CN105606736A

CN105606736A - 分离测定泊沙康唑中间体z1及其有关物质的方法

Info

Publication number: CN105606736A
Application number: CN201610060459.XA
Authority: CN
Inventors: 李江玲; 沈红梅
Original assignee: Chongqing Huapont Pharm Co Ltd
Current assignee: Chongqing Huapont Pharm Co Ltd
Priority date: 2016-01-27
Filing date: 2016-01-27
Publication date: 2016-05-25

Abstract

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法。该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以无机盐缓冲液和有机溶剂为流动相进行固液分离；该方法能同时将泊沙康唑中间体Z1及其有关物质完全分离，检测中溶剂峰不干扰泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的测定，分离度大于1.5；本方法专属性强，稳定性好，灵敏度和准确度高，可有效分离泊沙康唑中间体Z1及其有关物质，保障泊沙康唑原料及其制剂的质量安全；该操作方法简单，具有简便、快速的优点，对泊沙康唑中间体Z1的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。

Description

分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法。

背景技术

泊沙康唑一种广谱三唑类抗真菌药，可用于预防侵袭性曲霉菌和念珠菌感染，同时可用于治疗口咽念珠菌病，包括伊曲康唑和或氟康唑难治性口咽念珠菌病。泊沙康唑中间体Z1化学名为：4-(4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-5-(2,4-二氟苯基)四氢呋喃-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-((2S,3S)-2-(苯氧基)戊烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮，分子式：C₄₄H₄₈F₂N₈O₄，分子量：790.9，结构式为：

在泊沙康唑的合成过程中，其中间体Z1可能存在几个关键的工艺杂质和反应副产物，以及反应原料的残留。泊沙康唑中间体Z1合成过程中控制的有关物质有四个，化学名分别为杂质1：((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-甲基)-5-(2,4-二氟苯基)-3-四氢呋喃基)甲醇、杂质2：(R)-1-((2-(2,4-二氟苯基)-4-亚甲基-2-四氢呋喃基)甲基)-1H-1,2,4-三氮唑、杂质3：(5R-cis)-甲苯-4-磺酸5-(2,4-二氟苯基)-5-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)甲基四氢呋喃-3-基甲基酯、杂质4：2-[(1S,2S)-1-乙基-2-苄氧基丙基]-2,4-二氢-4-[4-[4-(4-羟基苯基)-1-哌嗪基]苯基]-3H-1,2,4-三氮唑-3-酮，结构式见下：

为了控制泊沙康唑中间体Z1的质量，需要对泊沙康唑中间体Z1及其相关物质进行分离测定，目前还没有公开的方法报道分离测定泊沙康唑中间体Z1及其相关物质的方法。因此开发一种分离测定泊沙康唑中间体Z1及其相关物质的方法对于实现对泊沙康唑中间体Z1的质量控制、安全性保证及对泊沙康唑原料和制剂质量控制具有极其重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离测定对泊沙康唑中间体Z1及其相关物质的方法，用高效液相色谱法分离测定对泊沙康唑中间体Z1及其相关物质，能够实现泊沙康唑中间体Z1及其相关物质的有效分离，还能够准确测定泊沙康唑中间体Z1及其相关物质的含量，专属性强，灵敏度高；该操作方法简单，具有简便、快速的优点。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以无机盐缓冲液和有机溶剂作为流动相梯度洗脱进行固液分离，所述Z1结构式如下所示：

所述梯度洗脱设置如下：

所述流动相A为无机盐缓冲液，所述流动相B为有机溶剂。

作为一种优选，所述梯度洗脱设置如下：

进一步，所述无机盐缓冲液中无机盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、高氯酸钠中的一种或多种；所述有机溶剂为甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或几种。

作为一种优选，所述无机盐缓冲液中无机盐为磷酸二氢钾。

作为一种优选，所述有机溶剂为甲醇或乙腈。

进一步，所述无机盐缓冲液的浓度为0.005mol/L～0.2mol/L。

进一步，所述有关物质包括：杂质1，杂质2，杂质3，杂质4的一种或多种，具体结构式如下：

进一步，分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法，具体包括以下步骤：

1)配制流动相：分别配制流动相A和流动相B；

2)配制供试品溶液：取供试品溶于稀释剂中，再加稀释剂稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液；

3)将步骤2)所述供试品溶液注入分离检测系统中，用步骤1)所述流动相对步骤2)所述供试品溶液进行梯度洗脱分离得洗脱液；

4)步骤3)所述洗脱液进入检测器进行测定。

进一步，步骤2)所述稀释剂为乙腈水溶液，乙腈与水的体积比为75-25:25-75。

进一步，步骤2)所述供试品溶液的浓度为0.5mg/ml～3.0mg/ml。

进一步，步骤3)所述流动相流速为0.5ml/min～2.0ml/min；步骤4)所述检测器的检测波长为205～280nm。

通过泊沙康唑合成工艺条件及参数的合理分析及研究，我们建立了一套液相色谱方法对其可能影响泊沙康唑中间体Z1质量的几个关键杂质进行了分析和测定。

本发明的目的之二在于提供一种利用高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法，所述有关物质包括：杂质1，杂质2，杂质3，杂质4，具体结构式如下：

具体包括以下步骤：

1)配制空白溶液：配置乙腈水溶液作为空白溶液；

2)配制有关物质定位溶液：取泊沙康唑中间体Z1有关物质对照品，用稀释剂溶解并稀释，得有关物质定位溶液；

3)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体Z1样品，加稀释剂溶解并稀释，得供试品溶液；

4)配制自身对照溶液：取步骤3)所述供试品溶液再加稀释剂稀释，得自身对照溶液；

5)分别取步骤1)所述空白溶液、步骤2)所述有关物质定位溶液、步骤3)所述供试品溶液和步骤4)所述自身对照溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的保留时间，按自身对照法计算供试品溶液中有关物质的含量。

检测过程中，溶剂峰不能干扰泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的测定，泊沙康唑中间体Z1主峰与各杂质峰间、各杂质峰之间的分离度均需大于1.5。

进一步，所述高效液相色谱方法采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，所述色谱柱柱箱温度为25～40℃，以无机盐缓冲液和和有机溶剂作为流动相；所述稀释剂为乙腈水溶液，乙腈与水的体积比为75-25:25-75。

本发明中目的还在于提供一种固定相及流动相在分离或测定分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的色谱法中的应用，所述固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，所述流动相为无机盐缓冲液和有机溶剂；所述无机盐缓冲液中无机盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、高氯酸钠中的一种或多种；所述有机溶剂为甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或几种；所述无机盐缓冲液的浓度为0.005mol/L～0.2mol/L。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法，采用十八烷基硅烷键合相为填充剂的色谱柱，以无机盐缓冲液和有机溶剂作为流动相相梯度洗脱进行固液分离；本方法采用普通的色谱柱(C18色谱柱)，快速准确地实现了泊沙康唑中间体Z1有关物质的分离测定，专属性强，灵敏度高；检测过程中，溶剂峰不干扰泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的测定，泊沙康唑中间体Z1主峰与各杂质峰间、各杂质峰之间的分离度均大于1.5；实现了对泊沙康唑中间体Z1有关物质的控制，保证了泊沙康唑中间体Z1的质量可控，对于实现对泊沙康唑中间体Z1的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。

附图说明

图1为空白溶剂的高效液相色谱图。

图2为泊沙康唑中间体Z1供试品溶液高效液相色谱图。

图3为泊沙康唑中间体Z1及其有关物质混合溶液高效液相色谱图。

图4为泊沙康唑中间体Z1系统适用性溶液高效液相色谱图。

图5为泊沙康唑中间体Z1及其有关物质检测限溶液高效液相色谱图。

图6为方法耐用性1高效液相色谱图。

图7为方法耐用性2高效液相色谱图。

图8为方法耐用性3高效液相色谱图。

图9为方法耐用性4高效液相色谱图。

图10为方法耐用性5高效液相色谱图。

图11为方法耐用性6高效液相色谱图。

图12为150101批次泊沙康唑中间体Z1的高效液相色谱图。

图13为150102批次泊沙康唑中间体Z1的高效液相色谱图。

图14为150103批次泊沙康唑中间体Z1的高效液相色谱图。

图15为150601批次泊沙康唑中间体Z1的高效液相色谱图。

图16为150602批次泊沙康唑中间体Z1的高效液相色谱图。

具体实施方式

以下将参照附图，对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例中所涉及的仪器与条件：

高效液相色谱仪：岛津：LC-20ATvp，SPD-M20Avp

色谱柱：C18(VP-ODS，250mm×4.6mm，5μm)

流动相：A：0.01mol/L磷酸二氢钾溶液；B：乙腈，按以下梯度进行洗脱：

所述梯度洗脱设置如下：

流速：1.5ml/min

检测波长：210nm

柱温：35℃

进样体积：10μl

实施例1高效液相色谱法测定泊沙康唑中间体Z1中有关物质的方法

具体方法步骤：

1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；

2)配制有关物质定位溶液：取泊沙康唑中间体Z1有关物质对照品，用稀释剂溶解并稀释，得杂质定位溶液；

3)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体Z1约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

4)配制自身对照溶液：精密移取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密移取1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(0.1％)

5)分别取步骤1)所诉空白溶液、步骤2)所述有关物质定位溶液、步骤3)所述供试品溶液进样和步骤4)所述自身对照溶液进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的保留时间，按自身对照法计算供试品溶液中有关物质的含量。

实施例2本发明色谱系统对泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的分离度

具体方法步骤：

2)配制供试品溶液：精密称取中间体Z149.85mg，置25ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(1.994mg/ml)；

3)配制有关物质定位溶液：

a)杂质1贮备液：精密称取杂质112.71mg，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(508.4μg/ml)；

b)杂质2贮备液：精密称取杂质212.70mg，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(508.0μg/ml)；

c)杂质3贮备液：精密称取杂质312.61mg，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(504.4μg/ml)；

d)杂质4贮备液：精密称取杂质425.42mg，置50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(508.4μg/ml)；

4)有关物质定位溶液：精密移取各杂质贮备液2.5ml，分置25ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；

5)配制混合溶液：精密称取供试品50.85mg，置25ml量瓶中，精密移取杂质1定位溶液1.0ml、杂质2定位溶液1.0ml、杂质3定位溶液1.5ml、杂质4定位溶液10ml，置同一量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

6)分别取所诉空白溶液、供试品溶液、有关物质定位溶液和混合溶液进样，记录色谱图，结果见图1～3。

根据图1～3说明，溶剂峰对中间体Z1及其有关物质无干扰；图2中，保留时间为2.280min、3.791min、5.226min、5.905min、14.814min色谱峰分别为杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和泊沙康唑中间体Z1色谱峰；分离度依次为9.937、8.263、3.333、30.928；本发明可以有效地将泊沙康唑中间体Z1与有关物质分离，分离度均大于1.5，专属性强。

实施例3本发明色谱系统对泊沙康唑中间体Z1的系统适用性试验

试验步骤：

2)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体Z149.85mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

3)配制自身对照溶液：精密移取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密移取1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；(0.1％)；

4)取自身对照溶液连续进样6针，记录色谱图，见图4；计算主峰峰面积RSD％、理论板数及拖尾因子，结果见表1。

表1系统适用性试验数据

结果可见，本色谱系统系统符合有关物质测定要求。

实施例4本色谱系统对泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的检出水平

试验步骤：

1)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体Z149.85mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

2)配制泊沙康唑中间体Z1二级稀释溶液：精密移取供试品溶液2.5ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；

3)配制定量限溶液：精密移取杂质1定位溶液0.5ml、杂质2定位溶液0.4ml、杂质3定位溶液0.7ml、杂质4定位溶液0.4ml，泊沙康唑中间体Z1二级稀释液0.6ml，置同一100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；

4)配制检测限溶液：精密移取定量限溶液7.5ml，置25ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；

5)取检测限溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，见图5；计算泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的检测限浓度(S/N＝3:1)，试验数据见表2。

表2检测限试验数据

结果可见，在本色谱系统条件下，检测限符合S/N＝3:1要求。

实施例5本色谱系统中泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的线性、范围和校正因子

试验步骤：

1)配制线性溶液：根据测试的具体要求及情况，线性范围：杂质1、杂质2和杂质3范围为LOQ、0.025％、0.05％、0.075％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％，共计8个线性浓度点；杂质4和泊沙康唑中间体Z1范围为LOQ、0.025％、0.05％、0.075％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.5％、1.0％、1.5％，共计11个线性浓度点。

2)取线性溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图；以浓度X(μg/ml)对峰面积Y做线性回归方程，计算回归方程及相关系数；统计数据见表3。

表3线性测定数据

杂质名称	线性回归方程	相关系数
			杂质1	Y＝10067X+281.56	r＝0.9996
杂质2	Y＝14338X+38.24	r＝0.9999
			杂质3	Y＝10986X+387.21	r＝0.9999
杂质4	Y＝30146X-1583.14	r＝0.9999
			泊沙康唑中间体Z1	Y＝22316X-690.88	r＝0.9999

杂质相对于泊沙康唑中间体Z1的校正因子的测定

式中：KZ1——Z1线性斜率；

K杂质——已知杂质线性斜率。

泊沙康唑中间体Z1及其有关物质在所述线性范围内，线性关系良好，相关系数均大于0.999；通过上述校正因子计算公式，得杂质1的校正因子为2.22，杂质2的校正因子为1.56，杂质3的校正因子为2.03，杂质4的校正因子为0.74，均不在0.9～1.1范围内，因此需带入校正因子计算各已知杂质含量(乘以校正因子；杂质1、杂质2、杂质3、杂质4的校正因子依次为2.2、1.6、2.0、0.74)。

实施例6本发明色谱系统对泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的精密度

试验步骤：

1)配制供试品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；(平行配制6份)；

2)配制自身对照溶液：精密移取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密移取1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；(0.1％)；

3)取上述供试品溶液和自身对照溶液依次进样，记录色谱图，按带校正因子的主成分自身对照法计算每份供试品中各有关物质含量及RSD％，试验结果见表4。

表4精密度试验数据

由表3可知，本色谱系统对泊沙康唑中间体Z1及其有关物质测定，精密度良好。

实施例7本发明色谱系统对泊沙康唑中间体Z1有关物质检测的准确度

试验步骤：

1)配制供试品贮备液：精密称取泊沙康唑中间体Z12.0045g，置100ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2)对照溶液：精密移取供试品贮备液10ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

3)准确度贮备液：精密移取杂质1贮备液2.0ml、杂质2贮备液2.0ml、杂质3贮备液3.0ml、杂质4贮备液20ml，置同一100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

4)标准溶液：精密移取准确度贮备液5.0ml，置25ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

5)加标溶液1：精密移取供试品贮备液2.5ml、准确度贮备液5.0ml，置同一25ml量瓶，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(平行配制三份)

6)加标溶液2：精密移取供试品贮备液5.0ml、准确度贮备液7.5ml，置同一50ml量瓶，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(平行配制三份)

7)加标溶液3：精密移取供试品贮备液10ml、准确度贮备液10ml，置同一100ml量瓶，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(平行配制三份)

8)取上述供试品溶液、对照溶液、加标溶液1～3及标准溶液依次进样，记录色谱图，按外标法计算每份供试品中各杂质含量、回收率及RSD％。试验结果见表5。

表5准确度试验测定数据

从上表数据可知，本色谱系统对泊沙康唑中间体Z1中有关物质检测准确度良好。

实施例8本发明色谱系统测定方法的耐用性

取混合溶液，在流动相组成、柱温和流速有微小的波动条件下进行测试，记录主峰与杂质峰间的分离度；试验结果见图6～11，试验数据见表6。

表6色谱条件变化耐用性数据

从上表数据可知，流动相起始比例、柱温、柱流速进行微小调整，各杂质之间、杂质与主峰之间的分离度均大于1.5，对检测结果无影响，方法耐用性好。

实施例9本发明色谱系统对泊沙康唑中间体Z1样品检测

试验步骤：

2)配制供试品溶液：取泊沙康唑中间体Z1(共5批泊沙康唑中间体Z1，批号分别为：1510101、150102、150103、150601、150602)约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，得为供试品溶液；

3)配制自身对照溶液：精密移取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密移取1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(0.1％)

4)取供试品溶液，按上述条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图12～图16；详细统计数据见表7。

表7多批次中间体Z中基因毒性杂质检出数据

由图1～图16、表1～7说明，本方法的发明，可以有效地将泊沙康唑中间体Z1及其有关物质分离，并可以准确进行测定，以控制泊沙康唑中间体Z中所述基因毒性杂质的含量，从而保证最终泊沙康唑原料和制剂的质量安全可控。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法，其特征在于，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以无机盐缓冲液和有机溶剂作为流动相梯度洗脱进行固液分离，所述Z1结构式如下所示：

所述梯度洗脱设置如下：

所述流动相A为无机盐缓冲液，所述流动相B为有机溶剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无机盐缓冲液中无机盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、高氯酸钠中的一种或多种；所述有机溶剂为甲醇、乙腈、异丙醇中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无机盐缓冲液的浓度为0.005mol/L～0.2mol/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有关物质包括：杂质1，杂质2，杂质3，杂质4的一种或多种，具体结构式如下：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)配制流动相：分别配制流动相A和流动相B；

4)步骤3)所述洗脱液进入检测器进行测定。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)所述稀释剂为乙腈水溶液，乙腈与水的体积比为75-25:25-75。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)所述供试品溶液的浓度为0.5mg/ml～3.0mg/ml。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)所述流动相流速为0.5ml/min～2.0ml/min；步骤4)所述检测器的检测波长为205～280nm。

9.利用高效液相色谱法分离测定泊沙康唑中间体Z1及其有关物质的方法，其特征在于，所述有关物质包括：杂质1，杂质2，杂质3，杂质4，具体包括以下步骤：

1)配制空白溶液：配置乙腈水溶液作为空白溶液；

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱方法采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，所述色谱柱柱箱温度为25～40℃，以无机盐缓冲液和和有机溶剂作为流动相；所述稀释剂为乙腈水溶液，乙腈与水的体积比为75-25:25-75。