CN103592393B - 一种四味姜黄汤散的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种四味姜黄汤散的检测方法，所述的检测方法是采用高效液相色谱法一次性对四味姜黄汤散中的余甘子、姜黄、小檗皮的含量进行检测，操作简便，分析数据准确，节省了实验时间，提高了工作效率，提升了检测结果的准确性，可有效对四味姜黄汤散进行检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂的检测方法，特别涉及一种四味姜黄汤散的检测方法，属于医药技术领域。
背景技术
四味姜黄汤散收载于中国藏药部颁标准中，标准编号：WS3-BC-0304-95，由如下重量配比的药材制成的：姜黄15g、小檗皮12.5g、余甘子25g、蒺藜25g，具有清热，利尿的作用，用于尿道炎，尿频，尿急有很好的疗效，现已广泛应用于临床。
四味姜黄汤散标准中的检测方法非常简单粗糙，没有鉴别和含量测定方法；文献《藏成药四味姜黄汤散质量标准研究》（中成药，2008年3期）采用薄层色谱法鉴别姜黄、小檗皮、余甘子、蒺藜；采用高效液相色谱法测定制剂中姜黄素含量，色谱条件为：C18柱，流动相为乙腈-4%冰醋酸（48：52），检测波长430nm。
按照现有技术对四味姜黄汤散进行检测，需要分别鉴别以上各味药材，操作十分繁琐，且仅对姜黄素进行定量检测。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种四味姜黄汤散的检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种四味姜黄汤散的检测方法，所述的检测方法是采用高效液相色谱法一次性对四味姜黄汤散中的余甘子、姜黄、小檗皮的含量进行检测，其方法如下：
A）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以磷酸调节pH值至3.0、体积份数比0.05mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→60min，流动相A：2%→2%→50%→50%；流动相B：98%→98%→50%→50%；检测波长为254nm；理论板数按姜黄素峰计算应不低于2000；
B）对照品溶液的制备：取没食子酸对照品、姜黄素对照品、盐酸小檗碱，精密称定，加甲醇制成每1ml含没食子酸0.1mg、姜黄素50μg、盐酸小檗碱0.3mg的溶液，即得；
C）供试品溶液的制备：将四味姜黄汤散研细后，取粉末1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比70：30：1甲醇-水-盐酸溶液25ml，称定重量，密塞，超声处理30min，放冷，再称定重量，用体积百分比70：30：1甲醇-水-盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
D）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。
本发明使用高效液相色谱法一次性对四味姜黄汤散中的余甘子、姜黄、小檗皮进行了含量检测，操作简便，分析数据准确，节省了实验时间，提高了工作效率，提升了检测结果的准确性，可有效对四味姜黄汤散进行检测。
附图说明
图1是没食子酸、姜黄素及盐酸小檗碱混合对照品高效液相色谱图；
图2是没食子酸线性关系图；
图3是姜黄素线性关系图；
图4是盐酸小檗碱线性关系图。
具体实施方式
下面结合实验例和实施例进一步说明本发明的方案和效果，但不限于所述的实验和实施例。
实验例1、含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：岛津-20AT泵，岛津SPD-20A紫外检测器，CTO-10ASvp柱温箱；电子天平：岛津AUW220D型。
对照品：没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所）批号：
110831-200803，姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所）批号：
110823-201004，盐酸小檗碱对照品，批号：MUST-11122005。
样品：四味姜黄汤散（山东阿如拉药物研究开发有限责任公司自制），批号：20131101，20131102，20131103。
2.检测波长的选择
姜黄素、没食子酸及盐酸小檗碱最大吸收差别较远，不易选择统一的波长，综合考虑，以通用检测波长254nm为检测波长，实验结果表明，以上三种对照品均有很好的吸收。
3.流动相选择
没食子酸与姜黄素、盐酸小檗碱极性相差较大，采用等度洗脱很难对两种成分进行同时测定，故选择梯度洗脱进行色谱分离。
使用甲醇-水体系进行色谱分离时发现，在254nm下甲醇-水体系易形成较大的梯度峰，影响测定。单纯使用乙腈-水体系，各色谱峰峰形较差，实验表明，在一定的酸体系下，峰形得到改善，同时为了保证体系的稳定性，加入一定的盐。实验发现，选择加入磷酸二氢钠后，流动性体系稳定，同时对照峰形趋于完美，分离度也得到了显著的提高。
故确定流动相A为乙腈，B为体积百分比0.05mol/L磷酸二氢钠（磷酸调节pH值至3.0）溶液。
实验发现，使用下述梯度，所得结果较为理想。
表1梯度洗脱表
4.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取没食子酸对照品贮备液溶液（202.6μg/ml）、姜黄素对照品贮备液溶液（101.8μg/ml）、盐酸小檗碱对照品储备液（612.4μg/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）为纵坐标，对照品浓度（C）为横坐标，进行线性回归，见表2、表3和表4。图2是没食子酸线性关系图；图3是姜黄素线性关系图；图4是盐酸小檗碱线性关系图。
表2没食子酸线性关系考察结果
回归方程：A=771.0C+504.4，相关系数：R=0.9995
表3姜黄素线性关系考察结果
回归方程：A=994.9C-705.0，相关系数：R=0.9999
表4盐酸小檗碱线性关系考察结果
回归方程：A=776.6C-7151，相关系数：R=0.9992
结果表明：没食子酸在20.26μg/ml-202.60μg/ml范围内，姜黄素在10.18-101.80μg/ml范围内，盐酸小檗碱在61.24μg/ml-612.40μg/ml范围内，线性关系良好。
5.精密度试验
精密吸取混合对照品溶液（含有：没食子酸101.3μg/ml、姜黄素50.9μg/ml、盐酸小檗碱306.2μg/ml）10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，分别为没食子酸峰面积RSD%=0.68%，姜黄素峰面积RSD%=0.87%，盐酸小檗碱峰面积RSD%=0.97%。结果表明：仪器精密度良好。
图1是没食子酸、姜黄素及盐酸小檗碱混合对照品高效液相色谱图。
6.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，分别为没食子酸峰面积RSD%=0.98%，姜黄素峰面积RSD%=0.65%，盐酸小檗碱峰面积RSD%=0.84%。结果表明：供试品溶液6小时内测定结果稳定。
7.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中含量的相对标准偏差，分别为没食子酸含量RSD%=0.58%，姜黄素含量RSD%=0.63%，盐酸小檗碱含量RSD%=0.86%。表明分析方法重复性良好。
8.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入对照品，测定其含量，计算回收率及相对标准偏差，分别为：没食子酸回收率平均为97.6%，RSD%=0.68%；姜黄素回收率平均为96.8%，RSD%=0.87%；盐酸小檗碱回收率平均为98.7%，RSD%=0.97%。表明该测定方法测定结果准确。
9.样品测定
取四味姜黄汤散三批，测定并计算没食子酸、姜黄素及盐酸小檗碱的含量，结果如下：
表5样品含量测定结果
以下实施例能实现上述实验例所述的效果。
实施例：四味姜黄汤散中余甘子、姜黄、小檗皮的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积份数比0.05mol/L磷酸二氢钠（磷酸调节pH值至3.0）溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→60min，乙腈：2%→2%→50%→50%；体积份数比0.05mol/L磷酸二氢钠（磷酸调节PH值至3.0）溶液：98%→98%→50%→50%；检测波长为254nm；理论板数按姜黄素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取没食子酸对照品、姜黄素对照品、盐酸小檗碱，精密称定，加甲醇制成每1ml含没食子酸0.103mg、姜黄素52.3μg、盐酸小檗碱0.321mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：将四味姜黄汤散研细后，取粉末1.0078g，精密称定置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比70：30：1甲醇-水-盐酸溶液25ml，称定重量，密塞，超声处理30min，放冷，再称定重量，用体积百分比70：30：1甲醇-水-盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
四味姜黄汤散中余甘子含量以没食子酸计，不得少于3.568mg/g；姜黄含量以姜黄素计，不得少于1.567mg/g；小檗皮含量以盐酸小檗碱计，不得少于15.11mg/g。
Claims (1)
1.一种四味姜黄汤散的检测方法，其特征在于，所述的检测方法是采用高效液相色谱法一次性对四味姜黄汤散中的余甘子、姜黄、小檗皮的含量进行检测，其测定方法如下：
a.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A；以体积份数比0.05mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相B，磷酸调节PH值至3.0；采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→60min；乙腈：2%→2%→50%→50%；体积份数比0.05mol/L磷酸二氢钠溶液：98%→98%→50%→50%；检测波长为254nm；理论板数按姜黄素峰计算应不低于2000；
b.对照品溶液的制备：取没食子酸对照品、姜黄素对照品、盐酸小檗碱适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含没食子酸0.1mg、姜黄素50μg、盐酸小檗碱0.3mg的溶液，即得；
c.供试品溶液的制备：将四味姜黄汤散研细后，取粉末1g，精密称定置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比70：30：1甲醇-水-盐酸溶液25ml，称定重量，密塞，超声处理30min，放冷，再称定重量，用体积百分比70：30：1甲醇-水-盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
d.测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述的四味姜黄汤散由如下重量配比的原料药制成：姜黄15份、小檗皮12.5份、余甘子25份、蒺藜25份。
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