CN105675739B - 一种治疗风热感冒中药的hplc特征图谱的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法,包括供试品溶液的制备,对照品溶液的制备,色谱条件限定,分别精密吸取供试品溶液、药材溶液,各10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得HPLC特征图谱。本发明的积极效果是:在同一色谱条件下同时检测多味药材化学成分,从指纹图谱的相似度判断批量之间的质量一致性。还可追根溯源,寻找工艺操作中的问题。指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9,能有效的反映成品批与批之间的质量,有利于全面监控产品的质量。避免了质量控制的单一性和片面性。并具有方便、快捷、稳定、精密、重现性好等特点。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,具体涉及一种治疗风热感冒制剂的质量控制方法。
背景技术
中药特征图谱能全面、综合的反映所含成分的相对关系,较好的体现中药成分的复杂性和相关性,具有特征明显、专属性强、重现性好等特点,随着中医中药的推广应用,特征图谱作为中草药及其提取物质量控制方法,目前已成为被国内外广泛接受的一种对中药质量进行评价的技术。
此前,一种治疗风热感冒制剂(专利号CN 104623082 A)没有明确的检测方法,而对其中的药味(金银花、连翘、锦灯笼、紫箕贯众、黄芩、甘草),多采用中国药典中给出的方法,即单独的对其中各味药的成分进行含量测定(金银花-绿原酸、连翘-连翘苷、黄芩-黄芩苷、甘草-甘草苷)。前述检测方法存在的不足之处有:
1、在药典规定的方法中没有对其中多味药材的多个主要化学成分进行全面、系统的检测。
2、现行无质量检测方法不能监控原料药材、中间体、成品的质量。
综上所述,现有技术中对一种治疗风热感冒制剂(专利号CN 104623082 A)方法存在方法繁琐、不能快速、全面的对一种治疗风热感冒制剂进行检测和鉴定等缺陷。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法,克服现有的检测方法存在的前述不足。
本发明的HPLC特征图谱的构建方法包括:
1、供试品溶液的制备:
取本品2g-5g,精密称定,精密加取30%-100%甲醇25-30ml,称定重量,用超声处理30-60分钟取出,待溶液冷却至室温,用30%-100%甲醇补重,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
2、参照物溶液的制备:分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量,加50%甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg的混合参照物贮备溶液。使用时精密量取2.00mL,置25mL量瓶中,用30%-100%甲醇稀释至刻度,作为参照物溶液。
3、色谱条件:采用ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈-水(乙腈9%-55%)梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;DAD检测器,波长为253nm;柱温35℃;进样量10μL。理论板数均不低于10000。
4、测定:分别精密吸取供试品溶液和参照物溶液各10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。
本发明的HPLC特征图谱的最佳构建方法如下:(以下技术方案中所记载的各物质的用量或用量范围,旨在表明各物质间的用量比例关系,并不限定在记载的具体数量上。)
供试品溶液的制备:取本品2g,精密称定,精密加取50%甲醇25ml,称定重量,用超声处理30分钟取出,待溶液冷却至室温,用50%甲醇补重,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
参照物溶液的制备:分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量,加50%甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg、的混合参照物贮备溶液及单独参照物。使用时精密量取2.00mL,置25mL量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,作为参照物溶液。
3、色谱条件:采用ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相梯度洗脱程序见表1;体积流量0.8mL/min;DAD检测器,波长为253nm;柱温35℃;进样量10μL。理论板数均不低于10000。
表1流动相梯度洗脱条件
4、测定:分别精密吸取供试品溶液和参照物溶液各10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。
其中所述一种治疗风热感冒制剂的HPLC特征图谱中共有7个特征共有峰,其中归属于金银花的特征图谱具有2个特征共有峰:1号峰、2号峰;归属于连翘的特征图谱具有2个特征共有峰:3号峰、4号峰;归属于甘草的特征图谱具有2个特征共有峰:5号峰、6号峰;归属于黄芩的特征图谱具有1个特征共有峰:7号峰;
其中所述的一种治疗风热感冒制剂的HPLC特征图谱的构建方法,在253nm波长检测下利用各标准品对主要峰进行比较确定;1-7号分别为绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷B、连翘苷、甘草酸、甘草苷、黄芩苷。
其中所述一种治疗风热感冒制剂的HPLC特征图谱,以甘草苷为参照峰S,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,所述相对保留时间在第一规定值的±5%之内,所述第一规定值为:16.18-峰1、8.3-峰2、17.8-峰3、7.86-峰4、21.12-峰5、1.00-峰S、11.83-峰7
其中所述一种治疗风热感冒制剂的HPLC特征图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价,供试品批与批间的相似度均大于0.90。
附图说明
图1是一种治疗风热感冒制剂的HPLC特征图谱
图2是一种治疗风热感冒制剂的HPLC对照品参照物图谱
图3是一种治疗风热感冒制剂的HPLC连翘苷对照品
图4是一种治疗风热感冒制剂的HPLC甘草苷对照品
图5是一种治疗风热感冒制剂的HPLC木犀草苷对照品
图6是一种治疗风热感冒制剂的HPLC连翘酯苷B与黄芩苷对照品
图7是一种治疗风热感冒制剂11批次样品叠加图
具体实施方式
实施例1:一种治疗风热感冒制剂特征图谱方法的建立。
1仪器:UltiMate 3000DGLC高效液相色谱仪,紫外DAD检测器;Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
2试剂与试药
2.1试剂:甲醇等为分析纯,磷酸、乙腈为色谱纯,水为超纯水。
2.2试药:绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸(均来自中国食品药品鉴定研究院),一种治疗风热感冒制剂批号:120601、120602、120603、130501、130502、130503、130504、130505、141201、141202、141203(来自吉林修正药业新药开发有限公司)。
3方法与结果
3.1色谱条件:采用ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相梯度洗脱程序见表;体积流量0.8mL/min;DAD检测器,波长为253nm;柱温35℃;进样量10μL。理论板数均不低于10000。
流动相梯度洗脱条件
3.2供试品溶液的制备:取本品2g,精密称定,精密加取50%甲醇25ml,称定重量,用超声处理30分钟取出,待溶液冷却至室温,用50%甲醇补重,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
3.3参照物溶液的制备:分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量,加50%甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg的混合参照物贮备溶液及单独参照物,使用时精密量取2.00mL,置25mL量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,作为参照物溶液。
3.4测定:分别精密吸取供试品溶液和参照物溶液各10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。
3.5指纹图谱的建立
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》对11批一种治疗风热感冒制剂进行相似度评价,见图3。结果表明,11批供试品指纹图谱与生成的对照图谱(S)的相似度均大于0.90。相似度比较结果见表1。
表1
3.6.特征峰归属
其中归属于金银花的特征图谱具有2个特征共有峰:1号峰、2号峰;归属于连翘的特征图谱具有2个特征共有峰:3号峰、4号峰;归属于甘草的特征图谱具有2个特征共有峰:5号峰、6号峰;归属于黄芩的特征图谱具有1个特征共有峰:7号峰;
3.6.1主要峰的定性:通过与标准品比较确定,1-7号分别为绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷B、连翘苷、甘草酸、甘草苷、黄芩苷。
在标准图谱中,以甘草苷为参照峰S,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,所述相对保留时间在第一规定值的±5%之内,所述第一规定值为:16.18-峰1、8.3-峰2、17.8-峰3、7.86-峰4、21.12-峰5、1.00-峰S、11.83-峰7
取一种治疗风热感冒制剂样品,按上述同法操作,得到一种治疗风热感冒制剂样品的特征图谱,采用中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件对样品图谱与标准图谱进行分析,相似度大于0.90为合格产品。
3.7保留时间
与现有技术相比,本发明有益效果如下:
该方法采用高效液相色谱法,在同一色谱条件下同时检测复方中的四味药材化学成分,从指纹图谱的相似度判断一种治疗风热感冒制剂批与批之间的质量一致性。还可依据成品、半成品、原料药材的特征图谱变化来追根溯源,寻找工艺操作中的问题。
(1)用本发明所提供的方法构建的一种治疗风热感冒制剂指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9,能有效的反映成品批与批之间的质量,有利于全面监控产品的质量。
(2)本发明采用高效液相色谱法,在同一色谱条件下同时检测复方中的四味药材成分,对有效成分既能定性又能定量,并通过一种治疗风热感冒制剂的特征图谱,获得原料与成品之间的相关性,避免了一种治疗风热感冒制剂质量控制的单一性和片面性。
(3)本发明具有方便、快捷、稳定、精密度高、重现性好等特点,可准确可靠的控制一种治疗风热感冒制剂的质量。
除以上实施例外,本发明还可以有其他实施方式,凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案,均落在本发明要求的保护范围。
Claims (4)
1.一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法,其特征是包括下述步骤:
(1)供试品溶液的制备:
取本品2g-5g,精密称定,精密加取30%-100%甲醇25-30ml,称定重量,用超声处理30-60分钟取出,待溶液冷却至室温,用30%-100%甲醇补重,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
(2)参照物溶液的制备:分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量,加50%甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg的混合参照物贮备溶液,使用时精密量取2.00mL,置25mL量瓶中,用30%-100%甲醇稀释至刻度,作为参照物溶液;
(3)色谱条件:采用ZORBAXSB-C18色谱柱为4.6mm×250mm,5μm,流动相乙腈-水,其中,乙腈为9%-55%梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;DAD检测器,波长为253nm;柱温35℃;进样量10μL,理论板数均不低于10000;梯度洗脱表:其中A为乙腈,B为0.1%磷酸溶液,0~30分钟;A:9%~15%,B:91%~85%,30~45分钟;A:15%~25%,B:85%~75%,45~55分钟;A:25%~70%,,B:75%~30%,55~60分钟;A:70%~55%,B:30%~45%,60~65分钟;A:55%~9%,B:45%~91%,65~75分钟;A:9%~9%,B:91%~91%;
(4)测定:分别精密吸取步骤(1)和步骤(2)各10μl注入液相色谱仪,照步骤(3)测定,得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。
2.根据权利要求1所述一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法,其特征是:
(1)供试品溶液的制备:取本品2g,精密称定,精密加取50%甲醇25ml,称定重量,用超声处理30分钟取出,待溶液冷却至室温,用50%甲醇补重,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得;
(2)参照物溶液的制备:分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量,加50%甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg的混合参照物贮备溶液及单独参照物,使用时精密量取2.00mL,置25mL量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,作为参照物溶液;
(3)色谱条件:采用ZORBAXSB-C18色谱柱4.6mm×250mm,5μm,流动相梯度洗脱程序见表1;体积流量0.8mL/min;DAD检测器,波长为253nm;柱温35℃;进样量10μL,理论板数均不低于10000;梯度洗脱表:其中A为乙腈,B为0.1%磷酸溶液,0~30分钟;A:9%~15%,B:91%~85%,30~45分钟;A:15%~25%,B:85%~75%,45~55分钟;A:25%~70%,,B:75%~30%,55~60分钟;A:70%~55%,B:30%~45%,60~65分钟;A:55%~9%,B:45%~91%,65~75分钟;A:9%~9%,B:91%~91%;
(4)测定:分别精密吸取步骤(1)和步骤(2)各10μl注入液相色谱仪,照步骤(3)测定,得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。
3.一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法,其特征在于,按照权利要求1~2任一项所述的方法构建11批一种治疗风寒感冒中药的HPLC特征图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件生成由7个共有峰构成的标准特征图谱,1-7号分别为绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷B、连翘苷、甘草酸、甘草苷、黄芩苷。
4.根据权利要求1或2所述的一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法,其特征在于,以甘草苷为参照峰S,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,所述相对保留时间在第一规定值的±5%之内,所述第一规定值为:16.18-峰1、8.3-峰2、17.8-峰3、7.86-峰4、21.12-峰5、1.00-峰S、11.83-峰7。
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