CN102967684A

CN102967684A - 一种炎宁胶囊质量标准检测方法

Info

Publication number: CN102967684A
Application number: CN 201210378989
Authority: CN
Inventors: 方洪壮; 孙开敬; 孙长海; 武凤梅; 张舒婷; 郑玉梅; 任恒鑫; 费建军; 张淼; 王浩; 朱文军; 李尚晏
Original assignee: SANJING QIANHE PHARMACEUTICAL CO Ltd HAYAO GROUP
Current assignee: SANJING QIANHE PHARMACEUTICAL CO Ltd HAYAO GROUP
Priority date: 2012-10-09
Filing date: 2012-10-09
Publication date: 2013-03-13

Abstract

本发明公开了一种炎宁胶囊质量标准的检测方法，用于炎宁胶囊的质量控制，增加了炎宁胶囊中白花蛇舌草的薄层定性鉴别，该方法具有操作简单、分离效果好、专属性强等到技术特点；对方中主药鹿茸草所含木犀草素采用高效液相色谱法（HPLC）测定含量，该方法具有分离效果好、测定准确、灵敏、快速及专属性强等特点。利用本发明的检测方法，可提高炎宁胶囊的质量可控性，有利于产品的质量稳定。

Description

一种炎宁胶囊质量标准检测方法

技术领域

本发明涉及药品检测技术领域，具体地说是涉及一种炎宁胶囊质量标准的检测方法。

背景技术

炎宁胶囊是国家食品药品监督管理局批准的药品，由鹿茸草、白花蛇舌草、鸭跖草配伍组成，采用现代提取方法提取其有效成份制备而成的胶囊剂，具有清热解毒，消炎止痢的功效，用于上呼吸道感染，扁桃体炎，尿路感染，急性菌痢，肠炎。

炎宁胶囊现行的质量标准标准号为YBZ10042008，该方法仅对产品的性状、鉴别及其它胶囊剂的常规项进行检测，鉴别中仅进行化学显色鉴别，同时产品组方中主要有效成分的含量测定限度较粗，该标准方法无专属性，难以准确反应产品质量，已不能适应中药现代化发展的技术要求及产品质量稳定可控的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种炎宁胶囊药品质量标准检测方法，该方法具有分离效果好，测定准确、灵敏、快速及专属性强等特点。

本发明所检测的炎宁胶囊，其标准处方为鹿茸草3906.25g，白花蛇舌草1953.12 g，鸭跖草1953.12g。其制备工艺为：以上三味，分别加10倍、8倍量水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10（85～90℃），加乙醇使含醇量为60%，搅匀，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.32（85～90℃）的清膏，80℃干燥，粉碎成细粉，加入硬脂酸镁0.5g，混合均匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

性状：本品为硬胶囊，内容物为红棕色至棕褐色的粉末；气香，味微苦。

本发明是对该药品原有的质量标准进行新的内容补充，即提高了白花蛇舌草的鉴别及鹿茸草的含量测定方法，具体技术方案为：

1、白花蛇舌草鉴别方法如下：

1）取炎宁胶囊内容物1.0g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

2）取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

3）取鹿茸草3906.25g，鸭跖草1953.12g，按样品制备方法制备出阴性样品，按供试品溶液制备方法制备出阴性样品溶液,作为缺少白花蛇舌草的阴性样品溶液。

4）照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1~5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇按体积配比40:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。

2、木犀草素含量测定方法如下：

1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(55：45)为流动相，检测波长为350nm。理论板数按木犀草素峰计算应不低于3000。

2）对照品溶液的制备：取在五氧化二磷中减压干燥至恒重的木犀草素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

3）供试品溶液的制备：取装量差异项下的炎宁胶囊内容物，研细，取约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，取峰面积按外标法计算，即得木犀草素含量。

3、方法学研究

1）最大吸收波长的测定：

①精密称取在五氧化二磷减压干燥下至恒重的木犀草素对照品10.67mg，置50mL量瓶，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。作为对照品溶液。

②甲醇为空白溶液。

③设置扫描波长的范围：选择ABS(吸光度）。采样间距，选择0.5nm。空白溶液校准扫描基线。放上待测对照品溶液进行扫描，即得到全波长的样品光谱图。在350nm处有最大吸收。

2）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(55：45)为流动相，检测波长为350nm。理论板数按木犀草素峰计算应不低于3000。

3）对照品溶液的制备：取在五氧化二磷中减压干燥至恒重的木犀草素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

4）供试品溶液的制备：取装量差异项下的炎宁胶囊内容物，研细，取约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，取峰面积按外标法计算，即得木犀草素含量。

根据本发明新增的鉴别和含量测定方法可制定出新的炎宁胶囊质量标准如下：

【鉴别】取本品内容物1.0g，加乙醚30ml，回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各1~5μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷－甲醇(40:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃ 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】应符合胶囊剂项下有关的各项规定（中国药典2010年版一部附录I L）。

【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(55：45)为流动相；检测波长为350nm。理论板数按木犀草素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取五氧化二磷减压干燥至恒重的木犀草素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物，研细，取约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含鹿茸草以木犀草素（C₁₅H₁₀O₆）计，不得少于0.50mg。

【功能与主治】清热解毒，消炎止痢。用于上呼吸道感染，扁桃体炎，尿路感染，急性菌痢，肠炎。

【用法与用量】口服。一次 4粒，一日 3～4 次。

【规格】每粒装0.5g

【贮藏】密封，避光。

本发明的有益效果为：对炎宁胶囊中的白花蛇舌草所含齐墩果酸进行薄层色谱法鉴别检查，该方法具有操作简单、分离效果好、专属性强等技术特点；对方中主药鹿茸草所含木犀草素采用高效液相色谱法（HPLC）测定含量，该方具有分离效果好，测定准确、灵敏度高、专属性强等特点。

附图说明

图1为本发明中白花蛇舌草的薄层鉴别图。

图2为本发明中含量测定木犀草素对照品图。

图3为本发明的含量测定炎宁胶囊的样品图。

图4为本发明的含量测定阴性对照图。

图5为本发明木犀草素标准曲线。

以木犀草素进样量为横坐标，峰面积为纵坐标做回归曲线，得线性回归方程：y =4230.5x-3202.4 R＝0.9999，由结果可见，木犀草素进样量在50.68~506.80ng范围之内呈良好的线性关系。

图1中，左数1为齐墩果酸对照品，2为阴性对照，3为批号为20100501炎宁胶囊样品，4，为批号为20100502炎宁胶囊样品，5为批号为20100503炎宁胶囊样品。

具体实施方式

一、对炎宁胶囊中白花蛇舌草的鉴别方法如下：

取本品内容物1.0g，加乙醚30ml，回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各1~5μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷－甲醇(40:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃ 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

二、对炎宁胶囊中木犀草素含量测定方法如下：

1、仪器与试药

仪器 LC-20AT岛津液相色谱仪、AG245电子天平

试药甲醇，色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯

对照品木犀草素对照品（中国药品生物制品检定所，批号111520-200504）

试药炎宁胶囊（哈药集团三精千鹤制药有限公司，批号20100501）。

2、方法与结果

（1）色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(55：45)为流动相，检测波长为350nm。理论板数按木犀草素峰计算应不低于3000。

（2）对照品贮备液制备

取在五氧化二磷中减压干燥至恒重的木犀草素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品内容物，研细，取约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

（5）系统适用性试验

在上述色谱条件下，选用不同型号的色谱柱进行系统适用性考察，试验结果见表1。

表1 含量系统适用性试验结果

试验号	色谱柱型号	理论板数
			1	Sapphire C18 5μ 250×4.6μm	7998.760
2	Packed Colamn 200×4.6μm C₁₈5μm	4713.015
			3	Hypersil ODS2250×4.6μm 5μm	4545.117

由结果可见，在选定的色谱条件下，供试品溶液中木犀草素与其它组分分离度良好，满足含量测定要求。

（6）阴性干扰试验

取按其处方比例，取除鹿茸草外的其它药材，同样品制备工艺制备缺鹿茸草的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性溶液。精密吸取供试品（批号：20100501）溶液，阴性溶液，对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图。

由色谱图提示，在对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性溶液在此峰位无吸收，对本制剂中木犀草素含量测定无干扰，方法专属性良好。

（7）线性关系考察

精密称取在五氧化二磷中减压干燥至恒重的木犀草素对照品12.67mg，置25ml量瓶，加甲醇使溶解，并定容至刻度，摇匀。精密移取上述溶液10 mL ，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。作为对照品贮备液。

精密吸取对照品贮备液0.5、1、2、3、4、5ml分别置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，即得木犀草素标准系列溶液。分别进样10μl，按上述色谱条件测定木犀草素峰面积。以峰面积为纵坐标，木犀草素进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表2。

表2 标准曲线测定结果

进样量(ng)	50.68	101.36	202.72	304.08	405.44	506.80
							峰面积	207869	426896	860282	1286474	1697692	2148053

（8）精密度

取本品（批号：20100501），按供试品溶液制备方法制备，以上述色谱条件进样（相同体积重复进样6次），木犀草素峰面积的相对标准偏差为。结果见表3。

表3 精密度试验结果

由结果可见，测量方法精密度良好。

（9）重复性

本品（批号：20100501）6份，按供试品溶液制备方法制备，依上述色谱条件进样，测定木犀草素的峰面积。其平均值为0.939mg/粒，相对标准偏差为0.57%。结果见表4。

表4 重复性试验结果

序号	1	2	3	4	5	6	平均值	RSD(%)
									取样量（g）	0.5062	0.5083	0.5012	0.5087	0.5153	0.5092
含量(mg/粒)	0.942	0.941	0.945	0.930	0.936	0.941	0.939	0.57

由结果可见，测定方法重复性良好。

（10）稳定性

取本品（批号：20100501），按供试品溶液制备方法制备，以上述色谱条件分别在间隔0小时、2小时、6小时、10小时、18小时、24小时后进样测定。木犀草素峰面积的相对标准偏差为，结果见表5。

表5 稳定性试验结果表

由结果可见，供试品溶液在24小时内基本稳定。含量测定应在24小时内完成。

（11）回收率

取本品6份（批号：20100501，含量：0.939mg/粒，胶囊平均粒重：0.5081g），分别精密加入木犀草素对照品溶液1ml(0.5244mg/ml)，挥干后，按供试品溶液制备方法制备，并按上述条件测定木犀草素的含量，计算回收率，结果平均回收率为101.06%，RSD为1.13%。结果见表6。

表6 回收率试验结果

由结果可见，回收率在95％～105％之间，RSD值为1.06％。测定方法回收率良好。

（12）样品测定

按上述方法对十批本品进行含量测定，结果见表7。由十批样品测定结果，暂定本品每粒胶囊含鹿茸草以木犀草素计，不得低于0.50mg。

表7 炎宁胶囊中木犀草素的含量测定结果

批号	含量（mg/粒）
		20100501	0.94
20100502	0.89
		20100503	0.84
20100601	0.88
		20100602	0.91
20100901	0.88
		20100902	0.89
20120401	0.93
		20120401	0.92
20120401	0.94

根据十批样品含量测定结果，并结合生产实际，确定本品的含量限度为本品每粒含鹿茸草以木犀草素（C₁₅H₁₀O₆）计，不得少于0.50mg。

参考文献：

1.南京中医药大学，《中药大辞典》。

2.中国药典委员会，中国药典2010年版一部。

3.国家药品监督管理局标准，炎宁胶囊质量标准，注册标准编号：YBZ10042008。

4.国家药品监督管理局，《中药新药研究的技术要求》。

Claims

1.一种炎宁胶囊药品中白花蛇舌草的鉴别方法，其特征在于按以下方法进行：取炎宁胶囊内容物1.0g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1~5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇按40:1体积配比为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。

2.一种炎宁胶囊药品中木犀草素的含量测定方法，其特征在于按以下进行：

（1）色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液按体积配比55：45为流动相，检测波长为350nm；理论板数按木犀草素峰计算应不低于3000；

（2）对照品溶液的制备：取在五氧化二磷中减压干燥至恒重的木犀草素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取炎宁胶囊内容物约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得木犀草素含量。