CN114544809B - 一种阿福特罗中间体及其对映异构体手性纯度的hplc检测方法 - Google Patents

一种阿福特罗中间体及其对映异构体手性纯度的hplc检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种阿福特罗中间体及其对映异构体手性纯度的HPLC检测方法，取阿福特罗中间体，用无水乙醇溶解，配制成样品溶液，取0.3μL样品溶液注入液相色谱仪，完成阿福特罗中间体及其对映异构体的分离，检测手性纯度ee%值；本方法采用涂敷型多糖衍生物手性柱，正庚烷/异丙醇正相色谱体系，等度洗脱进行分离，可以快速的分离阿福特罗中间体与其对映异构体，保证了阿福特罗中间体化学纯度ee%值的准确可靠性。

Description

一种阿福特罗中间体及其对映异构体手性纯度的HPLC检测 方法
技术领域
本发明属于高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)方法，尤其是一种用HPLC检测阿福特罗中间体与其对映异构体分离的方法。
背景技术
阿福特罗临床用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)，在其制备过程中的一种中间体结构式为
Figure BDA0003507540010000011
其分子式为C17H21NO，化学名称为(R)-(-)-1-(4'-methoxyphenyl)-2-benzylaminopropane，该中间体的分子中含一个手性碳原子，在通过定向合成目标化合物阿福特罗的过程中需要控制该中间体与其对映异构体的含量。
该中间体的合成是定向合成目标化合物阿福特罗的过程中非常关键的一步，且其手性纯度是控制该中间体质量的一项重要指标，因此，实现该中间体及其对映异构体的分离对阿福特罗药物的合成过程中的质量控制有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离阿福特罗中间体与其对映异构体的HPLC检测方法，用于测定阿福特罗中间体的手性纯度ee％值。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种阿福特罗中间体及其对映异构体手性纯度的HPLC检测方法，检测条件为色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm手性柱，柱温为35℃；流动相：异丙醇：正己烷＝3：97(v/v)，流速为0.6mL/min；洗脱程序：3％异丙醇等度洗脱15～20min；检测波长：225nm；包括以下步骤：
(1)，取阿福特罗中间体适量，用无水乙醇溶解样品，配制成每1mL乙醇含阿福特罗中间体约5mg的样品溶液；
(2)，取步骤(1)的样品溶液按照进样体积0.3μL注入液相色谱仪，完成阿福特罗中间体及其对映异构体的分离，进行检测记录色谱图，从而检测手性纯度ee％值。
进一步，所述的色谱柱为涂敷型多糖衍生物手性柱。
更进一步，色谱柱是固定相表面涂敷了纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的球形硅胶的色谱柱。
进一步，所述的液相色谱仪为Thermo Ultimate 3000，DAD检测器。
本发明的有益效果是：
本发明采用DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm手性柱，不仅提高了色谱峰的对称性，而且能有效分离阿福特罗中间体及其对映异构体；柱温选择35℃，缩短了分析时间。
本发明选择无水乙醇溶解样品，能有效避免样品溶液在高比例的非极性流动相正己烷中析出的可能性。
本发明进样体积0.3μL，该体积可根据样品浓度大小适当调整，流速选择0.6mL/min，降低了仪器压力，延长色谱柱寿命。
本发明方法能简单、快速、准确的测定阿福特罗中间体的手性纯度ee％值，解决了阿福特罗中间体及其对映异构体的分离问题，从而保证了阿福特罗中间体化学纯度ee％值的准确可靠性。
附图说明
图1为本发明对比例1的CHIRALCEL AD-H洗脱HPLC图；
图2为本发明对比例2的CHIRALCEL OD-H洗脱HPLC图；
图3为本发明对比例3的CHIRALCEL OD-H洗脱HPLC图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的说明。
申请人发现，以涂敷型多糖衍生物手性柱，正己烷/异丙醇作为流动相体系，等度洗脱，可以将阿福特罗中间体及其对映异构体进行有效分离，从而可以准确测定阿福特罗中间体的手性纯度ee％值。
本发明HPLC检测方法，可按照以下方法实现：
(1)，取阿福特罗中间体消旋体适量，用无水乙醇溶解，配制成每1mL含阿福特罗中间体约5mg的样品溶液。
(2)，设置流动相流速为0.6mL/min，检测波长225nm，色谱柱柱温35℃。
(3)取(1)的样品溶液0.3μL注入液相色谱仪，完成阿福特罗中间体及其对映异构体的分离，从而检测手性纯度ee％值。
其中检测条件为：
高效液相色谱仪：Thermo Ultimate 3000，DAD检测器；
色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm手性柱；
流动相：正己烷(通道一)、异丙醇(通道二)；
洗脱程序：3％异丙醇，洗脱15min；
检测波长：225nm；
流速：0.6mL/min；
柱温：35℃；
进样体积：0.3μL。
对比例1
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Thermo Ultimate 3000，DAD检测器；
色谱柱：DAICEL CHIRALCEL AD-H，4.6*250mm，5μm手性柱；
流动相：正己烷(通道一)、异丙醇(通道二)；
洗脱程序：5％异丙醇，洗脱15min；
检测波长：全扫；
流速：1.0mL/min；
柱温：25℃；
进样体积：1μL。
实验步骤：
取定向合成的阿福特罗中间体的消旋体5mg，置于1mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为方法开发用的样品溶液。
取上述样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1，图1中3号峰为阿福特罗中间体，1号峰为其对映异构体峰，从图中可看出，该条件下，阿福特罗中间体与其对映异构体不能有效分离，且拖尾严重。
对比例2
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Thermo Ultimate 3000，DAD检测器；
色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm手性柱；
流动相：正己烷(通道一)、异丙醇(通道二)；
洗脱程序：5％异丙醇，洗脱10min；
检测波长：全扫；
流速：1.0mL/min；
柱温：25℃；
进样体积：0.3μL。
实验步骤：
取定向合成的阿福特罗中间体的消旋体5mg，置于1mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为方法开发用的样品溶液。
取上述样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图2，图2中1号峰为阿福特罗中间体，2号峰为其对映异构体峰，从图中可看出，该条件下，阿福特罗中间体与其对映异构体分离度明显改善，但未基线分离，且2号峰不对称。
对比例3
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Thermo Ultimate 3000，DAD检测器；
色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm手性柱；
流动相：正己烷(通道一)、异丙醇(通道二)；
洗脱程序：3％异丙醇，洗脱20min；
检测波长：225nm；
流速：0.6mL/min；
柱温：35℃；
进样体积：0.3μL。
实验步骤：
取定向合成的阿福特罗中间体的消旋体5mg，置于1mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为方法开发用的样品溶液。
取上述样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3，图3中1号峰为阿福特罗中间体，2号峰为其对映异构体峰，从图中可看出，该条件下，阿福特罗中间体与其对映异构体分离度明显改善，达到基线分离，且峰型对称，阿福特罗中间体主峰在10.5min左右。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，以及部分运用的实施例，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种阿福特罗中间体及其对映异构体手性纯度的HPLC检测方法，所述的阿福特罗中间体结构式为
Figure DEST_PATH_IMAGE002
，化学名称为(R)-(-)-1-(4'-methoxyphenyl)-2-benzylaminopropane，其特征在于，检测条件为：
色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm，柱温为35℃；
流动相：异丙醇：正己烷=3：97，流速为0.6 mL/min；
洗脱程序：等度洗脱15～20min；
检测波长：225nm；
包括以下步骤：
（1），取阿福特罗中间体，用无水乙醇溶解，配制成每1mL乙醇含阿福特罗中间体5mg的样品溶液；
（2），取0.3μL样品溶液注入液相色谱仪，所述的液相色谱仪为Thermo Ultimate 3000，DAD检测器，完成阿福特罗中间体及其对映异构体的分离，检测手性纯度ee%值。
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