CN104914173A - 一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、液相条件、质谱条件、标准曲线的制定及计算结果。本发明的方法灵敏度高、分辨率高，方法简单可靠，重现性高，可以准确的测定出该中药组合物中的成分含量。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体的涉及中药成分的含量测定方法。
背景技术
该中药组合物是由人参，麦冬、丹参，山茱萸，黄连等12味中药组成分中药复方制剂，用于治疗心律失常疾病。药理研究表明该中药组合物对于减轻有毒化学物质或者缺血再灌注损伤所诱发的心律失常有很好的疗效。应用细胞膜片箝记录技术研究其抗心律失常的机制是因为该中药组合物是一种心肌细胞的多通道阻滞剂。临床试验显示，该药能够改善突发性心动过缓，并对心脏没有任何的副作用，能够有效的防止房颤和减少室性早搏，被广泛的应用于多种心血管系统疾病。
已有报道，用传统的薄层色谱法（TLC），高效液相色谱法（HPLC）测定该中药组合物中的人参皂苷Rb1、芍药苷、马钱苷、丹酚酸B、盐酸小檗碱和五味子酯甲等主要活性成分的含量以进行质量控制。近期对该中药组合物的高效液相指纹图谱进行了研究，并未确定出共有峰，且方法耗时过长。该药物有着几十甚至几百个生物活性成分，显然，为全面控制该中药组合物的质量，仅仅进行定性鉴别和定量测定是不充分的，因此，为确保药物有效性和安全性，需建立一个多成分测定的快速而有效的方法。
发明内容
本发明提供一种具有高灵敏度、高分辨率的测定方法，可以快速有效的测定该中药组合物中的多种成分的含量。
本发明所采用的技术方案是：
一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：人参45-180份、麦冬50-200份、山茱萸125-450份、丹参125-450份、炒酸枣仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鳖虫35-150份、甘松45-200份、黄连25-90份、南五味子35-150份、龙骨75-300份，该测定方法由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂0.2-0.5g，加入甲醇，超声处理30min，用甲醇补足，过滤，即得；
B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，分别得到不同浓度的各对照品溶液；
C、液相条件：色谱柱： C18 ,柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25% 乙腈,80-75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 - 95% 乙腈,75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 - 95% 乙腈，5-5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；
质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi。气帘气压：25 psi，采用多重反应监测(MRM)模式，碰撞池入口电压：10.0/-10.0V，碰撞池出口电压：3.0/-5.0V；
D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值代入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。
优选地，步骤A中用0.22μm滤膜过滤。
优选地，步骤C中 色谱柱的规格为4.6
mm×250 mm, 5 μm。
作为优选方式，该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：
人参89份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参224份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、土鳖虫75份、甘松89份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。
或
人参45份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参225份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、甘松45份、土鳖虫35份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。
为实现上述方案，将该中药组合物制成胶囊剂、片剂、散剂或丸剂。
该中药组合物的活性成分由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，即得该中药组合物活性成分。
中药组合物的胶囊剂的制备方法由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，装入胶囊。
中药组合物的片剂的制备方法由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成片剂。
中药组合物的冲剂的制备方法由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成冲剂。
本发明的方法灵敏度高、分辨率高，方法简单可靠，重现性高，可以准确的测定出该中药组合物中的成分含量。
液相色谱条件的优化
为了改善各特征峰，缩短分析时间，提高待测物质的响应值，我们需要对不同类型的色谱柱，流动相以及流速进行筛选。在色谱柱的选择中，我们选用了Waters
XBridgeTM 246 C18 column (3.0mm×150mm, 3.5μm)和 Waters Symmetry C18 column (4.6mm×250mm, 5μm)两根柱子进行对比。结果表明，Waters XBridgeTM 246 C18
column (3.0mm×150mm, 3.5μm)对于生物碱有着极强的保留性，并且其可以延长其相应的保留时间，但这却影响了槲皮素和三七皂苷R1的测定。所以我们选定Waters Symmetry C18 column (4.6mm×250mm, 5μm)为实验用色谱柱。
流动相中存在适当的电解质可以显著提高电喷雾(ESI)的电离效率和影响分析物质的相应。为了提高液相色谱中各物质的相应，我们试验了乙酸铵(0.2,0.5和1 mmoL·L-1)和甲酸(0.01%、0.05%和0.1%,v / v)两种流动相。最终发现，酸性洗脱液(A(乙腈)和B(0.1%甲酸水溶液,v / v)]可以提高分析物的电离水平，并获得一个较好的峰型。同时为了缩短分析时间，我们选用了梯度洗脱，并发现在21分钟之内就可以实现较好的分离。
精密度、准确度、稳定性测定
用日间精密度和日内精密度验证方法的准确性。日内精密度：一天之内对实施例1中的供试品连续测定6次。日间精密度：连续3天对实施例1中的供试品进行测定。23种目标化合物均根据相应的校正曲线进行定量，计算相对平均偏差估算方法的精密度。
用准确度试验评估仪器的精密度，称取实施例1中的0.2g样品，精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，按供试品溶液的制备方法，分别进行超声提取，过滤，注入液相色谱仪测定，计算平均回收率，RSD值。
回收率的计算公式：回收率(%)=100%×(实测值—供试品所含被侧成分量)/加入对照品量,RSD(%)=(标准偏差/平均值)×100%。
为了确保样品溶液的稳定性，应存放于室温下并24小时内进行分析。
基质效应
采用标准加入的方法，建立基体效应（ME%）。在本实验中，该中药组合物样品按照上述样品准备的方法进行提取。25ml该中药组合物提取液中加入对照品，另取25ml用甲醇稀释一倍，基体效应按照下述公式进行计算：基体效应（%）= (A − B) /C×100%。式中A、B分别表示加入标准样品和加入稀释样品的对应峰面积。C表示在相同浓度下标准甲醇溶液下测定的峰面积。见表1。
质谱方法和正负离子切换模式的建立
ESI参数的优化对于MS信号的强弱有着至关重要的影响。因此，为了优化各个化合物的质量条件，我们分别将23种待测物的50%甲醇标准溶液（含0.1%甲酸）以10 μL/min的速度，逐一注入电喷雾离子源（ESI source）中，采用全扫描模式和碰撞活化离解(CAD)的方法，以便获得其前体离子和最佳电离条件,建立适当的质谱多反应监测方法。结果表明，所有的分析物均能在正负离子的相互作用下产生电离。但是，其响应值仍然存在有显著的差异。比较结果后发现，正离子模式对于黄连碱、小檗碱、表小檗碱、盐酸小檗碱、巴马汀、马钱苷、芍药苷、莫诺苷、斯皮诺素、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲和丹参酮IIA具有更高的灵敏度；负离子模式对于槲皮素、丹酚酸A、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、 人参皂苷Rd、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2和三七参苷R1具有更高的灵敏度。
当所研究的成分需要不同的电离模式测定时，通常有两种传统的液质方法可供选用。一种是同时应用正负离子模式于电喷雾离子源中，但此法的灵敏度较低，电离效率也不是很理想。另一种是使用单一电离模式（正离子模式或负离子模式）于电喷雾离子源中，先后测定两针样品，但与此而来的是时间和资源的浪费。在本次实验中，我们应用了可一个适用于不同的监控模式的液质方法，其ESI的离子源可在合适的的时间点切换其正负离子模式。在0.00—10.21分钟内，其应用正离子模式测定黄连碱（Coptisine）、小檗碱（Berberine）、表小檗碱（Epiberberine）、盐酸小檗碱（Berberastine）、巴马汀（Palmatine）、马钱苷（Loganin）、芍药苷（Paeoniflorin）、莫诺苷（Morroniside）、斯皮诺素（Spinosin）。随后，程序使用1.8秒的时间切换成负离子模式，在10.24—14.24分钟内，测定槲皮素（Quercetin）、丹酚酸A（Salvianolic acid
A）、丹酚酸B（Salvianolic acid B）、人参皂苷Rb1（Ginsenoside Rb1）、 人参皂苷Rd（GinsenosideRd）、人参皂苷 Re（Ginsenoside Re）、人参皂苷 Rf（Ginsenoside Rf）、人参皂苷Rg1（Ginsenoside Rg1）、人参皂苷Rg2（Ginsenoside Rg2）和三七参苷R1（Notoginsenoside R1）。测定完成后，程序再次使用1.8秒的时间切换到正离子模式，在14.27—21.00分钟内，测定五味子甲素（Deoxyschizandrin）、五味子醇甲（Schisandrol A）、五味子酯甲（Schisantherin A）和丹参酮IIA（Tanshinone ⅡA）。通过使用这种多开关检测方法，我们就能得到各分析物的最佳电离效率和最短分析时间。
通常情况下，我们认为质子化的分子离子[M]+, [M+H]+,
[M+NH]+和去质子化的分子离子[M-H]–是较为稳定且丰度较大的离子序列。因此，在MS分析中，我们分别选定[M]+,
[M+H]+, [M+NH]+和[M-H]–作为前体离子（具体见表2）。为了获得一个相对丰度较大的母离子和子离子，其在解簇电压（DP）和碰撞能量（CE）方面的重要参数已被优化。通过观察质谱碎片离子的最大相应值，其最合适的的DP值和CE值已被测定（见表2）。
由于待测物中含有三对同分异构体（小檗碱和表小檗碱、人参皂苷Rd和Re、人参皂苷Rf和Rg1），其在质谱测定中能产生相似的前体和产物。因此，为了得到较好的分辨率和精准的测定，我们需要调整其流动相的成分和组成。
目标化合物的识别：
准确识别每个目标化合物是成功定量的关键。本实验中，ESI-MS用于校验样品与对照品的共有峰，通过分析MRM信号，使用IDA方法激发对产物离子的扫描。样品的保留时间和离子碎片信息与MRM-IDA-EPI光谱的参照标准进行比对，标定共有峰。
方法验证
通过构建峰面积和其相应浓度的最小平方回归分析，我们建立了23种待测物的标准曲线，其高度的相关系数（r2 >0.991）表明其相关性在线性范围之内。如表所示，23中待测物的检出限和定量限分别低于26.4 ng·mL-1和 132 ng·mL-1。这表明，在上述液相条件下，结果能满足高度的灵敏度，并且其定量限的精密度和准确性也可以得到保障。
对于所有的待测物，其日间和日内相对标准偏差（RSD）分别低于3.68%和3.85%。当RSD值在0.86%—3.65%间变化时，其整体的回收率处于96.38–103.09%范围之内。结果表明,本次实验所采用的方法是准确度高,并且具有良好的精确度，相关数据见表3。
常温下储存样品溶液，24小时内各待测物成分稳定（RSD<2.1%）。
基质效应（ME%）处于92.36%—110.14%，表明没有明显的基质效应出现。
待测物质的定量分析
该分析方法通过同时测定23种标记化合物，有效地应用到15批该中药组合物的分析和质量评价之中。通过各个特征峰的保留时间，实现了各个峰的定性确认。在液质的相关标准分析之中，同样得到了相对应的母离子和子离子。在23种待测物的定量测定中，我们使用了外部标准曲线的方法。其结果表明，这种既定的方法可以成功的应用与该中药组合物的主要成分的质量控制。通过改变单独进样后离子源的极性，使其在正离子模式和负离子模式之间转换，从而节省分析时间，缩短到仅仅21分钟就可以完成分析过程。此外，由于多反应监测扫描模式可有效的减少噪声比，提高各待测物的响应值，故其应用时可提供极高的灵敏度。正是由于该方法的诸多优点，才使得其能对该中药组合物中的一些微量成分进行准确的测定，这同样对解释该药物的药理作用具有重要的作用。15批次的该中药组合物中各有效成分含量详见表4。
该定量分析结果表明，样品中各有效物质的含量变化相对较大，15批次的样品中的中含量介于11.32—19.27mg/g。100926和1103027两个批次的样品具有最高的含量（分别是19.27和18.29mg/g），相比之下，1205036和1202020两个批次的含量最少（分别是11.32和12.68mg/g）。15批样品中含量的平均值为15.83mg/g。1202043、1204037、1205036、1202020、1111059这五批样品的含量略少于平均值，其中1205036批次为含量的最小值。包括丹酚酸B、丹酚酸A、芍药苷、小檗碱在内的四种成分为药品中的主要成分，其含量多少直接影响药品相应的药理作用。五味子醇甲为药品中含量最少的活性成分，仅为5.45mg/g，仅此于人参皂苷Rg2的含量（34.05mg/g）。这些微量成分均在质量控制中起着重要的作用。
一般来说，中药制剂的质量受到中草药和其预处理过程的影响。同时，中草药中的活性成分还受到其品种、来源、种植年限、采摘时间、地理气候和环境等多方面影响。因此，对于不同地理气候和环境采摘的中草药中提取出的有效成分，很难确定是否有含量不合格的产品出现。这也表明我们应加紧对各品种中草药指纹图谱数据库的建立，同时对于半成品的加工方法也应日渐形成标准化的规范。
具体实施方式
实施例1
该中药组合物由下列原料药制成：
人参89g、麦冬112g、山茱萸224g、丹参224g、炒酸枣仁186g、桑寄生186g、赤芍89g、土鳖虫75g、甘松89g、黄连45g、南五味子67g、龙骨149g。
制备方法：
a) 上述处方中，人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 上述处方中， 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d) 上述处方中，麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，装入1000粒胶囊。
含量测定方法：
A、供试品溶液的制备：取上述药物胶囊，倒出内容物，研细，称取0.2g，置于容量瓶中，甲醇定容，超声处理30min，放置室温，用甲醇补足，用0.22μm滤膜过滤，即得；
B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品适量，加甲醇，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，得到不同浓度的各对照品溶液，为0.01μg/L各对照品溶液、0.1μg/L各对照品溶液、0.5μg/L各对照品溶液、1.0μg/L各对照品溶液、5.0μg/L各对照品溶液、10μg/L各对照品溶液、50μg/L各对照品溶液；
C、液相条件：色谱柱：Waters Symmetry C18 column, 规格为4.6 mm×250 mm, 5 μm，柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25% 乙腈,80-75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 - 95% 乙腈,75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 - 95% 乙腈，5-5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；
质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，测定过程分为5个阶段，0.0 - 10.21min：黄连碱、小檗碱、表小檗碱、盐酸小檗碱、巴马汀、马钱苷、芍药苷、莫诺苷和人参皂苷9种化合物采用正离子模式检测。10.21 - -10.24min，正离子模式转换成负离子模式；10.24
- -14.24min：槲皮素、丹酚酸A、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、 人参皂苷Rd、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2和三七参苷R1在负离子模式下检测。随后0.03分钟内，负离子模式再次转换成正离子模式。剩余的四个化合物，五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲和丹参酮IIA在正离子模式下检测；
氮气应用于整个分析过程，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi。气帘气压：25 psi，采用多重反应监测(MRM)模式，碰撞池入口电压：10.0/-10.0V，碰撞池出口电压：3.0/-5.0V；
D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值带入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。
精密度、准确度、回收率见表5
实施例2
该中药组合物由下列原料药制成：
人参45g、麦冬112 g、山茱萸224 g、丹参225 g、炒酸枣仁186 g、桑寄生186 g、赤芍89 g、甘松45 g、土鳖虫35 g、黄连45 g、南五味子67 g、龙骨149 g。
制备方法：
a) 上述处方中，人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 上述处方中， 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d) 上述处方中，麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成片剂。
含量测定方法：
A、供试品溶液的制备：取上述药物片剂，研细，称取0.3g，置于容量瓶中，甲醇定容，超声处理30min，放置室温，用甲醇补足，用0.22μm滤膜过滤，即得；
B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，得到不同浓度的各对照品溶液，为0.01μg/L各对照品溶液、0.1μg/L各对照品溶液、0.5μg/L各对照品溶液、1.0μg/L各对照品溶液、5.0μg/L各对照品溶液、10μg/L各对照品溶液、50μg/L各对照品溶液；
C、液相条件：色谱柱：Waters Symmetry C18 column, 规格为4.6 mm×250 mm, 5 μm，柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25% 乙腈,80-75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 - 95% 乙腈,75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 - 95% 乙腈，5-5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；
质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，测定过程分为5个阶段，0.0 - 10.21min：黄连碱、小檗碱、表小檗碱、盐酸小檗碱、巴马汀、马钱苷、芍药苷、莫诺苷和人参皂苷9种化合物采用正离子模式检测。10.21 - -10.24min，正离子模式转换成负离子模式；10.24
- -14.24min：槲皮素、丹酚酸A、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、 人参皂苷Rd、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2和三七参苷R1在负离子模式下检测。随后0.03分钟内，负离子模式再次转换成正离子模式。剩余的四个化合物，五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲和丹参酮IIA在正离子模式下检测；
氮气应用于整个分析过程，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi。气帘气压：25 psi，采用多重反应监测(MRM)模式，碰撞池入口电压：10.0/-10.0V，碰撞池出口电压：3.0/-5.0V；
D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值带入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。
精密度、准确度、回收率见表6
实施例3
该中药组合物由下列原料药制成：
人参45g、麦冬200 g、山茱萸125g、丹参125 g、炒酸枣仁95 g、桑寄生95 g、赤芍45 g、甘松45 g、土鳖虫35 g、黄连25 g、南五味子35 g、龙骨75 g。
制备方法：
a) 上述处方中，人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 上述处方中， 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d) 上述处方中，麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成冲剂。
含量测定方法：
A、供试品溶液的制备：取上述药物冲剂0.4g，置于容量瓶中，甲醇定容，超声处理30min，放置室温，用甲醇补足，用0.22μm滤膜过滤，即得；
B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，得到不同浓度的各对照品溶液，为0.01μg/L各对照品溶液、0.1μg/L各对照品溶液、0.5μg/L各对照品溶液、1.0μg/L各对照品溶液、5.0μg/L各对照品溶液、10μg/L各对照品溶液、50μg/L各对照品溶液；
C、液相条件：色谱柱：Waters Symmetry C18 column, 规格为4.6 mm×250 mm, 5 μm，柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25% 乙腈,80-75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 - 95% 乙腈,75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 - 95% 乙腈，5-5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；
质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，测定过程分为5个阶段，0.0 - 10.21min：黄连碱、小檗碱、表小檗碱、盐酸小檗碱、巴马汀、马钱苷、芍药苷、莫诺苷和人参皂苷9种化合物采用正离子模式检测。10.21 - -10.24min，正离子模式转换成负离子模式；10.24
- -14.24min：槲皮素、丹酚酸A、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、 人参皂苷Rd、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2和三七参苷R1在负离子模式下检测。随后0.03分钟内，负离子模式再次转换成正离子模式。剩余的四个化合物，五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲和丹参酮IIA在正离子模式下检测；
氮气应用于整个分析过程，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi。气帘气压：25 psi，采用多重反应监测(MRM)模式，碰撞池入口电压：10.0/-10.0V，碰撞池出口电压：3.0/-5.0V；
D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值带入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。
精密度、准确度、回收率见表7
实施例4
该中药组合物由下列原料药制成：
人参180g、麦冬50 g、山茱萸450 g、丹参450 g、炒酸枣仁400 g、桑寄生400 g、赤芍200 g、甘松200 g、土鳖虫150 g、黄连90 g、南五味子150 g、龙骨300 g。
制备方法：
a) 上述处方中，人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 上述处方中， 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d) 上述处方中，麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成丸剂。
含量测定方法：
A、供试品溶液的制备：取上述药物胶囊，倒出内容物，称取0.5g，置于容量瓶中，甲醇定容，超声处理30min，放置室温，用甲醇补足，用0.22μm滤膜过滤，即得；
B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，得到不同浓度的各对照品溶液，为0.01μg/L各对照品溶液、0.1μg/L各对照品溶液、0.5μg/L各对照品溶液、1.0μg/L各对照品溶液、5.0μg/L各对照品溶液、10μg/L各对照品溶液、50μg/L各对照品溶液；
C、液相条件：色谱柱：Waters Symmetry C18 column, 规格为4.6 mm×250 mm, 5 μm，柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25% 乙腈,80-75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 - 95% 乙腈,75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 - 95% 乙腈，5-5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；
质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，测定过程分为5个阶段，0.0 - 10.21min：黄连碱、小檗碱、表小檗碱、盐酸小檗碱、巴马汀、马钱苷、芍药苷、莫诺苷和人参皂苷9种化合物采用正离子模式检测。10.21 - -10.24min，正离子模式转换成负离子模式；10.24
- -14.24min：槲皮素、丹酚酸A、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、 人参皂苷Rd、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2和三七参苷R1在负离子模式下检测。随后0.03分钟内，负离子模式再次转换成正离子模式。剩余的四个化合物，五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲和丹参酮IIA在正离子模式下检测；
氮气应用于整个分析过程，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi。气帘气压：25 psi，采用多重反应监测(MRM)模式，碰撞池入口电压：10.0/-10.0V，碰撞池出口电压：3.0/-5.0V；
D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值带入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。
精密度、准确度、回收率见表8
Claims (9)
1.一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：人参45-180份、麦冬50-200份、山茱萸125-450份、丹参125-450份、炒酸枣仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鳖虫35-150份、甘松45-200份、黄连25-90份、南五味子35-150份、龙骨75-300份，采用PLC-ESI-MS法定量测定所述中药组合物中的多种成分，其特征在于该测定方法由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂0.2-0.5g，加入甲醇，超声处理30min，再用甲醇补足，过滤，即得；
B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇溶解，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，分别得到不同浓度的各对照品溶液；
C、液相条件：色谱柱： C18,柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25% 乙腈,80-75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 - 95% 乙腈,75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 - 95% 乙腈，5-5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；
质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi,气帘气压：25 psi，采用多重反应监测MRM模式，碰撞池入口电压：10.0/-10.0V，碰撞池出口电压：3.0/-5.0V；
D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值代入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述步骤A中用0.22μm滤膜过滤，
所述步骤C中色谱柱的规格为4.6 mm×250 mm, 5 μm。
3.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：
人参89份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参224份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、土鳖虫75份、甘松89份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。
4.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：
人参45份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参225份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、甘松45份、土鳖虫35份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。
5.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、散剂或丸剂。
6.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于中药组合物的活性成分由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，即得该中药组合物活性成分。
7.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于中药组合物的胶囊剂的制备方法由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，装入胶囊。
8.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于中药组合物的片剂的制备方法由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成片剂。
9.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于中药组合物的冲剂的制备方法由以下步骤制成：
a) 人参用70%乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；
b) 南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70%乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；
c) 土鳖虫粉碎成细粉，备用；
d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；
e) 将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规方法制成冲剂。
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104914173B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107703244A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-02-16 | 天津中医药大学 | 一种中药组合物中14种化学成分含量的测定方法 |
| CN107966505A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-04-27 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 同时测定复方丹参片中多种成分的方法 |
| CN109900826A (zh) * | 2019-03-26 | 2019-06-18 | 广州莱泰制药有限公司 | 一种复方丹参片三七含量检验方法 |
| CN110464825A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-11-19 | 贵州景诚制药有限公司 | 一种地黄饮子药物组合物、制备方法、检测方法 |
| CN114894917A (zh) * | 2022-04-06 | 2022-08-12 | 山东步长制药股份有限公司 | 一种甘松挥发性成分的检测及指纹图谱构建方法 |
| CN115494185A (zh) * | 2022-08-08 | 2022-12-20 | 威海海洋生物医药产业技术研究院有限公司 | 一种西洋参根茎叶ppd、ppt和oa型皂苷分布的分析方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1403148A (zh) * | 2002-10-24 | 2003-03-19 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种治疗冠心病室性早搏的药物组合物及制备方法 |
| CN101874869A (zh) * | 2009-04-28 | 2010-11-03 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种中药组合物中马钱苷的含量测定方法 |
| CN102038856A (zh) * | 2009-10-13 | 2011-05-04 | 北京以岭药业有限公司 | 一种中药组合物中四种成分的含量测定方法 |
-
2014
- 2014-03-14 CN CN201410094149.0A patent/CN104914173B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1403148A (zh) * | 2002-10-24 | 2003-03-19 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种治疗冠心病室性早搏的药物组合物及制备方法 |
| CN101874869A (zh) * | 2009-04-28 | 2010-11-03 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种中药组合物中马钱苷的含量测定方法 |
| CN102038856A (zh) * | 2009-10-13 | 2011-05-04 | 北京以岭药业有限公司 | 一种中药组合物中四种成分的含量测定方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘敏彦 等: "超高效液相色谱法同时测定参松养心胶囊中8种活性成分的含量", 《中国医院药学杂志》 * |
| 辛海莉 等: "参松养心胶囊的高效液相色谱指纹图谱研究", 《中国药物应用与检测》 * |
| 辛海莉 等: "高效液相色谱法测定参松养心胶囊中马钱苷含量", 《中国药业》 * |
| 陈玉平 等: "反相高效液相色谱法测定参松养心胶囊中五味子甲素和五味子酯甲含量", 《中南药学》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107703244A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-02-16 | 天津中医药大学 | 一种中药组合物中14种化学成分含量的测定方法 |
| CN107966505A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-04-27 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 同时测定复方丹参片中多种成分的方法 |
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