CN104833751A - 小儿感冒宁糖浆水提液hplc标准指纹图谱的建立方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及其应用，包括对照品和供试品溶液的制备、HPLC测定、标准指纹图谱的建立以及样品检测等步骤。该法能有效表征小儿感冒宁糖浆水提液的工艺和质量，有利于监控产品的质量；具有方法简便、稳定性好、精密度高、重现性好等优点。

Description

小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法及其应用

技术领域

本发明涉及小儿感冒宁糖浆水提液指纹图谱的建立方法，具体地说，涉及小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及其应用。

背景技术

小儿感冒宁糖浆是由吉林益民堂制药有限公司生产的原中药保护品种，主要由薄荷、荆芥穗、苦杏仁、牛蒡子、黄芩、桔梗、前胡、白芷、炒栀子、焦山楂、六神曲(焦)、焦麦芽、芦根、金银花、连翘原料药组成,根据临床前药理及毒理研究,具有疏散风热、清热止咳的功效,主要用于治疗小儿外感风热所致的感冒，症见发热、汗出不爽、鼻塞流涕、咳嗽咽痛。

感冒是由生活起居不慎或气候突变，或体质素虚，卫外不足，外邪冒犯人体而发生的肺系疾病。本病的发生，常因气温骤变之时，寒热失常，感受外邪，外邪从皮毛、口鼻而入，侵袭肺卫，表卫不和所致。因小儿的生理和病理特点，可表现为，热证多，感邪之后，易从热化，临床发热较重；易挟痰，小儿肺脏尤娇，外邪犯肺，肺使宣降，而出现咳嗽痰多；易挟滞，小儿脾常不足，感受外邪之后，常导致脾胃失调，不能运化水谷，而出现不思饮食，脘腹胀满；易挟惊，小儿心肝有余，感受外邪，易化热化火，动风扰心，而出现烦躁哭闹。

本方为风热感冒所设。风热侵于肺卫，则见恶寒发热；风热犯肺，肺使宣降，则鼻塞流涕、咳嗽；风热上扰于喉，则咽喉肿痛。小儿感冒宁糖浆，为古代治疗感冒(风热型)之名方，“银翘散”化裁而来。方中金银花、连翘气味芳香，疏散风热，清热解毒。金银花甘寒，芳香疏散，善于散肺经热邪，透热达表；连翘苦寒，长于清心火，散上焦风热，二者治风热感冒，常相须为用，故重用为君药。薄荷、牛蒡子疏散风热，清头明目利咽。薄荷辛散之性较强，是治疗风热感冒药中最能宣散表邪之药；牛蒡子升散之中具有清降之性，长于宣肺祛痰，利咽消肿，为治疗咽喉肿痛常用药。荆芥穗解表散邪。白芷发散表邪，宣通鼻窍，治感冒头痛鼻塞不通，浊涕不止，为治“阳明头痛、鼻渊头痛之要药”。上四药相合，即可助君药疏散风热，又可治咽痛，鼻塞流涕。感冒易挟痰，故用黄芩、桔梗、前胡、芦根清肺化痰，止咳。黄芩注入肺经，善清泻肺火，而化痰止咳；桔梗开宣肺气，祛痰止咳，并可利咽消肿，古有“诸药舟楫，载药上浮”为肺经引经药。上七药合用即可助君药疏散风热，又可止咳化痰，利咽消肿，共为臣药。感冒易挟滞，故复用焦山楂、六神曲、焦麦芽消食化积，开胃健脾，即可治疗小儿不思饮食，又可增强食欲，以利体力恢复，提高正气，驱邪外出。栀子泻火除烦，以防小儿感冒挟惊，本品能淸泻三焦火，泻心火而除烦，为治热病心烦，躁扰不宁之要药。上四味药物相合，共为佐药。诸药合用，共奏疏散风热，清热止咳之功效。

目前，小儿感冒宁糖浆处方为薄荷80g、荆芥穗67g、苦杏仁80g、牛蒡子80g、黄芩80g、桔梗67g、前胡80g、白芷27g、炒栀子40g、焦山楂27g、六神曲(焦)27g、焦麦芽27g、芦根120g、金银花120g、连翘80g；制法为取以上十五味，薄荷、荆芥穗提取挥发油，苦杏仁压榨去油，加五倍水，37℃浸渍3小时，浸渍液水蒸气蒸馏，用90％乙醇液20ml收集蒸馏液至60ml，过滤，密封储存；其余牛蒡子等十二味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液浓缩至适量，加入蔗糖450g及羟苯乙酯0.25g，苯甲酸钠3g，煮沸使溶解，加入杏仁水混匀，静置，取上清液，加入挥发油及柠檬香精、香蕉香精适量，加水至1000ml，搅匀，滤过，分装，即得。

其中牛蒡子、黄芩、桔梗、前胡、白芷、炒栀子、焦山楂、六神曲(焦)、焦麦芽、芦根、金银花、连翘十二味的水提液的制法为：加水(5-6倍量)煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液浓缩至适量。现有方法采用水提、静置沉淀的方法处理，既浪费人力、物力，也浪费能源。因此，寻找新的小儿感冒宁糖浆水提液的沉淀方法及其质量检查方法成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及其应用，目的是解决目前小儿感冒宁糖浆水提液质量评价和成分分析中不能较全面综合反映和控制水提液整体质量的问题。

为了实现本发明目的，本发明提供小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法，包括HPLC测定；优选地，所述HPLC测定的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以0.3％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；

优选地，取多批次待测样品溶液分别按照所述HPLC色谱条件进行测定，对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱；优选地，紫外检测波长为320nm；和/或流速为1.0mL/min；和/或柱温为30℃；和/或进样量为10μL；

一般地，可选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，例如AgilentZORBAX SB-C₁₈(5μm，4.6×250mm)；

优选地，所述流动相按梯度洗脱梯度变化为：

上表中第三行“2→10”的含义是“流动相A由2％逐渐增加到10％”；第六行“30→2”的含义是“流动相A由30％逐渐变到2％”；其他与之含义类似；

在所述流动相条件下黄芩苷和绿原酸均能检测出来。小儿感冒宁糖浆水提液的成分较多，如果采用等度洗脱，有些成分被洗脱的过快或过慢，就不能形成一个完整的考查所有成分的图谱，后面的物质至少要120分钟才能检测出来。采用上述条件进行梯度洗脱，即可以节省时间，又能节省试剂，分离的效果非常显著。

优选地，所述供试品溶液(即小儿感冒宁糖浆水提液)可按现有技术例如中国药典方法制备；或者制备方法为：由以下重量份的原料药经水提获得，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲(焦)27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80。优选地，所述供试品溶液的制备为：取以上十二味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，即得；进一步优选再于4000转/分钟离心10分钟，取离心后的上清液，即得。更优选第一次煎煮，水的加入量为药材总重量的6倍，煎煮2小时，第二次煎煮，水的加入量为药材总重量的5倍，煎煮1小时。采用离心处理可以更好地获得水提液中的有效成份，更加准确地反应水提液质量情况，便于进行HPLC的检测。

优选地，所述标准指纹图谱的建立方法包括将多批次供试品溶液分别进行HPLC测定得到指纹图谱；采用软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。

具体地，所述小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲(焦)27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80，加水煎煮二次，第一次2小时(加水量药材总重量的6倍)，第二次1小时(加水量药材总重量的5倍)，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，再于4000转/分钟离心10分钟，取离心后的上清液，即得；

(2)HPLC测定：将多批次(例如10批次)供试品溶液各10μL注入到高效液相色谱仪中进行测定，得到指纹图谱；

色谱条件为，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，例如Agilent ZORBAX SB-C₁₈(5μm，4.6×250mm)；以乙腈为流动相A、以0.3％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；紫外检测波长为320nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；进样量10μL；流动相按梯度洗脱梯度变化为：

(3)标准指纹图谱的建立：采用软件(例如中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。

本发明还包括按上述方法建立的小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。所述HPLC标准指纹图谱由8个共有峰构成，第5号峰为黄芩苷峰，第7号峰为绿原酸峰，以黄芩苷峰为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间应在第一规定值的±5％之内，所述第一规定值分别为：0.40-峰1、0.46-峰2、0.63-峰3、0.68-峰4、1.00-峰S、1.25-峰6、1.36-峰7、1.42-峰8；所述共有峰的峰面积在第二规定值±20％之内，采用面积归一化法计算，第二规定值分别为：5.70％-峰1、5.54％-峰2、7.69％-峰3、5.85％-峰4、20.33％-峰S、7.89％-峰6、16.95％-峰7、18.44％-峰8。

所述8个共有峰的保留时间分别为12.44分钟、14.19分钟、19.10分钟、20.79分钟、30.54分钟、38.06分钟、41.65分钟、43.43分钟，峰面积分别为98901.28、96182.43、133598.95、101651.45、353021.41、136991.20、294370.68、220288.20。

本发明还包括按上述方法建立的HPLC标准指纹图谱在检测小儿感冒宁糖浆水提液质量的应用。

具体地，所述应用包括以下步骤：按上述方法建立小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱；取小儿感冒宁糖浆水提液待检样品，优选取采用以上述方法于4000转/分钟离心10分钟的上清液，按上述HPLC测定步骤同法操作，得到小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱，采用软件例如中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件对所得小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱和上述HPLC标准指纹图谱进行分析。可以根据相似度判断小儿感冒宁糖浆水提液待检样品质量。本发明通过大量实验验证，相似度大于0.95可判断为待检样品合格。

具体地，所述的应用包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲(焦)27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80，加水煎煮二次，第一次2小时(加水量药材总重量的6倍)，第二次1小时(加水量药材总重量的5倍)，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，再于4000转/分钟离心10分钟，取离心后的上清液，即得；

(2)HPLC测定：将多批次(例如10批次)供试品溶液(即小儿感冒宁糖浆水提液)各10μL注入到高效液相色谱仪中进行测定，得到指纹图谱；

色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，例如[Agilent ZORBAX SB-C₁₈(5μm，4.6×250mm)；以乙腈为流动相A、以0.3％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；紫外检测波长为320nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；进样量10μL；流动相按梯度洗脱梯度变化为：

(3)标准指纹图谱的建立：采用软件(例如中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱；

(4)样品检测：取小儿感冒宁糖浆水提液待检样品，优选取采用以上述方法于4000转/分钟离心10分钟的上清液，按上述HPLC测定同法操作，得到小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱，采用软件(例如中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对所得小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱和上述HPLC标准指纹图谱进行分析。

进一步地，所述的应用还包括对照品溶液的制备：即分别称取黄芩苷和绿原酸置同一量瓶中，加入甲醇制成分别含0.03-0.05mg/mL的溶液，优选加入甲醇制成分别含0.04mg/mL的溶液；将对照品溶液按上述HPLC测定同法操作，得到对照品溶液HPLC指纹图谱。

将上述各供试品溶液HPLC指纹图谱或待检样品溶液HPLC指纹图谱或HPLC标准指纹图谱分别与所述对照品溶液HPLC指纹图谱进行对比，可以快速判断所述各供试品溶液或待检样品溶液是否含有小儿感冒宁糖浆水提液标志性成分黄芩苷和绿原酸，以快速判断小儿感冒宁糖浆水提液质量。所述对照品溶液的制备和HPLC测定方法可以同时测定黄芩苷和绿原酸两种成分，方法简便稳定可靠、省时省力。

到目前为止，在中药生产和流通中，还没有一种质量控制手段能够全面地、综合地反映出中药产品的质量变异，可以有效地进行全过程的质量控制。通过对小儿感冒宁糖浆水提液的系统研究，证明采用高效液相色谱方法用指纹图谱作为指控标准是可行的。从药材的来源、生产、加工、贮存、中间品、成品、流通样品等各个角度和方面，进行中药样品的理化分析，通过相似度和相关性对比，发现质量变异和缺陷，从而全面、特异地把控以小儿感冒宁糖浆水提液的质量命脉。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

(一)按本发明方法建立的小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱能有效、准确地表征小儿感冒宁糖浆水提液的质量，有利于全面监控产品的质量，为药品的质量检测提供可靠的依据。

(二)本发明小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征。

(三)应用本发明HPLC标准指纹图谱能有效地监控小儿感冒宁糖浆水提液的质量，保证其质量的稳定、均一、可控。具有方法简便、稳定性好、精密度高、重现性好等优点，可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。

(四)本发明对照品溶液的制备和HPLC测定方法可以同时测定黄芩苷和绿原酸两种成分，方法简便稳定可靠、省时省力；可以快速判断所述各供试品溶液或待检样品溶液是否含有小儿感冒宁糖浆水提液标志性成分黄芩苷和绿原酸，以快速判断小儿感冒宁糖浆水提液质量。

附图说明

图1为实施例1小儿感冒宁糖浆黄芩苷、绿原酸对照品溶液的HPLC指纹图谱(即图1中曲线S1)。

图2为实施例1小儿感冒宁糖浆水提液10批次HPLC指纹图谱(即图2中曲线S1-S10)。

图3为实施例1小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱(即图3中曲线S1)。

图4-图6分别为实施例4小儿感冒宁糖浆水提液待检样品001-003的HPLC指纹图谱。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1 小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法

(1)供试品溶液的制备：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲(焦)27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80，加水煎煮二次，第一次2小时，加水量药材总重量的6倍，第二次1小时，加水量药材总重量的5倍，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，再于4000转/分钟离心10分钟，取离心后的上清液，即得。

(2)HPLC测定：精密吸取10批次按上述方法制备的供试品溶液(即小儿感冒宁糖浆水提液)各10μL注入到高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法中进行测定，分别得到10批次供试品溶液指纹图谱，见图2中曲线S1-S10。

1.1仪器：岛津LC-2010A高效液相色谱仪[二元高压梯度泵、在线脱气机、柱温箱(柱温30℃)、自动进样器、UVD检测器]；BS210S电子天平；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C₁₈用十八烷基硅烷键合硅胶为填料剂(5μm，4.6×250mm)。

1.2试药：液相色谱分析用试剂为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.3色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以0.3％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；紫外检测波长为320nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；进样量10μL；流动相按梯度洗脱梯度变化为：

(3)标准指纹图谱的建立：将上述步骤得到10批次样品的HPLC图谱进行比较，采用中国药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(版本2004A)》软件对这10批次供试品的指纹图谱进行相似度评价分析，所有值平均后得到标准图谱，确定共有特征峰，得到小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱，见图3中曲线S1。

在小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱中，含有8个共有特征峰，其中参照峰为黄芩苷峰(5号峰)、绿原酸峰(7号峰)。以黄芩苷峰为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和峰面积。

小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱中各共有峰的保留时间和峰面积如表1所示：

表1 小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱中共有峰的

相对保留时间和峰面积

相似度评价：以《中药色谱指纹图谱相似度评价系(版本2004A)》软件进行分析，计算供试品指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，结果均大于0.95。相似度评价结果见表2。

表2 HPLC指纹图谱相似度评价

对照品溶液的HPLC指纹图谱的建立：分别精密称取黄芩苷10.25mg和绿原酸对照品10.16mg置同一量瓶中，加甲醇制成分别含0.04mg/mL的溶液，精密量取10μL，注入液相色谱仪，按上述HPLC测定方法进样测定，得对照品溶液的HPLC指纹图谱，即图1中曲线S1。

实施例2 方法学验证

对实施例1确定后的HPLC色谱条件，进行了方法学验证，对精密度、重复性、稳定性进行了考察。

精密度 分别精密称取黄芩苷10.25mg和绿原酸对照品10.16mg置同一量瓶中，加甲醇制成分别含0.04mg/mL的溶液，精密量取10μL，注入液相色谱仪，按实施例1的HPLC测定方法连续进样6次，记录色谱图，计算RSD值。

表3 对照品溶液精密度试验

次数	黄芩苷峰面积	绿原酸峰面积
			1	410656.168	350223.031
2	407803.659	358787.246
			3	407094.692	356986.841
4	406433.153	355711.899
			5	413732.982	349740.661
6	411686.504	344249.853
			平均值	409567.860	352616.590
RSD(％)	0.71	1.56

黄芩苷精密度为0.71％，绿原酸精密度为1.56％，均小于2.0％，说明精密度良好。

重复性 精密量取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，计算RSD值。

表4 供试品溶液重复性试验

实验结果表明，重复性良好。

稳定性试验 取精密度试验对照品溶液，分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时10小时精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算RSD值。

表5 对照品溶液稳定性

时间(小时)	黄芩苷峰面积	绿原酸峰面积
			0	400133.338	353247.207
2	409994.063	353714.544
			4	403012.346	350011.266
6	400612.273	351320.128
			8	408914.104	348946.164
10	409590.675	348783.184
			平均值	405376.13	3521003.75
RSD(％)	1.14	0.61

黄芩苷RSD为1.14％，绿原酸RSD为0.61％，均小于2.0％，说明对照品稳定。

实施例3 小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的应用

按实施例1方法建立小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。另取3批按实施例1方法制备的小儿感冒宁糖浆水提液待检样品，编号001-003，按实施例1所述HPLC测定的条件同法操作，得到小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱，见图4-6，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(版本2004A)》软件对小儿感冒宁糖浆水提液待检样品HPLC指纹图谱和所述制得的HPLC标准指纹图谱进行分析。根据相似度判断小儿感冒宁糖浆水提液样品质量，以相似度大于0.95判断为样品合格。

结果：3个不同批次的小儿感冒宁糖浆水提液HPLC指纹图谱相似度均大于0.95，表明3批提取液整体性的化学特征相似。

综上所述，本发明质量检测方法的稳定性好、重复性好，利用本发明质量检测方法监控小儿感冒宁糖浆水提液，可使其药效确切，作用稳定。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法，包括HPLC测定，其特征在于，所述HPLC测定的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以0.3％磷酸为流动相B进行梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，取多批次待测样品溶液分别按照所述HPLC色谱条件进行测定，对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。

3.根据权利要求1或2所述的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱为：

4.根据权利要求1-3任一项所述的建立方法，其特征在于，紫外检测波长为320nm；和/或流速为1.0mL/min；和/或柱温为30℃；和/或进样量为10μL。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，还包括供试品溶液的制备；所述供试品溶液的制备为：由以下重量份的原料药经水提获得，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲(焦)27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80；优选取以上十二味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液即得；进一步优选将所得上清液再于4000转/分钟离心10分钟，取离心后的上清液，即得；更优选第一次煎煮，水的加入量为药材总重量的6倍，煎煮2小时，第二次煎煮，水的加入量为药材总重量的5倍，煎煮1小时。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲(焦)27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80，加水煎煮二次，第一次2小时(加水量药材总重量的6倍)，第二次1小时(加水量药材总重量的5倍)，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，再于4000转/分钟离心10分钟，取离心后的上清液，即得；

(2)HPLC测定：将多批次供试品溶液各10μL注入到高效液相色谱仪中进行测定，得到指纹图谱；

色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以0.3％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；紫外检测波长为320nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；进样量10μL；流动相按梯度洗脱梯度变化为：

(3)标准指纹图谱的建立：采用软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。

7.权利要求1-6任一项所述的方法建立的小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。

8.权利要求1-6任一项所述方法建立的HPLC标准指纹图谱在检测小儿感冒宁糖浆水提液质量的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：按上述方法建立小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱；取小儿感冒宁糖浆水提液待检样品，优选取采用以上述方法于4000转/分钟离心10分钟的上清液，按上述HPLC测定同法操作，得到小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱，采用软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对所得小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱和上述HPLC标准指纹图谱进行分析。

10.根据权利要求9所述的应用，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲(焦)27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80，加水煎煮二次，第一次2小时(加水量药材总重量的6倍)，第二次1小时(加水量药材总重量的5倍)，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，再于4000转/分钟离心10分钟，取离心后的上清液，即得；

(2)HPLC测定：将多批次供试品溶液各10μL注入到高效液相色谱仪中进行测定，得到指纹图谱；

色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以0.3％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；紫外检测波长为320nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；进样量10μL；流动相按梯度洗脱梯度变化为：

(3)标准指纹图谱的建立：采用软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱；

(4)样品检测：取小儿感冒宁糖浆水提液待检样品，优选取采用以上述方法于4000转/分钟离心10分钟的上清液，按上述HPLC测定同法操作，得到小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱，采用软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对所得小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱和上述HPLC标准指纹图谱进行分析；

优选地，所述的应用，还包括对照品溶液的制备：即分别称取黄芩苷和绿原酸置同一量瓶中，加入甲醇制成分别含0.03-0.05mg/mL的溶液，更优选加入甲醇制成分别含0.04mg/mL的溶液；将对照品溶液按上述HPLC测定同法操作，得到对照品溶液HPLC指纹图谱。