CN103760260A - 一种用高效液相色谱法测定比拉斯汀中间体有关物质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物分析领域，公开了一种用高效液相色谱法测定比拉斯汀中间体有关物质的方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱250mm×4.6mm，5μm，以一定比例的无机盐缓冲液体系－有机相为流动相，用于分离分析比拉斯汀中间体的有关物质。

Description

一种用高效液相色谱法测定比拉斯汀中间体有关物质的方法

技术领域

 本发明属涉及一种高效液相色谱分离分析方法，具体涉及一种用高效液相色谱法分离分析比拉斯汀中间体有关物质的方法。

背景技术

比拉斯汀是一种无镇静作用的高选择性组胺H1受体拮抗剂，用于治疗过敏性鼻结膜炎和荨麻疹，本品安全性良好，无常用抗组胺药物存在的镇静作用及心脏毒性。其中间体结构式：

分子式：C₃₂H₄₄N₄O₂，分子量：516.72

本法有效的对比拉斯汀中间体进行纯度分析，本试验采用普通的色谱柱（C₁₈色谱柱）快速准确的实现了比拉斯汀中间体有关物质的测定，从而实现了比拉斯汀中间体杂质的控制，保证了比拉斯汀中间体的质量可控，在合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离分析比拉斯汀中间体有关物质的高效液相色谱方法，从而实现比拉斯汀中间体与其有关物质的分离和测定，保证比拉斯汀中间体的质量控制。

本发明所用的高效液相色谱法分离分析比拉斯汀中间体的方法，选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲液-有机改性剂为流动相。

本发明采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（250mm×4.6 mm，5μm）。

本发明采用的有机改性剂选自乙腈、甲醇，最优选的有机改性剂为乙腈。

本发明采用无机盐缓冲液-有机改性剂梯度洗脱的方式。

本发明方法的无机盐缓冲液中无机盐选自以下：磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、

磷酸二氢铵、高氯酸钠等，优选为磷酸二氢铵。

本发明方法的无机盐缓冲液中所含无机盐的浓度为0.01～0.05 mol/L，最优为0.02mol/L。

本发明方法的磷酸二氢铵缓冲溶液的pH值为2~6，最优为4.5。

本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现：

⑴  称取比拉斯汀中间体样品适量，用流动相溶解样品，配制成每1ml约含比拉斯汀中间体0.1mg～1.5mg的样品溶液。

⑵  设置流动相流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为215nm。

⑶  取步骤⑴的样品溶液5~40μl注入液相色谱仪，完成比拉斯汀中间体的分离与分析。

其中：

高效液相色谱仪：岛津：LC-20 AT二元泵；CBM-20A控制器；SPD-M20A检测器；SIL-20AC自动进样器；CTO-10AS vp柱温箱

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）

流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH4.5）；B：乙腈；

按以下梯度进行洗脱：

时间（min）	0	5	40	55	60	70
							B%	10	15	55	70	10	10

流速：1.0ml/min

检测波长：215nm

柱温：室温

进样体积：10μl

本发明能够有效测定比拉斯汀中间体的有关物质，方法简单快捷，分析灵敏度高，结果准确可靠。可用于比拉斯汀中间体的质量控制，确保原料药和制剂的质量可控。

 

附图说明

图1  实施例1，无机盐缓冲液pH为4.5比拉斯汀中间体与中间体混合样品高效液相色谱图

图2  实施例2，无机盐缓冲液pH为4.5比拉斯汀中间体高效液相色谱图

图3  实施例3，无机盐缓冲液pH为4.3比拉斯汀中间体与中间体混合样品高效液相色谱图

具体实施方式

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围

实施例1

仪器与条件：

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-20ATvp，SPD-20Avp

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）

流动相A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH4.5）；B：乙腈，

按以下梯度进行洗脱

时间（min）	0	5	40	55	60	70
							B%	10	15	55	70	10	10

流速：1.0ml/min

检测波长：215nm

柱温：室温

进样体积：10μl

实验步骤：

称取比拉斯汀中间体10mg，中间体Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ 各5mg，置于20ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。

图1中保留时间为39.35分钟的色谱峰为比拉斯汀中间体的色谱峰，保留时间为5.21、27.69、32.22、60.63分钟色谱峰分别为中间体Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ的色谱峰。色谱图表明比拉斯汀中间体与其中间体及杂质可以在同一色谱条件下达到良好的分离。

实施例2

仪器与条件：

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-20TAvp，SPD-20Avp

色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）

流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH4.5）；B：乙腈，

按以下梯度进行洗脱

时间（min）	0	5	40	55	60	70
							B%	10	15	55	70	10	10

流速：1.0ml/min

检测波长：215nm

柱温：室温

进样体积：10μl

实验步骤：

称取比拉斯汀中间体10mg，置于10ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。

实施例3

仪器与条件：

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-20ATvp，SPD-20Avp

色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）

流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH4.3）；B：乙腈，

按以下梯度进行洗脱

时间（min）	0	5	40	55	60	70
							B%	10	15	55	70	10	10

流速：1.0ml/min

检测波长：215nm

柱温：室温

进样体积：10μl

实验步骤：

称取比拉斯汀中间体10mg，中间体Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ 各5mg，置于20ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。

Claims (9)

1.一种高效液相色谱法分离分析比拉斯汀中间体有关物质的方法，其特征在于采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以无机盐缓冲盐溶液－有机改性剂为流动相。

2.根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于所述色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述有机改性剂选自乙腈、甲醇。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述有机改性剂为乙腈。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所说的无机盐缓冲液中无机盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、高氯酸钠中的一种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述无机盐优选为磷酸二氢铵。

7.根据权利要求1方法中，所说的无机盐缓冲液中所含无机盐的浓度最优为0.02mol/L。

8.根据权利要求1 所述的分离测定方法，所说的无机盐缓冲液的pH值为2-6。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：

⑴  称取比拉斯汀中间体样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含比拉斯汀中间体0.1～1.5mg的样品溶液； 

⑵  设置流动相流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为210～250nm ，色谱柱柱箱温度为20～40℃；

⑶  取步骤⑴的样品溶液5~40μl注入液相色谱仪，完成比拉斯汀中间体及其有关物质的分离与分析。

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