CN109738565B

CN109738565B - 一种测定保健食品中非法添加化合物的方法

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Publication number: CN109738565B
Application number: CN201910095491.5A
Authority: CN
Inventors: 徐敦明; 赖国银; 黄蓬英; 伊雄海; 罗超; 陈燕; 张志刚
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-01-31
Filing date: 2019-01-31
Publication date: 2021-09-24
Anticipated expiration: 2039-01-31
Also published as: CN109738565A

Abstract

本发明涉及一种测定保健食品中非法添加化合物的方法，包括步骤1：将非法添加化合物的标准样品直接进样到质谱仪，得到目标化合物的质谱参数，作为定性判断依据，并绘制标准曲线，作为定量计算依据；步骤2：称取待测样品的重量，用乙腈超声提取后，HLB固相萃取小柱净化，获得进样溶液；步骤3：将进样溶液送入液相色谱质谱联用仪，进行定性和定量判断；其中液相色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相为乙酸铵水溶液和甲醇。本发明提供的方法可同时测定保健食品中21种非法添加化合物，包括减肥类、降脂类、降压类、降糖类保健食品，食品形式不限于口服液、颗粒、片剂、硬胶囊或软胶囊。

Description

一种测定保健食品中非法添加化合物的方法

技术领域

本发明涉及药物检测方法，尤其是一种测定保健食品中非法添加化合物的方法。

背景技术

目前用于减肥类、降脂类、降糖类、降压类保健食品中非法添加药物的检测方法主要有液相色谱法、液相色谱质谱联用、拉曼光谱法、薄层色谱法，其中超高效液相色谱串联质谱法因具有高选择性、高灵敏度在保健食品中非法添加药物的定性及定量分析中得到了广泛的应用。采用超高效液相色谱串联质谱法的难点在于：一套检测方法往往是一个完整的体系，前后步骤密切相关，例如不同提取溶剂获得的提取液，需要不同的分离方案才能实现有效分离；而分离方案的不同也会导致质谱数据的大幅变化，从而无法获得回收率和相对偏差皆满意的数据，因此大幅改变提取、分离或者色谱、质谱检测条件中任一个，都无法预测最后检测的结果，需要反复经过验证才能获得检测效果稳定的全套方案。

专利申请CN104991009A公开了一种利用高效液相色谱-四级杆串联线性离子阱质谱开发了一种同时定性、定量检测(多反应监测sMRM－信息依赖性采集IDA－增强子离子扫描 EPI模式检测)中药及保健品中非法添加盐酸可乐定、格列齐特等13种降糖降压类化学药物的方法。利用高效液相色谱-四级杆串联线性离子阱质谱开发了一种同时定性、定量检测(多反应监测sMRM－信息依赖性采集IDA－增强子离子扫描EPI模式检测)中药及保健品中非法添加盐酸可乐定、格列齐特等13种降糖降压类化学药物的方法。然而麻黄碱(ephedrine)、芬氟拉明(fenfluramine)、N,N-双去甲基西布曲明(N,N-didesmiehylsibutramine)、N-单去甲基西布曲明(N-monodesmiehylsibutramine)、西布曲明(sibutramine)等非法添加物无法检测。

专利申请CN108169381A公开了一种具有降血脂功能的中成药和保健食品中非法添加6 种降血脂药物的快速检测方法。样品用甲醇提取处理后，采用超高效液相色谱-串联质谱法，色谱柱分离，甲酸水溶液和乙腈作流动相梯度洗脱，质谱ESI正离子、多反应监测模式测定，外标法定量。由于甲醇易溶于水，因此该方法无法实现液体药物中有效成分的分离，不能检测口服液类的保健食品。在色谱条件上，甲酸水溶液和乙腈作流动相梯度洗脱会造成流动相复杂操作较困难等不利影响，且仅能测定6种非法添加物。

专利申请CN108061777A公开了一种减肥类保健食品中34种非法添加药物残留量的快速检测方法，以甲醇、丙酮及辛醇聚氧乙烯醚提取目标对象，同样存在上述问题，丙酮会造成提取溶液复杂而导致基质干扰严重不利影响，辛醇聚氧乙烯醚是较为特殊的有机试剂不适用于推广应用，因此以甲醇、丙酮和辛醇聚氧乙烯醚混合形成的提取液过于复杂无法适应较多基质。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有的非法添加物质检测范围有限，检测效果差，提供一种测定保健食品中非法添加化合物的方法，该方法一次进样，同步检测，可减少样品在测定过程中对仪器带来的污染，打击不同功效保健食品中交叉添加化学药物行为，通过超高效液相色谱-串联质谱同时测定减肥类、降脂类、降压类、降糖类保健食品中21种非法添加药物的方法。

具体方案如下：

一种测定保健食品中非法添加化合物的方法，包括以下步骤：

步骤1：将非法添加化合物的标准样品直接进样到质谱仪，对非法添加化合物的标准样品分别进行一级质谱分析和二级质谱扫描，得到目标化合物的质谱参数，作为定性判断依据，并绘制标准曲线，作为定量计算依据；

步骤2：称取待测样品的重量，向其中加入乙腈后进行超声提取，提取液利用HLB固相萃取小柱，以甲醇水的混合溶液进行洗脱，收集洗脱液进行过滤，获得进样溶液；

步骤3：将步骤2得到的进样溶液送入液相色谱质谱联用仪，先经过液相色谱进行分离，之后进入质谱仪进行检测，根据步骤1所述定性判断依据确定待测样品中添加的物质种类，根据步骤1所述定量判断依据确定待测样品中添加物质的量；其中液相色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相为乙酸铵水溶液和甲醇。

进一步的，所述保健食品为减肥类、降脂类、降糖类或降压类保健食品的口服液、颗粒、片剂、硬胶囊或软胶囊。

进一步的，所述非法添加化合物为麻黄碱、西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、N-单去甲基西布曲明、芬氟拉明、苯乙双胍、吡咯列酮、格列吡嗪、瑞格列奈、格列齐特、格列本脲、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、格列波脲、可乐定、利血平、去羟基洛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀或辛伐他汀中至少一种。

进一步的，所述步骤1和步骤3中，质谱仪的条件为：电喷雾电离离子源；扫描方式为正离子扫描；检测模式为MRM模式；去溶剂气流量为800-1000L/H；去溶剂气温度为 600-700℃。

进一步的，所述步骤1和步骤3中，质谱仪的条件为：电喷雾电离离子源；扫描方式为正离子扫描；检测模式为MRM模式；去溶剂气流量为900L/H；去溶剂气温度为650℃。

进一步的，所述步骤2中，超声提取时间为10-20min，优选为15min。

进一步的，所述步骤2包括：2a)称取0.5g待测样品，其中对于颗粒或片剂进行研细，对于硬胶囊或软胶囊取内容物，对于液体试样取1g并加入1mL饱和氯化钠溶液；2b)将待测样品于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混匀后超声提取15min，以5000r/min离心10min，取乙腈层至另一离心管中；残渣再用10mL乙腈超声提取15min，以5000r/min离心10min；合并乙腈层，氮吹至0.5mL后，加入10mL水涡旋，待净化；2c)将Oasis HLB固相萃取小柱接于固相萃取装置上，依次用5mL甲醇、5mL水活化小柱，用5mL 5体积％甲醇水平衡后，将待净化的样品溶液加入Oasis HLB固相萃取小柱内，控制流速1滴/s，待样品溶液流尽后，用4mL 5体积％甲醇水溶液淋洗Oasis HLB固相萃取小柱，最后用90体积％甲醇水溶液洗脱Oasis HLB固相萃取小柱，收集洗脱液至5mL容量瓶中，定容至刻度，经0.16-0.19μm滤膜过滤后作为进样溶液。

进一步的，所述步骤3中液相色谱条件为：流动相：7-12mmol/L乙酸铵水溶液和甲醇；梯度洗脱：0～2min，30体积％甲醇；4min，60体积％甲醇；8min，70体积％甲醇；10min，94体积％甲醇；10.5～14min，30体积％甲醇；流速为0.2-0.4ml/min，柱温为27-35℃；进样量为1.5-2.5μL。

进一步的，所述非法添加化合物的标准曲线皆呈线性关系，相关系数均大于0.995，回收率在61.8％～109.3％之间，相对标准偏差均不高于15％，同一种非法添加化合物在不同基质的方法检出限在3～80μg/kg之间。

有益效果：

本发明采用乙腈超声提取待测样品，HLB固相萃取小柱净化，经液相色谱分离，以乙酸铵和甲醇为流动相梯度洗脱，采用电喷雾离子源、多反应监测模式检测，提供了液相色谱- 质谱联用同时测定保健食品中21种非法添加化合物的方法。21种非法添加化合物均呈良好的线性关系，相关系数均大于0.995，回收率在61.8％～109.3％之间，相对标准偏差均不高于 15％，不同基质的方法检出限在3～80μg/kg之间。该方法可作为减肥类、降脂类、降糖类、降压类保健食品中非法添加药物的同时测定方法。

附图说明

为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅涉及本发明的一些实施例，而非对本发明的限制。

图1是本发明一个实施例1提供的麻黄碱MRM图；

图2是本发明一个实施例1提供的芬氟拉明MRM图；

图3是本发明一个实施例1提供的N,N-双去甲基西布曲明MRM图；

图4是本发明一个实施例1提供的N-单去甲基西布曲明MRM图；

图5是本发明一个实施例1提供的西布曲明MRM图；

图6是本发明一个实施例1提供的苯乙双胍MRM图；

图7是本发明一个实施例1提供的甲苯磺丁脲MRM图；

图8是本发明一个实施例1提供的格列齐特MRM图；

图9是本发明一个实施例1提供的吡格列酮MRM图；

图10是本发明一个实施例1提供的格列波脲MRM图；

图11是本发明一个实施例1提供的格列吡嗪MRM图；

图12是本发明一个实施例1提供的瑞格列奈MRM图；

图13是本发明一个实施例1提供的格列美脲MRM图；

图14是本发明一个实施例1提供的格列本脲MRM图；

图15是本发明一个实施例1提供的格列喹酮MRM图；

图16是本发明一个实施例1提供的可乐定MRM图；

图17是本发明一个实施例1提供的利血平MRM图；

图18是本发明一个实施例1提供的去羟基洛伐他汀MRM图；

图19是本发明一个实施例1提供的美伐他汀MRM图；

图20是本发明一个实施例1提供的洛伐他汀MRM图；

图21是本发明一个实施例1提供的辛伐他汀MRM图；

图22是本发明一个实施例3提供的麻黄碱淋洗曲线图；

图23是本发明一个实施例3提供的芬氟拉明淋洗曲线图；

图24是本发明一个实施例3提供的N,N-双去甲基西布曲明淋洗曲线图；

图25是本发明一个实施例3提供的N-单去甲基西布曲明淋洗曲线图；

图26是本发明一个实施例3提供的西布曲明淋洗曲线图；

图27是本发明一个实施例3提供的苯乙双胍淋洗曲线图；

图28是本发明一个实施例3提供的甲苯磺丁脲淋洗曲线图；

图29是本发明一个实施例3提供的格列齐特淋洗曲线图；

图30是本发明一个实施例3提供的吡格列酮淋洗曲线图；

图31是本发明一个实施例3提供的格列波脲淋洗曲线图；

图32是本发明一个实施例3提供的格列吡嗪淋洗曲线图；

图33是本发明一个实施例3提供的瑞格列奈淋洗曲线图；

图34是本发明一个实施例3提供的格列美脲淋洗曲线图；

图35是本发明一个实施例3提供的格列本脲淋洗曲线图；

图36是本发明一个实施例3提供的格列喹酮淋洗曲线图；

图37是本发明一个实施例3提供的可乐定淋洗曲线图；

图38是本发明一个实施例3提供的利血平淋洗曲线图；

图39是本发明一个实施例3提供的去羟基洛伐他汀淋洗曲线图；

图40是本发明一个实施例3提供的美伐他汀淋洗曲线图；

图41是本发明一个实施例3提供的洛伐他汀淋洗曲线图；

图42是本发明一个实施例3提供的辛伐他汀淋洗曲线图。

具体实施方式

下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。在下面的实施例中，如未明确说明，“％”均指体积分数。

以下使用的主要试剂和设备包括：

甲醇、乙腈，色谱纯，德国Merker公司；乙酸铵，色谱纯，美国sigma公司。

非法添加化合物标准品：麻黄碱、西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、N-单去甲基西布曲明、芬氟拉明、苯乙双胍、吡咯列酮、格列吡嗪、瑞格列奈、格列齐特、格列本脲、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、格列波脲、可乐定、利血平、去羟基洛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀均购置于中国食品药品检定研究院。

TQD液相色谱质谱联用仪，美国Waters公司；P 300H超声波清洗器，德国Elma公司；分析天平，瑞士梅特勒公司；涡旋混合器，德国IKA公司；氮吹仪，美国Organomation公司。

实施例1以21种非法添加化合物的标准样品建立定性判断依据

取标准品：麻黄碱、西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、N-单去甲基西布曲明、芬氟拉明、苯乙双胍、吡咯列酮、格列吡嗪、瑞格列奈、格列齐特、格列本脲、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、格列波脲、可乐定、利血平、去羟基洛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀，直接进样到液相色谱质谱联用仪。质谱条件：电喷雾电离离子源；扫描方式为正离子扫描；检测模式为MRM模式；去溶剂气流量为900L/H；去溶剂气温度为650℃。对标准品进行一级质谱分析，得到各自母离子。对标准品进行二级质谱扫描，得到物质的子离子信息，确定目标化合的定量定性离子对。通过优化各物质锥孔电压、碰撞能量，确定各化合物质谱参数(见表1)。

表1. 21种非法添加化合物的质谱参数

注：*为定量离子

标准品MRM图见图1～图21，图中横坐标为时间，纵坐标为响应。从图1-图21可以看出，各目标物质由保留时间、母离子和子离子信息共同确定，因而可以通过一次进样同时区分开所添加的化合物种类。

实施例2色谱条件的优化

分别测试了甲醇-水、乙酸铵水溶液-甲醇作为流动相时各物质的响应情况，实验发现用甲醇-水体系作为流动相时，降脂类等化合物的响应明显增强，且各化合物之间分离效果较好，此外，在水中加入7-12mmol/L乙酸铵后明显能改善峰型。优选10mmol/L乙酸铵-甲醇体系作为流动相，21种化合物分析时间较短，分离好，响应高。

实施例3净化方法的优化

针对21种化合物结构式中存在的官能团，如季铵离子、苯环，实验考察了QuECHERS(900mg Mg2SO4、150mg PSA、15mg GCB)、PAX SPE、HLB SPE对标准样品的净化效果，结果显示，采用QuECHERS及PAX对某些化合物的回收率不够理想，而采用HLB小柱对目标化合物的回收率较好，最终选用HLB作为净化小柱。

目标化合物淋洗曲线的建立：将21种目标化合物的水溶液上样，然后分别用0％、5％、 10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液上机测定，以甲醇水浓度为横坐标，回收率为纵坐标建立淋洗曲线，考察各目标化合物被洗脱时的溶剂体系。各化合物的淋洗曲线见图22-图42，图中横坐标表示甲醇水溶液体积浓度，纵坐标表示淋洗回收率。从图22-图42可以看出90％的甲醇水浓度，化合物的回收率最好。

实施例4方法的线性范围、检出限和定量限

为考察样品基质的影响，实验分别使用甲醇和口服液、片剂、硬胶囊、软胶囊空白基质溶液来配制系列标准溶液，以色谱峰的峰面积对待测成分的浓度制作标准曲线。通过向4种剂型的阴性样品中添加21种待测成分标准样品考察方法的检出限(S/N＝3)和定量限 (S/N＝10)。分别在100、500和1000ng三个加标量进行加标回收率和精密度试验，结果见表2～表23，结果表明在考察浓度范围内，各种基质中21种非法添加化合物均呈良好的线性关系，相关系数均大于0.995，且溶液标准曲线与基质标准曲线基本一致，回收率在61.8％～ 109.3％之间，相对标准偏差均不高于15％，不同基质的方法检出限在3～80μg/kg之间。

表2.麻黄碱标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表3.芬氟拉明标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表4.N,N-双去甲基西布曲明标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表5.N-单去甲基西布曲明标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表6.西布曲明标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表7.苯乙双胍标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表8.甲苯磺丁脲标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表9.格列齐特标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表10.吡格列酮标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表11.格列波脲标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表12.格列吡嗪标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表13.瑞格列奈标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表14.格列美脲标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表15.格列本脲标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表16.格列喹酮标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表17.可乐定标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表18.利血平标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表19.去羟基洛伐他汀标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表20.美伐他汀标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表21.洛伐他汀标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表22.辛伐他汀标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限

表23.4种剂型中21种非法添加化合物的回收率和精密度

实施例5未知样品检测

取待测样品，称取0.5g(精确至0.0001g)待测样品(颗粒、片剂：取适量，研细；胶囊：取内容物；液体试样取1g并加入1mL饱和氯化钠溶液)于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混匀后超声提取15min，以5000r/min离心10min，取乙腈层至另一离心管中；残渣再用10mL乙腈超声提取15min，以5000r/min离心10min；合并乙腈层，氮吹约至0.5mL后，加入10mL水涡旋，待净化。

将Oasis HLB固相萃取小柱接于固相萃取装置上，依次用5mL甲醇、5mL水活化小柱，用5mL 5％甲醇水平衡后，将待净化的样品溶液加入小柱内，控制流速1滴/s，待样品溶液流尽后，用4mL 5％甲醇水溶液淋洗小柱，最后用90％甲醇水溶液洗脱小柱，收集洗脱液至5mL 容量瓶中，定容至刻度，经0.22μm滤膜过滤后作为进样溶液。

将进样溶液送入液相色谱质谱联用仪，先经过液相色谱进行分离，之后进入质谱仪进行检测，液相色谱条件为：色谱柱为Waters BEH C18(100×2.1mm,1.7μm)；流动相：10mmol/L 乙酸铵水溶液和甲醇；梯度洗脱：0～2min，30％甲醇；4min，60％甲醇；8min，70％甲醇； 10min，94％甲醇；10.5～14min，30％甲醇。流速为0.3ml/min，柱温为30℃；进样量为2μL。质谱条件为电喷雾电离离子源；扫描方式为正离子扫描；检测模式为MRM模式；去溶剂气流量为900L/H；去溶剂气温度为650℃。

根据实施例1中定性判断依据确定待测样品中添加的物质种类，根据实施例4中定量判断依据确定待测样品中添加物质的量。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims

1.一种测定保健食品中非法添加化合物的方法，包括以下步骤：

步骤1：将非法添加化合物的标准样品直接进样到质谱仪，对非法添加化合物的标准样品分别进行一级质谱分析和二级质谱扫描，得到目标化合物的质谱参数，作为定性判断依据，并绘制标准曲线，作为定量计算依据；所述非法添加化合物为麻黄碱、西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、N-单去甲基西布曲明、芬氟拉明、苯乙双胍、吡咯列酮、格列吡嗪、瑞格列奈、格列齐特、格列本脲、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、格列波脲、可乐定、利血平、去羟基洛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀和辛伐他汀；

步骤3：将步骤2得到的进样溶液送入液相色谱质谱联用仪，先经过液相色谱进行分离，之后进入质谱仪进行检测，根据步骤1所述定性判断依据确定待测样品中添加的物质种类，根据步骤1所述定量判断依据确定待测样品中添加物质的量；其中液相色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相为乙酸铵水溶液和甲醇；

所述步骤1和步骤3中，质谱仪的条件为：电喷雾电离离子源；扫描方式为正离子扫描；检测模式为MRM模式；去溶剂气流量为800-1000L/H；去溶剂气温度为600-700℃；

所述步骤3中液相色谱条件为：流动相：7-12mmol/L乙酸铵水溶液和甲醇；梯度洗脱：0～2min，30体积％甲醇；4min，60体积％甲醇；8min，70体积％甲醇；10min，94体积％甲醇；10.5～14min，30体积％甲醇；流速为0.2-0.4ml/min，柱温为27-35℃；进样量为1.5-2.5μL。

2.根据权利要求1所述测定保健食品中非法添加化合物的方法，其特征在于：所述保健食品为减肥类、降脂类、降糖类或降压类保健食品的口服液、颗粒、片剂、硬胶囊或软胶囊。

3.根据权利要求1所述测定保健食品中非法添加化合物的方法，其特征在于：所述步骤1和步骤3中，质谱仪的条件为：电喷雾电离离子源；扫描方式为正离子扫描；检测模式为MRM模式；去溶剂气流量为900L/H；去溶剂气温度为650℃。

4.根据权利要求1或2所述测定保健食品中非法添加化合物的方法，其特征在于：所述步骤2中，超声提取时间为10-20min。

5.根据权利要求4所述测定保健食品中非法添加化合物的方法，其特征在于：所述步骤2中，超声提取时间为15min。

6.根据权利要求1或2所述测定保健食品中非法添加化合物的方法，其特征在于：所述步骤2包括：2a)称取0.5g待测样品，其中对于颗粒或片剂进行研细，对于硬胶囊或软胶囊取内容物，对于液体试样取1g并加入1mL饱和氯化钠溶液；2b)将待测样品于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混匀后超声提取15min，以5000r/min离心10min，取乙腈层至另一离心管中；残渣再用10mL乙腈超声提取15min，以5000r/min离心10min；合并乙腈层，氮吹至0.5mL后，加入10mL水涡旋，待净化；2c)将Oasis HLB固相萃取小柱接于固相萃取装置上，依次用5mL甲醇、5mL水活化小柱，用5mL 5体积％甲醇水平衡后，将待净化的样品溶液加入OasisHLB固相萃取小柱内，控制流速1滴/s，待样品溶液流尽后，用4mL 5体积％甲醇水溶液淋洗Oasis HLB固相萃取小柱，最后用90体积％甲醇水溶液洗脱Oasis HLB固相萃取小柱，收集洗脱液至5mL容量瓶中，定容至刻度，经0.16-0.19μm滤膜过滤后作为进样溶液。

7.根据权利要求1或2所述测定保健食品中非法添加化合物的方法，其特征在于：所述非法添加化合物的标准曲线皆呈线性关系，相关系数均大于0.995，回收率在61.8％～109.3％之间，相对标准偏差均不高于15％，同一种非法添加化合物在不同基质的方法检出限在3～80μg/kg之间。