CN109596751A - 一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法 - Google Patents

一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109596751A
CN109596751A CN201910041593.9A CN201910041593A CN109596751A CN 109596751 A CN109596751 A CN 109596751A CN 201910041593 A CN201910041593 A CN 201910041593A CN 109596751 A CN109596751 A CN 109596751A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
mailuo
oral liquid
ning
peak
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910041593.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109596751B (zh
Inventor
周红燕
张蕙
汤卫国
徐向阳
夏云
崔凌云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jinting Pharmaceutical Co., Ltd.
Original Assignee
TECHNOLOGY CENTRE OF JINLING PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TECHNOLOGY CENTRE OF JINLING PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical TECHNOLOGY CENTRE OF JINLING PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN201910041593.9A priority Critical patent/CN109596751B/zh
Publication of CN109596751A publication Critical patent/CN109596751A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109596751B publication Critical patent/CN109596751B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/74—Optical detectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8624—Detection of slopes or peaks; baseline correction
    • G01N30/8631—Peaks
    • G01N30/8634—Peak quality criteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/047—Standards external
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Quality & Reliability (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法，包括取脉络宁口服液供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，色谱条件：C18色谱柱，柱温25～40℃；以甲醇为流动相A，酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，记录色谱图，以脉络宁口服液指纹图谱为参照，由相似度软件计算供试品相似度，供试品指纹图谱应与标准指纹图谱相似；并用外标一点法计算脉络宁口服液中成分含量。本发明提方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；本发明方法脉络宁口服液指纹图谱的分离度、重现性均较好，信息全面，标示出21个共有峰，各批次样品的相似度在0.95以上，能全面、客观、科学地评价脉络宁口服液的质量。

Description

一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，特别涉及一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法。
背景技术
中药复方成分极为复杂，仅仅使用定性鉴别和指标成分的含量测定方法，很难准确的判断其内在的质量。同时中药复方是多种化学成分综合作用的结果，因此以某种单一的成分作为质量控制的指标明显不适应中药复方质量控制的要求。
脉络宁口服液是脉络宁注射液剂型改革而成的口服剂型，是脉络宁系列产品之一，具有清热养阴、活血祛瘀的功效。文献研究发现，脉络宁口服液的药学研究相对比较薄弱，仅见肉桂酸、哈巴俄苷的含量测定和薄层色谱鉴别。申请人采用脉络宁注射液指纹图谱的研究方法(CN 200410008733.6实施例1色谱条件)，对脉络宁口服液和脉络宁注射液进行了比较，结果发现除原儿茶酸和原儿茶醛出峰不明显无法确定外，其余在注射液指纹图谱中存在的共有峰均能在口服液中找到，但是口服液中5-羟甲基糠醛(5-HMF)、肉桂酸的含量小于注射液，其余成分口服液均大于注射液；同时，由于脉络宁口服液的制备工艺与注射液不同，注射液中还含有其他新的成分，申请人采用注射液指纹图谱的色谱条件，发现口服液中出峰更为复杂，且部分成分无法完全分离，明显影响了分离效果。说明现行的质量控制技术标准已经不能满足脉络宁口服液应用发展之需要。只有对脉络宁口服液进行质量标准研究，才能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。
发明内容
本发明的目的在于提供一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分的检测方法，该检测方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；本发明确定脉络宁口服液共有峰共计21个，在指纹图谱研究的基础上，对可能含有的成分进行进一步指认，对比了5-HMF，原儿茶酸、原儿茶醛、新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、1,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、石斛酚、木犀草苷、滨蒿内酯、杓唇石斛素、毛兰素、哈巴俄苷、没食子酸、阿魏酸、川续断皂苷乙、金丝桃苷、β-谷甾醇、齐墩果酸、槲皮素、木犀草苷、熊果酸、芦丁、对羟基肉桂酸、间羟基肉桂酸、栀子苷等几十种成分，比较保留时间和紫外吸收光谱确定了13个色谱峰，并对其中9种成分进行含量测定，该方法简便可行、快速准确，可以作为评价脉络宁口服液质量的有效方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
脉络宁口服液是由以下制备方法制得的：牛膝1～4重量份、玄参1～4重量份、石斛1～4重量份、金银花与山银花共1～4重量份，其中，以金银花与山银花重量之和为100％计，金银花与山银花的比例为80％:20％～50％:50％；5味药材加总重量4～8倍量水，浸泡1～3小时后，煎煮提取2～3次，每次1～3小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.30(80℃)，加乙醇使含醇量至60％～80％，静置，取上清液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.45(80℃)，加乙醇至含醇量为70％～90％，静置，取上清液，回收除尽乙醇，加水适量冷藏，过滤，按常规工艺制备成口服液。
作为所述的脉络宁口服液的优选技术方案，加水至口服液总体积的90％～95％，冷藏，过滤，加入甜菊甙、吐温-80使得口服液中甜菊甙的质量分数为0.1～0.15％、吐温-80的质量分数为4～6％，调pH至8.0-8.6，过滤，加余量水，灌封，灭菌，得脉络宁口服液。
一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法，包括取脉络宁口服液供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，HPLC检测的色谱条件为：
色谱柱为C18色谱柱，柱温25～40℃；以甲醇为流动相A，酸的水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为260nm～340nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000；
记录色谱图，以脉络宁口服液的指纹图谱为参照，获得脉络宁口服液的成分，由相似度软件计算供试品相似度，供试品指纹图谱应与标准指纹图谱相似；并用外标一点法分别计算脉络宁口服液中9个成分含量。
优选的，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，柱温35℃；以甲醇为流动相A，酸的水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。
所述的C18色谱柱为小粒径色谱柱，优选为phenomenex Luna C18(4.6mm*250mm，粒径5μm)。
所述的酸为磷酸、甲酸或冰乙酸中的一种或两种以上的混合；优选为磷酸。在所述的酸的水溶液中酸的体积百分数为0.05％～0.5％；优选为0.1％～0.5％。
所述的供试品溶液的制备方法：取1mL脉络宁口服液，50％甲醇定容至10mL，过0.22μm滤膜，取续滤液，即得。
所述的标准品溶液的制备方法：取标准品，精密称定，50％甲醇定容。
所述的标准品溶液为5-羟甲基糠醛(5-HMF)、原儿茶酸、新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、哈巴俄苷中的一种或两者以上的混合溶液，优选为5-羟甲基糠醛、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸的混合溶液，标准品溶液中各成分浓度：5-羟甲基糠醛5～500μg/mL、新绿原酸3～3000μg/mL、绿原酸30～1500μg/mL、隐绿原酸30～1500μg/mL、咖啡酸2～400μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸30～1500μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸15～1500μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸5～1000μg/mL、肉桂酸2～200μg/mL。
优选的，标准品溶液中各成分浓度：5-羟甲基糠醛5.89～58.9μg/mL、新绿原酸3.64～36.4μg/mL、绿原酸53.2～532μg/mL、隐绿原酸47.8～478μg/mL、咖啡酸2.43～24.3μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸34.8～348μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸21～210μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸6.6～66μg/mL、肉桂酸3.13～31.3μg/mL。
本发明提供的一些实施例中，标准品溶液中5-羟甲基糠醛81.12μg/mL、原儿茶酸28.625μg/mL、新绿原酸426μg/mL、原儿茶醛189μg/mL、绿原酸51.3μg/mL、隐绿原酸39.4μg/mL、咖啡酸21μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸179μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸241μg/mL、木犀草苷41.33μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸19.8μg/mL、肉桂酸465μg/mL、哈巴俄苷11.84μg/mL。
本发明提供的一些实施例中，标准品溶液中5-羟甲基糠醛17.67μg/mL、原儿茶酸14.13μg/mL、新绿原酸10.92μg/mL、绿原酸159.6μg/mL、隐绿原酸143.4μg/mL、咖啡酸7.29μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸104.4μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸63μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸19.8μg/mL、肉桂酸9.39μg/mL。
采用本发明的色谱条件，基线平稳，色谱峰较全面且各色谱峰分离度较好，重现性均较好，适宜指纹图谱的建立，标示出21个共有峰；同时适宜检测5-羟甲基糠醛、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸的含量。
所述的指纹图谱的构建方法，包括：采用本发明所述的色谱条件对不同批次的脉络宁口服液进行HPLC检测，根据HPLC检测结果，标定共有峰(各共有峰的峰面积占总峰面积的5％以上)，以中位数法建立脉络宁口服液指纹图谱；所述的指纹图谱以绿原酸为参照峰，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积如下：
峰号 相对保留时间 相对峰面积
1 0.130～0.138 —
2 0.139～0.147 —
3 0.165～0.175 —
4 0.294～0.312 —
5 0.578～0.614 0.153～0.606
6 0.641～0.680 —
7 0.695～0.738 —
8 0.767～0.814 0.981～1.631
9 0.815～0.865 —
10 1.000 1.000
11 1.001～1.056 0.737～1.177
12 1.057～1.108 0.154～0.426
13 1.281～1.360 —
14 1.473～1.530 0.402～1.148
15 1.531～1.559 0.211～0.557
16 1.560～1.623 —
17 1.651～1.714 0.328～0.931
18 1.715～1.780 —
19 1.890～1.962 0.407～1.094
20 1.963～2.037 —
21 2.192～2.327 —
本发明的有益效果：
本发明提供的检测方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；脉络宁口服液指纹图谱的分离度、重现性均较好，信息全面，标示出21个共有峰，各批次样品的相似度在0.95以上。本发明建立的脉络宁口服液中9种成分的含量测定及指纹图谱研究方法为脉络宁口服液质量控制提供依据。
本发明简便可行、快速准确，可以作为评价脉络宁口服液质量的有效方法。
附图说明
图1为13种对照品及供试品比对色谱图，5号峰为5-羟甲基糠醛，7号峰为原儿茶酸，8号峰为新绿原酸，9号峰为原儿茶醛，10号峰为绿原酸，11号峰为隐绿原酸，12号峰为咖啡酸，14号峰为3,4-二咖啡酰奎宁酸，15号峰为3,5-二咖啡酰奎宁酸，16号峰为木犀草苷，17号峰为4,5-二咖啡酰奎宁酸，19号峰为肉桂酸，21号峰为哈巴俄苷。
图2为选用不同提取溶剂的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图3为色谱柱phenomenex Gemini C18(4.6mm*250mm，5μm)得到的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图4为色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm*250mm，5μm)得到的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图5为色谱柱Kromasil C18(4.6mm*250mm，5μm)得到的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图6为以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图7为以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图8为以乙腈-0.1％磷酸水为流动相进行梯度洗脱的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图9为以甲醇-0.1％磷酸水为流动相进行梯度洗脱的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图10为以甲醇-0.5％磷酸水为流动相进行梯度洗脱的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图11为以甲醇-0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图12为以甲醇-0.1％冰乙酸水为流动相进行梯度洗脱的脉络宁口服液HPLC色谱图。
图13为在不同检测波长下进行测定的脉络宁口服液HPLC色谱图；其中，S1-S14依次代表检测波长220nm、230nm、240nm、254nm、260nm、270nm、280nm、290nm、300nm、310nm、320nm、330nm、340nm、350nm的HPLC色谱图。
图14为脉络宁口服液的对照指纹图谱，5号峰为5-羟甲基糠醛，7号峰为原儿茶酸，8号峰为新绿原酸，9号峰为原儿茶醛，10号峰为绿原酸，11号峰为隐绿原酸，12号峰为咖啡酸，14号峰为3,4-二咖啡酰奎宁酸，15号峰为3,5-二咖啡酰奎宁酸，16号峰为木犀草苷，17号峰为4,5-二咖啡酰奎宁酸，19号峰为肉桂酸，21号峰为哈巴俄苷；其它峰为未知峰。
图15为脉络宁口服液指纹图谱中色谱峰来源指认，指纹图谱中标定了21个共有峰，其中4、5、7、8、9、10、11、12、14、15、16、18号峰来自金银花和山银花重量比64％:36％药材，4、5、13、17、19、20、21号峰来自玄参药材，3、4、5、10、19号峰来自牛膝药材，5号峰来自石斛药材。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法。特别需要指出的是，本发明的技术方案已经通过较佳实施例进行描述，本领域技术人员可以借鉴本文内容，在不脱离本发明内容、精神和范围内适当改进工艺参数实现，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。
仪器：WATERS2998-600高效液相色谱仪；2998二极管阵列检测器、717自动进样器、Empower色谱工作站；Agilent 1260高效液相色谱仪；DAD检测器；BT-125D十万分之一电子天平(METTLER TOLEDO)。
试药：5-羟甲基糠醛(纯度>99％，Sigma公司，批号102K3450)，原儿茶酸(中国药品生物制品检定所，批号110810-200604)，新绿原酸(纯度>99％，成都曼思特生物科技有限公司，批号070915)，原儿茶醛(中国药品生物制品检定所，批号110810-200506)，绿原酸(中国药品生物制品检定所，批号110753-200413)，隐绿原酸(纯度>99％，成都曼思特生物科技有限公司，批号070918)，咖啡酸(中国药品生物制品检定所，批号110885-200102)，3,4-二咖啡酰奎宁酸(纯度>98％，成都曼思特生物科技有限公司，14534-61-3)，3,5-二咖啡酰奎宁酸(纯度>98％，成都曼思特生物科技有限公司)，4,5-二咖啡酰奎宁酸(纯度>98％，071115)、木犀草苷(中国药品生物制品检定所，批号111520-200506)，肉桂酸(中国药品生物制品检定所，批号0786-9802)，哈巴俄苷(中国药品生物制品检定所，批号：111730-200501)；甲醇(色谱纯)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
药品来源：脉络宁口服液，由南京金陵制药厂生产，批号090503、100303、110203、110802、130401、130402、130403、130404、130405、130406。
脉络宁口服液的具体制备方法：金银花和山银花共1重量份、石斛1重量份、牛膝1重量份、玄参1重量份；其中：以金银花与山银花重量之和为100％计，金银花与山银花的比例为64％:36％；5味药材加总重量6倍量水浸泡2小时，煎煮2次，每次1.5小时，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.16(80℃)，加乙醇至含醇量66％，静置，取上清液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.36(80℃)，加乙醇至含醇量为80％，静置，取上清液，回收尽乙醇，加水至950ml，冷藏过滤，加1.2g甜菊甙，5g吐温-80，调pH至8.0-8.6，过滤，加水至1000ml，灌封，灭菌，即得。
参照物的选择：选择保留时间适中、分离度较好的绿原酸作为参照物。
实施例1
对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、哈巴俄苷对照品适量，精密称定，以50％甲醇为溶剂，分别配制含5-羟甲基糠醛81.12μg/mL、原儿茶酸28.625μg/mL、新绿原酸426μg/mL、原儿茶醛189μg/mL、绿原酸51.3μg/mL、隐绿原酸39.4μg/mL、咖啡酸21μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸179μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸241μg/mL、木犀草苷41.33μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸19.8μg/mL、肉桂酸465μg/mL、哈巴俄苷11.84μg/mL的单一对照品溶液。
参照物溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成浓度为51.3μg/mL的溶液。
供试品溶液的制备：取脉络宁口服液(批号090503)1mL，置于10mL量瓶中，加50％甲醇定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。
测定法：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，色谱条件(表1和表2方法1)：C18色谱柱，柱温30℃；以甲醇为流动相A，0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000；记录色谱图。以绿原酸为参照物，计算相对保留时间和相对峰面积比值。
表1梯度洗脱程序
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～10 3→20 97→80
10～45 20→55 80→45
45～50 55 45
50～51 55→3 45→97
51～65 3 97
表2色谱条件
色谱图如图1所示，与对照品进行对比，指认出5号峰为5-羟甲基糠醛，7号峰为原儿茶酸，8号峰为新绿原酸，9号峰为原儿茶醛，10号峰为绿原酸，11号峰为隐绿原酸，12号峰为咖啡酸，14号峰为3,4-二咖啡酰奎宁酸，15号峰为3,5-二咖啡酰奎宁酸，16号峰为木犀草苷，17号峰为4,5-二咖啡酰奎宁酸，19号峰为肉桂酸，21号峰为哈巴俄苷。
实施例2供试品溶液提取试剂的选择
供试品溶液的制备：取脉络宁口服液(批号090503)1mL，置于10mL量瓶中，加50％甲醇或蒸馏水定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。
精密吸取供试品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，色谱条件同实施例1，记录色谱图。脉络宁口服液HPLC色谱图见图2(S1为蒸馏水，S2为50％甲醇)。结果表明，在相同浓度和相同进样体积的情况下，以蒸馏水作为提取试剂，色谱峰的峰面积略小，说明二咖啡酰奎宁酸类物质在水中不稳定，而在50％甲醇中均一性比较好且提取效率高，因此选用50％甲醇作为提取溶剂。
实施例3脉络宁口服液指纹图谱研究色谱柱的选择
调整实施例1的色谱柱为phenomenex Gemini C18(表2方法2)、Agilent ZORBAXSB-C18(表2方法3)、Kromasil C18(表2方法4)，色谱图分别见图3、图4、图5，结果显示采用色谱柱phenomenex Luna C18分离效果最佳、基线平整、柱效最高。
流动相的选择
调整实施例1的流动相为：甲醇-水(表2方法5)、乙腈-水(表2方法6)、乙腈-0.1％磷酸(表2方法7)、甲醇-0.5％磷酸(表2方法8)、甲醇-0.1％甲酸(表2方法9)、甲醇-0.1％乙酸(表2方法10)进行梯度洗脱，色谱图分别见图6、图7、图8、图10、图11、图12，结果显示采用甲醇-水、乙腈-水和乙腈-0.1％磷酸水作流动相时，峰的分离度不好；采用甲醇-0.1％乙酸水作为流动相，在27分钟左右的两个色谱峰没有分离完全；采用甲醇-0.5％磷酸水、甲醇-0.1％甲酸水和甲醇-0.1％磷酸水分离效果相似，梯度洗脱效果明显要好，谱图上各个色谱峰的分离度良好，保留时间适中，但是基线不如甲醇-0.1％磷酸平稳，同时磷酸是较为常用的酸，故采用甲醇-0.1％磷酸水系统作为流动相进行梯度洗脱。
检测波长的选择
调整实施例1的检测波长为220nm、230nm、240nm、254nm、260nm、270nm、290nm、300nm、310nm、320nm、330nm、340nm、350nm，色谱图见图13，结果发现，和其他检测波长相比，280nm处化合物吸收最大，出峰较多，反映的信息较完全，各个峰吸收值良好，基线比较平整，色谱峰基本体现，故选择280nm作为检测波长。
综上所述，确定最优的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为phenomenex Luna C18色谱柱(4.6mm*250mm，粒径5μm)，柱温30℃；以甲醇为流动相A，0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。
实施例4线性关系考察
精密称取5-羟甲基糠醛、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和肉桂酸对照品适量，用50％甲醇配制成含5-羟甲基糠醛58.9μg/mL、新绿原酸36.4μg/mL、绿原酸532μg/mL、隐绿原酸478μg/mL、咖啡酸24.3μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸348μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸210μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸66μg/mL、肉桂酸31.3μg/mL的混合对照品溶液，作为母液，依次精密吸取0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1mL母液，置于1mL量瓶内，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，色谱条件为：色谱柱为phenomenex Luna C18色谱柱(4.6mm*250mm，粒径5μm)，柱温30℃；以甲醇为流动相A，0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。以进样浓度为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)绘制标准曲线。
各对照品线性范围、回归方程和相关系数见表3。
表3各对照品线性范围、回归方程和相关系数
成分 线性范围(μg/mL) 回归方程 相关系数
5-羟甲基糠醛 5.89～58.9 y＝199193x-115220 1.000
新绿原酸 3.64～36.4 y＝14529x-28473 0.999
绿原酸 53.2～532 y＝30827x-30684 0.998
隐绿原酸 47.8～478 y＝30127x-25158 0.998
咖啡酸 2.43～243 y＝39106x-1524 0.999
3,4-二咖啡酰奎宁酸 34.8～348 y＝38407x-28791 0.998
3,5-二咖啡酰奎宁酸 21～210 y＝35663x-16883 0.998
4,5-二咖啡酰奎宁酸 6.6～66 y＝41400x-58738 0.998
肉桂酸 3.13～31.3 y＝212001x-155531 1.000
实施例5精密度试验
(1)对照品溶液精密度试验
取实施例4母液0.5mL，置于1mL量瓶内，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，按实施例4方法测定，连续进样6次，测定其峰面积，结果见表4，表明精密度良好。
表4对照品溶液精密度考察结果
名称 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD(％)
5-HMF 27.6 27.6 27.6 27.7 27.7 27.7 27.7 0.175
新绿原酸 2126.0 2129.5 2129.8 2131.4 2130.8 2130.0 2129.6 0.088
绿原酸 775.7 776.2 777.7 777.5 778.3 780.3 777.6 0.212
隐绿原酸 751.2 752.0 752.1 752.7 754.0 754.9 752.8 0.185
咖啡酸 119.1 119.4 119.0 115.0 119.7 115.6 118.0 1.770
3,4-二咖啡酰奎宁酸 286.9 287.6 288.3 288.0 288.3 288.7 288.0 0.221
3,5-二咖啡酰奎宁酸 163.1 163.3 163.5 163.5 164.0 163.8 163.5 0.210
4,5-二咖啡酰奎宁酸 226.7 226.6 227.4 227.0 227.7 227.9 227.2 0.228
肉桂酸 88.2 88.3 88.4 88.4 88.5 88.7 88.4 0.172
(2)样品精密度实验
取脉络宁口服液(批号090503)，精密量取1mL至10mL量瓶内，加50％甲醇稀释定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，注入高效液相色谱仪，按实施例4方法测定，连续进样6次，供试品溶液中各共有峰的相对保留时间及主要峰(占总峰面积5％以上)的相对峰面积见表5和表6，9个指标成分峰面积结果见表7。以第1次进样所得指纹图谱做为对照，计算后5次进样所得指纹图谱相似度，结果相似度均大于0.99。结果表明该方法精密度良好。
表5样品共有峰的相对保留时间的精密度考察结果
表6样品主要色谱峰的相对峰面积精密度考察结果
表7 9个指标成分峰面积的精密度考察结果
实施例6稳定性试验
取脉络宁口服液(批号090503)，精密量取1mL至10mL量瓶内，加50％甲醇稀释定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，分别在0、3、6、9、12、18、24h注入高效液相色谱仪，按实施例4方法，记录色谱图。供试品溶液中各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积结果见表8和表9，9个指标成分峰面积结果见表10。又以0小时进样所得指纹图谱做为对照计算相似度，结果相似度均大于0.99。结果表明供试品溶液室温24小时稳定性良好。
表8样品共有峰的相对保留时间稳定性考察结果
表9样品主要色谱峰的相对峰面积稳定性考察结果
表10 9个指标成分峰面积的稳定性考察结果
实施例7重复性试验
取脉络宁口服液(批号090503)，精密量取1mL至10mL量瓶内，加50％甲醇稀释定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，同法制备供试品溶液6份，按实施例4方法测定。供试品溶液中各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积结果见表11和表12，9个指标成分峰面积结果见表13。以第1份样品进样所得指纹图谱做为对照计算另5份样品所得指纹图谱的相似度，结果相似度均大于0.99。结果表明该方法重复性良好。
表11样品共有峰的相对保留时间重复性考察结果
表12样品主要色谱峰的相对峰面积重复性考察结果
表13 9个指标成分峰面积的重复性考察结果
根据以上方法学考察结果，脉络宁口服液含量测定精密度、重复性、稳定性均较好。
实施例8加样回收率试验
取同一供试品(批号090503)精密量取6份，每份0.5mL分别置于10mL量瓶内，精密量取混合对照品母液(实施例4)0.5mL于上述6份样品中，加入50％甲醇稀释定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，注入高效液相色谱仪，按实施例4色谱条件测定，计算回收率。结果见表14，5-羟甲基糠醛、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁、3,5-二咖啡酰奎宁、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸的平均回收率分别为99.7％、96.3％、97.1％、96.0％、96.2％、97.3％、99.4％、103.6％、98.1％，RSD分别为3.840％、1.579％、2.416％、1.044％、2.658％、2.036％、0.763％、2.622％、1.312％，表明能够准确测定样品中5-羟甲基糠醛、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁、3,5-二咖啡酰奎宁、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸的含量。
表14加样回收结果
实施例9样品含量测定
分别取10批脉络宁口服液，每批脉络宁口服液精密量取1mL至10mL量瓶内，加50％甲醇稀释定容至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，注入高效液相色谱仪，按实施例4色谱条件测定，根据表3回归方程计算脉络宁口服液中9个成分的含量，结果见表15。
表15 10批脉络宁口服液含量测定结果(μg·mL-1)
实施例10脉络宁口服液指纹图谱及对照指纹图谱的获得
收集10批清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液样品，按实施例8制备供试品溶液，依法测定，计算各共有峰的相对保留时间、主要峰的相对峰面积和相似度，结果见表16-18。
表16脉络宁口服液指纹图谱测定结果(主要色谱峰的相对保留时间)
表17脉络宁口服液图谱样品测定结果(主要色谱峰的相对峰面积)
将10批脉络宁口服液的图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》，经过选峰，设定其匹配模板，将色谱峰进行自动匹配；设定标准模板，进行色谱峰差异性评价和整体相似性评价，计算相似度，相似度计算结果见表18。以10批样品指纹图谱为基础，采用相似度软件获得“共有模式”作为对照指纹图谱，见图14。
表18脉络宁口服液指纹图谱样品测定结果(相似度)
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
批次 090503 100303 110203 110802 130401 130402 130403 130404 130405 130406
相似度 0.994 0.983 0.983 0.983 0.978 0.995 0.995 0.989 0.994 0.995
由相似度结果可知，10批清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液与对照指纹图谱的相似度均大于0.95，相似度较高。根据10批指纹图谱中各共有峰相对峰面积和相对保留时间，确定口服用清热养阴活血祛瘀指纹图谱中各共有峰相对峰面积和相对保留时间应符合表19的限度范围。
表19各共有峰相对峰面积和相对保留时间限度范围
实施例11相关性研究
取金银花和山银花药材饮片，两者重量比为64％:36％，加药材重量6倍量水，浸泡2小时后，煎煮提取2次，每次1.5小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.16(80℃)，加乙醇使含醇量至66％，静置，取上清液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.36(80℃)。加乙醇至含醇量80％，静置，取上清液，回收尽乙醇，加水至950ml，冷藏，过滤；精密量取1mL滤液至10mL量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，即得。
玄参、牛膝、石斛如上述方法制备。
金银花和山银花混合制备液、玄参制备液、牛膝制备液、石斛制备液按实施例4色谱条件进样分析，通过保留时间和DAD扫描分析，结果见图15，指纹图谱中标定的21个共有峰其中4、5、7、8、9、10、11、12、14、15、16、18号峰来自金银花和山银花，4、5、13、17、19、20、21号峰来自玄参，3、4、5、10、19号峰来自牛膝药，5号峰来自石斛。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法，其特征在于包括取脉络宁口服液供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，所述HPLC检测的色谱条件为：
色谱柱为C18色谱柱，柱温25～40℃；以甲醇为流动相A，酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为260nm～340nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000；
记录色谱图，以脉络宁口服液的指纹图谱为参照，由相似度软件计算供试品相似度；并用外标一点法计算脉络宁口服液中成分含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，柱温35℃；以甲醇为流动相A，酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为：0～10min，3％A→20％A；10～45min，20％A→55％A；45～50min，55％A；50～51min，55％A→3％A；51～65min，3％A；流动相流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的C18色谱柱为phenomenex LunaC18(4.6mm*250mm，粒径5μm)。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的酸为磷酸、甲酸或冰乙酸中的一种或者两者以上的混合，优选为磷酸。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的酸水溶液中酸的体积百分数为0.05％～0.5％，优选为0.1％～0.5％。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的供试品溶液的制备方法：取脉络宁口服液，50％甲醇定容，过0.22μm滤膜，取续滤液，即得；
所述的标准品溶液的制备方法：取5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、哈巴俄苷标准品中的至少一种，精密称定，50％甲醇定容。
7.根据权利要求1或6所述的检测方法，其特征在于所述的标准品溶液为5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、新绿原酸、原儿茶醛、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸、肉桂酸、哈巴俄苷中的混合溶液；标准品溶液中各成分浓度：5-羟甲基糠醛5～500μg/mL、新绿原酸3～3000μg/mL、绿原酸30～1500μg/mL、隐绿原酸30～1500μg/mL、咖啡酸2～400μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸30～1500μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸15～1500μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸5～1000μg/mL、肉桂酸2～200μg/mL。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于所述的标准品溶液中各成分浓度：5-羟甲基糠醛5.89～58.9μg/mL、新绿原酸3.64～36.4μg/mL、绿原酸53.2～532μg/mL、隐绿原酸47.8～478μg/mL、咖啡酸2.43～24.3μg/mL、3,4-二咖啡酰奎宁酸34.8～348μg/mL、3,5-二咖啡酰奎宁酸21～210μg/mL、4,5-二咖啡酰奎宁酸6.6～66μg/mL、肉桂酸3.13～31.3μg/mL。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的脉络宁口服液的指纹图谱的构建方法包括：采用权利要求1所述的色谱条件对不同批次的口服用清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液进行HPLC检测，根据HPLC检测结果，标定共有峰，以中位数法建立脉络宁口服液的指纹图谱。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于所述的指纹图谱以绿原酸为参照峰，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积如下：
峰号 相对保留时间 相对峰面积 1 0.130～0.138 — 2 0.139～0.147 — 3 0.165～0.175 — 4 0.294～0.312 — 5 0.578～0.614 0.153～0.606 6 0.641～0.680 — 7 0.695～0.738 — 8 0.767～0.814 0.981～1.631 9 0.815～0.865 — 10 1.000 1.000 11 1.001～1.056 0.737～1.177 12 1.057～1.108 0.154～0.426 13 1.281～1.360 — 14 1.473～1.530 0.402～1.148 15 1.531～1.559 0.211～0.557 16 1.560～1.623 — 17 1.651～1.714 0.328～0.931 18 1.715～1.780 — 19 1.890～1.962 0.407～1.094 20 1.963～2.037 — 21 2.192～2.327 —
。
CN201910041593.9A 2019-01-16 2019-01-16 一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法 Active CN109596751B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910041593.9A CN109596751B (zh) 2019-01-16 2019-01-16 一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910041593.9A CN109596751B (zh) 2019-01-16 2019-01-16 一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109596751A true CN109596751A (zh) 2019-04-09
CN109596751B CN109596751B (zh) 2021-07-06

Family

ID=65965314

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910041593.9A Active CN109596751B (zh) 2019-01-16 2019-01-16 一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109596751B (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111239315A (zh) * 2020-01-20 2020-06-05 金陵药业股份有限公司 一种基于uplc-dad-ms研究脉络宁注射液指纹图谱的分析方法
CN112505213A (zh) * 2019-12-19 2021-03-16 金陵药业股份有限公司 一种清热养阴活血祛瘀口服液成分检测方法
CN112710759A (zh) * 2021-03-29 2021-04-27 江西省药品检验检测研究院 脉络宁颗粒的质量检测方法
CN113030349A (zh) * 2019-12-24 2021-06-25 金陵药业股份有限公司 提高脉络宁注射液中间体浸膏中肉桂酸含量检测准确度和精密度的方法
CN113655162A (zh) * 2021-07-31 2021-11-16 南京海昌中药集团有限公司 薄荷清新茶指纹图谱的检测方法
CN114113437A (zh) * 2021-12-06 2022-03-01 苏州市药品检验检测研究中心 一种清热解毒口服液hplc指纹图谱和在清热解毒口服液质量控制中的应用
CN116242933A (zh) * 2023-01-17 2023-06-09 河北省药品医疗器械检验研究院(河北省化妆品检验研究中心) 一种芎菊上清片中8种成分的含量测定方法
CN117233306A (zh) * 2023-11-16 2023-12-15 江西省药品检验检测研究院 一种金丹附延颗粒指纹图谱建立及其成分含量测定方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1670523A (zh) * 2004-03-16 2005-09-21 金陵药业股份有限公司 一种治疗血栓闭塞性疾病的注射液的质量控制方法
CN1679648A (zh) * 2004-04-09 2005-10-12 北京奇源益德药物研究所 脉络宁注射制剂及其制备方法和它的质量控制方法
CN1857617A (zh) * 2006-03-14 2006-11-08 石家庄制药集团欧意药业有限公司 无糖型脉络宁颗粒及其制备方法与质量控制方法
CN101085224A (zh) * 2006-06-08 2007-12-12 天津天士力之骄药业有限公司 一种脉络宁注射制剂及其质量控制方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1670523A (zh) * 2004-03-16 2005-09-21 金陵药业股份有限公司 一种治疗血栓闭塞性疾病的注射液的质量控制方法
CN1679648A (zh) * 2004-04-09 2005-10-12 北京奇源益德药物研究所 脉络宁注射制剂及其制备方法和它的质量控制方法
CN1857617A (zh) * 2006-03-14 2006-11-08 石家庄制药集团欧意药业有限公司 无糖型脉络宁颗粒及其制备方法与质量控制方法
CN101085224A (zh) * 2006-06-08 2007-12-12 天津天士力之骄药业有限公司 一种脉络宁注射制剂及其质量控制方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴婷等: ""HPLC 同时测定脉络宁注射液中8种主要成分的含量", 《中国实验方剂学杂志》 *
张尊建等: "脉络宁注射液HPLC/UV/MS指纹图谱研究", 《中成药》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112505213A (zh) * 2019-12-19 2021-03-16 金陵药业股份有限公司 一种清热养阴活血祛瘀口服液成分检测方法
CN112505213B (zh) * 2019-12-19 2022-04-08 金陵药业股份有限公司 一种清热养阴活血祛瘀口服液成分检测方法
CN113030349A (zh) * 2019-12-24 2021-06-25 金陵药业股份有限公司 提高脉络宁注射液中间体浸膏中肉桂酸含量检测准确度和精密度的方法
CN111239315A (zh) * 2020-01-20 2020-06-05 金陵药业股份有限公司 一种基于uplc-dad-ms研究脉络宁注射液指纹图谱的分析方法
CN112710759A (zh) * 2021-03-29 2021-04-27 江西省药品检验检测研究院 脉络宁颗粒的质量检测方法
CN113655162A (zh) * 2021-07-31 2021-11-16 南京海昌中药集团有限公司 薄荷清新茶指纹图谱的检测方法
CN113655162B (zh) * 2021-07-31 2023-06-23 南京海昌中药集团有限公司 薄荷清新茶指纹图谱的检测方法
CN114113437A (zh) * 2021-12-06 2022-03-01 苏州市药品检验检测研究中心 一种清热解毒口服液hplc指纹图谱和在清热解毒口服液质量控制中的应用
CN114113437B (zh) * 2021-12-06 2024-04-12 苏州市药品检验检测研究中心 一种清热解毒口服液hplc指纹图谱和在清热解毒口服液质量控制中的应用
CN116242933A (zh) * 2023-01-17 2023-06-09 河北省药品医疗器械检验研究院(河北省化妆品检验研究中心) 一种芎菊上清片中8种成分的含量测定方法
CN117233306A (zh) * 2023-11-16 2023-12-15 江西省药品检验检测研究院 一种金丹附延颗粒指纹图谱建立及其成分含量测定方法
CN117233306B (zh) * 2023-11-16 2024-01-30 江西省药品检验检测研究院 一种金丹附延颗粒指纹图谱建立及其成分含量测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109596751B (zh) 2021-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109596751A (zh) 一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法
US20230213487A1 (en) Fingerprint Detection Method for Pharmaceutical Preparation
CN104950052B (zh) 一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法
CN109406645A (zh) 一种小儿定喘口服液中麻黄、炒苦杏仁、甘草、黄芩的检测方法
CN105675739B (zh) 一种治疗风热感冒中药的hplc特征图谱的构建方法
CN106404942B (zh) 一种康肾颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱
CN107589191A (zh) 金贝口服液hplc 指纹图谱建立和检测方法
CN102441057B (zh) 一种养血清脑颗粒的hplc指纹图谱检测方法
CN108459090B (zh) 济川煎组合物的质量控制方法
CN104678031B (zh) 高效液相色谱法检测苍术苷和/或羧基苍术苷的方法
CN109668970A (zh) 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法
CN112666277B (zh) 一种香附药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒hplc特征图谱的构建及检测方法
CN114184704A (zh) 一种逍遥丸uplc指纹图谱的构建方法及其应用
CN110806457B (zh) 四君甘露饮指纹图谱的检测方法
CN109406682A (zh) 生姜药材的uplc特征图谱构建方法和检测方法
CN105158352B (zh) 一种冠心宁片的指纹图谱的建立方法及其应用
CN108663440A (zh) 裸花紫珠药材uplc指纹图谱构建方法及标准指纹图谱
CN110031564A (zh) 基于hplc指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法
CN113341007B (zh) 一种基于hplc特征图谱的枣仁安神胶囊全药味多成分含量测定方法
CN114813987A (zh) 一种含川芎、冰片、人工麝香的复方组合物及药物制剂的特征图谱构建方法
CN106950289B (zh) 一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法
CN107064352A (zh) 银蓝调脂胶囊指纹图谱质量控制方法
CN109828040B (zh) 墨旱莲药材uplc特征图谱的构建方法和检测方法
CN110031577B (zh) 一种中药或中药组合物制剂的质量检测方法与鉴别应用
CN108107130B (zh) 一种参枝苓制剂指纹图谱的测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190812

Address after: 210009 No. 238, Central Road, Nanjing, Jiangsu

Applicant after: Jinting Pharmaceutical Co., Ltd.

Address before: 210009 No. 238, Central Road, Nanjing, Jiangsu

Applicant before: Technology Centre of Jinling Pharmaceutical Co., Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
CB02 Change of applicant information

Address after: No. 58, Xingang Avenue, Nanjing Economic and Technological Development Zone, Qixia District, Nanjing City, Jiangsu Province

Applicant after: JINLING PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Address before: 210009 No. 238, Central Road, Nanjing, Jiangsu

Applicant before: JINLING PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant