发明内容
本发明的目的是提供一种治疗烧烫伤的中药外用制剂及其制备、质量检测方法,特别是提供一种质量检测方法使其能够全面控制烧烫伤搽剂的质量,从而确保产品的生产质量和用药安全。
本发明所述的一种治疗烧烫伤的中药外用制剂,由以下原料药配制而成:马尾连85~102g、紫草56~69g、黄芩85~102g、地榆56~69g、大黄56~69g和冰片4~6g。
其中,优选技术方案如下:由以下原料药配制而成:马尾连93g、紫草62.4g、黄芩93g、地榆62.4g、大黄62.4g和冰片5g。
本发明所述的治疗烧烫伤的中药外用制剂的制备方法,取马尾连、大黄、紫草、地榆和黄芩用1170~1430g的香油浸泡18~36小时后炸至枯黄,过滤,立即加入15~25g的蜂蜡,当温度降至55~65℃时,加入冰片,搅拌使其溶解,降至室温时,加入4~5ml的苯酚,搅拌均匀,灌装即得。
本发明所述的治疗烧烫伤的中药外用制剂的质量检测方法,包括以下方面的质量检测:
(1)大黄的薄层鉴别:
取治疗烧烫伤的中药外用制剂10ml,用乙醇萃取3次,每次10ml,合并乙醇液,置水浴上蒸干,残渣加乙醇1ml使其溶解,作为供试品溶液;另取大黄酚对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法检验,吸取供试品溶液5~10μl,对照品溶液2~5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为15∶5∶1的石油醚、甲酸乙酯和甲酸混合物为展开剂,展开,取出,晾干,在365nm的紫外光灯下检视,其中,石油醚的沸点为30~60℃;
大黄的薄层鉴别合格标准为:供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(2)冰片的薄层鉴别:
取治疗烧烫伤的中药外用制剂10ml,用乙醇萃取3次,每次10ml,合并乙醇液,置水浴上蒸干,残渣加乙醇1ml使其溶解,作为供试品溶液;另取冰片对照品,加乙醇制成每1ml含5mg的溶液,作为对照品溶液;
照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法检验,吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2~5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为9∶1的石油醚和乙酸乙酯混合物为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1wt%香草醛硫酸溶液,热风吹干至斑点清晰进行检视,其中,石油醚的沸点为60~90℃;
冰片的薄层鉴别合格标准为:供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)紫草的薄层鉴别:
取治疗烧烫伤的中药外用制剂20ml,用乙醇提取3次,每次20ml,合并乙醇液蒸干,残渣加乙醇1ml使其溶解,作为供试品溶液;另取紫草对照药材lg,加乙醇10ml浸渍2小时,滤过,取滤液1ml作为对照品溶液;
照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法检验,吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2~5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为5∶5∶0.5∶0.1的环己烷、甲苯、乙酸乙酯和甲酸混合物为展开剂,展开,取出,晾干,进行检视;
紫草的薄层鉴别合格标准为:供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,喷以10%氢氧化钾甲醇溶液后,斑点变为蓝色。
(4)冰片中龙脑的含量测定:
色谱条件与系统适用性试验:30m×0.53mm×1.00μm的Rtx-Wax毛细管柱,聚乙二醇PEG-20M为固定相;氢火焰离子化检测器;进样口、检测器温度均为210℃;柱温150℃;柱流量8ml/min;分流进样,分流比9∶1;理论塔板数按龙脑峰计算应不低于6000;
内标溶液的制备:精密称取水杨酸甲酯对照品适量,加乙酸乙酯制成每1ml含0.8mg的溶液,备用;
对照品溶液的制备:精密称取龙脑对照品,加内标溶液1ml,用乙酸乙酯定容至10ml,制成每1ml含0.05mg的溶液,备用;
供试品溶液的制备:取治疗烧烫伤的中药外用制剂0.5g,精密称定,置10ml容量瓶中,加内标溶液1ml,用乙酸乙酯定容至10ml,混匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,备用;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入气相色谱仪,测定,即得。
冰片中龙脑的含量的检测合格标准为:本品含冰片以龙脑计,不得少于0.9mg/g。
本发明的优点在于:(1)该质量控制方法全面,精密度、灵敏度、稳定性均好,而且方法更简捷,能保证产品质量稳定可控;(2)建立了烧烫伤搽剂全面的质量检测方法,能全面检测制剂质量,确保临床用药安全有效。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1:
配方:马尾连93g、紫草62.4g、黄芩93g、地榆62.4g、大黄62.4g和冰片5g。
制备方法:取马尾连、大黄、紫草、地榆和黄芩用1300g的香油浸泡24小时后炸至枯黄,过滤,立即加入20g的蜂蜡,当温度降至60℃时,加入冰片,搅拌使其溶解,降至室温时,加入4.5ml的苯酚,搅拌均匀,灌装即得。
按照上述要求得到荣昌制药(淄博)有限公司060301、060302、060303三批药品,并以此分别用做下述质量检测。
(1)大黄的薄层鉴别:
供试品溶液的制备:取药品10ml,用乙醇萃取3次,每次10ml,合并乙醇液,置水浴上蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,按照此方法,制备3批供试品溶液。
对照品溶液的制备:取大黄酚对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
阴性溶液的制备:将配方中的大黄除去,其它五味按质量标准中的制法项进行制备阴性对照样品;然后照供试品溶液的制备方法同法制备。
薄层板:自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板,规格为10×20cm,涂布厚度为0.3mm。
点样:专用定量毛细管接触式圆点状点样,点样量为供试品溶液10μl、对照品溶液5μl。阴性溶液的点样量10μl。
展开剂:石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(质量比15∶5∶1)。
展开方式:双槽展开缸,上行展开,展距为10cm。
显色与检视:紫外光灯(365nm)下检视
结果:供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰。三批样品的色谱图结果见图1。
(2)冰片的薄层鉴别:
供试品溶液的制备:取药品10ml,用乙醇萃取3次,每次10ml,合并乙醇液,置水浴上蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。按照此方法,制备3批供试品溶液。对照品溶液的制备:取冰片对照品,加乙醇制成每1ml含5mg的溶液,作为对照品溶液。
阴性溶液的制备:将配方中的冰片除去,其它五味按质量标准中的制法项进行制备阴性对照样品;然后照供试品溶液的制备方法同法制备。
薄层板:自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板,规格为10×20cm,涂布厚度为0.3mm。
点样:专用定量毛细管接触式圆点状点样,点样量为供试品溶液10μl、对照品溶液5μl。阴性溶液的点样量10μl。
展开剂:石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(质量比9∶1)。
展开方式:双槽展开缸,上行展开,展距为10-12cm。
显色与检视:喷以1%香草醛硫酸溶液,热风吹干至斑点清晰。
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。三批样品的结果见附图2。
(3)紫草的薄层鉴别:
供试品溶液的制备:取烫伤油20ml,用乙醇提取3次,每次20ml,合并乙醇液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。按照此方法,制备3批供试品溶液。
对照药材溶液的制备:取紫草对照药材1g,加乙醇10ml浸渍2小时,滤过,取滤液1ml作为对照药材溶液。
阴性溶液的制备:将配方中的紫草除去,其它五味按质量标准中的制法项进行制备阴性对照样品;然后照供试品溶液的制备方法同法制备。
薄层板:自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板,规格为10×20cm,涂布厚度为0.3mm。
点样:专用定量毛细管接触式圆点状点样,点样量为供试品溶液10μl、对照品溶液5μl。阴性溶液的点样量10μl。
展开剂:环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸(质量比5∶5∶0.5∶0.1)。
展开方式:双槽展开缸,上行展开,展距为10-12cm。
显色与检视:喷以10%氢氧化钾甲醇溶液后,斑点变为蓝色。
结果:供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,喷以10%氢氧化钾甲醇溶液后,斑点变为蓝色,阴性对照无干扰。三批样品的结果见图3、图4。
(4)冰片中龙脑的含量测定:
1)仪器与试药
仪器:日本岛津GC-2014气相色谱仪,毛细管柱Rtx-Wax(30m×0.53mm×1.00μm),聚乙二醇PEG-20M为固定相,氢火焰离子化检测器(FID),Gcsolution数据处理软件,startoriusBP211D电子分析天平d=0.01mg,startorius BS124S电子分析天平d=0.1mg。
试剂:水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。
龙脑对照品(110881-200504,20mg,中国药品生物制品检定所,供含量测定用)。
水杨酸甲酯对照品(707-200106,1ml,中国药品生物制品检定所,供含量测定用)。
2)色谱条件的选择
采用日本岛津GC-2014气相色谱仪,分流进样,分流比9∶1,进样口、检测器温度均为210℃,进样量1μl。考虑到柱温和柱流量对色谱峰影响较大,故对柱温和柱流量进行了试验选择。
3)对照品、供试品溶液的制备
内标溶液:精密称取水杨酸甲酯对照品适量,加乙酸乙酯制成每1ml含0.8mg的溶液,即得。
对照品溶液:精密称取龙脑对照品适量,加内标溶液1ml,用乙酸乙酯定容至10ml,制成每1ml含0.05mg的溶液,即得。
供试品溶液:取060302批批装量差异项下的本品0.5g,精密称定,置10ml容量瓶中,加内标溶液1ml,用乙酸乙酯定容至10ml,混匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。
4)柱温选择
将柱温分别设为130℃、140℃、150℃、160℃,对同一对照品和烧烫伤供试品溶液进行了试验,结果柱温为150℃时龙脑峰和水杨酸甲酯峰峰形好,分离度均大于2.0,且出峰时间较短,故确定柱温为150℃。
5)柱流量选择:
将柱流量分别设为6ml/min、8ml/min、10ml/min,对同一对照品和烧烫伤供试品溶液进行了试验,结果柱流量为8ml/min时龙脑峰和水杨酸甲酯峰峰形好,分离度均大于1.5,且出峰时间较短,比柱流量为10ml/min节省载气,故确定柱流量为8ml/min。
6)阴性对照试验:
取不含冰片的烧烫伤阴性样品0.5g,冰片药材细粉5mg,同前法处理后,分别制得阴性对照液和冰片药材溶液,分别取对照品溶液、冰片药材溶液、阴性对照液、烧烫伤供试品溶液各1μl注入气相色谱仪,记录色谱图,由图5~图8可以看出,在阴性对照图谱中龙脑峰无干扰。
6)精密度试验:
精密吸取龙脑对照品溶液(龙脑0.070mg/ml,内标0.0735mg/ml)重复进样6次,每次各1μl,记录峰面积并计算f值及RSD,结果见表1。
表1:精密度试验结果
结果表明:f值的RSD为0.51%,证明本方法精密性良好。
6)线性范围考察:
精密称取龙脑对照品适量,加内标溶液(含水杨酸甲酯0.077mg/ml)制成0.34mg/ml的对照品溶液。精密吸取1ml对照品溶液用上述内标溶液稀释到2ml,依次梯度稀释;各取1μl注入气相色谱仪测定。以龙脑浓度为横坐标,龙脑峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标绘制标准曲线,计算得回归方程y=19.831x-0.0525,相关系数r=0.9998,如图9所示。表明龙脑浓度在0.022~0.340mg/ml范围内线性关系良好。
表2:线性范围考察结果(n=2)
龙脑峰面积/内标峰面积 |
6.7319 |
3.2209 |
1.6450 |
0.8176 |
0.4102 |
龙脑浓度(mg/ml) |
0.340 |
0.170 |
0.085 |
0.043 |
0.022 |
7)稳定试验:
取060302批同一份供试品溶液,分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时进样,记录结果并计算龙脑峰与水杨酸甲酯峰面积比。结果见表3。
表3:样品稳定性试验结果(n=1)
结果表明:供试品在8小时内龙脑峰与水杨酸甲酯峰面积比RSD为1.57%,供试品溶液在8小时内稳定性良好。
8)重现性试验:
取060302批样品5份,分别按供试品制备项下方法制备,测定峰面积,结果见表4。
表4:重现性试验结果(n=2)
结果表明:5份供试品的平均含量为1.22mg/g,RSD为1.70%,证明本试验方法的重现性良好。
9)回收率试验(采用加样回收法):
精密称取060302批(已知龙脑含量为1.22mg/g)样品0.25g,共取5份,分别精密加入0.3mg的龙脑对照品,同前法制备供试品溶液,测定总含量,计算回收率。回收率=(总量-样品中量)/加入纯品量×100%。结果见表5。
表5龙脑回收率试验结果(n=2)
结果表明:龙脑平均回收率为99.9%,RSD为0.85%,加样回收率良好。
10)样品测定:
取荣昌制药(淄博)有限公司生产的烧烫伤搽剂,按发明方法测定,龙脑含量见表6。
表6:龙脑含量测定结果
结果表明:产品含量均在0.9mg/g以上,相对比较稳定,证明该发明方法能很好的控制产品的质量。