CN104345110B - 一种中药组合物制剂中七种成分的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种中药组合物制剂中七种成分含量的测定方法，属于中药领域，具体制备步骤为：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、UPLC检测、标准曲线的制定及结果计算。本发明的测定方法周期短、灵敏度高。

Description

一种中药组合物制剂中七种成分的含量测定方法
技术领域
本发明属于中药分析领域，具体涉及中药成分的含量测定方法。
背景技术
该中药组合物由制何首乌、菊花、酸枣仁等多味中药组成，具有治疗抑郁失眠的功效，含有绿原酸、二苯乙烯苷、槲皮苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸等主要成分。目前其主要成分的检测方法有胶束电动毛细管色谱法、高效液相色谱法、液质联用等方法，都不太理想，不能有效的控制质量。
为了能够有效的控制产品质量，保证公众的用药安全，必须对生产工艺的中间环节进行质量控制，但是该中药组合物中的成分比较多，目前的方法检验周期长，重复性、灵敏度等无法满足连续生产的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种周期短、灵敏度高的检测一种中药组合物中多种成分含量的方法。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种中药组合物制剂中七种成分含量的测定方法，该中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成: 何首乌150-270、酸枣仁145-275、桑椹160-255、灵芝80-135、百合75-160、知母50-110、丹参120-200、菊花45-120、茯苓75-145、合欢花165-288，该含量测定方法由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂1-2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇匀，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，柱温40℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-2min，10%乙腈，90%的0.1%磷酸；2-2.5min，10-12%乙腈，90-88%的0.1%磷酸；2.5-20min，12%乙腈，88%的0.1%磷酸；20-21min，12-95%乙腈，88-5%的0.1%磷酸；检测波长340nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.5-5.0μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积代入标准曲线中，得到绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
作为优选方式，所述步骤A中用0.2μm滤膜过滤；所述步骤C中色谱柱为ACQUITYBEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，流速为0.4 ml/min。
优选的测定方法：
A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂1-2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇匀，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，绿原酸浓度为0.032 mg.mL-1、芒果苷浓度为0.051mg.mL-1、二苯乙烯苷0.492mg.mL-1、斯皮诺素0.041mg.mL-1、木犀草苷0.021mg.mL-1、槲皮苷0.213mg.mL-1、3，5-二咖啡酰奎宁酸0.047mg.mL-1；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，柱温40℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-2min，10%乙腈，90%的0.1%磷酸；2-2.5min，10-12%乙腈，90-88%的0.1%磷酸；2.5-20min，12%乙腈，88%的0.1%磷酸；20-21min，12-95%乙腈，88-5%的0.1%磷酸；检测波长340nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.5-5.0μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积代入标准曲线中，得到绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
优选的，其原料药的重量份比例为：
何首乌158 酸枣仁270 桑椹165 灵芝135 百合80
知母110 丹参125 菊花118 茯苓80 合欢花280。
或
何首乌265 酸枣仁147 桑椹250 灵芝81 百合158
知母55 丹参188 菊花50 茯苓145 合欢花170。
或
何首乌225 酸枣仁163 桑椹220 灵芝83 百合113
知母50 丹参190 菊花45 茯苓113 合欢花178。
或
何首乌165 酸枣仁228 桑椹173 灵芝110 百合75
知母75 丹参150 菊花78 茯苓78 合欢花218。
或
何首乌200 酸枣仁200 桑椹200 灵芝100 百合100
知母66.7 丹参166.7 菊花66.7 茯苓100 合欢花200。
为实现上述技术方案，将该中药组合物制成胶囊剂、片剂或丸剂。
所述片剂的制备方法包括以下步骤：
a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加6-12倍量30%-70%乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.10-1.15，得醇提浸膏，备用；
b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加10-15倍量水提取1-3次，每次提取1-3小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.10-1.15，得水提浸膏，备用；
c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；
d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉干燥制粒，整粒后，加入适当辅料，混匀，压片，包衣，即得。
为了验证本发明的方法的可行性和精确度，作了如下的试验：
仪器精密度试验
分别精密吸取对照品溶液1μL，连续进样6次，测定峰面积，结果绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸面积的RSD分别为1.22%、1.16%、1.04%、0.76%、1.62%、1.14%和1.22%，表明仪器精密度良好。
稳定性试验
吸取实施例1中的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h，进行测定，绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸峰面积的RSD分别为1.24%、1.57%、1.39%、1.05%、0.86%、0.94%和1.61%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
重复性试验
按照实施例1中供试品溶液的制备方法制备6份，测定，结果样品中绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的RSD分别为1.02%，1.15%，0.92%，1.05%，1.02%，0.89%和1.15%，表明方法的重复性良好。
回收率试验
精密称取己知含量的样品0.5g，平行6份，分别加入一定量的对照品溶液，测定含量并计算回收率，结果绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的平均回收率为：96.3%，98.2%，100.5%，99.3%，97.7%，97.0%，96.4%，RSD分别为2.06%，0.54%，1.44%，2.04%，0.18%，1.42%，0.95%，表明方法准确可靠。
取5批次该中药组合物片剂，计算结果如下
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
本发明采用UPLC同时测定该中药组合物中多种成分的含量，重复性好、精密度高、分析速度快，可以在比较短的周期内检测出各成分的含量，可以更方便的控制药物的质量。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细说明：
仪器与试药
ACQUITY UPLC H CLASS（美国Waters公司，包括四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Empower3色谱工作站）；KQ5200B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；分析天平（AG135，METTLER TOLEDO）
乙腈、甲醇（色谱级，美国Fisher Scientific公司），磷酸（色谱级，天津市科密欧化学试剂有限公司），水（重蒸馏水），其他试剂均为分析纯。该中药组合物样品（石家庄以岭药业股份有限公司，批号100901、100902、100903、111001、120602）。对照品：绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸（批号分别为：110753-200413、111607-200402、110844-201109、111869-201102、111720-201106、111782-201102），均购于中国药品生物制品检定所。
实施例1：
原料药配方为：
何首乌200克 酸枣仁200克 桑椹200克 灵芝100克 百合100克
知母66. 7克 丹参166.7克 菊花66.7克 茯苓100克 合欢花200克
中药组合物片剂的制备方法为：
a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加60%乙醇，加热回流提取2次，第一次加10倍量，提取2小时，第二次加8倍量，提取1小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.10，得醇提浸膏，备用；
b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加11倍量水提取2次，每次1.5小时，提取液过滤，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.10，得水提浸膏，备用；
c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；
d)将步骤c)所得百合细粉加入喷雾干燥制粒机原料容器内，将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏喷入，喷雾制粒，整粒后，加入0.5％硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得。
该中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：取该中药组合物片芯，研细，称取1g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，用0.2μm滤膜过滤，摇匀，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，绿原酸浓度为0.032 mg.mL-1、芒果苷浓度为0.051mg.mL-1、二苯乙烯苷0.492mg.mL-1、斯皮诺素0.041mg.mL-1、木犀草苷0.021mg.mL-1、槲皮苷0.213mg.mL-1、3，5-二咖啡酰奎宁酸0.047mg.mL-1；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温40℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-2min，10%乙腈，90%的0.1%磷酸；2-2.5min，10-12%乙腈，90-88%的0.1%磷酸；2.5-20min，12%乙腈，88%的0.1%磷酸；20-21min，12-95%乙腈，88-5%的0.1%磷酸；检测波长340nm，流速为0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.5μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，然后分别吸取1.0μL的各对照品溶液、2.0μL的各对照品溶液、3.0 μL的各对照品溶液、4.0μL的各对照品溶液、5.0 μL的各对照品溶液，注入超高效色谱仪中进行色谱分析以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量，分别为0.61 2mg、1.445 mg、6.386 mg、0.624 mg、0.378 mg、0.592 mg、0.929 mg。
表1
对照品 标准曲线 浓度范围 (ng)
绿原酸 y=7920.4x+61.9 0.9998 3.2~32
芒果苷 y =2853.6x-949.7 0.9997 5.1~51
二苯乙烯苷 y =1208.2x-26.2 0.9996 49.2~492
斯皮诺素 y =8912.6x-15.7 0.9999 4.1~41
木犀草苷 y =1177.5x+57.9 0.9997 2.1~21
槲皮苷 y =1545.2x-10.8 0.9998 21.3~213
3,5-二咖啡酰奎宁酸 y =7192.5x-18.8 0.9996 4.7~47
实施例2：
原料药配方为：
何首乌150克 酸枣仁275克 桑椹160克 灵芝80克 百合160克
知母110克 丹参120克 菊花120克 茯苓75克 合欢花288克。
中药组合物胶囊剂的制备方法为：
a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加6倍量30%乙醇，加热回流提取3次，每次3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.15，得醇提浸膏，备用；
b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加10倍量水提取3次，每次提取3小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.15，得水提浸膏，备用；
c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；
d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉干燥制粒，整粒后，加入适当辅料，混匀，填充胶囊，即得。
中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：取该中药组合物胶囊剂，倒出内容物，研细，称取1.5g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取10min，放冷、称重，用甲醇补足重量，用0.2μm滤膜过滤，摇匀，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，绿原酸浓度为0.032 mg.mL-1、芒果苷浓度为0.051mg.mL-1、二苯乙烯苷0.492mg.mL-1、斯皮诺素0.041mg.mL-1、木犀草苷0.021mg.mL-1、槲皮苷0.213mg.mL-1、3，5-二咖啡酰奎宁酸0.047mg.mL-1；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温40℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-2min，10%乙腈，90%的0.1%磷酸；2-2.5min，10-12%乙腈，90-88%的0.1%磷酸；2.5-20min，12%乙腈，88%的0.1%磷酸；20-21min，12-95%乙腈，88-5%的0.1%磷酸；检测波长340nm，流速为0.2ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.5μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，然后分别吸取1.0μL的各对照品溶液、2.0μL的各对照品溶液、3.0μL的各对照品溶液、4.0 μL的各对照品溶液、5.0 μL的各对照品溶液，注入超高效色谱仪中进行色谱分析以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量，分别为0.552mg、1.245 mg、6.256 mg、0.594 mg、0.458 mg、0.612 mg、0.889 mg。
仪器精密度试验
分别精密吸取对照品溶液1μL，连续进样6次，测定峰面积，结果绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸面积的RSD分别为1.22%、1.16%、1.04%、0.76%、1.62%、1.14%和1.22%，表明仪器精密度良好。
稳定性试验
吸取本实施例中的供试品溶液，0、2、4、8、12、24h，进行测定，绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸峰面积的RSD分别为1.24%、1.57%、1.39%、1.05%、0.86%、0.94%和1.61%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
重复性试验
按照本实施例中供试品溶液的制备方法制备6份，测定，结果样品中绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的RSD分别为1.02%，1.15%，0.92%，1.05%，1.02%，0.89%和1.15%，表明方法的重复性良好。
回收率试验
精密称取本实施例的样品0.5g，平行6份，分别加入一定量的对照品溶液，测定含量并计算回收率，结果绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的平均回收率为：96.3%，98.2%，100.5%，99.3%，97.7%，97.0%，96.4%，RSD分别为2.06%，0.54%，1.44%，2.04%，0.18%，1.42%，0.95%，表明方法准确可靠。
实施例3：
原料药配方为：
何首乌270克 酸枣仁145克 桑椹255克 灵芝135克 百合75克
知母50克 丹参120克 菊花45克 茯苓145克 合欢花165克。
中药组合物丸剂的制备方法为：
a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加12倍量70%乙醇，加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.12，得醇提浸膏，备用；
b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加15倍量水提取2次，每次提取2小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.12，得水提浸膏，备用；
c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；
d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉按照常规方法制成丸剂，即得。
该中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物丸剂，研细，称取2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取20min，放冷、称重，用甲醇补足重量，用0.2μm滤膜过滤，摇匀，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，绿原酸浓度为0.032 mg.mL-1、芒果苷浓度为0.051mg.mL-1、二苯乙烯苷0.492mg.mL-1、斯皮诺素0.041mg.mL-1、木犀草苷0.021mg.mL-1、槲皮苷0.213mg.mL-1、3，5-二咖啡酰奎宁酸0.047mg.mL-1；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温40℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-2min，10%乙腈，90%的0.1%磷酸；2-2.5min，10-12%乙腈，90-88%的0.1%磷酸；2.5-20min，12%乙腈，88%的0.1%磷酸；20-21min，12-95%乙腈，88-5%的0.1%磷酸；检测波长340nm，流速为0.3ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.5μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，然后分别吸取1.0μL的各对照品溶液、2.0μL的各对照品溶液、3.0 μL的各对照品溶液、4.0μL的各对照品溶液、5.0 μL的各对照品溶液，注入超高效色谱仪中进行色谱分析以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量，分别为0.572mg、1.345 mg、6.556 mg、0.624 mg、0.388 mg、0.572 mg、0.929 mg。
仪器精密度试验
分别精密吸取对照品溶液1μL，连续进样6次，测定峰面积，结果绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸面积的RSD分别为1.22%、1.16%、1.04%、0.76%、1.62%、1.14%和1.22%，表明仪器精密度良好。
稳定性试验
吸取本实施例中的供试品溶液，0、2、4、8、12、24h，进行测定，绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸峰面积的RSD分别为1.24%、1.57%、1.39%、1.05%、0.86%、0.94%和1.61%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
重复性试验
按照本实施例中供试品溶液的制备方法制备6份，测定，结果样品中绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的RSD分别为1.02%，1.15%，0.92%，1.05%，1.02%，0.89%和1.15%，表明方法的重复性良好。
回收率试验
精密本实施例的样品0.5g，平行6份，分别加入一定量的对照品溶液，测定含量并计算回收率，结果绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的平均回收率为：96.3%，98.2%，100.5%，99.3%，97.7%，97.0%，96.4%，RSD分别为2.06%，0.54%，1.44%，2.04%，0.18%，1.42%，0.95%，表明方法准确可靠。

Claims (6)

1.一种中药组合物制剂中七种成分的含量测定方法，该中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成: 何首乌150-270、酸枣仁145-275、桑椹160-255、灵芝80-135、百合75-160、知母50-110、丹参120-200、菊花45-120、茯苓75-145、合欢花165-288，其特征在于该含量测定方法由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂1-2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇匀，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液；
C、UPLC检测：色谱柱为ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，流速为0.4 ml/min，柱温40℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-2min，10%乙腈，90%的0.1%磷酸；2-2.5min，10-12%乙腈，90-88%的0.1%磷酸；2.5-20min，12%乙腈，88%的0.1%磷酸；20-21min，12-95%乙腈，88-5%的0.1%磷酸；检测波长340nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.5-5.0μL注入超高效色谱仪中按照步骤C的UPLC检测条件进行分析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述步骤A中用0.2μm滤膜过滤。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：
A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂1-2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇匀，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，绿原酸浓度为0.032 mg.mL-1、芒果苷浓度为0.051mg.mL-1、二苯乙烯苷0.492mg.mL-1、斯皮诺素0.041mg.mL-1、木犀草苷0.021mg.mL-1、槲皮苷0.213mg.mL-1、3，5-二咖啡酰奎宁酸0.047mg.mL-1；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，柱温40℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-2min，10%乙腈，90%的0.1%磷酸；2-2.5min，10-12%乙腈，90-88%的0.1%磷酸；2.5-20min，12%乙腈，88%的0.1%磷酸；20-21min，12-95%乙腈，88-5%的0.1%磷酸；检测波长340nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.5-5.0μL注入超高效色谱仪中按照步骤C的UPLC检测条件进行分析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积代入标准曲线中，得到绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
4.根据权利要求1-3任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物原料药的重量份比例为：
何首乌200 酸枣仁200 桑椹200 灵芝100 百合100
知母66.7 丹参166.7 菊花66.7 茯苓100 合欢花200。
5.根据权利要求1-3任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药组合物制剂的剂型为胶囊剂、片剂或丸剂。
6.权利要求5所述的测定方法，其特征在于所述片剂的制备方法包括以下步骤：
a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加6-12倍量30%-70%乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.10-1.15，得醇提浸膏，备用；
b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加10-15倍量水提取1-3次，每次提取1-3小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60℃测定相对密度为1.10-1.15，得水提浸膏，备用；
c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；
d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉干燥制粒，整粒后，加入适当辅料，混匀，压片，包衣，即得。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109828059A (zh) * 2019-04-02 2019-05-31 成都中医药大学 桂枝芍药知母汤的检测方法

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107149623B (zh) * 2016-03-03 2021-03-12 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法
CN105954400A (zh) * 2016-04-26 2016-09-21 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 液质谱串联法测定清热镇咳糖浆中多种成分的方法
CN105866284A (zh) * 2016-04-26 2016-08-17 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 一种同时检测清热镇咳糖浆中三种成分的方法
CN109324126B (zh) * 2018-09-21 2021-06-08 山西中医药大学 一种利用uplc-ms/ms同时测定酸枣仁中9种化学成分的方法
CN109212082B (zh) * 2018-10-10 2021-03-02 桂林三金药业股份有限公司 一种复方罗汉果清肺制剂的含量检测方法
CN109239224B (zh) * 2018-10-17 2021-07-02 山西大学 酸枣仁水提物中9种入血成分的同时定量测定方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0299107A1 (de) * 1986-02-06 1989-01-18 ERGO Forschungsgesellschaft mbH Verfahren zur Abtrennung und Gewinnung von Dicaffeoyl-chinasäuren
CN1493319A (zh) * 2002-10-28 2004-05-05 河北以岭医药研究院有限公司 一种治疗神经衰弱的药物组合物
JP2004161706A (ja) * 2002-11-14 2004-06-10 Api Co Ltd 健康食品、医薬品、化粧品並びに健康食品、医薬品又は化粧品用素材及びそれらの製造方法
CN101919962A (zh) * 2009-06-10 2010-12-22 河北以岭医药研究院有限公司 一种治疗失眠的药物及其制备方法
CN102038856A (zh) * 2009-10-13 2011-05-04 北京以岭药业有限公司 一种中药组合物中四种成分的含量测定方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0299107A1 (de) * 1986-02-06 1989-01-18 ERGO Forschungsgesellschaft mbH Verfahren zur Abtrennung und Gewinnung von Dicaffeoyl-chinasäuren
CN1493319A (zh) * 2002-10-28 2004-05-05 河北以岭医药研究院有限公司 一种治疗神经衰弱的药物组合物
JP2004161706A (ja) * 2002-11-14 2004-06-10 Api Co Ltd 健康食品、医薬品、化粧品並びに健康食品、医薬品又は化粧品用素材及びそれらの製造方法
CN101919962A (zh) * 2009-06-10 2010-12-22 河北以岭医药研究院有限公司 一种治疗失眠的药物及其制备方法
CN102038856A (zh) * 2009-10-13 2011-05-04 北京以岭药业有限公司 一种中药组合物中四种成分的含量测定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HPLC法测定杏香兔耳风中绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素;冯育林 等;《中草药》;20120331;第43卷(第3期);513-514页 *
HPLC法测定杏香兔耳风中绿原酸和 3, 5-o-二咖啡酰基奎宁酸的含量;王英锋 等;《药物分析杂志》;20091231;第29卷(第3期);430-432页 *
RP-HPLC双波长切换法同时测定复方酸枣仁颗粒中芒果苷和斯皮诺素;田笑菲 等;《中国实验方剂学杂志》;20110630;第17卷(第11期);52-55页 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109828059A (zh) * 2019-04-02 2019-05-31 成都中医药大学 桂枝芍药知母汤的检测方法
CN109828059B (zh) * 2019-04-02 2021-08-31 成都中医药大学 桂枝芍药知母汤的检测方法

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