CN107831230B - 分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法。该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以由乙腈、四氢呋喃、三乙胺的水溶液组成的流动相洗脱进行固液分离，所述相关杂质包括双氧化杂质Ⅰ、单氧化杂质Ⅱ、Z式Ⅲ、E式Ⅳ及E式异构体Ⅴ的一种或多种。本发明的方法采用高效液相色谱法对阿伐斯汀及其制剂中相关杂质进行分离和检测，可在18分钟内将阿伐斯汀及其制剂中相关杂质完全分离并进行检测，该方法分离度好，专属性强，灵敏度高；且操作简单，具有简便、快速的优点，从而确保了阿伐斯汀及其制剂的质量可控，并最终确定产品的安全有效，对于阿伐斯汀的质量控制有重要意义。

Description

分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法。
背景技术
阿伐斯汀一种中等强度的竞争性组织胺H1受休拮抗剂，属于酚嗪类抗组胺药。阿伐斯汀的结构式如式I所示，是20世纪80年代末期由葛兰素威康公司推出的抗过敏药物，为Triprolidine的衍生物，其分子式为C22H24N2O3，分子量为348.444，化学名为(E,E)-3-[6-[1-(4-甲基苯基)-3-(1-吡咯烷基)-1-丙烯基]-2-吡啶基]-2-丙烯酸，是吡咯胺类结构的第二代抗组胺新药，为竞争性很强的组织胺H1受体拮抗剂，没有明显抗胆碱作用，对中枢神经系统的穿透能力低，对急、慢性荨麻疹，过敏性鼻炎等变态反应疾病都有较好的疗效。本品无心脏毒性反应，推荐剂量下有轻度嗜睡作用，偶有皮疹。
Figure BDA0001452129590000011
在合成阿伐斯汀及其制剂时，会产生相关杂质。为了控制阿伐斯汀的质量，需要对阿伐斯汀及其制剂及其相关杂质进行分离测定。
目前还没有公开的方法报道分离测定阿伐斯汀及其杂质的方法。因此开发一种分离测定阿伐斯汀及其杂质的方法对于实现对阿伐斯汀及其制剂的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法。本发明的方法可同时实现阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的分离和检测，该方法分离度好，专属性强，灵敏度高；且操作简单，具有简便、快速的优点。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以由乙腈、四氢呋喃、三乙胺的水溶液组成的流动相洗脱进行固液分离，所述相关杂质包括双氧化杂质Ⅰ、单氧化杂质Ⅱ、Z式Ⅲ、E式Ⅳ及E式异构体Ⅴ的一种或多种，具体结构式如下所示：
Figure BDA0001452129590000021
Figure BDA0001452129590000031
所述双氧化杂质Ⅰ、单氧化杂质Ⅱ、Z式Ⅲ、E式Ⅳ及E式异构体Ⅴ为阿伐斯汀的降解产物。
进一步，所述三乙胺的水溶液中三乙胺质量百分比为0.5％。
进一步，所述流动相的pH值为6.9±0.2。
进一步，所述流动相中乙腈、四氢呋喃和三乙胺的水溶液的体积比为10～15：5～15：70～90。
阿伐斯汀为两性化合物，既有酸性部分羧酸根离子，又有N碱基部分，三乙胺的添加，对主峰及杂质的峰型有明显的改善，四氢呋喃的加入，可以使主峰与至少5个降解杂质达到有效分离。
本发明的目的之二在于提供一种利用高效液相色谱法分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法，采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以由乙腈、四氢呋喃、质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液组成的流动相进行洗脱，进入检测器进行检测；所述乙腈、四氢呋喃和质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液的体积比为10～15：5～15：70～90；所述相关杂质包括双氧化杂质(Ⅰ)、单氧化杂质(Ⅱ)、Z式(Ⅲ)、E式(Ⅳ)及E式异构体(Ⅴ)的一种或多种。
进一步，所述相关杂质为双氧化杂质(Ⅰ)、单氧化杂质(Ⅱ)、Z式(Ⅲ)、E式(Ⅳ)及E式异构体(Ⅴ)，包括以下步骤：
1)分别取阿伐斯汀及其相关杂质的对照品，用所述流动相作为稀释剂溶解制成阿伐斯汀及其对相关杂质的对照品溶液，分别取对照品溶液进样进行高效液相色谱分析，确定阿伐斯汀及其相关杂质的保留时间；
2)取阿伐斯汀供试样品加稀释剂制成供试样品溶液，再取稀释剂作为空白溶液，分别取供试样品溶液及空白溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图；根据供试样品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积比较完成阿伐斯汀及其相关杂质的分离测定。
进一步，所述阿伐斯汀供试样品浓度为180ug/ml-250ug/ml。
作为一种优选，所述阿伐斯汀供试样品浓度为200ug/ml。
进一步，所述色谱柱的规格为250×4.6mm，5μm；所述色谱柱柱箱温度为35-45℃。
作为一种优选，所述色谱柱柱箱温度为40℃。
进一步，所述流动相流速为0.5-2.0ml/min。
作为一种优选，所述流动相流速为0.5ml/min
进一步，所述检测器为紫外检测器，所述检测器的检测波长为210-280nm。
作为一种优选，所述检测器的检测波长为250nm。
本发明的目的之三在于提供一种分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的试剂组合物，所述试剂组合物由乙腈、四氢呋喃、三乙胺的水溶液组成；所述三乙胺的水溶液中三乙胺的质量百分比为0.5％；所述乙腈、四氢呋喃和三乙胺的水溶液的体积比为10～15：5～15：70～90。用该试剂组合物进行分离测定，能够有效快速的将阿伐斯汀及其制剂中相关杂质分离，且分离度好，专属性强。
作为一种优选，所述乙腈、四氢呋喃和三乙胺的水溶液的体积比为12：8：80。
作为一种优选，所述试剂组合物的pH值为6.9±0.2。
本发明的有益效果在于：
1)本发明的分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法，采用高效液相色谱法对阿伐斯汀及其制剂中相关杂质进行分离和检测，可在18分钟内将阿伐斯汀及其制剂中相关杂质完全分离并进行检测，分离时间短，且有优良的分离性能和耐久性。
2)本发明解决了分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的分离测定问题，该方法分离度好，专属性强，灵敏度高；且操作简单，具有简便、快速的优点，从而确保了阿伐斯汀及其制剂的质量可控，并最终确定产品的安全有效，对于阿伐斯汀的质量控制有重要意义。
3)本发明还提供了一种分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的试剂组合物，阿伐斯汀为两性化合物，既有酸性部分羧酸根离子，又有N碱基部分，三乙胺的添加，对主峰及杂质的峰型有明显的改善，四氢呋喃的加入，可以使主峰与至少5个降解杂质达到有效分离；用该试剂组合物进行分离测定，能够有效快速的将阿伐斯汀及其制剂中相关杂质分离，且分离度好，专属性强。
附图说明
图1为阿伐斯汀胶囊及其相关杂质的混合溶液高效液相色谱图。
具体实施方式
以下将参照附图，对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
以下实施例中，采用的仪器及色谱条件如下：
色谱条件：SHIMADZU VP-ODS，50mm×4.6mm，5μm；或性能相当的色谱柱；
流动相：乙腈-四氢呋喃-0.5％三乙胺(用磷酸调节pH至6.9±0.2)；
流动相流速：0.5ml/min；
检测器检测波长：250nm；
色谱柱柱箱柱温：40℃；
进样量：20μl；
稀释剂为流动相。
实施例1 分离测定阿伐斯汀及其相关杂质的方法
1)避光操作，取阿伐斯汀适量，加流动相使溶解并稀释制成每1ml含阿伐斯汀约200μg的溶液，作为供试样品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
2)取阿伐斯汀对照品适量，置石英容量瓶中，加流动相超声溶解并定量稀释制成每1ml约含阿伐斯汀200μg的溶液，在5000lx光照箱中光照48h作为系统适应性溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ、杂质Ⅴ和阿伐斯汀峰，理论板数按阿伐斯汀峰计算应不低于5000，阿伐斯汀和杂质Ⅴ峰间分离度应大于2.0，各相邻杂质峰间分离度应符合要求。
3)分别取供试样品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
所述流动相中乙腈、四氢呋喃和质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液的体积比为10：5：85。
实施例2 分离测定阿伐斯汀胶囊及其相关杂质的方法
1)避光操作，取阿伐斯汀胶囊含量项下内容物适量(约相当于阿伐斯汀20mg)，置100ml棕色量瓶中，加流动相超声并不时振摇10分钟使阿伐斯汀溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试样品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
2)取阿伐斯汀对照品适量，置石英容量瓶中，加流动相超声溶解并定量稀释制成每1ml约含阿伐斯汀200μg的溶液，在5000lx光照箱中光照48h作为系统适应性溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ、杂质Ⅴ和阿伐斯汀峰，理论板数按阿伐斯汀峰计算应不低于5000，阿伐斯汀和杂质Ⅴ峰间分离度应大于2.0，各相邻杂质峰间分离度应符合要求。
3)分别取供试样品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。
所述流动相中乙腈、四氢呋喃和质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液的体积比为12：8：80。
实施例3 分离测定阿伐斯汀胶囊及其相关杂质的方法
除了采用的流动相配比不同，其余条件均与实施例2相同。
所述流动相中乙腈、四氢呋喃和质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液的体积比为15：5：80。
实施例4 分离测定阿伐斯汀胶囊及其相关杂质的方法
除了采用的流动相配比不同，其余条件均与实施例2相同。
所述流动相中乙腈、四氢呋喃和质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液的体积比为15：15：70。
对比例1
除了采用的流动相配比不同，其余条件均与实施例2相同。
所述流动相中乙腈、四氢呋喃和质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液的体积比为15：20：65。
对比例2
除了采用的流动相配比不同，其余条件均与实施例2相同。
所述流动相中乙腈、四氢呋喃和质量百分比为0.5％的三乙胺的水溶液的体积比为5：5：90。
对比例3
除了阿伐斯汀供试样品溶液浓度不同，其余条件均与实施例2相同。
阿伐斯汀供试样品溶液浓度为170ug/ml。
对比例4
除了阿伐斯汀供试样品溶液浓度不同，其余条件均与实施例2相同。
阿伐斯汀供试样品溶液浓度为260ug/ml。
实施例5 分离结果测定
实施例2-4及对比例1-4分离后记录色谱图，试验结果如下：
表1 测定结果(1)
Figure BDA0001452129590000081
结论：本发明技术方案内的方法分离结果主峰与相关杂质峰间分离度大于1.5；上述试验证明阿伐斯汀与其相关杂质峰分离良好，专属性强。
表1 测定结果(2)
Figure BDA0001452129590000082
结论：在与上述实施例其他条件相同仅流动相不同或其他条件相同仅阿伐斯汀供试样品溶液浓度不同的分离试验中，阿伐斯汀与其相关杂质分离度小于1.5，不能满足阿伐斯汀与其相关杂质进行有效分离。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (5)

1.分离测定阿伐斯汀及其制剂中相关杂质的方法，其特征在于，采用高效液相色谱法分离测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以由乙腈、四氢呋喃、三乙胺的水溶液组成的流动相洗脱进行固液分离，所述流动相中乙腈、四氢呋喃和三乙胺的水溶液的体积比为10～15：5～15：70～90；所述三乙胺的水溶液中三乙胺质量百分比为0.5％；检测中采用的阿伐斯汀供试样品浓度为180μg/ml-250μg/ml；所述相关杂质包括双氧化杂质Ⅰ、单氧化杂质Ⅱ、Z式Ⅲ、E式Ⅳ及E式异构体Ⅴ，具体结构式如下所示：
Figure FDA0002610977620000011
Figure FDA0002610977620000021
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的pH值为6.9±0.2。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)分别取阿伐斯汀及其相关杂质的对照品，用所述流动相作为稀释剂溶解制成阿伐斯汀及其相关杂质的对照品溶液，分别取对照品溶液进样进行高效液相色谱分析，确定阿伐斯汀及其相关杂质的保留时间；
2)取阿伐斯汀供试样品加稀释剂制成供试样品溶液，再取稀释剂作为空白溶液，分别取供试样品溶液及空白溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图；根据供试样品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积比较完成阿伐斯汀及其相关杂质的分离测定。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用的色谱柱的规格为250×4.6mm，5μm；所述色谱柱柱箱温度为35-45℃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为0.5-2.0ml/min；所述高效液相色谱法使用的检测器为紫外检测器，所述检测器的检测波长为210-280nm。
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