CN108918702A

CN108918702A - 一种同时测定丹七制剂中两类活性成分含量的方法

Info

Publication number: CN108918702A
Application number: CN201810485561.3A
Authority: CN
Inventors: 林德良; 杨健
Original assignee: BEIJING RED SUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: BEIJING RED SUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2018-05-21
Filing date: 2018-05-21
Publication date: 2018-11-30

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种同时测定丹七制剂中两类活性成分含量的方法。该法采用UPLC‑TQ MS同时测定丹七制剂中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re、三七皂苷R1两类四种活性成分。经实验验证，本发明方法快速、稳定、可靠，可为丹七制剂的质量评估提供重要的依据。

Description

一种同时测定丹七制剂中两类活性成分含量的方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及到一种同时测定丹七制剂中两类活性成分含量的方法。

背景技术

丹七制剂处方全方由丹参、三七两味药组成，方中以丹参活血通络、凉血消肿、清心除烦、袪瘀止痛为君；三七甘缓温通，苦降下泄，有散瘀止血、消肿定痛之功；二药合用共奏活血散瘀消肿定痛之功效。临床上多用于淤血所致的疾患，如：胸痹心痛、淤血头痛、跌打损伤、月经不调、产后瘀阻所致小腹疼痛，创伤性血肿、痛经、恶露不尽、冠心病、心绞痛、高血压等。丹七类制剂类型除了最早的丹七片剂之外，还出现了颗粒剂、胶囊剂等。这些丹七制剂因其配方不同，或者配方比例不同，或者提取精制方法不同，或者剂型不同，治疗效果也有所差异。

丹七制剂的活性成分含有两类活性成分，其一是来源于丹参的丹酚酸类物质，其二是来源于三七的三七皂苷类物质等。现有技术对丹七制剂的质量控制，有仅控制三七皂苷类成分的，例如丹七片(中国药典2015年版一部，676页)仅对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Re进行控制，这类方法均具有一定的片面性，无法实现对处方整体质量的有效控制；也有对丹参素和三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Re都进行控制的，但是由于丹参素与三七皂苷类物质化学结构差异较大，两种物质在用色谱进行检测时检测波长差异性较大，不能再同一波长下检测，例如丹七软胶囊质量控制标准(新药转正标准第74册，34页)，两类物质需要采用两种不同色谱方法进行检测，质控步骤繁琐，耗时较长。因此有必要开发一种适合于同时检测丹七制剂中丹参酚酸类和三七皂苷类的方法，以便简便、全面、快速评价丹七制剂的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用“UPLC-TQ MS”法同时测定丹七制剂中两类活性成分含量的方法，其中“UPLC-TQ MS”为“超高液相色谱串联三重四极杆质谱”。在该法中，超高液相色谱仪与质谱仪采用串联的方式，超高液相色谱仪相当于质谱仪的“进样器”，试样经色谱分离后以纯物质形式进入质谱仪；质谱仪相当于超高液相色谱仪的“检测器”。该方法可以充分发挥超高液相色谱的高分离效率以及质谱定性定量检测的专属性能力，可更好的综合评价丹七制剂的质量，指导丹七制剂的生产，使消费者更全面认识该产品质地。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种采用UPLC-TQ MS法同时测定丹七制剂中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re和三七皂苷R1的方法，其液相色谱条件：色谱柱为超高压色谱柱；进样量为1μL；流速为0.4mL/min；柱温为30℃；流动相A是体积比为0.1：99.9的甲酸和水的混合溶液，流动相B是体积比为0.1：99.9的甲酸和乙腈的混合溶液；进行梯度洗脱，梯度条件为：

质谱条件：离子源为Turbo V；电离模式为ESI^-；气帘气体积流量为30L/min；喷雾电压为-4500V；雾化气体积流量为50L/min；加热辅助气体积流量为50L/min；采集方式为多反应监测模式，离子化温度为550℃；去簇电压DP，入口电压EP，碰撞能量CE，碰撞室出口电压CXP等参数为：

在一些实施方式中，本发明方法采用的超高压色谱柱为Waters ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱。

在一些实施方式中，本发明方法采用的Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱规格为50×2.1mm，1.7μm。

在一些实施方式中，本发明方法用于同时检测丹七制剂中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re和三七皂苷R1的含量。

在一些实施方式中，本发明方法用于同时检测丹七制剂中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re和三七皂苷R1的溶出度。

在一些实施方式中，本发明方法所检测的丹七制剂包括三七丹参片、三七丹参颗粒、丹七片、丹七颗粒、丹七胶囊、丹七软胶囊。

本发明的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

(1)本发明方法能够在同一个检测条件下同时检测丹七制剂中两类4种活性成分含量，避免了在检测中频繁更换液相条件及检测波长，提高了工作效率，适合工业化大生产的要求。

(2)本发明方法快速、稳定、可靠，全程分析时间仅为12分钟。

附图说明

图1：实施例1对照品标准溶液的UPLC-TQ MS分析总离子流图；

图2：实施例1丹七软胶囊内容物的UPLC-TQ MS分析总离子流图；

图3：丹七方三种剂型溶出度比较，其中(a)为丹参素的溶出曲线；(b)为丹酚酸A的溶出曲线；(c)为三七皂苷Re的溶出曲线；(d)为三七皂苷R1的溶出曲线。

具体实施方案

下述是结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不是用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件。

实施例1：丹七软胶囊中两类四种活性成分含量的检测

(1)仪器

超高效液相色谱仪(UPLC，美国Waters公司)；串联API 5500三重四极杆质谱仪(美国Applied Biosystems公司)，配备Waters UPLC自动进样器，柱温箱，数据采集由Analyst软件完成。

(2)仪器操作条件

液相色谱条件：Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm，1.7μm)；进样量为1μL；流速为0.4mL/min；柱温为30℃；流动相A是体积比为0.1：99.9的甲酸和水的混合溶液，流动相B是体积比为0.1：99.9的甲酸和乙腈的混合溶液；进行梯度洗脱，梯度条件为：

(3)对照品贮备液的制备

分别精密称定1.0mg丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re、三七皂苷R1，置入10mL容量瓶中，50％甲醇超声波辅助溶解，放冷后稀释至刻度，得对照品贮备液。

(4)样品的制备

取丹七制剂或胶囊内容物0.5g，置于15mL离心管中，加入50％甲醇10.0mL，密封，超声30min。然后，4000r/min离心10min，取上清液，残渣用50％甲醇洗涤3次，将洗液与上清液合并，过滤，浓缩，定容至10mL量瓶中，摇匀，0.22μm PTFE滤膜滤过，置4℃冰箱中保存备用。

(5)标准曲线的绘制

精密量取一系列体积的贮备液至10mL量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，得到各对照品系列标准溶液。进样1μL，记录色谱峰面积，以对照品浓度(c)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标做图，制得对照品标准曲线。

各目标化合物的标准曲线的在相应的线性范围内线性良好(r²>0.9996)。丹参素：Y＝229923X+22453(r²＝0.9999)，丹酚酸A：Y＝624536X+21103(r²＝0.9997)，三七皂苷Re：Y＝5739X+25783(r²＝0.9995)，三七皂苷R1：Y＝3914X+58234(r²＝0.9996)。

(6)精密度实验

取同一浓度对照品溶液，于检测条件下进样1μL分析，重复6次进样，由标准曲线计算对照品的浓度，计算RSD值，即为精密度。

精密度实验中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re、三七皂苷R1的RSD分别为0.34％、0.29％、0.44％、0.36％，表明该方法精密度良好。

(7)加样回收率实验

取丹七软胶囊溶出实验60min时的样品，共9份，分成3组，分别精密加入高、中、低浓度的对照品溶液，计算加样回收率。加样回收率考察中发现丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re、三七皂苷R1的回收率在98.8－101.2％范围内，平均回收率分别为100.4％、101.1％、99.5％、98.95％，RSD分别为0.49％、0.91％、0.76％、0.87％，结果表明了方法的准确度良好。

(8)稳定性实验

取丹七软胶囊溶出实验60min时的样品、以及丹七软胶囊内容物和丹七片粉末的50％甲醇溶液，分别在0、2、4、8、10、12、24h时过0.22μmPTFE滤膜后，进样1μL检测，记录色谱峰面积，计算RSD。样品制备24h内，检测丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re、三七皂苷R1的RSD分别为0.69％、0.48％、0.78％、0.82％(溶出60min样品)，0.61％、0.58％、0.34％、0.48％(丹七软胶囊内容物)，0.47％、0.65％、0.67％、0.72％(丹七片)，表明该方法在24h内具有较好的稳定性。

实施例2丹七软胶囊两类四种活性成分溶出度的测定

(1)溶出度的条件及测定

量取900ml经脱气处理的溶出介质(1％SDS水溶液)，加热使介质温度升至并保持于(37±0.5)℃，取6粒丹七软胶囊、6粒丹七片和6粒丹七胶囊，每个转篮中投入1粒，每种制剂6个重复，转速100r/min进行试验，于1，5，10，20，30，45，60，70，90min定时、定点取样2mL，同时补加同温等量的同种介质，样品中加甲醇至4mL，摇匀过0.22μm PTFE滤膜，取续滤液，UPLC-TQ MS法进样1μL，测定目标化合物的含量，计算目标物的累积溶出度。以时间为横坐标，累积溶出度为纵坐标，绘制溶出曲线，结果如图3。

(2)溶出均一性考察

取本品6粒，以丹参素和人参皂苷R1为指标性成分，按上述溶出度测定方法进行丹七软胶囊溶出均一性试验。结果表明，丹七软胶囊的溶出均一性良好。

(3)溶出重复性考察

取3批样品(批号：15010110、15030113、15050112)，按上述溶出度测定方法进行溶出重现性试验。结果表明3批丹七软胶囊的溶出重复性良好。

本发明可以同时定量分析丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re、三七皂苷R1，且方法的准确度，精密度，重复性和稳定性均符合检测要求。本发明所选择的四种活性成分代表了丹七方中的酚酸类物质和三七皂苷类物质，同时检测丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re、三七皂苷R1的累积溶出度有利于更全面的了解不同制剂类型丹七方的溶出规律。由试验结果可知，相对于传统的片剂和胶囊剂，丹七软胶囊制剂溶出更快，约30分钟时酚酸类物质和三七皂苷类即可达到最大的溶出。药物溶出是药物吸收的前提，也是评价口服固体制剂质量的一个重要指标，丹七软胶囊中物质的快速溶出可以提高丹七方制剂的生物利用度。

应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种采用UPLC-TQ MS法同时测定丹七制剂中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re和三七皂苷R1的方法，其特征在于：

液相色谱条件：色谱柱为超高压色谱柱；进样量为1μL；流速为0.4mL/min；柱温为30℃；流动相A是体积比为0.1：99.9的甲酸和水的混合溶液，流动相B是体积比为0.1：99.9的甲酸和乙腈的混合溶液；进行梯度洗脱，梯度条件为：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述超高压色谱柱为Waters ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱的规格为50×2.1mm，1.7μm。

4.根据权利要求1、2或3所述方法，其特征在于所述方法用于同时检测丹七制剂中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re和三七皂苷R1的含量。

5.根据权利要求1、2或3所述方法，其特征在于所述方法用于同时检测丹七制剂中丹参素、丹酚酸A、三七皂苷Re和三七皂苷R1的溶出度。

6.根据权利要求1、2或3所述方法，其特征在于，所述丹七制剂包括三七丹参片、三七丹参颗粒、丹七片、丹七颗粒、丹七胶囊、丹七软胶囊。

7.根据权利要求1、2或3所述方法，其特征在于，所述丹七制剂包括三七丹参片、三七丹参颗粒、丹七片、丹七颗粒、丹七胶囊、丹七软胶囊。

8.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述丹七制剂包括三七丹参片、三七丹参颗粒、丹七片、丹七颗粒、丹七胶囊、丹七软胶囊。