CN102038856A

CN102038856A - 一种中药组合物中四种成分的含量测定方法

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Publication number: CN102038856A
Application number: CN2009100756662A
Authority: CN
Inventors: 陈玉平
Original assignee: Beijing Yiling Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Yiling Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2009-10-13
Filing date: 2009-10-13
Publication date: 2011-05-04
Anticipated expiration: 2029-10-13
Also published as: CN102038856B

Abstract

本发明提供了一种中药组合物中四种成分的含量测定方法，该中药组合物由人参、麦冬、山茱萸、丹参、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、土鳖虫、甘松等中药组成，临床用于治疗心律失常。本发明采用高效液相的方法同时测定该中药组合物的芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B的含量，方法简便可行、测定结果准确可靠，可用来评价该中药组合物的质量。

Description

一种中药组合物中四种成分的含量测定方法

技术领域

本发明涉及到一种中药组合物中四种成分的含量测定方法，该方法采用高效液相色谱法同时测定芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B的含量。

背景技术

中药是我国传统防治疾病的重要武器，千百年来，在我国人民的健康生活中发挥着重大的作用。随着现代科学技术的发展，传统中药也面临着现代化的问题。近年来，全世界对中药的认识也逐渐加深，开始重视，这表明中药国际市场的快速发展时期已经来临。当前，中药要进入世界市场，实现中药现代化，首当其冲是其质量的控制，而含量测定是质量控制最关键的部分。由于中成药中化学成分十分复杂，因此在检测前需要提取、分离、精制，又由于所含有效成分量甚微，故目前多采用色谱、光谱法进行检测。传统中药含量测定仪薄层扫描为主，薄层扫描的方法定量存在较大的误差。

现阶段的中药质量控制模式基本上是借鉴化学药品质量控制的模式，含量测定作为中药质量标准中的要害内容之一，对于有效成分制剂而言，可在很大程度上控制药品质量，但对于复方制剂采用多种不同提取方式或多条提取路线的工艺以及多个有效部位制成的新药而言，仅建立某单一成分的含量测定在很大程度上带有较大的片面性。虽然研究者越来越熟悉到中药新药工艺过程的控制对于质量控制的重要性，但是多数制剂的质量标准仍然不能全面反映制剂的过程控制结果，即难以全面控制中药制剂的质量。因此，从中药质量标准的技术要求方面，全面提高质量标准仍然有很大的发展空间。因此，从中药研究的技术要求方面，将来的新药研究有必要在质量标准中建立多指标含量测定，目的之一是实现对多数成份指标的控制，并将对中药制剂工艺过程的控制直接在质量标准中得到体现。即处方中含有多个明确有效成分的，或者处方中药味分别按不同路线提取等各种不同情况下，均有必要研究建立多个指标的含量测定。但是，这就对质量控制的效率带来了挑战，如果均采用快捷的薄层扫描定量，则准确度会较差，如果均采用色谱法测定，则非常耗费时间并且显著增加质量控制的成本，在同一色谱系统中同时测定几种成分，则是比较理想的质量控制方法。

专利ZL02146572.X公开了一种治疗冠心病室性早搏的药物组合物及其制备方法，本专利申请就是针对该中药组合物进行的质量控制方法研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药组合物四种有效成分的含量测定方法。

该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

人参45-180份、麦冬50-200份、山茱萸125-450份、丹参125-450份、炒酸枣仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鳖虫35-150份、甘松45-200份、黄连25-90份、南五味子35-150份、龙骨75-300份。

在质量控制方面，本发明提供的测定方法可同时测定该中药组合物的芍药苷、马钱苷、小檗碱和丹酚酸B四种成分的含量，方法简便可行、测定结果准确可靠。

本发明的含量测定方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：

色谱柱为C18柱，规格为250mm×4.6mm，流动相A为0.18％甲酸/甲醇，B为0.30％甲酸/水，洗脱梯度：0～15min，流动相A由5％增至20％；2～7min，流动相A保持20％；7～37min，流动相A由20％增至35％；37～47min，流动相A由35％增至42％；47～50min，A保持42％；检测波长为230nm，流速：1.0mL/min，柱温：30-50℃；芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B与各自相邻峰的分离度均大于1.5；

对照品溶液的配制：

精密称取芍药苷对照品、马钱苷对照品、小檗碱对照品、丹酚酸B对照品，加甲醇分别制成每1ml含芍药苷0.10mg，马钱苷0.04mg，小檗碱0.08mg，丹酚酸B0.16mg的混合溶液，即得；

供试品溶液配制：

取本中药组合物制剂，必要时去除胶囊壳或包衣，研细，充分混匀，取0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70％甲醇补足重量，摇匀，取2ml，0.22μm微孔滤膜过滤，即得；

测定方法：

将对照品混合溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，对照品混合溶液进样量10μL，供试品液进样量为20μL，记录色谱峰面积，外标法计算含量。

采用本发明方法测定含量，所述中药组合物中原料药的重量比优选为：

人参89份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参224份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、土鳖虫75份、甘松89份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。

或者

人参45份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参225份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、甘松45份、土鳖虫35份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。

或者

人参90份、麦冬135份、山茱萸270份、丹参200份、炒酸枣仁150份、桑寄生150份、赤芍100份、土鳖虫100份、甘松95份、黄连60份、南五味子75份、龙骨150份。

上述优选的中药组合物采用本方法测定含量均能取得良好的精密度和准确性。

为使本发明含量测定方法得以实现，本发明中药组合物需要制成成型的制剂，为此，有必要对其活性成分进行提取。

该中药组合物的活性成分由下列步骤制成：

a)人参加70％乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，浓缩，烘干，粉碎成的细粉；

b)南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松共同加70％乙醇回流提取3次，合并提取液，滤过，浓缩的浸膏；

c)土鳖虫粉碎成的细粉；

d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮2次，合并提取液，浓缩的浸膏。

e)将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉，烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀即得该中药组合物活性成分。

本发明的应用中，所述中药组合物制剂剂型为胶囊剂、片剂、冲剂或散剂中的一种，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。

优选的，本发明胶囊剂的制备方法为：

(1)、人参加8倍量70％乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成80目粉；

(2)、五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松加8倍量70％乙醇回流提取3次，合并提取液，滤过，回收乙醇；

(3)、土鳌虫粉碎成80目粉；

(4)、麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水9倍量煎煮2次，合并提取液，滤过，与步骤(2)的提取液合并，浓缩，与步骤(1)、(3)粉混匀，烘干，粉碎成80目粉，装胶囊即得。

为证实本发明含量测定方法的效果，发明人进行了大量的实验进行优选，并对最终确定的测定方法进行了科学的验证，验证实验如下：

1仪器与材料

高效液相色谱仪(Waters e2695)、紫外检测器(Waters 2489)、KQ3200DE型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、芍药苷对照品(批号：110736-200933，中国药品生物制品检定所)、马钱苷对照品(批号：110706-200505，中国药品生物制品检定所)、盐酸小檗碱对照品(批号：110713-200208，中国药品生物制品检定所)、丹酚酸B对照品(批号：111562-200807，中国药品生物制品检定所)，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。本发明中药组合物胶囊剂为石家庄以岭药业股份有限公司按照实施例1制剂的制备方法制得的(批号：090247、090316、090242、090245、090247、090312、090307、090240、090239、090241、090311)。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Extend C18(250mm×4.6mm，5μm)。流动相A为0.18％甲酸/甲醇，B为0.30％甲酸/水，洗脱梯度：0～15min，A(5％→20％)；2～7min，A(20％)；7～37min，A(20％→35％)；37～47min，A(35％→42％)；47～50min，A(42％)。检测波长为230nm，流速：1.0mL·min-1，柱温：35℃。在此色谱条件下，得到芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B混合对照品色谱图及本发明中药组合物胶囊剂供试品色谱图，芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B的保留时间分别为16.9、18.1、29.9、45.2min，各自相邻峰的分离度均大于1.5。

2.2对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品、马钱苷对照品、小檗碱对照品、丹酚酸B对照品，加甲醇分别制成每1ml含芍药苷0.1004mg，马钱苷0.0404mg，小檗碱0.0824mg，丹酚酸B0.1610mg的混合溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取本品20粒，倾出内容物，充分混匀，取0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70％甲醇补足重量，摇匀，取2ml，0.22μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4线性化范围试验

分别精密吸取芍药苷(0.1004mg/ml)，马钱苷(0.0404mg/ml)，小檗碱(0.0824mg/ml)，丹酚酸B(0.1610mg/ml)对照品混合溶液各4、6、8、10、12、14μL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，以峰面积对进样量进行线性回归，结果见表1，可见该方法在试验范围内线性关系良好。

表1 标准曲线和线性范围实验结果

成分	回归方程	相关系数	线性范围(μg)
				芍药苷	y＝1059941.8042x-52328.2476	0.9998	0.4016～1.4056
马钱苷	y＝1216188.8260x-15319.5905	0.9998	0.1616～0.5656
				小檗碱	y＝3917448.6824x-75767.9429	0.9998	0.3296～1.1536
丹酚酸B	y＝1439494.2325x+22550.1905	0.9999	0.6440～2.2540

2.5精密度试验

精密吸取同一供试品溶液20μL，连续注入液相色谱仪6次，按以上条件进行测定，记录色谱峰面积，结果芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B的RSD分别为1.8％、1.9％、2.1％、2.2％，表明精密度良好。

2.6重复性试验

取同一批号(090247)本发明中药组合物胶囊剂，重复6次取样，精密称定，按“2.3”所述方法制备供试品溶液，进样20μL测定，计算含量，结果芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B的RSD分别为2.2％、2.3％、2.2％、2.7％，表明重复性试验良好。

2.7稳定性试验

按“2.3”所述方法制备供试品溶液(090247)，在配制后0，4，8，12，16，20，24h进样20μL，分别记录4种成分的峰面积，结果芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B的RSD分别为1.0％、1.4％、1.0％、1.3％，表明样品在24h基本稳定。

2.8加样回收率试验

取已知含量的样品(批号：090247)6份，分别精密加入对照品溶液，按“2.3”所述方法制备供试品液，进样20μL，重复6次，计算4种成分的平均加样回收率，测定结果见表2。

表2 回收率实验结果(n＝6)

2.9样品含量测定

取10批本发明中药组合物胶囊剂，按“2.3”所述方法制得供试品液，将对照品混合溶液和供试品液分别注入液相色谱仪，对照品溶液进样量10μL，供试品溶液进样量为20μL，记录色谱峰面积，外标法计算含量，测定结果见表3。

表3 样品测定结果(mg·g-1)

批号	芍药苷	马钱苷	小檗碱	丹酚酸B
					090316	2.06	0.78	2.01	5.25

090242	2.49	0.73	1.59	6.32
					090245	3.20	0.92	2.26	6.24
090247	2.56	0.89	1.97	7.03
					090312	2.16	0.82	2.28	4.90
090307	2.15	0.96	1.77	6.91
					090240	2.42	0.94	1.86	7.61
090239	2.46	0.75	2.04	7.58
					090241	2.84	0.70	1.87	8.16
090311	1.95	0.91	2.36	7.30

具体实施方式

下述实施例用于举例说明本发明中药组合物的含量测定方法，但其不能对本发明的范围构成任何限制。

实施例1

为了便于该中药组合物含量测定方法的实施，将该中药组合物制备为胶囊剂

处方：

人参89g 麦冬112g 山茱萸224g 丹参224g

炒酸枣仁186g 桑寄生186g 赤芍89g 土鳖虫75g

甘松89g 黄连45g 南五味子67g 龙骨149g

制备方法：

a)上述处方中，人参用70％乙醇回流提取三次，第一次3小时，以后每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩，烘干，粉碎成细粉，备用；

b)上述处方中，南五味子、山茱萸、丹参、黄连、甘松用70％乙醇回流提取三次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得浸膏，备用；

c)上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；

d)上述处方中，麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮二次，合并提取液，滤过，滤液与南五味子等的提取液合并，浓缩得浸膏，备用；

e)将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，装入1000粒胶囊。

含量测定方法：

色谱条件与系统适用性试验：

对照品溶液的配制：

供试品溶液配制：

测定方法：

测定结果：见表3

实施例2

为了便于该中药组合物含量测定方法的实施，将该中药组合物制备为片剂

处方：

人参45g 麦冬112g 山茱萸224g 丹参225g 炒酸枣仁186g

桑寄生186g 赤芍89g 甘松45g 土鳖虫35g 黄连45g

南五味子67g 龙骨149g。

制备方法：

c)上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；

e)将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按常规制剂工艺压制成1000片。

含量测定方法：

色谱条件与系统适用性试验：

对照品溶液的配制：

精密称取芍药苷对照品、马钱苷对照品、小檗碱对照品、丹酚酸B对照品，加甲醇分别制成每1ml含芍药苷0.1022mg，马钱苷0.0418mg，小檗碱0.0793mg，丹酚酸B0.1601mg的混合溶液，即得；

供试品溶液配制：

取本品20片，研细，充分混匀，取0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70％甲醇补足重量，摇匀，取2ml，0.22μm微孔滤膜过滤，即得；

测定方法：

测定结果：

芍药苷 2.06mg·g-1 马钱苷 0.78mg·g-1 小檗碱 2.01mg·g-1

丹酚酸B 5.25mg·g-1

实施例3

为了便于该中药组合物含量测定方法的实施，将该中药组合物制备为颗粒剂

处方：

人参175g 麦冬192g 山茱萸421g 丹参440g 炒酸枣仁395g

桑寄生396g 赤芍188g 土鳖虫98g 甘松188g 黄连85g

南五味子147g 龙骨278g。

制备方法：

c)上述处方中，土鳖虫粉碎成细粉，备用；

e)将步骤b)与d)所得浸膏合并，加入步骤c)所得的药物细粉烘干，粉碎成细粉，加入步骤a)所得药物细粉，混匀，按照常规制剂制成1000袋颗粒剂。

含量测定方法：

色谱条件与系统适用性试验：

对照品溶液的配制：

精密称取芍药苷对照品、马钱苷对照品、小檗碱对照品、丹酚酸B对照品，加甲醇分别制成每1ml含芍药苷0.1017mg，马钱苷0.0422mg，小檗碱0.0807mg，丹酚酸B0.1641mg的混合溶液，即得；

供试品溶液配制：

取本品10g，研细，充分混匀，取0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70％甲醇补足重量，摇匀，取2ml，0.22μm微孔滤膜过滤，即得；

测定方法：

测定结果：

芍药苷 2.38mg·g-1 马钱苷 0.81mg·g-1 小檗碱 2.21mg·g-1

丹酚酸B 5.47mg·g-1。

Claims

1.一种中药组合物中四种成分的含量测定方法，该四种成分分别为芍药苷、马钱苷、小檗碱、丹酚酸B，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

人参45-180份、麦冬50-200份、山茱萸125-450份、丹参125-450份、炒酸枣仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鳖虫35-150份、甘松45-200份、黄连25-90份、南五味子35-150份、龙骨75-300份，其特征在于，该方法采用高效液相色谱的方法进行测定，色谱条件及测定方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：

对照品溶液的配制：

供试品溶液配制：

测定方法：

2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

4.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

5.如权力要求1-4所述的含量测定方法，其特征在于，该中药组合物的活性成分由下列步骤制成：

c)土鳖虫粉碎成的细粉；

d)麦冬、炒酸枣仁、桑寄生、赤芍、龙骨加水煎煮2次，合并提取液，浓缩的浸膏；

6.如权利要求1-4中任一项所述的含量测定方法，其特征在于，所述中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、冲剂、散剂或口服液制剂中的一种。