CN104181248A

CN104181248A - 一种感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法

Info

Publication number: CN104181248A
Application number: CN201410431650.1A
Authority: CN
Inventors: 李琼娅; 林丽娜; 张跃飞; 马鹏岗
Original assignee: China Resources Sanjiu Medical and Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: China Resources Sanjiu Medical and Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-08-28
Filing date: 2014-08-28
Publication date: 2014-12-03
Anticipated expiration: 2034-08-28
Also published as: CN104181248B

Abstract

本发明属于中药制剂检测领域，具体涉及一种感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法。本发明所述方法利用高效液相色谱法通过对感冒灵颗粒中包含蒙花苷在内的中药成分的检测，能够全面反映感冒灵颗粒的质量信息，有效控制感冒灵颗粒的内在质量；并且所建立的方法稳定性、精密度、重现性较好；采用国家药典委员会规定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件操作快捷、结果客观准确。

Description

一种感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法

技术领域

本发明属于中药制剂检测领域，具体涉及一种感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法。

背景技术

中药成分复杂，药效部位常常不是单一成分，以某种单一成分作为质量控制指标已越来越不适应中药质量控制的要求，因此，中药指纹图谱技术应运而生。

中药指纹图谱技术源于指纹鉴定学，利用现代信息技术和质量分析手段较全面的反映了中药所含化学成分的种类和数量。对于中药材，指纹图谱可以用来鉴别真伪、评判优劣；对于中成药，指纹图谱可以鉴别产品真伪，评判制备工艺的合理性，有效地控制产品质量。现阶段中药的有效成分大多数尚不明确，中药指纹图谱的整体性和模糊性正好适应这一特点，较单一成分的质量控制方法更具有科学性和全面性。目前国际上已认可将中药指纹图谱作为中药质量的控制模式。高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快等优点，已成为当今指纹图谱的主要分析手段。

感冒灵颗粒收载于中华人民共和国药品标准中药成方制剂第八册，由三叉苦、金盏银盘、野菊花、岗梅、咖啡因、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、薄荷素油共八味原料药组成，具有解热镇痛功效，用于感冒引起的头痛、发热、鼻塞流涕、咽痛等。

感冒灵颗粒在中药成方制剂第八册标准中公开了用薄层色谱法鉴别马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚，用永停法测定对乙酰氨基酚的含量的方案。但是存在含量测定方法的终点不易观察、操作繁琐复杂、准确性欠佳的问题。

吴广等人在《中国药品标准》(2005，6(3)：32-35)报道了感冒灵颗粒薄层鉴别和含量测定的方法，即在原标准的基础上增订了咖啡因、野菊花的薄层鉴别，修订了对乙酰氨基酚的含量测定；在后续的研究中，庄幼龄在《海峡药学》(2009，21(12)：90-91)中公开了用HPLC法同时测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚和咖啡因含量的方法；韩正洲等在《中国药学杂志》(2010，45(3)：228-230)中报道了用HPLC测定对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏的含量的方法；陈在敏在《中国研究与信息》(2005，17(4)：50-51)公开了HPLC法测定蒙花苷的含量的方法；陈怀冰在《海峡药学》(2009，21(1)：53-54)报道了HPLC法测定绿原酸的含量。

上述对感冒灵颗粒的质量控制方法中，往往是选取感冒灵颗粒中三个化学成分或一两个中药材中的已知成分进行含量测定，用其含量的多少判定质量好坏。但由于中药材质量受产地、气候、季节等多方面影响，导致所含成分的种类及含量往往不稳定，中药部分只检测其中单一成分的含量具有一定片面性。因此，以上方法均不能系统、全面的反映感冒灵颗粒的内在质量。

为保障患者用药安全有效，发明一种控制感冒灵颗粒整体质量的检测方法迫在眉睫。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种可全面反映感冒灵颗粒的内在质量及用药安全的指纹图谱检测方法。

本发明提供了一种感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：

精密称定蒙花苷，加甲醇溶解稀释，制成每1体积份含0.00001重量份的蒙花苷对照品溶液；

取感冒灵颗粒粉末2.0-6.0重量份，加甲醇20-30体积份，进行超声处理，放冷后称定并以甲醇补足重量，滤过后取滤液5-15体积份，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5体积份，微孔滤膜过滤制成供试品溶液；

照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈为流动相A、以0.1％甲酸溶液为流动相B，控制流速为0.8-1.2ml/min，柱温30℃，检测波长为310nm；按照如下程序进行梯度洗脱：从0-15min，流动相A：流动相B的体积比由8％：92％→10％：90％；从15-30min，流动相A：流动相B体积比由10％：90％→15％：85％；从30-70min，流动相A：流动相B体积比由15％：85％→30％：70％；从70-71min，流动相A：流动相B体积比由30％：70％→8％：92％；从71-75min，流动相A：流动相B体积比8％：92％；理论板数按蒙花苷峰计算，应不低于3000；

吸取供试品溶液与对照品溶液10μl-20μl，注入液相色谱仪，测定；

所述重量份与所述体积份的关系为g/mL的关系。

优选的，所述供试品溶液制备的步骤具体为：取感冒灵颗粒粉末4.0重量份，加甲醇25体积份，进行超声处理，放冷后称定并以甲醇补足重量，滤过后取滤液10体积份，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5体积份，微孔滤膜过滤制成供试品溶液。

优选的，所述供试品溶液制备的步骤具体为：取感冒灵颗粒粉末3.0重量份，加甲醇28体积份，进行超声处理，放冷后称定并以甲醇补足重量，滤过后取滤液8体积份，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5体积份，微孔滤膜过滤制成供试品溶液。

优选的，所述供试品溶液制备的步骤具体为：取感冒灵颗粒粉末5.0重量份，加甲醇22体积份，进行超声处理，放冷后称定并以甲醇补足重量，滤过后取滤液12体积份，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5体积份，微孔滤膜过滤制成供试品溶液。

优选的，所述供试品溶液制备的步骤中，所述超声处理步骤的功率200W，频率为59KHz，超声处理20-40min。

优选的，所述高效液相色谱法检测步骤中，所述色谱柱为Kromasil C₁₈柱。

本发明所述感冒灵颗粒的相关信息记载于中华人民共和国药品标准中药成方制剂第八册，原料药组成为：三叉苦442-540重量份、金盏银盘295-349重量份、野菊花221-270重量份、岗梅720-750重量份、咖啡因0.36-0.44重量份、对乙酰氨基酚18-22重量份、马来酸氯苯那敏0.36-0.44重量份、薄荷素油0.18-0.22体积份。

相关方案可详见中国专利CN102147360A。

本发明还公开了由上述方法构建得到的感冒灵颗粒的指纹图谱，得到的感冒灵颗粒的标准指纹图谱详见图4所示，所得的感冒灵颗粒的标准指纹图谱包括14个共有峰，各峰号的相对保留时间(以14号峰蒙花苷为基准)分别为：1号峰0.070、2号峰0.085、3号峰0.114、4号峰0.131、5号峰0.150、6号峰0.257、7号峰0.302、8号峰0.455、9号峰0.674、10号峰0.731、11号峰0.754、12号峰0.813、13号峰0.990、14号峰1.000。

本发明还公开了上述方法用于感冒灵颗粒检测中的用途。

本发明所述的感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，通过对包含蒙花苷在内的中药成分的检测分析，能够全面反映感冒灵颗粒的质量信息，有效控制感冒灵颗粒的内在质量；并且所建立的方法稳定性、精密度、重现性较好；采用国家药典委员会规定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件操作快捷、结果客观准确。

实验例

实验例一条件优化

1仪器与试药：

仪器：Waters e 2695高效液相色谱仪，DAD检测器，Empower色谱工作站，AG245型电子天平(Mettler Toledo)，SK5200H超声波清洗机。

试药：乙腈为色谱纯，水为超纯水，甲醇和甲酸为分析纯，蒙花苷对照品(由中国药品生物制品检定所提供)，感冒灵颗粒(由华润三九医药股份有限公司提供)。

2色谱条件优化

2.1色谱柱的选择

在同一色谱条件下，选择Kromasil C₁₈(250mm×4.6mm，5um)、Hypersil BDS C₁₈(250mm×4.6mm，5um)、Sapphire C₁₈(250mm×4.6mm，5um)三种色谱柱进行比较，获得的色谱图结果见图1所示。

Hypersil柱峰之间未达到基线分离，Sapphire柱各峰对称性较差，而Kromasil分离效果较好、检出峰多、保留时间适宜，故选择Kromasil C18(250mm×4.6mm，5um)为感冒灵颗粒指纹图谱分析用色谱柱。

2.2检测波长的选择

对不同波长条件下感冒灵颗粒指纹图谱进行了比较，选择了254nm、280nm、300nm、310nm、320nm五个波长进行比较，获得的色谱图结果见图2所示。

结果显示，选择310nm时吸收峰较多，峰形较好，各峰分离度好，基线平稳，且在此波长下对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏均无吸收峰，充分显示感冒灵颗粒中药部分的指纹特征，故选择310nm作为检测波长。

2.3流速的选择

考察了流速0.8、1.0、1.2ml/min对分离度的影响，结果表明三种流速均可行。

2.4流动性梯度选择

采用Kromasil C₁₈(250mm×4.6mm，5um)色谱柱；流速1.0ml/min；检测波长310nm；柱温：30℃；进样量20μl；以乙腈为A相、0.1％甲酸溶液为B相，采用以下三种梯度洗脱：

a)、从0-15min，A：B(v/v)由8％：92％→10％：90％；从15-30min，A：B(v/v)由10％：90％→15％：85％；从30-70min，A：B(v/v)由15％：85％→30％：70％；从70-71min，A：B(v/v)由30％：70％→8％：92％；从71-75min，A：B(v/v)为8％：92％；

b)、从0-15min，A：B(v/v)由5％：95％→10％：90％；从15-30min，A：B(v/v)由10％：90％→20％：80％；从30-70min，A：B(v/v)由20％：80％→30％：70％；从70-71min，A：B(v/v)由30％：70％→5％：95％；从71-75min，A：B(v/v)为5％：95％；

c)、从0-20min，A：B(v/v)由8％：92％→10％：90％；从20-35min，A：B(v/v)由10％：90％→20％：80％；从35-65min，A：B(v/v)由20％：80％→30％：70％；从65-66min，A：B(v/v)由30％：70％→8％：92％；从66-70min，A：B(v/v)为8％：92％。

各梯度洗脱程序下得到的对应的色谱图结果见图3所示。

从图中可见，采用梯度方式a)得到的色谱图分离度较好，基线平稳，保留时间适宜，故选择梯度a)作为感冒灵颗粒指纹图谱分析的色谱条件。

3感冒灵颗粒样品制备的优化

3.1供试品溶液制备方法的选择

采用现有技术中的四种制备方法获得供试品溶液，具体如下：

a、取感冒灵颗粒粉末2.0g，精密称定，置25ml量瓶中，加50％甲醇20ml，超声处理30min，取出，放冷，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，滤液过0.45μm微孔滤膜，即得；

b、取感冒灵颗粒粉末4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称重，超声处理30min，取出，放冷，用甲醇补重，滤过，精密移取上清液5ml置10ml量瓶中，加水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

c、取感冒灵颗粒粉末4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称重，超声处理30min，取出，放冷，用甲醇补重，滤过，精密移取滤液10ml至蒸发皿中，水浴挥干，残渣用50％甲醇溶解置5ml量瓶中并定溶至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

d、取感冒灵颗粒粉末4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称重，超声处理30min，取出，放冷，用甲醇补重，滤过，滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。

分别对上述a-d四种制备方法所得的感冒灵颗粒色图谱按照上述优化后的条件进行检测。结果显示，其指纹图谱的整体相同。但采用方法a时，供试品溶液较难过滤；采用方法b、d时，供试品峰面积较小，需要较大的进样量才能达到预期的峰面积；另外方法d中，甲醇作为供试品溶剂，各色谱峰峰形较差。综合考虑，最终选择方法c作为感冒灵颗粒供试品溶液的制备方法。

3.2超声处理时间的选择

试验比较了在供试品溶液制备中，超声处理的时间分别为10min、20min、30min和40min的感冒灵颗粒指纹图谱。结果发现，随着超声时间的延长，各色谱峰峰面积有所增加，但超声30min与40min的无差异，较佳的超声处理时间为30min。

实验例二：感冒灵指纹图谱方法验证

1指纹图谱检测

按照上述实验中优化后的检测条件进行感冒灵颗粒的指纹图谱检测，具体包括：

取感冒灵颗粒粉末4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称重，超声处理(200W、59KHz)30min，取出，放冷，用甲醇补重，滤过，精密移取滤液10ml至蒸发皿中，水浴挥干，残渣用50％甲醇溶解置5ml量瓶中并定溶至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液；

吸取供试品溶液与对照品溶液10μl-20μl，注入液相色谱仪，测定。

检测得到的感冒灵颗粒的标准指纹图谱详见图4所示，所得的感冒灵颗粒的标准指纹图谱包括14个共有峰，各峰号的相对保留时间分别为：(1)0.070、(2)0.085、(3)0.114、(4)0.131、(5)0.150、(6)0.257、(7)0.302、(8)0.455、(9)0.674、(10)0.731、(11)0.754、(12)0.813、(13)0.990、(14)1.000。

2精密度试验

取同一份感冒灵颗粒供试品，按照上述实验中优化后的检测条件进行指纹图谱检测，并连续进样6次。取同一份感冒灵颗粒供试品溶液，连续进样6次，以蒙花苷为参照峰，结果各主要色谱峰的相对保留时间RSD均小于0.5％，检测结果见表1所示。

以第一次分析所得指纹图谱为对照图谱，其他5次分析所得指纹图谱与对照图谱相比，相似度计算结果为：1.000、1.000、1.000、1.000、1.000，说明仪器精密度良好。

表1感冒灵颗粒精密度试验相对保留时间

3稳定性试验

取同一份感冒灵颗粒供试品溶液，分别在0、4、8、12、18、24小时进行检测，以蒙花苷为参照峰，结果各主要色谱峰的相对保留时间RSD均小于0.5％，结果见表2。以0小时所得指纹图谱为对照图谱，其他5次分析所得指纹图谱与对照图谱相比，相似度计算结果为：0.999、1.000、0.999、1.000、1.000，相似度均大于等于0.999，说明感冒灵颗粒供试品溶液在室温24小时内稳定性良好。

表2感冒灵颗粒稳定性试验保留时间

3重复性试验

取同一批次感冒灵颗粒6份，按照上述检测方法，以蒙花苷为参照峰，结果各主要色谱峰相对保留时间的RSD值均小于0.3％，结果见表3。以其中一个指纹图谱为对照图谱，其他指纹图谱与对照图谱相比，相似度结果分别为：1.000、1.000、1.000、1.000、1.000，说明该方法的重复性良好。

表3感冒灵颗粒重复性试验相对保留时间

实验例三感冒灵颗粒指纹图谱方法耐用性实验

1同一类型色谱柱间色谱重现性比较

用Kromasil C₁₈(250mm×4.6mm，5um)三个不同批次的色谱柱(S/N号分别为E64633、E65267、E65319)分析同一感冒灵颗粒供试品溶液，以其中一根色谱柱测定的指纹图谱为参照，计算另两根色谱柱指纹图谱的相似度，结果分别为0.992、0.995，表明采用同一类型色谱柱分析的指纹图谱重现性良好。

2不同仪器间感冒灵颗粒指纹图谱重现性比较

采用型号分别为Waters e2695、Dionex P680、DionexUitimate 3000高效液相分析同一感冒灵颗粒供试品溶液，以Waters e2695液相色谱仪测定的指纹图谱为参照，计算另两台液相色谱仪指纹图谱的相似度，结果分别为0.992、0.995，表明采用不同液相色谱仪分析的指纹图谱重现性良好。

实验例四感冒灵颗粒HPLC指纹图谱色谱峰指认

通过考察不同对照品的保留时间及紫外光谱，鉴别了感冒灵颗粒HPLC指纹图谱中6号峰(16.50min)为绿原酸、14号峰(64.11min)为蒙花苷。在该色谱条件下未见咖啡因、对乙酰氨基酚及马来酸氯苯那敏色谱峰。通过光谱图给出的光学信息发现，感冒灵颗粒色谱中与相应已知参照物色谱峰的紫外光谱吻合。

在上述已优化并确定的色谱条件下，依次将已制备好的四味药材(金盏银盘、三叉苦、岗梅、野菊花)样品注入高效液相色谱仪中，记录下的色谱图与成品色谱图进行比较，通过各味药材色谱峰与成品色谱峰的一一对应关系，确定药材在成品色谱图中的归属。结果分别见图5、图6、及表4。

表4色谱峰在药材中的归属

实验例五感冒灵颗粒样品的检测

取感冒灵颗粒21批次产品(批号为：1003164H、0906244、1008063H、0909181、0908011、0904101、0901151、1009201H、1007172H、0903051、1002163H、091110H、1001251H、0909201、1005282H、0902172、1006094H、1011013H、1008192D、0907052、0907122)由华润三九医药股份有限公司提供。

按照前述实验例二中提供的方法进行指纹图谱的检测，各批次样品各峰的相对保留时间详见下表5。

表521批感冒灵颗粒相对保留时间

表5(续表)21批感冒灵颗粒相对保留时间

采用相似度计算软件对上述21批感冒灵颗粒指纹图谱的相似度进行了分析(取中位数)，相似度结果如下：0907122(0.998)、091110H(0.992)、1002163H(0.995)、0903051(0.993)、1007172H(0.967)、1009201H(0.971)、0901151(0.996)、0908011(0.981)、0909181(0.981)、1003164H(0.990)、0906244(0.989)、1008063H(0.993)、0904101(0.995)、1008192D(0.995)、0907052(0.988)、1011013H(0.995)、1005282H(0.957)、0902172(0.980)、1006094H(0.997)、0909201(0.987)、1001251H(0.942)。

结果表明，21批感冒灵颗粒的相似性较好，由此得出的共有模式具有一定的代表性，可以反映感冒灵颗粒的指纹特征。因此，将感冒灵颗粒的指纹图谱纳入其内控质量标准中，将其相似性定为不得小于0.90。

上述21批感冒灵颗粒样品的指纹图谱叠加图详见图7所示，可见，其共有模式图谱与附图4所示的标准图谱一致。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，

图1为采用不同色谱柱对感冒灵颗粒进行指纹图谱检测的结果；

图2为采用不同波长对感冒灵颗粒进行指纹图谱检测的结果；

图3为采用不同流动相梯度程序对感冒灵颗粒进行指纹图谱检测的结果；

图4为采用本发明所述方法检测感冒灵颗粒的标准指纹图谱；

图5为采用本发明所述方法检测获得的感冒灵颗粒指纹图谱中各个色谱峰的确认；

图6为本发明所述感冒灵颗粒与金盏银盘、三叉苦、岗梅、野菊花的色谱图结果；

图7为21批感冒灵颗粒样品的指纹图谱叠加图。

具体实施方式

实施例1

本实施例所述感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：

A、供试品溶液制备

称取感冒灵颗粒粉末4.0g，加甲醇25ml，在功率200W，频率59KHz下，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，置5ml量瓶中并定容至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

B、对照品溶液制备

取蒙花苷适量，精密称定，加甲醇，溶解并稀释，制成每1ml含0.00001g的蒙花苷，即得；

C、色谱条件

采用色谱柱Kromasil C₁₈(250mm×4.6mm，5um)；以乙腈为流动相A、以体积比0.1％的甲酸溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：从0-15min，流动相A：流动相B的体积比由8％：92％→10％：90％；从15-30min，流动相A：流动相B体积比由10％：90％→15％：85％；从30-70min，流动相A：流动相B体积比由15％：85％→30％：70％；从70-71min，流动相A：流动相B体积比由30％：70％→8％：92％；从71-75min，流动相A：流动相B体积比8％：92％；控制流速为1.0ml/min；柱温30℃；检测波长为310nm；进样量为20μl；理论板数按蒙花苷峰计算，应不低于3000；

D、测定法

吸取供试品溶液与对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例2：

A、供试品溶液制备

称取感冒灵颗粒粉末3.0g，加甲醇28ml，在功率200W，频率59KHz下，超声处理35min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液8ml，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，置5ml量瓶中并定容至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

B、对照品溶液制备

取蒙花苷适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml含0.00001g的蒙花苷，即得；

C、色谱条件

采用色谱柱Kromasil C₁₈(250mm×4.6mm，5um)；以乙腈为流动相A、以体积比0.1％的甲酸溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：从0-15min，流动相A：流动相B的体积比由8％：92％→10％：90％；从15-30min，流动相A：流动相B体积比由10％：90％→15％：85％；从30-70min，流动相A：流动相B体积比由15％：85％→30％：70％；从70-71min，流动相A：流动相B体积比由30％：70％→8％：92％；从71-75min，流动相A：流动相B体积比8％：92％；控制流速为0.8ml/min；柱温30℃；检测波长为310nm；进样量为10μl；理论板数按蒙花苷峰计算，应不低于3000；

D、测定法

实施例3：

A、供试品溶液制备

称取感冒灵颗粒粉末5.0g，加甲醇22ml，在功率200W，频率59KHz下，超声处理25min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液12ml，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，置5ml量瓶中并定容至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

B、对照品溶液制备

取蒙花苷适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释，制成每1体积份含0.00001重量份的的蒙花苷，即得；

C、色谱条件

采用色谱柱Kromasil C₁₈(250mm×4.6mm，5um)；以乙腈为流动相A、以体积比0.1％的甲酸溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：从0-15min，流动相A：流动相B的体积比由8％：92％→10％：90％；从15-30min，流动相A：流动相B体积比由10％：90％→15％：85％；从30-70min，流动相A：流动相B体积比由15％：85％→30％：70％；从70-71min，流动相A：流动相B体积比由30％：70％→8％：92％；从71-75min，流动相A：流动相B体积比8％：92％；控制流速为1.2ml/min；柱温30℃；检测波长为310nm；进样量为10μl；理论板数按蒙花苷峰计算，应不低于3000；

D、测定法

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims

1.一种感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

所述重量份与所述体积份的关系为g/mL的关系。

2.根据权利要求1所述的感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备的步骤具体为：

取感冒灵颗粒粉末4.0重量份，加甲醇25体积份，进行超声处理，放冷后称定并以甲醇补足重量，滤过后取滤液10体积份，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5体积份，微孔滤膜过滤制成供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备的步骤具体为：

取感冒灵颗粒粉末3.0重量份，加甲醇28体积份，进行超声处理，放冷后称定并以甲醇补足重量，滤过后取滤液8体积份，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5体积份，微孔滤膜过滤制成供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备的步骤具体为：

取感冒灵颗粒粉末5.0重量份，加甲醇22体积份，进行超声处理，放冷后称定并以甲醇补足重量，滤过后取滤液12体积份，蒸干，残渣用50％甲醇溶解，并定容至5体积份，微孔滤膜过滤制成供试品溶液。

5.根据权利要求1-4任一所述的感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备的步骤中，所述超声处理步骤的功率200W，频率为59KHz，超声处理20-40min。

6.根据权利要求1-5任一所述的感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测步骤中，所述色谱柱为Kromasil C₁₈柱。

7.根据权利要求1-6任一所述的感冒灵颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述感冒灵颗粒的原料药组成为：

三叉苦442-540重量份、金盏银盘295-349重量份、野菊花221-270重量份、岗梅720-750重量份、咖啡因0.36-0.44重量份、对乙酰氨基酚18-22重量份、马来酸氯苯那敏0.36-0.44重量份、薄荷素油0.18-0.22体积份。

8.由权利要求1-7任一所述方法构建得到的感冒灵颗粒的指纹图谱，其特征在于，所述感冒灵颗粒的标准指纹图谱包括14个共有峰，各峰号的相对保留时间分别为：1号峰0.070、2号峰0.085、3号峰0.114、4号峰0.131、5号峰0.150、6号峰0.257、7号峰0.302、8号峰0.455、9号峰0.674、10号峰0.731、11号峰0.754、12号峰0.813、13号峰0.990、14号峰1.000。

9.权利要求1-7任一所述方法用于感冒灵颗粒检测领域中的用途。