CN1971270B - 一种同时测定多种抗癫痫药物血药浓度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属医学检验领域,涉及体内药物的分析测定方法,具体涉及一种可同时测定人血浆中扑米酮、苯巴比妥、苯妥英、卡马西平,拉莫三嗪、奥卡西平六种抗癫痫药物以及奥卡西平活性产物单羟奥卡西平和卡马西平活性产物环氧卡马西平浓度的方法。本发明方法对待测样品经蛋白沉淀预处理后,在酸性流动相条件下等度洗脱,经色谱柱分离后,用紫外检测器检测。本方法样品取样量少,预处理方法简单、快速、灵敏,无需昂贵的设备和试剂,适用面广,成本低,适合于临床常规血药浓度的监测。
Description
技术领域
本发明属于医学检验领域,涉及体内药物的分析测定方法。具体涉及一种可同时测定多种抗癫痫药物血药浓度的方法。
背景技术
扑米酮(Primidone,PRI)、苯巴比妥(Phenobarbital,PB)、苯妥英(Phenytoin,PHT)、卡马西平(Carbamazepine,CBZ)是传统的一线抗癫痫治疗药物,拉莫三嗪(Lamotrigen,LTG)、奥卡西平(Oxcarbazepine,OXC)则是近十年上市的第二代抗癫痫药物。OXC和CBZ在体内可分别代谢为活性产物单羟奥卡西平(Monohydroxycarbazepine,MHD)和环氧卡马西平(Carbamazepine 10,11-epoxide,CBZE)。由于这些药物的药动学个体间差异大、治疗窗窄,且药动学特性与抗癫痫效果、药物不良反应发生有相关关系,因此开展对上述药物的治疗药物监测有重要的临床意义。
目前国内外测定抗癫痫药物血药浓度的方法主要采用高效液相色谱法(HPLC)和免疫法。免疫法只能测定PB、CBZ和PHT,其他药物的测定只能采用HPLC法。现有技术的方法存在操作繁琐费时,效率低,测定周期长,所需仪器设备或试剂价格昂贵,分析成本高等种种缺陷,不适合常规治疗药物浓度监测。
发明内容
本发明的目的是克服已知技术的缺陷,提供一种简便、快速、灵敏的可同时测定多种抗癫痫药物血药浓度的方法。
本方法无需昂贵的设备和试剂,具有操作简便,快速,灵敏度高,血浆用量少,成本低等优点,并且能同时定量测定人血浆或血清中扑米酮(PRI)、苯巴比妥(PB)、苯妥英(PHT)、卡马西平(CBZ),拉莫三嗪(LTG)、奥卡西平(OXC)6种抗癫痫药物以及OXC活性产物单羟奥卡西平(MHD)和CBZ活性产物环氧卡马西平(CBZE)的浓度,适合常规治疗药物浓度监测。
本方法的技术方案是:待测样品预处理,经酸性流动相在色谱柱分离后,用紫外检测器检测。
包括下述步骤:
1)样品预处理
取待测样品,加入定量的有机溶媒蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀,
所述有机溶媒蛋白沉淀剂选自甲醇、乙腈或甲醇和乙腈的混合物;
2)样品分离与分析
采用通用型的液相色谱柱,其填料为Zorbax RX-C8,高效液相系统采用通用型的紫外检测器以及高压泵,采用甲醇、乙腈和酸性水溶液(pH=2.1~2.5)的混合液作为流动相,等度洗脱;
本方法流动相优选甲醇-乙腈-0.1%三氟乙酸(200±5∶135±5∶665±5)混合液;
采用紫外检测器215±1nm测定检测PRI、LTG、MHD、PB和CBZE的峰面积,235±1nm测定OXC、PHT和CBZ的峰面积,用标准曲线方程换算成浓度。
与现有的技术相比,本方法的贡献在于:采取了不同实验方法,针对测定物进行了实验条件优化,采用了不同的分析色谱柱,以Zorbax RX-C8为色谱柱填料,优化了流动相条件,采用酸性水溶液甲醇-乙腈-0.1%三氟乙酸作为流动相。
本方法具有以下优点:
1.预处理方法:一步有机溶媒蛋白沉淀法,简便价廉,适用于常规检测。
2.分离条件:分离采用填料为Zorbax RX-C8的色谱柱作为固定相,甲醇、乙睛和酸性水溶液的混合液作为流动相,等度洗脱,20分钟内完成PRI、PB、LTG、OXC、MHD、CBZ、CBZE和PHT八种抗癫痫药物和内标的分离。而且,内源性物质和常用合并用药不干扰上述药物的测定。
3.检测时针对不同的待测药物采用不同的波长,避免内源性物质的干扰,且获得最佳的响应信号。
4.内标选用价廉易得的药物盐酸普萘洛尔,安全性好且有合适的保留时间。
本发明方法快速准确、灵敏度高、操作简便、成本低、适合于临床常规监测。所述的PRI、LTG、MHD、PB、CBZE、OXC、PHT和CBZ的线性范围分别是5~50,1~25,1~50,5~100,1~10,0.5~25,1~50,1~25μg·mL-1。平均方法回收率分别为98.7%,97.0%,97.9%,102.9%,100.0%,99.2%,100.1%和101.7%。日内和日间精密度RSD均小于15%。
附图说明
图1:典型色谱图:空白血浆A1:215nm,A2:235nm。
图2:典型色谱图:空白血浆+标准品(B1:215nm,B2:235nm)PRI、MHD、PHT均为20μg·mL-1,LTG、OXC、CBZ均为10μg·mL-1,PB40μg·mL-1,CBZE 4μg·mL-1。
图3:服用LTG+PB+CBZ的癫痫患者的色谱图,其中C1:215nm,C2:235nm。
图4:服用PRI+OXC+PHT的癫痫患者的色谱图,其中D1:215nm,D2:235nm,1-PRI;2-LTG;3-MHD;4-PB;5-CBZE;6-OXC;7-PHT;8-CBZ;9-盐酸普萘洛尔。
具体实施方式
实施例1
色谱条件
Agilent Zorbax RX-C8色谱柱:4.6mm×250mm,5μm;流动相:甲醇-乙腈-0.1%三氟乙酸(200∶135∶665);流速:1.5mL·min-1;柱温:40℃;双波长双通道检测:215nm检测PRI、LTG、MHD、PB和CBZE,235nm检测OXC、PHT和CBZ。
血浆样品预处理
取血浆样品100μL,加10μg·mL-1盐酸普萘洛尔甲醇工作液300μL,涡旋混合30s,离心12000×g,4℃,10min,取上清液20μL直接进样,内标法以峰面积定量。
选择性
取不同来源的10位健康志愿者的血样,按照上述样品制备和测定方法进行测定,未发现内源性物质对上述测定组分有干扰。取常用的抗癫痫药物、精神类药物和非处方药物适量进样,结果显示多虑平、硝基安定、安定、氯硝安定、氟哌啶醇等精神类药物和甲硝唑、对乙酰氨基酚、硝苯地平、布洛芬、阿昔洛韦等均不干扰样品测定。PRI、LTG、PB、OXC、PHT、CBZ、MHD、CBZE和内标盐酸普萘洛尔的典型保留时间分别为:4.5、5.4、7.4、10.9、17.4、18.5、6.7、8.8、14.9min。各测试组分峰形良好、分离完全。整个色谱分析过程时间为20min。
线性试验
精密称取标准物质适量,用甲醇溶解,空白血浆稀释定容,制成含PRI5,10,12.5,25,37.5,50μg·mL-1、含LTG 1,5,6.25,12.5,18.75,25μg·mL-1、含MHD 1,5,12.5,25,37.5,50μg·mL-1、含PB 5,15,25,50,75,100μg·mL-1、含CBZE 1,2,2.5,5,7.5,10μg·mL-1、含OXC 0.5,2.5,6.25,12.5,18.75,25μg·mL-1、含PHT 1,5,12.5,25,37.5,50μg·mL-1、含CBZ 1,5,6.25,12.5,18.75,25μg·mL-1的系列浓度标准血样。各取血浆100μL,按”血浆样品预处理”方法操作。以待测组分与内标峰面积比(x)和待测组分的浓度(y)作加权(1/x)线性回归,表1为回归方程与线性关系,表明各待测组分标准曲线回归方程。
准确度和精密度
精密称取标准物质适量,用甲醇溶解,空白血浆稀释定容,制成含PM 10,20,40μg·mL-1、含LTG 2,10,20μg·mL-1、含MHD 2,20,40μg·mL-1、含PB10,40,80μg·mL-1、含CBZE 2,4,8μg·mL-1、含OXC 1,10,20μg·mL-1、含PHT 2,20,40μg·mL-1、含CBZ 2,10,20μg·mL-1的低、中、高质控血样。各取血浆100μL,按”血浆样品预处理”方法操作,考察皮内和批间精密度和准确度。根据线性回归方程计算其实测浓度,计算每种浓度的实测平均值及相对标准偏差(RSD)表示,(C实测/C理论)×100%即为回收率。表2为批内精密度,表3是批间精密度,表4是回收率试验结果。
实验结果表明:内源性物质不干扰待测物的测定。且上述待测组分和内标物质峰形对称、分离良好。
同时,本方法已在实际患者血药浓度的测定中得到了验证。
表1
药物 | 回归方程 | r | 线性范围/μg·mL<sup>-1</sup> |
PRILTGMHDPBCBZEOXCPHTCBZ | Y=0.0081706X+0.0013784Y=0.037961X+0.011992Y=0.019040X+0.021026Y=0.012446X-0.0011166Y=0.027788X+0.0018558Y=0.015737X-0.0024455Y=0.0044029X-0.0012089Y=0.024838X-0.0023432 | 0.99860.99920.99940.99930.99690.99920.99920.9995 | 5~501~251~505~1001~100.5~251~501~25 |
表2
药物 | 低 | 中 | 高 | ||||||
理论浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | 测定浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | RSD/% | 理论浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | 测定浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | RSD/% | 理论浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | 测定浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | RSD/% | |
PRILTGMHDPBCBZEOXCPHTCBZ | 1022102122 | 9.58±0.381.83±0.132.01±0.1010.17±0.431.96±0.131.03±0.112.04±0.242.04±0.05 | 4.027.284.974.276.8210.8811.582.65 | 201020404102010 | 20.38±0.7210.10±0.4720.43±0.9040.65±1.674.04±0.199.63±0.4620.37±1.0410.06±0.39 | 3.544.694.414.114.724.815.083.85 | 402040808204020 | 39.71±1.2419.76±0.6139.47±1.0778.14±1.667.76±0.2418.87±0.2339.51±1.1719.62±0.40 | 3.113.072.722.133.051.222.962.04 |
表3
药物 | 低 | 中 | 高 | ||||||
理论浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | 测定浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | RSD/% | 理论浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | 测定浓度/μg·m<sup>-1</sup> | RSD/% | 理论浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | 测定浓度/μg·mL<sup>-1</sup> | RSD/% | |
PRILTGMHDPBCBZEOXCPHTCBZ | 1022102122 | 9.95±0.371.96±0.101.92±0.1710.00±0.372.03±0.160.97±0.052.06±0.122.02±0.07 | 3.695.319.013.687.984.775.693.23 | 201020404102010 | 20.43±0.7710.13±0.3320.26±0.5540.46±0.834.14±0.099.75±0.3720.35±0.5510.06±0.32 | 3.783.302.712.052.243.842.733.16 | 402040808204020 | 39.30±1.1119.51±0.3939.20±0.6578.32±1.057.84±0.1819.29±0.6339.64±0.6719.65±0.48 | 2.832.001.671.342.313.281.682.45 |
表4
药物 | 提取回收率 | 方法回收率 | ||
回收率/% | RSD/% | 回收率/% | RSD/% | |
PRILTGMHDPBCBZEOXCPHTCBZ | 104.6±0.67106.8±4.9899.1±9.51107.7±7.76103.7±2.50101.7±9.9897.6±10.52106.7±4.04 | 0.644.669.597.202.419.8110.783.79 | 98.7±2.5897.0±3.9897.9±5.18102.9±5.51100.0±3.3699.2±4.49100.1±2.31101.7±3.37 | 2.614.105.295.363.364.532.303.31 |
Claims (2)
1.一种同时测定多种抗癫痫药物血药浓度的方法,其特征是待测样品预处理,经酸性流动相在色谱柱分离后,用紫外检测器检测,包括以下步骤:
1)样品预处理
取待测样品,加入定量的有机溶媒蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀,
所述有机溶媒蛋白沉淀剂选自甲醇、乙腈或甲醇和乙腈的混合物;
2)样品分离与分析
采用通用型液相色谱柱,其填料为Zorbax RX-C8,Agilent Zorbax RX-C8色谱柱:4.6mm×250mm,5μm,高效液相系统采用通用型的紫外检测器以及高压泵,采用甲醇-乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液的混合液为流动相,等度洗脱;甲醇∶乙腈∶0.1%三氟乙酸水溶液的体积比为200±5∶135±5∶665±5,pH=2.1~2.5;
3)紫外检测器检测,测峰面积,用标准曲线方程换算浓度;
所述的多种抗癫痫药物是扑米酮、苯巴比妥、苯妥英、卡马西平、拉莫三嗪、奥卡西平以及单羟奥卡西平和环氧卡马西平。
2.按权利要求1所述的同时测定多种抗癫痫药物血药浓度的方法,其特征是所述的步骤3)的紫外检测器检测,其中:采用紫外检测器215±1nm测定扑米酮、拉莫三嗪、单羟奥卡西平、苯巴比妥和环氧卡马西平的峰面积,235±1nm测定奥卡西平、苯妥英和卡马西平的峰面积,用标准曲线方程换算成浓度。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100580447C (zh) * | 2007-07-31 | 2010-01-13 | 复旦大学附属华山医院 | 一种测定人血浆中抗病毒药物浓度的方法 |
CN100580448C (zh) * | 2007-08-10 | 2010-01-13 | 复旦大学附属华山医院 | 一种测定人血浆中苯妥英及其前体药物和代谢物的方法 |
CN101419225B (zh) * | 2008-11-06 | 2012-09-05 | 复旦大学附属华山医院 | 一种同时测定人尿液中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法 |
CN102768284B (zh) * | 2012-08-01 | 2015-05-06 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 一种卡马西平均相酶免疫检测试剂的制备方法 |
CN108037214A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-05-15 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中苯妥英钠药物含量的液相色谱分析方法 |
CN108241031A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-07-03 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中茶碱药物含量的液相色谱分析方法 |
CN107991420A (zh) * | 2018-01-25 | 2018-05-04 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种检测血液中卡马西平含量的液相色谱分析方法 |
CN108037225A (zh) * | 2018-01-25 | 2018-05-15 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法 |
CN110763800A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-02-07 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中奥卡西平和10,11-二氢-10-羟基卡马西平的方法 |
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CN115326960B (zh) * | 2022-08-11 | 2024-03-15 | 复旦大学附属华山医院 | 一种同时检测人血浆中8种抗癫痫药物及1种活性代谢物浓度的分析方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1102989A (zh) * | 1993-11-24 | 1995-05-31 | 沈阳市铁西神经精神病医院 | 一种抗癫痫药物及其制备方法 |
CN1060675C (zh) * | 1998-09-08 | 2001-01-17 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种治疗癫痫的药物 |
-
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1102989A (zh) * | 1993-11-24 | 1995-05-31 | 沈阳市铁西神经精神病医院 | 一种抗癫痫药物及其制备方法 |
CN1060675C (zh) * | 1998-09-08 | 2001-01-17 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种治疗癫痫的药物 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
焦正、钟明康、施孝金、张静华.HPLC法同时测定人血清中卡马西平、环氧化卡马西平和苯妥英.药物分析杂志22 6.2002,22(6),446. |
焦正、钟明康、施孝金、张静华.HPLC法同时测定人血清中卡马西平、环氧化卡马西平和苯妥英.药物分析杂志22 6.2002,22(6),446. * |
詹三华、李顺炜、毛名扬.RP-HPLC法测定人血浆中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平浓度.安徽医药7 2.2003,7(2),135. |
詹三华、李顺炜、毛名扬.RP-HPLC法测定人血浆中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平浓度.安徽医药7 2.2003,7(2),135. * |
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Legal Events
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---|---|---|---|
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PB01 | Publication | ||
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C14 | Grant of patent or utility model | ||
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CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
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