CN101596229A - 猴耳环提取物及其制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
猴耳环提取物及其固体制剂的质量控制方法，涉及药品中测定有效成分的方法，是用高效液相色谱法测定猴耳环提取物及其制剂中7－氧－没食子酰基－5，3′，4′，5′－四羟基黄烷的含量，色谱条件：C18色谱柱，0.4％(w/v)磷酸水溶液和甲醇作流动相进行梯度洗脱，检测波长为275±5nm，检测温度为15～25℃，流速为1ml/min，理论塔板数按7－氧－没食子酰基－5，3′，4′，5′－四羟基黄烷计算，应不低于2000；用外标二点法计算测定值，该方法操作简单快速，准确可靠，灵敏度，精密度和回收率高，重现性好，能更有效的控制猴耳环提取物及其制剂产品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及中药制品中测定有效成分的方法，具体是测定猴耳环提取物及其制剂中7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷含量的方法。
背景技术
猴耳环为豆科含羞草亚科围涎树属植物猴耳环[Pithecellibium clypeariaBenth]。猴耳环为乔木，药用部分为其嫩枝叶，猴耳环又名围涎树、鸡三树等，民间用于烧伤、烫伤的治疗。由猴耳环植物的水提物制成的猴耳环消炎胶囊和猴耳环消炎片已收载于“中华人民共和国卫生部药品标准”中，在临床上用于治疗上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃体炎和急性肠炎等，根据国家卫生部药品标准中药成方制剂第6册(猴耳环消炎胶囊WS3-B-1249-92和猴耳环消炎片WS3-B-1248-92)，控制猴耳环药品的质量方法是测定没食子酸的含量，但没食子酸并不是猴耳环提取物中特有的有效成分，没食子酸是可水解鞣质的组成部分，在大多数植物中都存在，用其含量指标作为控制猴耳环药品质量没有专属性，要测定猴耳环提取物中抗菌消炎的有效成分含量才能反应其产品的质量，根据研究猴耳环提取物中的主要有效成分是7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷，在专利zL 200410051988.0中简称猴耳环酚I，为此，有必要寻找一种更有效的作为控制猴耳环制剂的产品质量。
发明内容
本发明的目的是测定猴耳环提取物及其制剂中7-氧-没食子酰基--5，3’，4’，5’-四羟基黄烷的含量，作为控制猴耳环产品质量的方法。7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷的英文名为7-O-gallloyltricetifavan，简称猴耳环酚I(以下同)结构为：
为实施本发明的目的，控制猴耳环水提取物及其制剂质量的方法，是用高效液相色谱法测定产品中7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷的含量，具体是按下述步骤进行：
一、色谱条件：
色谱柱：用十八烷基键合硅胶作填充料，简称C18色谱柱，具体可采用型号为zorbax Eclipse XDB-C18的色谱柱或Zorbax SB-C18色谱柱或zorbax300Extend色谱柱或zorbax sb-aq，其中以zorbax Eclipse XDB-C18Analytical的色谱柱为佳。
流动相：用0.4％(w/v)磷酸水溶液和甲醇进行梯度洗脱；
检测波长：275±5nm；
检测温度：15～25℃；
流速：1ml/min；
理论塔板数：按7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷计算，应不低于2000；
二、对照品溶液的制备：精密称取7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷，加甲醇溶解配成每0.2mg/ml浓度的溶液，摇匀，即得，具体操作时可以称取7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷5mg，加甲醇溶解定容至25ml，摇匀，即得；
三、供试品溶液的制备：1、猴耳环提取物供试品溶液制备：取猴耳环水提取物干品280～380mg至25ml容量瓶中，加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声30分钟，补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；或2、猴耳环消炎胶囊供试品溶液的制备：取本品10粒，除去胶囊壳，内容物混合均匀，精密称取330～430mg mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声30分钟，补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
或3、猴耳环消炎片供试品溶液的制备：取本品20片，研成细粉，混合均匀，精密称取380～480mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声20～50分钟，甲醇补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制成猴耳环消炎片供试品溶液；
或4、猴耳环消炎颗粒供试品溶液的制备：取本品5袋，研成细粉，混合均匀，精密称取3800～4800mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声20～50分钟，甲醇补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制成猴耳环消炎颗粒供试品溶液；
四、测定：分别精密吸取对照品溶液5～10μl及供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，依法测定，用外标二点法计算，即得。
本发明的优点是：
操作简单快速，准确可靠，灵敏度，精密度和回收率高，重现性好，采用本发明能更有效的控制猴耳环提取物及其制剂产品的质量。
附图说明
图1用Zorbax 300A 300Extend(4.6×250mm，5μm)色谱柱的HPLC色谱图。
图2用Zorbax sb-aq(4.6×250mm，5μm)色谱柱的HPLC色谱图。
图3用Eclipse XDB-C18(4.6×150mm，5μm)色谱柱的HPLC色谱图。
图4用Zorbax SB-C18(4.6×150mm，5μm)色谱柱的HPLC色谱图。
图5猴耳环水提取物供试品梯度洗脱的HPLC色谱图。
图6猴耳环酚I标准曲线图。
下面通过实施例和附图进一步说明本发明的技术方案和有益效果。
具体实施方式
实施例1、高效液相色谱法测定猴耳环水提取物中猴耳环酚I含量的方法研究
1、仪器与样品
仪器：Agilent 1100系列高效液相色谱仪，自动进样器，
检测器：二极管阵列检测器。
试剂：超纯水，甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)，其它均为分析纯。
样品：没食子酸标准品购自中国药品生物制品检定所；猴耳环酚I由暨南大学药学院提供，纯度98.3％；
猴耳环水提取物由广州莱泰制药公司自制，按猴耳环消炎片(WS3-B-1248-92)干浸膏制备方法制备。干膏收率为18％
2、方法与结果
2.1溶液的制备
2.1.1对照品溶液的制备：
2.1.1.1猴耳环酚I对照品溶液的制备：精密称取猴耳环酚I 5mg，加甲醇溶解定容至25ml，摇匀，即得。
2.1.1.2没食子酸对照品溶液的制备：精密称取没食子酸2mg，加甲醇溶解定容至25ml，摇匀，即得。
2.1.2供试品溶液的制备：取猴耳环水提取物干品300mg至25ml容量瓶中，加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声30分钟(50-250W，40-100Hz)，加甲醇补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制成猴耳环水提取物供试品溶液；
2.2检测波长的选择
紫外全波长扫描，二极管阵列检测器检测猴耳环供试品的三D图谱，在275.16nm处，各主要色谱峰均有最大吸收，故选择其为本含量测定方法的检测波长。
2.3色谱柱的选择
因不同的色谱柱柱效可能有差异，因此进行了色谱柱的比较，对不同型号的RP C18柱进行比较。共试验了四种C18色谱柱，包括zorbax 300Extend(4.6X250mm)，zorbax sb-aq(4.6X250mm)，zorbax Eclipse XDB-C18Analytical(4.6X150mm，5μm)，Zorbax SB-C18(4.6X150mm)。从中选了分离度较好、出峰较快的zorbax Eclipse XDB-C18 Analytical(4.6X150mm)。分离效果分别见附图1～附图4。
2.4流动相的选择：
经过反复试验，采用流动相A：0.4％磷酸水溶液，B：甲醇，线性梯度洗脱条件分离效果最好，分析时间也比较合理，分离效果见图5
2.5、色谱条件的确定
色谱柱；zorbax Eclipse XDB-C18 Analytical(4.6X150mm)；
检测波长：275nm；
检测温度：15-25℃；
流速：1ml/min；
进样量：5～10μL；
流动相：A：甲醇；
B：0.4％磷酸水溶液；
梯度洗脱：
| 时间(min) | 0 | 3 | 8 | 11 | 14 | 19 | 22 | 27 | 30 | 35 |
| A％ | 15 | 15 | 25 | 25 | 35 | 35 | 40 | 40 | 50 | 50 |
| B％ | 85 | 85 | 75 | 75 | 65 | 65 | 60 | 60 | 50 | 50 |
2.6线性关系考察
将已配好的猴耳环酚I对照品溶液，分别以1、3、5、7、9μl注入色谱仪，按色谱条件测定各峰峰面积。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，得线性回归方程：Y＝6947.4X-10.643，结果见图6。
Y＝6947.4X-10.643，R2＝0.9995，猴耳环酚I在0.097～0.872μg之间与峰面积有良好的线性关系。
2.7精密度试验：
取同一供试品溶液，连续进样6次，每次进样5μl，各色谱峰面积比例及RSD如表1所示：
表1 精密度试验峰面积与RSD表
实验结果表明，本法精密度良好。
2.8稳定性试验：取样品供试液室温放置，分别于0小时、3小时、6小时、12小时、18小时及24小时进样，每次进样5μl，测得样品中猴耳环酚I峰面积及RSD如表2所示：
表2 稳定性试验峰面积与RSDG表
实验结果表明，本品在24小时内稳定性良好。
2.9回收率试验：
称取已知含量的供试品6份，分别精密加入一定量的猴耳环酚I对照品，按供试品溶液制备方法操作，测定结果见表3。
表3 猴耳环酚I回收率表
实验结果表明，本方法的回收率良好.
2.10样品测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，依上述色谱条件依法测定，经计算，猴耳环水提取物中猴耳环酚I含量为1.52％(干品计)，
实施例2、猴尔环消炎胶囊剂中猴耳环酚I的测定
1、仪器与样品
仪器：Agilent 1100系列高效液相色谱仪，自动进样器，二极管阵列检测器。
试剂：超纯水，甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)，其它均为分析纯。
样品：猴耳环酚I由暨南大学药学院提供，纯度98.3％；猴耳环胶囊由广州莱泰制药有限公司生产；批号为080101、080102、080201。
2、方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱；zorbax Eclipse XDB-C18 Analytical(4.6X150mm)；
检测波长：275nm；
检测温度：18℃；
流速：1ml/min；
进样量：5μL；
流动相：A：甲醇；B：0.4％磷酸水溶液进行梯度洗脱：
| 时间(min) | 0 | 3 | 8 | 11 | 14 | 19 | 22 | 27 | 30 | 35 |
| A％ | 15 | 15 | 25 | 25 | 35 | 35 | 40 | 40 | 50 | 50 |
| B％ | 85 | 85 | 75 | 75 | 65 | 65 | 60 | 60 | 50 | 50 |
2.2对照品溶液的制备：精密称取猴耳环酚I 5mg，加甲醇溶解定容至25ml，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备：取本品10粒，除去胶囊壳，内容物混合均匀，精密称取380mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声30分钟，补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得.
2.4样品测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，依法测定，外标法计算3批猴耳环胶囊猴耳环酚I含量(批号080101、080102、080201)，结果见表4。
表4 猴耳环消炎胶囊含量测定结果
实施例3、猴尔环消炎片中猴耳环酚I的测定
1、仪器与样品
仪器：Agilent 1100系列高效液相色谱仪，自动进样器，二极管阵列检测器。试剂：超纯水，甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)，其它均为分析纯。
样品：猴耳环酚I由暨南大学药学院提供，纯度98.3％；猴耳环消炎片由广州莱泰制药有限公司生产；批号为060501、060502、060503。
2、方法与结果
2.1色谱条件：同实施例2
2.2对照品溶液的制备：同实施例2
2.3供试品溶液的制备：取本品20片，研成细粉，混合均匀，精密称取430mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声20--50分钟，甲醇补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制成猴耳环消炎片供试品溶液；
2.4样品测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，依法测定，计算3批猴耳环消炎片猴耳环酚I含量(批号060501、060502、060503)，结果见表5。
表5 猴耳环消炎片含量测定结果
实施例4、猴尔环消炎颗粒中猴耳环酚I的含量测定
1、仪器与样品
仪器：Agilent 1100系列高效液相色谱仪，自动进样器，二极管阵列检测器。
试剂：超纯水，甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)，其它均为分析纯。
样品：猴耳环酚I由暨南大学药学院提供，纯度98.3％；猴耳环消炎颗粒由广州莱泰制药有限公司生产；批号为080801、080802、080901。
2、方法与结果
2.1色谱条件：同实施例2
2.2对照品溶液的制备：同实施例2
2.3供试品溶液的制备：取本品5袋，研成细粉，混合均匀，精密称取4000mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声20～50分钟，甲醇补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制成猴耳环消炎颗粒供试品溶液。
2.4样品测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5μL，依法测定，外标法计算3批猴耳环消炎颗粒猴耳环酚I含量(批号080801、080802、080901)，结果见表6。
表6 猴耳环消炎颗粒含量测定结果
Claims (2)
1、一种猴耳环提取物及其固体制剂的质量控制方法，其特征在于用高效液相色谱法测定产品中7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷的的含量，具体是按下述步骤进行：
一、色谱条件：
色谱柱：C18色谱柱
流动相：0.4％(w/v)磷酸水溶液和甲醇进行梯度洗脱
检测波长：275±5nm
检测温度：15～25℃
流速：1ml/min
理论塔板数：按7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷计算，应不低于2000；
二、对照品溶液的制备：精密称取7-氧-没食子酰基-5，3’，4’，5’-四羟基黄烷，加甲醇溶解配成每0.2mg/ml浓度的溶液，摇匀，即得；
三、供试品溶液的制备：1、猴耳环水提取物供试品溶液制备：取猴耳环水提取物干品280～380mg至25ml容量瓶中，加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声30分钟，补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；或2、猴耳环消炎胶囊供试品溶液的制备：取本品10粒，除去胶囊壳，内容物混合均匀，精密称取330～430mg mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声30分钟，补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
或3、猴耳环消炎片供试品溶液的制备：取本品20片，研成细粉，混合均匀，精密称取380～480mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声20～50分钟，甲醇补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制成猴耳环消炎片供试品溶液；
或4、猴耳环消炎颗粒供试品溶液的制备：取本品5袋，研成细粉，混合均匀，精密称取3800～4800mg，转移至25ml容量瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，闭塞，超声20～50分钟，甲醇补足至25mL，摇匀、过滤，取续滤液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制成猴耳环消炎颗粒供试品溶液；
四、测定：分别精密吸取对照品溶液5～10μl及供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标二点法计算，即得。
2、根据权利要求1所说的猴耳环水提取物及其固体制剂的质量控制方法，其特征在于色谱条件中色谱柱的型号为zorbax Eclipse XDB-C18的色谱柱。
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