CN110940757B - 一种沙格列汀中间体及其异构体的高效液相色谱检测方法 - Google Patents

一种沙格列汀中间体及其异构体的高效液相色谱检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种(1S,3S,5S)‑2‑氮杂双环[3.1.0]己烷‑3‑羧酰胺甲烷磺酸盐及其异构体的高效液相色谱检测方法。该方法选用大赛璐AD‑H色谱柱，以加入二乙胺的乙醇与正己烷的混合溶液为流动相，进行等度洗脱。本发明可以通过一次高效液相色谱检测，同时准确地测定出(1S,3S,5S)‑2‑氮杂双环[3.1.0]己烷‑3‑羧酰胺甲烷磺酸及其异构体的含量，能够达到良好的分离效果。

Description

一种沙格列汀中间体及其异构体的高效液相色谱检测方法
技术领域：
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐及其异构体的高效液相色谱检测方法。
背景技术：
沙格列汀是由Bristol-Myers Squibb公司与Astra Zeneca公司联合开发的一种高效二肽基肽酶-4(DPP-4)选择性和竞争性抑制剂，主要用于Ⅱ型糖尿病治疗。该药的主要作用机制是通过可逆的、竞争性和选择性抑制二肽基肽酶-4(DPP-4)，减少胰高血糖素样肽-1(GLP-1)水解，增加胰岛素释放从而降低血糖。该药降血糖作用明显、毒副作用小、安全性高。沙格列汀的化学名为(1S,3S,5S)-2-[(2S)-2-氨基-2-(3-羟基三环[3.3.1.13,7]癸烷-1-基)乙基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-腈，结构如式I所示。
Figure BDA0002329875140000011
(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸是降血糖药沙格列汀合成所需的重要原料，结构如式II所示。沙格列汀分子结构中有4个手性中心，其中3个手性中心是由(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸引入，因此，(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸的手性纯度很大程度上决定了沙格列汀的光学纯度、异构体杂质多少等。
含有多个手性碳原子的化合物的光学异构体的分离一直是药物质量控制的难点，然而，对于(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐及其异构体的手性分析测定至今未见报道。
发明内容：
本发明的目的在于针对现有技术，提供一种检测(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐及其异构体的高效液相色谱法。
本发明采用的技术方案如下：选用大赛璐AD-H色谱柱，以加入二乙胺的乙醇和正己烷混合溶液为流动相，流动相的体积比为乙醇：正己烷：二乙胺＝15～25:75～85:0.1，流速为0.8～1.2mL/min进行等度洗脱。
进一步，所述大赛璐AD-H柱以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为填料。
更进一步，所述大赛璐AD-H柱的规格为250mm*4.6mm*5um。
更进一步，所述手性色谱柱的柱温为20～30℃，优选25℃。
进一步，所述流动相为加入二乙胺的乙醇和正己烷的混合溶液。
更进一步，所述流动相的体积比为乙醇：正己烷：二乙胺＝15～25:75～85:0.1，优选为乙醇：正己烷：二乙胺＝20:80:0.1。
更进一步，所述流动相流速为0.8～1.2mL/min，优选1.0mL/min。
进一步，供试液浓度为10～15mg/mL，优选10mg/mL。
进一步，进样量为10～30uL，优选20uL。
进一步，选用乙醇、流动相以及二乙胺的混合溶液作为配制待测样品的稀释剂。
更进一步，所述稀释剂的体积比为乙醇：流动相：二乙胺＝20～30:70～80:1，优选为乙醇：流动相：二乙胺＝25:75:1。
进一步，检测波长为210～220nm，优选215nm。
进一步，运行时间为10～30min，优选20min。
进一步，在我们的检测条件下，最先出峰的是(1S,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，紧跟出峰的是异构体(1R,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，再出峰的是为(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，最后出峰的是异构体(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，相邻异构体之间的分离度均大于2.0，完全符合基线分离的要求。
本发明的有益效果在于：本发明可以通过一次高效液相色谱检测，同时准确地测定出(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸及其异构体的含量，能够达到良好的分离效果。该方法简单、快速，可以更好地控制产品的质量以及稳定性。
附图说明
图1实施例1的高效液相色谱图
图2实施例2的高效液相色谱图
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术内容作进一步的阐述，其目的是为了更好的理解本发明的内容，但本发明的保护范围不限于此。
实施例1(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸的HPLC分析
色谱条件：
色谱柱：大赛璐AD-H柱，250mm*4.6mm*5um。
流动相：乙醇/正己烷/二乙胺(20/80/0.1，V/V/V)，等度洗脱。
流速：1.0mL/min。
波长：215nm。
柱温：25℃。
运行时间：20min。
稀释剂及空白：乙醇/流动相/二乙胺(25/75/1,V/V/V)。
供试液浓度：10mg/mL。
进样量：20uL。
实验步骤：
分别称取(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐及其三种异构体(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐、(1R,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐和(1S,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐)各100mg至10mL容量瓶中，用上述稀释剂溶解稀释至刻度，摇匀，得混合液。取空白和混合液按照上述色谱条件进样，记录色谱图(附图1)，其中保留时间约8.545min的峰为异构体(1S,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，9.389min的峰为异构体(1R,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，10.354min的峰为(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，12.434min的峰为异构体(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，相邻异构体之间的分离度均大于2.0，完全符合基线分离的要求。
实施例2(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸的HPLC分析
色谱条件：
色谱柱：大赛璐AD-H柱，250mm*4.6mm*5um。
流动相：乙醇/正己烷/二乙胺(25/75/0.1，V/V/V)，等度洗脱。
流速：0.8mL/min。
波长：215nm。
柱温：30℃。
运行时间：30min。
稀释剂及空白：乙醇/流动相/二乙胺(25/75/1,V/V/V)。
供试液浓度：10mg/mL。
进样量：10uL。
实验步骤：
分别称取(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐及其三种异构体(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐、(1R,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐和(1S,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐)各100mg至10mL容量瓶中，用上述稀释剂溶解稀释至刻度，摇匀，得混合液。取空白和混合液按照上述色谱条件进样，记录色谱图(附图2)，其中保留时间约8.296min的峰为异构体(1S,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，9.178min的峰为异构体(1R,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，10.078min的峰为(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，11.981min的峰为异构体(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐的峰，相邻异构体之间的分离度均大于2.0，完全符合基线分离的要求。

Claims (5)

1.一种沙格列汀中间体及其异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述沙格列汀中间体为(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，所述异构体为(1S,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，(1R,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酰胺甲烷磺酸盐，选用大赛璐AD-H色谱柱，以加入二乙胺的乙醇和正己烷混合溶液为流动相，流动相的体积比为乙醇：正己烷：二乙胺＝15～25:75～85:0.1，流速为0.8～1.2mL/min进行等度洗脱，柱温为20～30℃，检测波长为210～220nm。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述大赛璐AD-H色谱柱以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为填料。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，供试液浓度为10～15mg/mL；进样量为10～30uL。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，选用乙醇、流动相以及二乙胺的混合溶液作为配制待测样品的稀释剂。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，运行时间为20～30min。
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