CN103308622A - 傣药栘依提取物及药材检测和鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种傣药栘依提取物及栘依检测和鉴别方法。本发明最大可能地检测了傣药栘依药材的化学成分，有利于对傣药栘依药材质量的全方位监控，更为客观地反映药材的质量品质，从根本上避免人为辨析药材质量的主观性，严格辨别药材伪品，保证药材质量在一定范围内稳定、一致、可控。
Description
技术领域
本发明涉及傣药栘依提取物及药材检测和鉴别方法。
背景技术
傣药栘依（又名栘木衣），源自于云南栘依Docynia delavayi(Franch.)Schneid.、栘依Docynia indica(Wall.)Dcne.或长爪栘依Docynia longiunguis Q.Luo et J.L.Liu的干燥茎皮或/和叶，主要分布在我国的四川、云南、贵州等西南地区。由于傣药栘依药材和山楂等易混品的形态相似，作为傣药时往往难以从形态学上加以辨别；同时，药材植物来源不同、产地不同、采收期不同等原因而造成药材质量参差不齐，药效和稳定性难以保证。药材的鉴别直接影响到药材的质量和人民的用药安全，而目前对傣药栘依的真伪鉴别和质量评价尚无明确有效的办法，因此寻找准确快速的鉴别傣药栘依正、伪品及评价药材质量品质的方法极为必要。
中药指纹图谱系指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。目前还未见采用HPLC指纹图谱技术对傣药栘依药材的检测。
同时，目前在使用液相检测中药材质量时，多是采用对照品或指纹图谱进行检测，其中，采用对照品检测时，不能充分反映药材的质量；而采用指纹图谱时，虽然能够全面反应药材质量，但是，也可能因为检测仪器、流动相、环境条件等多种因素的差异，造成测量的误差。若能够提供一种药材的标准提取物，该提取物中包含了较多的有效成分，那么，将该提取物与指纹图谱检测手段联合使用后，必定能够避免或降低外界因素带来的误差，更能有效反映药材质量。
发明内容
本发明的目的在于提供傣药栘依提取物及傣药栘依检测和鉴别方法。
本发明提供了一种傣药栘依提取物，所述提取物的HPLC色谱图中，含有13个主要色谱峰，各色谱峰的保留时间依次为：2.7±0.2、3.4±0.2、12.9±0.2、14.5±0.2、25.7±0.2、26.3±0.2、27.9±0.2、31.8±0.3、36.2±0.2、42.0±0.2、43.3±0.2、54.4±0.2、61.6±0.2min；
HPLC色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
检测波长：285±2nm；
流动相：乙腈-甲醇-水梯度洗脱，梯度条件如下：
进一步地，各色谱峰的峰面积依次为：26.94±20、33.55±30、21.14±20、26.64±25、52.79±40、34.87±30、292.41±230、2068.37±700、22.67±20、47.98±40、22.51±20、28.79±25、22.27±20mAU*min。
优选地，所述HPLC色谱图如图4所示。
更进一步地，所述傣药提取物的制备方法如下：取傣药栘依药材，以甲醇提取后，合并提取液，即得到傣药栘依提取物。
其中，所述所述傣药栘依来自于云南栘依Docynia delavayi(Franch.)Schneid.、栘依Docynia indica(Wall.)Dcne.或长爪栘依Docynia longiunguis Q.Luo et J.L.Liu的茎皮或/和叶。
本发明还提供了傣药栘依的检测方法，它包括如下操作步骤：
（1）取傣药栘依药材，以甲醇或乙醇提取后，取提取液制备供试品溶液；
（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪，检测即可，其液相色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
检测波长：285±2nm；
流动相：乙腈-甲醇-水梯度洗脱，梯度条件如下：
进一步地，色谱柱柱温为25±2℃；流速为1±0.2ml/min。
本发明还提供了傣药栘依药材的鉴别方法，它包括如下操作步骤：
（1）取待测药材，以甲醇或乙醇提取后，取提取液制备供试品溶液；
（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪，检测即得供试品色谱图，其液相色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
检测波长：285±2nm；
流动相：乙腈-甲醇-水梯度洗脱，梯度条件如下：
（3）将供试品色谱图与标准指纹图谱对比，相似度在0.9以上为傣药栘依药材；其中，标准指纹图谱中，有13个主要色谱峰，各色谱峰的保留时间依次为：2.7±0.2、3.4±0.2、12.9±0.2、14.5±0.2、25.7±0.2、26.3±0.2、27.9±0.2、31.8±0.3、36.2±0.2、42.0±0.2、43.3±0.2、54.4±0.2、61.6±0.2min。
进一步地，各色谱峰的峰面积依次为：26.94±20、33.55±30、21.14±20、26.64±25、52.79±40、34.87±30、292.41±230、2068.37±700、22.67±20、47.98±40、22.51±20、28.79±25、22.27±20mAU*min。
其中，所述标准指纹图谱如图4所示。
本发明最大可能地检测了傣药栘依药材的化学成分，有利于对傣药栘依药材质量的全方位监控，更为客观地反映药材的质量品质，从根本上避免人为辨析药材质量的主观性，严格辨别药材伪品，保证药材质量在一定范围内稳定、一致、可控。
附图说明
图1云南栘依Docynia delavayi(Franch.)Schneid.药材色谱图
图2栘依Docynia indica(Wall.)Dcne.药材色谱图
图3长爪栘依Docynia longiunguis Q.Luo et J.L.Liu药材色谱图
图4标准指纹图谱
图5山楂药材色谱图
各色谱图中，横坐标单位为min，纵坐标单位为mAU。
具体实施方式
实施例1 本发明傣药栘依提取物的制备
取云南栘依、栘依或长爪栘依药材，研磨成粉，过60目筛，称取2.00g于锥形瓶中，加入40mL甲醇，室温超声提取（200W，24Hz）3次，每次30min，滤过，取续滤液，即得傣药栘依提取物。
实施例2 本发明傣药栘依提取物的制备
取云南栘依、栘依或长爪栘依药材，研磨成粉，过60目筛，称取2.00g于锥形瓶中，加入20mL甲醇，回流提取3次，每次20min，滤过，取续滤液，干燥，即得傣药栘依提取物。
实施例3 傣药栘依的HPLC指纹图谱检测方法
一、傣药栘依的HPLC指纹图谱建立
1、仪器与试药
1.1、仪器
DIONEX-Summit P680A DGP-6型双三元高效液相色谱仪；PDA-100二极管阵列检测器；Sartorius BP211D电子天平；KQ5200DE型数控超声波清洗器；RE-52AA型旋转蒸发仪。
1.2、试药
甲醇，分析纯，成都市科龙化工试剂厂生产；甲醇，色谱纯，成都市科龙化工试剂厂生产；乙腈，色谱纯，成都市科龙化工试剂厂生产；超纯水；10批傣药栘依药材。
2、色谱条件
DIONEX-Summit P680A DGP-6型双三元高效液相色谱仪；PDA-100二极管阵列检测器；Agilent4.6×250mm，5μm的C18柱；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；检测波长：285nm；流动相为：乙腈（A）-甲醇（B）-水（C）线性梯度洗脱，洗脱比例为：
3、标准指纹图谱建立
3.1、供试品溶液制备：
傣药栘依药材研磨成粉，过60目筛，称取2.00g于锥形瓶中，加入40mL甲醇，室温超声提取（200W，24Hz）3次，每次30min，滤过，取续滤液，减压浓缩，定容至25mL，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
3.2、测定法：分别进样供试品溶液10μL，记录70min的指纹图谱。
3.3、方法学考察
3.3.1、精密度考察
连续进样同一供试品溶液6次，考察仪器的精密度。测得各共有峰的相对保留时间和峰面积的比值的RSD值分别为：0.02%～2.00%和0.32%～2.94%，均小于3%，表明仪器精密度良好，符合指纹图谱的技术要求。
3.3.2、稳定性考察
分别在0、2、4、6、8、12h进样同一供试品溶液，考察样品的稳定性。测得0～12h、内各共有峰的相对保留时间和峰面积的比值的RSD值分别为：0.02%～0.48%和0.32%～2.94%，均小于3%，表明样品在12h内稳定性良好，符合指纹图谱的技术要求。
3.3.3、重复性考察
按照制备方法，在同一批傣药栘依药材中，重复制备6份供试品溶液，分别进样分析，考察方法的重复性。测得各共有峰的相对保留时间和峰面积的比值的RSD值分别为：0.02%～0.66%和0.09%～2.98%，均小于3%，表明指纹图谱方法重复性良好，符合指纹图谱的技术要求。
3.4、构建标准指纹图：
按照所述方法，通过对30批傣药栘依药材进行测定，其中，
云南栘依Docynia delavayi(Franch.)Schneid.、栘依Docynia indica(Wall.)Dcne.或长爪栘依Docynia longiunguis Q.Luo et J.L.Liu药材各10批，各品种色谱图参见图1-3。色谱图经色谱工作站自动积分，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件拟合建立HPLC标准指纹图谱建立HPLC标准指纹图谱（见图4）。30批傣药栘依药材的指纹图谱中，共有峰的相对保留时间的相对标准偏差和峰面积的比值的相对标准偏差均小于3%。30批傣药栘依药材的指纹图谱与其标准指纹图谱间的整体相似度经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件计算，均大于0.900。
所得标准指纹图谱中，共有13个主要特征峰，其保留时间依次为2.68、3.35、12.93、14.53、25.65、26.29、27.91、31.81、36.19、42.04、43.34、54.35、61.63min。
各批药材的指纹图谱中，13个共有峰的峰面积如下：
表1 云南栘依Docynia delavayi(Franch.)Schneid.
表2 栘依Docynia indica(Wall.)Dcne.
表3 长爪栘依Docynia longiunguis Q.Luo et J.L.Liu
根据上述30批药材数据计算可得，傣药栘依药材的指纹图中，其13个共有峰的峰面积依次为：26.94±20、33.55±30、21.14±20、26.64±25、52.79±40、34.87±30、292.41±230、2068.37±700、22.67±20、47.98±40、22.51±20、28.79±25、22.27±20mAU*min。
二、傣药栘依与山楂的鉴别
按照上述检测方法和条件对2批待测傣药栘依药材（除已采用的30批以外）和2批市售山楂进行测定，采集70min色谱图。
将采集到的待测傣药栘依药材和市售山楂的指纹图谱与标准指纹图谱比较，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件计算整体相似度，待测傣药栘依药材相似度分别为0.998、0.991；市售山楂相似度分别为0.011、0.007（见图5）。两批待测傣药栘依药材与标准指纹图谱的相似度均大于0.900，可以在生产中使用；两批市售山楂与标准指纹图谱的相似度均极小，辨别为伪品。
综上所述，本发明最大可能地检测了傣药栘依药材的化学成分，有利于对傣药栘依药材质量的全方位监控，更为客观地反映药材的质量品质，从根本上避免人为辨析药材质量的主观性，严格辨别药材伪品，保证药材质量在一定范围内稳定、一致、可控。
Claims (10)
1.一种傣药栘依提取物，其特征在于：所述提取物的HPLC色谱图中，含有13个主要色谱峰，各色谱峰的保留时间依次为：2.7±0.2、3.4±0.2、12.9±0.2、14.5±0.2、25.7±0.2、26.3±0.2、27.9±0.2、31.8±0.3、36.2±0.2、42.0±0.2、43.3±0.2、54.4±0.2、61.6±0.2min；
HPLC色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
检测波长：285±2nm；
流动相：乙腈-甲醇-水梯度洗脱，梯度条件如下：
2.根据权利要求1所述的傣药栘依提取物，其特征在于：各色谱峰的峰面积依次为：26.94±20、33.55±30、21.14±20、26.64±25、52.79±40、34.87±30、292.41±230、2068.37±700、22.67±20、47.98±40、22.51±20、28.79±25、22.27±20mAU*min。
3.根据权利要求1或2所述的傣药栘依提取物，其特征在于：所述HPLC色谱图如图4所示。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的傣药栘依提取物，其特征在于：所述提取物的制备方法如下：取傣药栘依药材，以甲醇提取后，合并提取液，即得傣药栘依提取物。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的傣药栘依提取物，其特征在于：所述傣药栘依来自于云南栘依Docynia delavayi(Franch.)Schneid.、栘依Docyniaindica(Wall.)Dcne.或长爪栘依Docynia longiunguis Q.Luo et J.L.Liu的茎皮或/和叶。
6.傣药栘依的检测方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：
（1）取傣药栘依药材，以甲醇或乙醇提取后，取提取液制备供试品溶液；
（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪，检测即可，其液相色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
检测波长：285±2nm；
流动相：乙腈-甲醇-水梯度洗脱，梯度条件如下：
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：色谱柱柱温为25±2℃；流速为1±0.2ml/min。
8.傣药栘依药材的鉴别方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：
（1）取待测药材，以甲醇或乙醇提取后，取提取液制备供试品溶液；
（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪，检测即得供试品色谱图，其液相色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
检测波长：285±2nm；
流动相：乙腈-甲醇-水梯度洗脱，梯度条件如下：
（3）将供试品色谱图与标准指纹图谱对比，相似度在0.9以上为傣药栘依药材；其中，标准指纹图谱中，有13个主要色谱峰，各色谱峰的保留时间依次为：2.7±0.2、3.4±0.2、12.9±0.2、14.5±0.2、25.7±0.2、26.3±0.2、27.9±0.2、31.8±0.3、36.2±0.2、42.0±0.2、43.3±0.2、54.4±0.2、61.6±0.2min。
9.根据权利要求8所述的鉴别方法，其特征在于：各色谱峰的峰面积依次为：26.94±20、33.55±30、21.14±20、26.64±25、52.79±40、34.87±30、292.41±230、2068.37±700、22.67±20、47.98±40、22.51±20、28.79±25、22.27±20mAU*min。
10.根据权利要求8或9所述的鉴别方法，其特征在于：所述标准指纹图谱如图4所示。
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141210 Termination date: 20150619 |
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| EXPY | Termination of patent right or utility model |