CN102018929A

CN102018929A - 姜黄素的含量测定方法

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Publication number: CN102018929A
Application number: CN2009100443634A
Authority: CN
Inventors: 李湘洲; 张胜; 旷春桃; 杨国恩
Original assignee: Central South University of Forestry and Technology
Current assignee: Central South University of Forestry and Technology
Priority date: 2009-09-18
Filing date: 2009-09-18
Publication date: 2011-04-20

Abstract

本发明涉及一种姜黄素的含量测定方法，特别是复方姜黄降脂胶囊的中所含姜黄素的含量测定方法。其采用的色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相梯度洗脱程序：A：乙腈；B：0.01mol·L^-1的磷酸二氢钾溶液，pH为2.5；在0～20分钟内B相从55％按一级线性梯度增加到60％；第20～30分钟B相从60％按一级线性梯度降低到55％；流速：1.0ml.min^-1；检测波长：425nm；柱温：30℃。本测定方法做了大量方法学验证试验，结果认为该方法准确可靠，分别开展了线性关系考察，稳定性试验，精密度试验，重现性试验和加样回收试验对方法进行验证。

Description

姜黄素的含量测定方法

技术领域

本发明涉及一种姜黄素的含量测定方法，特别是复方姜黄降脂胶囊的中所含姜黄素的含量测定方法。

背景技术

姜黄是一种药食两用的传统药材，具有破瘀、行气、消积和止痛的功效以及抗癌、抗早孕、抗凝血、抗氧化和保肝等生理活性。姜黄的主要有效成分为姜黄素。

银杏又名公孙树或白果树等，为古代孑遗植物，其叶和果具有重要的药用价值。银杏在我国被用作药物已有约5000年的历史，银杏叶提取物主要有效成分为植物黄酮类类。国内外基础和临床研究表明，银杏叶提取物对多种不同动物种类、动物模型及人类均有着明显而广泛的药理活性。

红曲在中国的应用源远流长，是我国先人巧夺天工的伟大发明，是祖国宝贵的科学文化遗产，自古至今就是一个具有药用和食用价值的典型代表。本品性温、味甘，具有活血化瘀、健脾消食之功效，主治产后恶露不净、瘀滞腹痛、食积饱胀、赤白下痢、跌打损伤等症。

姜黄提取物，银杏叶提取物，红曲粉复配后制成的复方姜黄降脂胶囊，必需建立新的质量控制方法。其目的在于检查生产过程的中间体，成品中各项质量指标是否符合规定，生产工艺是否合理。

有关制剂中姜黄素的质量控制，一般采用紫外-可见分光光度法(UV)，薄层扫描法(TLCS)及高效液相色谱法(HPLC)。

以下是部分文献的公开报道：

刘渝等使用薄层扫描法测定三黄前列贴中姜黄素含量。样品经过适当提取后点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(9.6∶0.3∶0.1)为展开剂，检测波长λ_s＝425am，λ_r＝560nm。。

刘彦等对安宫牛黄中姜黄素进行含量测定。具体方法为色谱柱：C18柱，200mm×4.6mm，粒径5μm；流动相：乙腈-4％冰醋酸溶液(50∶50)；流速：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：430nm。

甘宾宾等建立了高效液相色谱法测定保健食品中姜黄素含量的方法。用甲醇对样品进行超声提取，以C18柱(4.6X250mm)为分析柱，乙腈∶磷酸盐缓冲液＝50∶50为流动相，流量1.0mL·min^-1，检测波长为425nm。

李维等建立高效液相色谱测定傣药双姜胃痛丸中姜黄素的含量。方法采用C18柱(250nm×4.6nm，5μm)，以乙腈-4％乙酸溶液(40∶60)为流动相；检测波长为430nm，流速：1.0ml·min^-1，检测波长为430nm。

金城等建立高效液相色谱法测定姜参胶囊中姜黄素含量的方法。方法采用色谱柱为C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-8％醋酸溶液(47∶53)，流速为1.0mL·min^-1，检测波长为254nm，柱温为室温。

崔红彬等建立HPLC法测定姜黄片中姜黄素含量的方法。方法采用ODS₂C18色谱柱，乙腈-4％冰醋酸(48∶52)为流动相；流速1.0ml·min^-1；检测波长430nm.

李玲等采用反相色谱法，测定七味姜黄胶囊中姜黄素的含量。色谱柱：C18(250nm×4.6nm，5μm)，流动相：四氢呋喃-5％醋酸溶液(42∶58)，流速1mL·min^-1，检测波长428nm，柱温35℃

王静等以薄层扫描法测定散结乳癣贴膏中姜黄素含量。方法：展开剂为氯仿-甲醇-冰醋酸(96∶3∶1)，扫描波长为λs 425nm、λs2：650nm，扫描速度为10mm·min^-1。

申凯采用高效液相色谱法测定“七种熊胆胶囊”中姜黄素含量。方法：色谱柱为ODS分析柱(4.6mm×200mm，5μm)，乙腈一0.2％磷酸溶液(45∶55)为流动相，流速为1mL·min^-1，检测波长为430nm，进样量为10L。

王玉峰等建立益智胶囊中姜黄素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈-2％冰乙酸(49∶51)为流动相，检测波长425nm，流速1.0mL·min^-1。

2005版中国药典规定姜黄中姜黄素的含量测定方法为高效液相色谱法，用辛烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈-4％冰乙酸(48∶52)为流动相，检测波长430nm，流速1.0mL·min^-1。

从上述方法中可以看出，HPLC法为较常使用的分析手段。TLCS法样品处理繁琐，使用频率较少。UV法主要用于姜黄素生产过程质量控制，因为复方产品中可能有其他成分干扰，所以很少用于制剂成品中姜黄素的含量测定。在实际操作中我们发现，HPLC法的色谱条件选择所获得的分离效果有较大不同。上述文献报导所采用的乙腈-酸-水系统及等度洗脱的方式，经我们用来测试复方姜黄降脂胶囊中姜黄素，发现分离效果不及本专利所提供的色谱条件(见图4)。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的姜黄素的含量测定方法，特别是适用于在具有多种有效成分的组合物中测定姜黄素的方法。

根据本发明提供的一种姜黄素含量测定方法，其采用的色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相梯度洗脱程序：A：乙腈；B：0.01mol·L^-1的磷酸二氢钾溶液，pH为2.5)；在0～20分钟内B相从55％按一级线性梯度(即时间-流动相比例按直线方程变化)增加到60％；第20～30分钟B相从60％按一级线性梯度降低到55％；流速：1.0ml.min^-1；检测波长：425nm，柱温：30℃。

本测定方法做了大量方法学验证试验，结果认为该方法准确可靠，分别开展了线性关系考察，稳定性试验，精密度试验，重现性试验和加样回收试验对方法进行验证。与同类方法比较，姜黄素的分离度更高，可达到基线分离。不但可用于复方姜黄降脂胶囊的质量控制，也可延展至含姜黄素的药品，保健食品制剂中应用。

附图说明

图1是本发明提供的姜黄素检测方法的标准曲线；

图2是根据本发明提供的姜黄素检测方法测定的姜黄素对照品HPLC图；

图3是采用本发明方法分离姜黄素的HPLC效果图，其中1：双去甲氧基姜黄素；2：去甲氧基姜黄素；3：姜黄素；

图4是采用现有技术中的分析方法乙腈-酸-水系统色谱条件分离姜黄素的HPLC图，其中1：双去甲氧基姜黄素；2：去甲氧基姜黄素；3：姜黄素。

具体实施方式

实施例1

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相梯度洗脱程序：A：乙腈；B：0.01mol·L^-1的磷酸二氢钾溶液(用磷酸调整PH至2.5)；在0～20分钟内B相从55％(体积百分浓度)按一级线性梯度(即时间-流动相比例按直线方程变化)增加到60％；第20～30分钟B相从60％按一级线性梯度降低到55％。流速：1.0ml.min^-1；检测波长：425nm，柱温：30℃。理论板数以姜黄素计不得低于5000，分离度不低于1.5。

对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的姜黄素对照品6.4mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为贮备液；精密吸取0.5ml置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：精密称定复方姜黄降脂胶囊内容物约30mg，置25ml的容量瓶中，用甲醇溶解，超声处理20分钟，放冷后定容，再稀释5倍，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

现有方法与本发明的方法相比较：本发明改用缓冲盐溶液作为流动相，同时针对姜黄素类3个成分保留时间较为接近特点，以梯度洗脱的淋洗方式对其进行分离。结果显示(参考图2、3、4)，采用本发明所分离的姜黄素色谱分离度明显优于现有方法。

实施例2

1.线性关系考察

精密吸取姜黄素对照品储备溶液，用甲醇稀释分别配制成浓度为4.0μg·mL^-1，8.0μg·mL^-1，16.0μg·mL^-1，32.0μg·mL^-1，64.0μg·mL^-1，的一系列对照品溶液，摇匀，过滤，分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，结果见表1，以姜黄素浓度C(μg.mL^-1)为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线(见图1)，结果姜黄素峰面积与浓度呈良好线性关系，回归方程为y＝90714738.58x-67033.08，r＝0.9999.

表1线性关系考察结果

2.稳定性试验

精密吸取对照品溶液，在室温下，保存在暗处，分别于配制后0、4、8、24小时进行姜黄素峰面积测定，每次进样10μl，测得姜黄素对照品溶液至在24小时内的峰面积平均值为870002，RSD为1.43％，结果见表2。结果表明姜黄素溶液保存在暗处，在24小时内稳定。

表2稳定性试验

3.精密度实验

精密吸取上述同一样品溶液10μL，重复进样5次，测定姜黄素峰面积，实验结果见表3，RSD＝1.37％，显示精密度良好。

表3精密度试验

4.重现性实验

称取同一批号(090101)的样品5份，每份约30mg，精密称定，按2.1.3.2中供试品制备方法制备5份供试品溶液，并测定含量，结果见表4，平均含量为9.41％，RSD＝3.46％，表明方法重复性好。

表4重现性试验

4.回收率试验

采用加样回收法，称取已知含量的同一批复方姜黄降脂胶囊内容物(姜黄素含量为9.41％)5份，精密称定，分别精密加入对照品溶液5ml(姜黄素对照品浓度为0.38mg/ml)，照供试品溶液制备方法制备。按系统适应性条件方法，进样，测定峰面积，计算，求得姜黄素平均回收率为96.63％，RSD＝1.57％，结果见表5。结果表明，本法回收率较好，方法可行。

表5姜黄素回收率试验

Claims

1.一种姜黄素含量测定方法，其采用的色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相梯度洗脱程序：A：乙腈；B：0.01mol·L^-1的磷酸二氢钾溶液，pH为2.5；在0～20分钟内B相从55％按一级线性梯度增加到60％；第20～30分钟B相从60％按一级线性梯度降低到55％；流速：1.0ml.min^-1；检测波长：425nm；柱温：30℃。