CN107515255B - 利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法，所述高效液相色谱分析：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱作为色谱柱；采用酸性水溶液作为流动相A；以及采用第一有机溶剂作为流动相B进行梯度洗脱。该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作简便快速，且该方法的适用性广，实现了达格列净原料药及其制剂中有关物质在同一色谱条件下的分离测定，从而有效控制药品质量。

Description

利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法
技术领域
本发明属于化学分析技术领域，具体而言，本发明涉及一种利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法。
背景技术
达格列净(Dapagliflozin，Farxiga，式1所示化合物)，由Bristol Myers Squibb研发，是一种2型钠离子依赖型葡萄糖协同转运蛋白(sodium-dependent glucosecotransporter 2,SGLT2)抑制剂，2014年1月8日被FDA批准用于治疗II型糖尿病。
Figure BDA0001021052950000011
达格列净在制备过程中，因原料、合成工艺过程、降解等多种因素可能产生多个杂质，其中以杂质A、杂质B及杂质C为合成工艺中较难控制的三个杂质，发明人将此三个杂质设定为达格列净产品的特定杂质，并作为有关物质项目中主要考察杂质，其限度要求均为不得过0.15％。
目前，尚未见有关达格列净有关物质的检测方法。而实现达格列净原料药及制剂中有关物质的快速分离和含量分析，对于合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种快速分析分离达格列净及其有关物质的高效液相色谱法，从而实现了达格列净原料药及其制剂中有关物质在同一色谱条件下的分离测定。
达格列净杂质A为还原反应的副产物α–构型异构体杂质参与水解反应生成产品达格列净相应的α–构型异构体杂质(达格列净1R非对映异构体，简称为杂质A)，化学结构式如下：
Figure BDA0001021052950000021
达格列净杂质B为起始原料的溴代杂质参与达格列净生产工艺反应，最终生成产品达格列净相应的溴代杂质(简称为杂质B)，其化学式结构式如下：
Figure BDA0001021052950000022
达格列净杂质C为在达格列净生产工艺中亲核加成反应时，六元环半缩酮中间态可能与其开环异构体进行相互转化，而后者会被过量的格氏试剂异丙基氯化镁还原为达格列净的开环杂质(简称为杂质C)，其化学结构式如下：
Figure BDA0001021052950000023
杂质A：(1R)-1,5-脱水-1-C-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-D-葡萄糖醇
杂质B：(1S)-1,5-脱水-1-C-[4-溴-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-D-葡萄糖醇
杂质C：开环杂质
在本发明的一个方面，本发明提供了一种利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法。所述高效液相色谱分析：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱作为色谱柱；采用酸性水溶液作为流动相A；以及采用第一有机溶剂作为流动相B进行梯度洗脱。
采用该方法可以将达格列净原料药及制剂中的杂质A、B、C在同一色谱条件下进行快速高效的分离，从而有效控制原料药及制剂的质量，并且该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制药品的质量。
根据本发明实施例的利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法还可以具有以下附加技术特征：
根据本发明的实施例，所述色谱柱的柱长为250mm。由此，可以进一步提高主峰与杂质B的分离度。
根据本发明的实施例，所述色谱柱中填料的粒径为1.8～5μm，优选为5μm。由此，可以进一步提高分离度。
根据本发明实施例，所述梯度洗脱的条件为：
时间(分钟) 流动相A/V％ 流动相B/V％
0 68～72 28～32
30 55 45
45 10～20 80～90
55 5 95
60 5 95
60.1 70 30
70 70 30
优选所述梯度洗脱的条件为：
时间(分钟) 流动相A/V％ 流动相B/V％
0 70 30
30 55 45
45 10 90
55 5 95
60 5 95
60.1 70 30
70 70 30
由此得到的分离效果最佳，峰形最好。
根据本发明的实施例，所述第一有机溶剂为选自甲醇和乙腈中的至少一种，优选为乙腈。此得到的峰形及分离效果最好。
根据本发明的实施例，所述酸性水溶液为选自磷酸水溶液、三氟醋酸水溶液和甲酸水溶液中的至少一种，优选为磷酸水溶液。由此得到的杂质分离效果最佳，并且可以保证空白溶剂对杂质的检测无干扰。
根据本发明的实施例，所述酸性水溶液的浓度为0.01体积％～0.1体积％，优选为0.01体积％。由此，可以进一步提高分离度，并且可以在得到较好的峰形和分离效果情况下延长色谱柱寿命。
根据本发明的实施例，采用第二有机溶剂和水的混合溶液将待检测样品配制成样品溶液；将所述样品溶液注入高效液相色谱仪，完成达格列净原料药及制剂中有关物质的测定。
根据本发明的实施例，所述第二有机溶剂为选自甲醇和乙腈中的至少一种，优选为乙腈。由此保证样品充分溶解。
根据本发明的实施例，所述混合溶液中，所述第二有机溶剂与所述水的体积比为4：1。由此，可以进一步提高分离效率。
根据本发明的实施例，检测条件为：流动相的流速为0.8～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。由此，可以进一步提高分离度。
根据本发明的实施例，所述色谱柱的柱温为20℃～40℃，优选为30℃。由此，可以进一步提高各组分的分离度。
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱仪的检测波长为200nm～240nm，优选为224nm。由此，可以显著提高检测灵敏度。
根据本发明的实施例，注入所述高效液相色谱仪的样品溶液的体积为2～20μL，优选为10μL。
本发明所述的测定方法，可以依照以下方法实现：
(1)取待测样品适量，用乙腈-水(体积比4：1)的混合液溶解，配制成每1ml含1mg的待测样品溶液。
(2)设置梯度洗脱的流动相的流速为1.0ml/min；检测波长224nm；色谱柱温度为30℃。
(3)取步骤(1)中的所述待测样品溶液2～20μl，优选10μl，注入高效液相色谱仪，完成过达格列净有关物质的测定。
本发明方法的洗脱分离效果较好，能使样品中主药达格列净及特定杂质A、B、C在同一色谱条件下分离，亦能使样品中其他非特定杂质有效分离。可以快速、准确、可靠的检测出样品中的杂质的含量及主药的纯度。本发明通过利用HPLC法，对达格列净进行有关物质的检测，从而有效控制原料药及其制剂的质量。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1：按照实施例1条件检测的空白溶液色谱图；
图2：按照实施例1条件检测的系统适用性溶液的色谱图；
图3：按照实施例1条件检测的达格列净供试品溶液的色谱图；
图4：按照实施例1条件检测的100％加样回收溶液色谱图；
图5：按照实施例1条件检测的达格列净及杂质A、B、C检测限色谱图；
图6：按照对比实施例1条件检测的空白溶液色谱图；
图7：按照对比实施例1条件检测的供试品溶液色谱图；
图8：按照对比实施例2条件检测的供试品溶液色谱图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
本发明实施例中所用的达格列净原料药为发明人自制。
达格列净原料药(自制，批号：WS0364-010-02)；
达格列净对照品(自制，批号：WS0364-010-02)；
杂质A对照品(自制，批号：WS0351–039–02)；
杂质B对照品(自制，批号：WS0351–075–01)；
杂质C对照品(自制，批号：WS0351–034–02)；
达格列净片(自制，批号：131203，规格：25mg)；
下述实施例试验所用液相色谱仪均为Agilent 1260高效液相色谱仪。
实施例1
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250*4.6mm，5μm)；
流动相A：0.01％磷酸水溶液；
流动相B：乙腈；
梯度洗脱条件：
Figure BDA0001021052950000051
Figure BDA0001021052950000061
柱温：30℃；
检测波长：224nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：10μL；
运行时间：70min；
实验步骤：
稀释液：乙腈-水(80:20)(v/v)
空白溶液：稀释液
杂质对照贮备液：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品各约10mg，精密称定，置于同一个100ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
达格列净对照品储备溶液：取达格列净对照品约20mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液：精密量取杂质对照贮备液1.0ml，置于10ml容量瓶中，用达格列净对照品储备溶液稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液：取自制达格列净样品约25mg，置于25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
杂质对照品溶液：精密量取杂质对照贮备液5ml置于25ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
100％加样回收溶液：取达格列净对照品约25mg，置于25ml容量瓶中，再向容量瓶中加入精密量取的5ml杂质对照贮备液，用稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液：精密称取达格列净、杂质A、杂质B、杂质C各约20mg分别置于同一个20ml容量瓶中，加稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取达格列净对照品储备液1ml置于100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得定量限贮备液。精密量取定量限贮备液1ml置100ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液：精密量取定量限溶液3ml至10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
分别取上述溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1、附图2、附图3、附图4和附图5。
结论：图1表明空白对杂质A、B、C及达格列净主峰的检测无干扰；图2表明各杂质及达格列净各峰间的分离度良好；图3表明自制的达格列净样品中未检出杂质A、C，检出的杂质B及其他单个杂质的量均在规定的限度以下；图4表明各杂质在该色谱条件下检测准确度良好；图5表明达格列净、杂质A、杂质B、杂质C的检测限分别为0.005％、0.006％、0.006％、0.006％，远远低于各杂质规定的限度，由此表明该方法对各杂质的检测灵敏度高。
实施例2
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250*4.6mm，5μm)；
流动相A：0.01％磷酸水溶液；
流动相B：甲醇；
梯度洗脱条件：
时间(分钟) 流动相A(V％) 流动相B(V％)
0 72 28
30 55 45
45 20 80
55 5 95
60 5 95
60.1 72 28
70 72 28
柱温：35℃；
检测波长：224nm；
流速：1.2mL/min；
进样量：10μL；
运行时间：70min；
实验步骤：
稀释液：乙腈-水(80:20)(v/v)；
空白溶液：稀释液；
杂质对照贮备液：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品各约10mg，精密称定，置于同一个100ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
达格列净对照品储备溶液：取达格列净对照品约20mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液：精密量取杂质对照贮备液1.0ml，置于10ml容量瓶中，用达格列净对照品储备溶液稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液：取自制达格列净样品约25mg，置于25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
杂质对照品溶液：精密量取杂质对照贮备液5ml置于25ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
100％加样回收溶液：取达格列净对照品约25mg，置于25ml容量瓶中，再向容量瓶中加入精密量取的5ml杂质对照贮备液，用稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液：精密称取达格列净、杂质A、杂质B、杂质C各约20mg同一个20ml容量瓶中，加稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取达格列净对照品储备液1ml置于100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得定量限贮备液。精密量取1ml置100ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液：精密量取定量限溶液3ml至10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
分别取上述溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析。
结论：在此色谱条件下，空白对杂质及主峰的检测无干扰，各杂质及达格列净各峰间的分离度良好，自制的达格列净样品中各杂质的检出量均在规定的限度以下，各杂质在该色谱条件下检测准确度良好。
实施例3
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250*4.6mm，5μm)；
流动相A：0.01％磷酸水溶液；
流动相B：乙腈；
梯度洗脱条件：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 68 32
30 55 45
45 10 90
55 5 95
60 5 95
60.1 68 32
70 68 32
柱温：25℃；
检测波长：224nm；
流速：0.8mL/min；
进样量：10μL；
运行时间：70min；
实验步骤：
稀释液：乙腈-水(80:20)(v/v)
空白溶液：稀释液
杂质对照贮备液：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品各约10mg，精密称定，置于同一个100ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
达格列净对照品储备溶液：取达格列净对照品约20mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液：精密量取杂质对照贮备液1.0ml，置于10ml容量瓶中，用达格列净对照品储备溶液稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液：取自制达格列净样品约25mg，置于25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
杂质对照品溶液：精密量取杂质对照贮备液5ml置于25ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
100％加样回收溶液：取达格列净对照品约25mg，置于25ml容量瓶中，再向容量瓶中加入精密量取的5ml杂质对照贮备液，用稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液：精密称取达格列净、杂质A、杂质B、杂质C各约20mg同一个20ml容量瓶中，加稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取达格列净对照品储备液1ml置于100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得定量限贮备液。精密量取1ml置100ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液：精密量取定量限溶液3ml至10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
分别取上述溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析。
结论：在此色谱条件下，空白对杂质及主峰的检测无干扰，各杂质及达格列净各峰间的分离度良好，自制的达格列净样品中各杂质的检出量均在规定的限度以下，各杂质在该色谱条件下检测准确度良好。
实施例4：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250*4.6mm，5μm)；
流动相A：0.01％磷酸水溶液；
流动相B：乙腈；
梯度洗脱条件：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 70 30
30 55 45
45 10 90
55 5 95
60 5 95
60.1 70 30
70 70 30
柱温：30℃；
检测波长：224nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：10μL；
运行时间：70min；
实验步骤：
稀释液：乙腈-水(80:20)(v/v)
空白溶液：稀释液
杂质对照贮备液：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品各约10mg，精密称定，置于同一个100ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
达格列净对照品储备溶液：取达格列净对照品约20mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液：精密量取杂质对照贮备液1.0ml，置于10ml容量瓶中，用达格列净对照品储备溶液稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液的配制：取达格列净片20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于游离达格列净50mg)，置50ml量瓶中，加稀释液适量，超声20分钟使溶解，放冷至室温，用稀释液稀释至刻度，摇匀，离心，取上层澄清液体过滤，作为供试品溶液。
结论：按照实施例1条件检测自制达格列净片，空白对杂质A、B、C及达格列净主峰的检测无干扰，杂质及达格列净各峰见的分离度良好、检测准确度及灵敏度良好。
对比实施例1
色谱柱：YMC-PACK ODS-AQ(150*4.6mm，5μm)；
流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液；
流动相B：0.05％三氟醋酸乙腈溶液；
梯度洗脱条件：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 70 30
45 10 90
50 10 90
50.1 70 30
60 70 30
柱温：30℃；
检测波长：220nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：10μL；
运行时间：60.1min，后运行：9.9min；
实验步骤：
稀释液：乙腈-水(80:20)(v/v)；
空白溶液：稀释液；
杂质对照贮备液：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品各约10mg，精密称定，置于同一个100ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
达格列净对照品储备溶液：取达格列净对照品约20mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液：精密量取杂质对照贮备液1.0ml，置于10ml容量瓶中，用达格列净对照品储备溶液稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液：取自制达格列净样品约25mg，置于25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
杂质对照品溶液：精密量取杂质对照贮备液5ml置于25ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
100％加样回收溶液：取达格列净对照品约25mg，置于25ml容量瓶中，再向容量瓶中加入精密量取的5ml杂质对照贮备液，用稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液：精密称取达格列净、杂质A、杂质B、杂质C各约20mg同一个20ml容量瓶中，加稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取达格列净对照品储备液1ml置于100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得定量限贮备液。精密量取1ml置100ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液：精密量取定量限溶液3ml至10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
分别取上述溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图6、7。
结论：在此色谱条件下，空白溶液对杂质检出有干扰，且各杂质的检测灵敏度低。
对比实施例2
色谱柱：Waters Sunfire C18(150*4.6mm，3.5μm)；
流动相A：0.01体积％磷酸水溶液；
流动相B：乙腈；
梯度洗脱条件：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 70 30
30 55 45
45 10 90
55 5 95
60 5 95
60.1 70 30
70 70 30
柱温：30℃；
检测波长：224nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：10μL；
运行时间：70min；
实验步骤：
稀释液：乙腈-水(80:20)(v/v)；
空白溶液：稀释液；
杂质对照贮备液：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品各约10mg，精密称定，置于同一个100ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
达格列净对照品储备溶液：取达格列净对照品约20mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液：精密量取杂质对照贮备液1.0ml，置于10ml容量瓶中，用达格列净对照品储备溶液稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液：取自制达格列净样品约25mg，置于25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
杂质对照品溶液：精密量取杂质对照贮备液5ml置于25ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
100％加样回收溶液：取达格列净对照品约25mg，置于25ml容量瓶中，再向容量瓶中加入精密量取的5ml杂质对照贮备液，用稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液：精密称取达格列净、杂质A、杂质B、杂质C各约20mg同一个20ml容量瓶中，加稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取达格列净对照品储备液1ml置于100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得定量限贮备液。精密量取1ml置100ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液：精密量取定量限溶液3ml至10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
分别取上述溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图8。
结论：在此色谱条件下，杂质B与主峰未达到基线分离，影响杂质B的检测准确度。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (15)

1.一种利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法，其特征在于，所述高效液相色谱分析：
采用Agilent Eclipse XDB-C18作为色谱柱；
采用酸性水溶液作为流动相A；以及
采用第一有机溶剂作为流动相B进行梯度洗脱，
其中，所述有关物质包括达格列净杂质A、达格列净杂质B和达格列净杂质C，
所述达格列净杂质A为还原反应的副产物α–构型异构体杂质参与水解反应生成产品达格列净相应的α–构型异构体杂质，化学结构式如下：
Figure FDA0003516435460000011
所述达格列净杂质B为起始原料的溴代杂质参与达格列净生产工艺反应，最终生成产品达格列净相应的溴代杂质，其化学式结构式如下：
Figure FDA0003516435460000012
所述达格列净杂质C为在达格列净生产工艺中亲核加成反应时，六元环半缩酮中间态可能与其开环异构体进行相互转化，而后者会被过量的格氏试剂异丙基氯化镁还原为达格列净的开环杂质，其化学结构式如下：
Figure FDA0003516435460000021
所述梯度洗脱的条件为：
时间/分钟 流动相A/V％ 流动相B/V％ 0 68～72 28～32 30 55 45 45 10～20 80～90 55 5 95 60 5 95 60.1 70 30 70 70 30
，
所述色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，所述色谱柱中填料的粒径为5μm，
所述酸性溶液为浓度为0.01体积％的磷酸水溶液，所述第一有机溶剂为选自甲醇和乙腈中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：
时间/分钟 流动相A/V％ 流动相B/V％ 0 70 30 30 55 45 45 10 90 55 5 95 60 5 95 60.1 70 30 70 70 30
。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一有机溶剂为乙腈。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
采用第二有机溶剂和水的混合溶液将待检测样品配制成样品溶液；
将所述样品溶液注入高效液相色谱仪，完成达格列净原料药及制剂中有关物质的测定。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第二有机溶剂为选自甲醇和乙腈中的至少一种。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述第二有机溶剂为乙腈。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述混合溶液中，所述第二有机溶剂与所述水的体积比为4：1。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相的流速为0.8～1.2ml/min。
9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于，流动相的流速为1.0ml/min。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为20℃～40℃。
11.根据权利要求1或10所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30℃。
12.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的检测波长为200nm～240nm。
13.根据权利要求4或12所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的检测波长为224nm。
14.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，注入所述高效液相色谱仪的样品溶液的体积为2～20μL。
15.根据权利要求4或14所述的方法，其特征在于，注入所述高效液相色谱仪的样品溶液的体积为10μL。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109374784B (zh) * 2018-12-21 2022-02-01 安徽联创生物医药股份有限公司 一种用hplc分离测定达格列净原料药有关物质的方法
CN111398457A (zh) * 2020-04-01 2020-07-10 上海应用技术大学 降解条件下埃格列净影响因素有关物质的检测方法
CN114577944B (zh) * 2022-03-10 2023-08-15 山东鲁抗医药股份有限公司 一种5-溴-2-氯-4`-乙氧基二苯甲烷中有关物质的检测方法
CN115407001A (zh) * 2022-11-03 2022-11-29 山东省食品药品检验研究院 一种达格列净的有关物质的分析方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104334568A (zh) * 2012-04-10 2015-02-04 泰拉科斯有限公司 苄基苯钠依赖性葡糖糖协同转运蛋白2(sglt2)抑制剂的制备方法
WO2014187365A1 (zh) * 2013-05-24 2014-11-27 四川海思科制药有限公司 氧杂双环衍生物、制备方法及其应用
US20160083374A1 (en) * 2013-05-30 2016-03-24 Cadila Healthcare Limited Amorphous form of canagliflozin and process for preparing thereof
CN104739835A (zh) * 2013-12-30 2015-07-01 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 一种治疗糖尿病的新型药物组合物
CN105319294B (zh) * 2014-06-20 2021-03-30 重庆医药工业研究院有限责任公司 一种分离测定卡格列净及其有关物质的方法
CN105651914A (zh) * 2014-12-02 2016-06-08 深圳翰宇药业股份有限公司 一种直接测定sglt2抑制剂共晶体中手性共晶溶剂的方法
CN104678026B (zh) * 2015-03-19 2020-06-19 重庆医药工业研究院有限责任公司 一种测定有机药物中四丁基溴化铵含量的方法
CN105503845A (zh) * 2015-12-01 2016-04-20 北京普德康利医药科技发展有限公司 去氟卡格列净化合物及其制备方法和应用
CN105548378B (zh) * 2015-12-03 2017-12-26 上海应用技术学院 一种卡格列净α、β异构体的分离方法
CN105486767B (zh) * 2015-12-03 2018-03-13 上海应用技术学院 一种达格列净及其α‑异构体的分离方法
CN105622357B (zh) * 2016-01-30 2017-11-17 合肥华方医药科技有限公司 一种达格列净杂质的合成方法

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