CN104623082A - 一种治疗风热症感冒的中药及制备方法 - Google Patents

Abstract

一种治疗风热症感冒的中药及其制备方法，本发明的中药由金银花乙醇回流提取物和连翘、锦灯笼、紫箕贯众、黄芩、甘草及醇提后的金银花水煎提取物组成，制备方法是：金银花乙醇回流提取，浓缩提取液。连翘、紫箕贯众、黄芩、锦灯笼、甘草加水煎煮，浓缩水煮液，混合醇提浓缩液和水提浓缩液，制干膏，即得。本发明治疗感冒的中药，不仅可治疗温病初起邪在卫分，还可预防病邪传入气分，六味药相辅相承，疗效显著。本药重在“清热解毒，宣肺泄热”，散外邪与清内热并用，卫气同治，表里双解。重用入肺药宣畅肺气，疏畅肺络，直达病位。既不失温病治疗之大法，又紧扣瘟疫传变之病机，清除病因以除外来之戾气，重用清解以平疫毒之热势，调动机体抗病康复能力。

Description

一种治疗风热症感冒的中药及制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种治疗风热症感冒的中药提取物的组合物。

背景技术

本方所治之证，系由温热病邪侵犯上焦肺卫而致发热、微恶寒、头痛、咳嗽、咽喉疼痛等，属中医温病之范畴。热、毒是温热类温病的重要的、首要的病理因素。由于热从毒生、热盛者即为毒，故清热法和解毒法常并称。温病以发热为主症，热盛则病进，热清则病退。因此，治疗温病的关键在于清热解毒，祛除“异气”而清解热毒，是本病的治疗大法。

相关技术中，治疗感冒所用的药物大多都是西药，虽然其疗效较快，但是长期服用对机体产生耐药性及毒副作用。在现有治疗风热症感冒的中药组方，如双黄连颗粒，银翘解毒片，桑菊感冒片等。在市售药品中一般只具有抗病毒能力或调节免疫功能作用，在治疗风热症感冒的时候治疗方式单一，缺少协调性，而且对风热感冒带来的一系列并发症没有明确的疗效。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗风热症感冒的中药及其制备方法，克服现有治疗感冒药存在的上述不足。

本发明的中药由金银花乙醇回流提取物和连翘、锦灯笼、紫箕贯众、黄芩、甘草及醇提后的金银花水煎提取物组成，其中，各原料的用量比例为：金银花8-14重量份、连翘8-14重量份、锦灯笼6-10重量份、紫箕贯众5-9重量份、黄芩5-9重量份、甘草4-8重量份。

本发明的中药优选原料组成为：金银花10重量份，连翘10重量份，锦灯笼8重量份，紫箕贯众7重量份，黄芩7重量份，甘草重量6份。

本发明的中药的制备方法是：

1、按重量份数比例提取药材。

2、取金银花用80％乙醇回流提取2次，每次2小时，加乙醇量分别为药材的8倍，滤过，回收乙醇至无醇味，得浓缩液，备用；

3、将连翘、紫箕贯众、黄芩、锦灯笼、甘草及80％乙醇回流提取后的金银花加水煎煮3次，每次2小时，加水量分别为药材的8倍，浓缩至相对密度约为1.12时，加入乙醇至含醇量为60％，滤过，回收乙醇至无醇味，与上述的金银花浓缩液混合，浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，减压干燥成干膏，即得。

本发明中药在所提取的活性成分中添加药学上可接受的载体和/或辅料，或稀释剂组成。

所述制剂为片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、丸剂、滴丸剂。

所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。

本发明由金银花、连翘、锦灯笼、紫箕贯众、黄芩、甘草组成，金银花、连翘为治温病之主药，二者均入肺经清热解毒又能轻宣透表，且性味辛凉而不伤阴，为方中之君药。本方重用锦灯笼，其苦寒，归肺经。温病初起，邪在于肺，肺与皮毛相合，通过肌表来透散，锦灯笼可以辅助君药透表袪邪，使得邪有处可去。温邪上受，首先犯肺，所以本方佐以紫箕贯众、黄芩，以增强清肺之效；甘草清热解毒，调和诸药，用作使药。

本发明发明治疗感冒的中药，它不仅可以治疗温病初起邪在卫分，还可以预防病邪传入气分，并加入锦灯笼促进金银花，连翘苦寒的药性，从而达到中医理论中“热者寒之”的治疗原则，且协同黄芩，紫箕贯众清肺利咽，辅以甘草清热解毒使本发明在传统的解热基础上强化了其特征的疗效，增加了利咽喉，利尿等辅助作用。在经方中锦灯笼还广泛用于食疗方中，取之药效且不伤正气，使本发明六味药相辅相承，疗效显著。本药重在“清热解毒，宣肺泄热”，散外邪与清内热并用，卫气同治，表里双解。重用入肺药宣畅肺气，宣泄肺热，疏畅肺络，直达病位。既不失温病治疗之大法，又紧扣瘟疫传变之病机，清除病因以除外来之戾气，重用清解以平疫毒之热势，适当芳香辟秽，调动机体抗病康复能力。本发明药物配伍简便，避免多药物制剂中各个药物之间的协同拮抗作用混乱，导致的一些临床并发症的发生。在加入锦灯笼增强原有药物药性药效的同时，增加了利咽消肿等辅助疗效，有效降低了患者痛苦。所提供的药物配伍药材价廉易得， 大大的降低了患者的经济负担，使其用药的同时没有后顾之忧。

本品服用量为每次6g(不计辅料)，一日三次。 

具体实施方式

实施例一

取金银花8份、连翘8份、锦灯笼6份、紫箕贯众7份、黄芩7份、甘草7份。

以上六味，取金银花用80％乙醇回流提取2次，每次2小时，加乙醇量分别为药材的8倍，滤过，回收乙醇至无醇味，得浓缩液，备用；将连翘、紫箕贯众、黄芩、锦灯笼、甘草及80％乙醇回流提取后的金银花加水煎煮3次，每次2小时，加水量分别为药材的8倍，浓缩至相对密度约为1.12时，加入乙醇至含醇量为60％，滤过，回收乙醇至无醇味，与上述的金银花浓缩液混合，浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，减压干燥，得干膏；与3份淀粉、适量糊精、2份枸椽酸、0.5份甜菊素混合均匀，加适量糊精，用乙醇制粒，整粒，分装，即得。

实施例二：一种治疗感冒(风热症)的中药组合颗粒剂

取金银花10份、连翘11份、锦灯笼9份、紫箕贯众8份、黄芩8份、甘草7份。

以上六味，取金银花用80％乙醇回流提取2次，每次2小时，加乙醇量分别为药材的8倍，滤过，回收乙醇至无醇味，得浓缩液，备用；将连翘、紫箕贯众、黄芩、锦灯笼、甘草及80％乙醇回流提取后的金银花加水煎煮3次，每次2小时，加水量分别为药材的8倍，浓缩至相对密度约为1.12时，加入乙醇至含醇量为60％，滤过，回收乙醇至无醇味，与上述的金银花浓缩液混合，浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，减压干燥，得干膏；与3份淀粉、适量糊精、2份枸椽酸、0.5份甜菊素混合均匀，加适量糊精，用乙醇制粒，整粒，分装，即得。

实施例三

金银花14份、连翘14份、锦灯笼10份、紫箕贯众5份、黄芩5份、甘草4份。

以上六味，取金银花用80％乙醇回流提取2次，每次2小时，加乙醇量分别为药材的8倍，滤过，回收乙醇至无醇味，得浓缩液，备用；将连翘、紫箕贯众、黄芩、锦灯笼、甘草及80％乙醇回流提取后的金银花加水煎煮3次，每次2小时， 加水量分别为药材的8倍，浓缩至相对密度约为1.12时，加入乙醇至含醇量为60％，滤过，回收乙醇至无醇味，与上述的金银花浓缩液混合，浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，减压干燥，得干膏；与与3份淀粉、2份枸椽酸、0.5份甜菊素混合均匀，加适量糊精，用乙醇制粒，整粒，分装，即得。

药效学研究 

1、以10.98、5.49、2.74g生药/kg剂量给家兔灌胃，可明显对抗内毒素引起家兔的发热反应；

2、以21.17、10.59、5.29g生药/kg剂量给大鼠灌胃，可明显对抗2、4-二硝基苯酚引起的大鼠体温升高。

3、以21.17、10.59、5.29g生药/kg给小鼠灌胃，能明显抑制由角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀；

4、对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加有抑制作用；提高正常小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能。

5、醋酸引起的小鼠扭体反应次数减少,并提高小鼠的热板痛阈值。

本发明制剂剂系由金银花、连翘、紫箕贯众等6味中药组成，具有疏散风热、宣肺解表的功能。临床上用于上呼吸道感染，中医辨证为风热证。临床证见：身热较著，微恶风、头胀痛、咳嗽、咽痛等症。为证实其疗效，我们进行如下研究。本发明制剂剂，含量为6.0g成品药粉/袋，2.178g生药/g成品药粉，实验用未加辅料的药粉，6.96g生药/g药粉，阳性药选用双黄连片，哈尔滨圣泰制药有限公司生产(0.5g/片)，批号：110508，市售。芬必得，中美天津史克制药有限公司生产(300mg布洛芬/粒)，批号：11110689，市售。实验中阳性药用量以药品包装标示量表示。内毒素为大肠杆菌血清型O55:B5(Sigma公司生产)。角叉菜胶由中国药科大学药理室提供。

动物：昆明种小白鼠，体重18—22g，25—30g，♀♂兼用，Wistar种大白鼠，体重150—200g,♀♂兼用，购自长春高新医学动物实验研究中心，动物质量合格证号：10-5113、10-5112。日本大耳白家兔，体重1.85—2.50kg,购自长春市朝阳区实验动物养殖场，动物质量合格证号：10—5105。

仪器：MC—3B型电脑数字式体温计(日本产)GJ-8402型热板测痛仪(中国浙江产)

实验方法和结果

1、对内毒素致家兔发热反应的影响

筛选体温在38.5～39.6℃内的家兔60只，在室温18～20℃环境下适应一周。随机分成6组，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组(336mg/kg)、本发明制剂剂高、中、低剂量组(10.98g/kg、5.49g/kg、2.74g/kg)。试验当天造模型前待动物安静稳定后用电子温度计(末端涂少许凡士林)插入肛门3～4cm，测量正常肛温。而后给动物静脉注射预先处理的内毒素10ug/kg(经过预试)，30min后测肛温并按体重灌胃给药，正常对照组、模型对照组灌服等体积水，分别测量灌胃给药后不同时间(1、2、3、4、6h)动物肛温。

实验结果表明：静脉注射内毒素后60-240min，本发明制剂各剂量组对内毒素所致家兔的发热反应均有程度不同的抑制作用。60min时，10.98g/kg组作用最明显(与模型对照组比较P＜0.01)。详见表1

表1本发明制剂剂对内毒素致家兔发热模型体温变化

注：与模型对照组比较^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001

2、对2、4—二硝基苯酚致大鼠发热模型的影响

筛选正常体温雄性大鼠50只，随机分为五组，如表2所示剂量灌胃给药一次，药后1h各组大鼠立即背部皮下注射0.15％2、4—二硝基苯酚10ml/kg，分别于注射致热剂后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0h用温度计测量大鼠肛温，观察体温变化。

结果可见，本发明制剂对2、4—二硝基苯酚所致大鼠体温的升高有抑制作用，与对照组比较差异显著(P＜0.01)，详见表2。

表2本发明制剂对2、4—二硝基苯酚所致大鼠发热模型的影响

注：与模型对照组比较^*P<0.05，^**P<0.01

3、对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的抗炎作用

取大鼠50只，按体重随机分为5组，即空白对照组，灌胃给予同体积蒸馏水(10ml/kg)；阳性药(阿司匹林)组，灌胃给予阿司匹林540mg/kg；二丁颗粒大、中、小剂量组。2.7g/kg、5.4g/kg、10.8g/kg。每日灌胃给药1次，连续7日。末次给药后，用大鼠足趾容积测量仪测量大鼠足趾体积，末次给药后30min，于大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜胶溶液0.1ml/只，随后分别于给药后1、2、3、4和6小时各测一次足趾厚度。结果用足肿胀程度表示(给药前后差值)。

结果表明：5个作用时间点，本发明制剂高剂量组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.001)，详见表3

表3本发明制剂对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀程度的影响

注：与模型对照组比较^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001

4、对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响

取雄性小鼠50只，随机分为五组，按表4所示剂量灌胃给药，每日1次，连续7日。末次药后30min，依次给小鼠尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g,随即腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20分钟后脱臼处死，腹腔注射生理盐水6ml,轻按小鼠腹部，抽取腹腔液3ml,3000rpm离心10分钟，取上清液于590nm处测OD值。

结果可见,本发明制剂剂能使OD值降低，与对照组比较差异显著(P<0.05)。表明本发明制剂剂对醋酸引起小鼠腹腔毛细血管通透性增加有抑制作用。结果详见表4

表4对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响

注：与模型对照组比较^*P<0.05

5、对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响

取小鼠50只，随机分为五组，按表5所示剂量灌胃给药，每日1次，连续7日，对照组给予等体积水。末次给药后30min，各鼠尾静脉注射墨汁(墨汁：生理盐水＝1：5)0.05ml/10g，于注射后2min、15min从眼眶后静脉丛取血50μl，溶于2ml 1％Na₂CO₃溶液中，用752—紫外光栅分光光度计在680nm波长下比 色，测定OD值，处死小鼠，称量小鼠肝脏、脾脏重量，计算吞噬活性α，

结果表明，本发明制剂剂能明显提高小鼠巨噬细胞的吞噬指数及吞噬活性，与对照组比较差异显著(P<0.05)。结果详见表5

表5对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响

注：与模型对照组比较^*P<0.05

6、对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

取小鼠70只，随机分为七组，如表6所示剂量灌胃给药，每日1次，连续3日。末次给药后1h，各鼠腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g，记录注射后，10min内小鼠出现的扭体次数。

结果显示，本发明制剂剂可对抗醋酸引起的小鼠扭体反应，使小鼠扭体反应次数减少，与对照组比较差异显著(P<0.05)。而水提样品与水提后醇沉样品之间在药效上没有明显差别。结果详见表6。

表6对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

注：与模型对照组比较^*P<0.05

7、对小鼠热板痛阈值的影响

筛选痛阈值为5-30S的雌性小鼠50只，随机分为五组，按表7所示剂量灌胃给药，每日1次，连续3日，分别于末次给药后30、60、90、120、150、180、240分钟，将小鼠置GJ-8420小鼠热板测痛仪中，于55±0.5℃热板上测定痛阈值。

结果显示，本发明制剂剂能明显提高小鼠热板痛阈值，与对照组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)。结果见表7。

表7本发明制剂剂对小鼠热板痛阈值影响

注：与模型对照组比较^*P<0.05，^**P<0.01

小结：感冒为常见病、多发病，临床上常表现为发热、头痛、咽喉肿痛等诸多症状。而本发明制剂剂作为抗感冒新药，其动物药效学试验结果证明，本发明制剂剂能明显对抗内毒素引起家兔的发热反应及明显对抗2、4—二硝基苯酚引起的大鼠体温升高，表明本品有很好的解热作用；本发明制剂剂还能明显抑制由巴豆油引起的小鼠耳肿胀及抑制由醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的作用，提示本品有抗炎作用；本发明制剂剂能明显提高巨噬细胞的吞噬功能，表明本品能提高动物的免疫功能；同时，本发明制剂剂还能减少小鼠扭体反应次数，提高小鼠的热板痛阈值，显示出具其较强的镇痛作用。综上所述，本发明制剂剂具有解热、抗炎、调节免疫功能及镇痛等作用。

药理毒理研究 

目的：本发明制剂的抗病毒药效作用。方法：采用组织细胞培养法、病理学检查法和建立流行性感冒动物模型等方法，对不同浓度的本发明制剂剂进行体内

外抗病毒药效学研究。结果显示：本发明制剂剂在体外有明显的抑制副流感病毒、柯萨奇B₃病毒致细胞病变作用。对流感病毒、呼吸道合胞病毒有延缓病毒致细胞病变作用，对腺病毒3型和单纯疱疹病毒I型致细胞病变作用不明显。体内抗病毒试验结果显示，本发明制剂剂可有效抑制流行性感冒病毒所致小鼠病毒性肺炎。结论：本发明制剂剂对副流感病毒和柯萨奇病毒B₃两种常见的呼吸道病毒,在体外有较好抗病毒效果。体内实验证明本发明制剂具有明显的抗流感病毒的作用。

一、本发明制剂抗病毒实验

试验材料： 

1、药物

(1)本发明制剂 

(2)双黄连片：哈尔滨圣泰制药有限公司。批号：20121203，批准文号：(96)卫药准字Z-85号，作为本次试验阳性对照药物。

2.细胞株

Hela(宫颈癌细胞)由本实验室保存细胞株。

Hep-2(喉癌细胞)购于卫生部药品生物制品检定所。

FL(人羊膜细胞)长春生物制品研究所提供。

3.病毒株

1)呼吸道合胞病毒(RSV) 来源于预防医学科学院病毒所。

2)流感病毒FM₁株 购于预防医学科学院病毒研究所。

3)副流感病毒 购于预防医学科学院病毒研究所。

4)单纯疱疹病毒I型(HSV-1)SM₄₄株 购于卫生部药品生物制品检定所。

5)柯萨奇病毒B₃(CVB₃)株 来源于美国,为实验室室保存。

6)腺病毒3型(AdV-3) 来源于白求恩医科大学一院儿科研究室。

4.主要试剂

胎牛血清 长春生物制品研究所产品。

胰蛋白酶 日本生产上海化学试剂厂分装。

培养基   IMDM为美国Sigma产品。

5.实验动物

Swiss小鼠，雌雄各半，3-4W龄，16-18g，由吉林大学白求恩医学部实验动物中心提供。医动字第10-5219号。

方法：

1、细胞准备Hela、Hep-2、FL、传代细胞培养2-4d，达到对数生长期，用25％胰酶消化，待细胞面出现针尖样小孔，吸尽消化液，取数毫升培养液吹散细胞，计数，用培养液稀释至约5×10⁷/ml后，接种于96孔培养板内，待细胞长成单层。

2、药物毒性测定

根据LD₅₀、LD₀计算的本发明制剂体内试验药物用量为：31.2g/ml、15.6g/ml、7.8g/ml、3.9g/ml、、1.95g/ml。

体外试验：将本发明制剂稀释为100g/ml,50g/ml,25g/ml,12.5g/ml,6.25g/ml,3.125g/ml,1.5625g/ml,0.78125g/ml,0.390625g/ml，0.1953125g/ml为本次实验用药。

阳性药：双黄连稀释为18.75g/ml,9.37g/ml,4.68g/ml。

将上述用培养液稀释好的不同浓度的药品滴加于Hep-2、FL与Hela细胞上，每孔0.2ml，37℃5％CO₂孵箱培养，每天镜下观察细胞病变(CPE)，求出药液致细胞毒性，计算最大无毒浓度。

3、药物对病毒致细胞病变作用的影响

在Hep-2、Hela和FL细胞上分别加入10^-1-10^-6不同浓度的6种病毒液，吸附1h后洗去病毒液，加入无毒界限药液，每一病毒稀释度各加3复孔，同时设病毒对照，细胞对照，阳性药物对照组。置37℃CO₂培养箱内培养,每天在镜下观察病变,连续7d,记录各孔病变情况。

4、结果判定及计算方法

以能使50％细胞孔发生CPE的最高稀释度作为终点,用karber法计算病毒滴度。

公式

TCID₅₀：50％组织细胞感染量

XM：病毒最高浓度稀释度的对数

d：稀释度系数(倍数)的对数

Σpi：每个稀释度病变百分数的总和

5、各种病毒TCID₅₀的测定

将各种病毒进行10倍递减稀释为10^-1,10^-2,10^-3......10^-6不同稀释度，并将各种不同稀释度的病毒感染Hep-2、Hela和FL细胞，用96孔板单层培养。观察细胞病变，测定各病毒半数致细胞病变剂量(TCID₅₀)。

6、体内抗病毒试验

1)病毒毒力测定：乙醚麻醉小鼠，滴鼻感染，每鼻孔不同稀释度病毒

0.03ml，记录死亡百分数，计算LD₅₀。

2)药物毒性测定：小鼠急性毒性和亚急性毒性，计算LD₅₀及LD₀。

3)抗病毒试验：小鼠随机分组，10只/组，于感染前一天开始腹腔注射给药，连续5d，对照组腹腔注射相同体积的生理盐水。在乙醚浅麻醉下滴鼻感染流感病毒鼠肺适应株FM₁,15LD₅₀，感染后96h解剖，取肺称重，逐个算出肺指数值，与对照组比较，进行组间t检验。统计学处理，计算t值和P值。

4)病理组织学检查：取各试验组鼠肺、固定、包埋、切片染色、镜检等，具体方法略。

结果：

1)各种病毒的TCID₅₀

副流感病毒： ${\mathrm{LogTCID}}_{50}=-2+0.5-\frac{100+100+50}{100}=-4$

流感病毒FM₁： ${\mathrm{LogTCID}}_{50}=-2+0.5-\frac{100+100+50}{100}=-4$

RSV： ${\mathrm{LogTCID}}_{50}=-2+0.5-\frac{100+100+100+50}{100}=-5$

CVB₃： ${\mathrm{LogTCID}}_{50}=-2+0.5-\frac{100+100+100+50}{100}=-5$

HSV-1SM₄₄： ${\mathrm{LogTCID}}_{50}=-2+0.5-\frac{100+100+100+30}{100}=-4.8$

AdV-3： ${\mathrm{LogTCID}}_{50}=-2+0.5-\frac{100+100+50}{100}=-4$

2)药物对细胞毒性的测定

本发明制剂在0.781g/kg以上稀释的各浓度对FL、Hela和Hep-2细胞均无毒性作用。双黄莲在4.687g/kg以上稀释时对FL、Hela和MDCK细胞均无毒性作用。本次试验本发明制剂采用0.781/kg,双黄莲4.687g/kg。

3)本发明制剂对病毒致细胞病变保护作用结果

在感染30-100TCID₅₀的6种病毒的情况下，本发明制剂在0.781g/ml～0.390625g/ml的浓度范围，对副流感病毒和柯萨奇病毒B₃有明显的抑制其致细胞病变作用，对流感病毒、呼吸道合胞病毒有延缓病毒致细胞病变作用，对腺病毒3型和单纯疱疹病毒I型致细胞病变作用不明显，结果见表1。

表1本发明制剂剂对病毒致细胞病变作用

注：-示无细胞病变；±示有延缓细胞病变作用；+示1/4以下的细胞病变；++示1/4～1/2的细胞有病变；+++示1/2～3/4的细胞有病变；++++示3/4以上的细胞有病变。

4)对小鼠流感病毒性肺炎的影响

本发明制剂对小鼠肺炎的影响结果，采用EXCEL统计软件，进行两组均数T检验，详见表2。在7.8g/kg/d及以上计量,均有显著的治疗作用。

表2本发明制剂剂对小鼠流感病毒性肺炎的作用

注：与模型对照组比较^**P<0.01

5)病理结果

病毒性肺炎模型组镜下可见：细支气管壁、支气管和肺泡壁等肺间质充血、水肿以及炎细胞浸润，肺泡壁增宽，肺泡呈炎症反应。本发明制剂剂治疗各组鼠肺病变明显减轻，部分肺组织形态结构正常，最佳治疗剂量为15.6g/kg、7.8g/kg。结果见图片1、2、3、4。

结论：本发明制剂剂在体外对副流感病毒和柯萨奇病毒B₃有明显的抑制其致细胞病变作用，对流感病毒、呼吸道合胞病毒有延缓病毒致细胞病变作用，对腺病毒3型和单纯疱疹病毒I型致细胞病变作用不明显。体内抗病毒试验结果显示，本发明制剂剂可有效的抑制流行性感冒病毒所致的病毒性肺炎，与模型对照组比较，差异显著。关于该药抗病毒的作用机理有待进一步深入研究。

二、本发明制剂剂体外抗菌试验

材料与方法 

1、试验药品 

待测药物：本发明制剂,批号：20120601。

对照药物：双黄连片，哈尔滨圣泰制药有限公司。0.53g/片，批号：2012120批准文号：(96)卫药准字Z-85号，作为本次试验阳性对照药物。

2、实验菌株 

国际标准株：金黄色葡萄球菌ATCC25925，大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。

临床分离株：金黄色葡萄球菌10株，铜绿假单胞菌8株，化脓性链球菌11株，肺炎链球菌9株，大肠埃希菌12株，流感嗜血杆菌8株。以上所有菌株均自临床标本中分离，经本实验室鉴定保存。3、培养基

普通肉汤培养基：每升中含蛋白胨(日本进口)10g，牛肉膏5g，NaCl5g，蒸馏水加至1000ml，调pH7.4，分装后高压灭菌待用，主要用于细菌活化。

普通琼脂培养基：营养琼脂45g加至1000ml，高压灭菌。用于培养营养要求不高的细菌，如大肠埃希菌，葡萄球菌等。

4％琼脂培养基：普通肉汤培养基加入4％琼脂粉。用于培养铜绿假单胞菌。巧克力培养基：将普通琼脂培养基加热溶化后，约90℃时注入羊全血,混均。用于培养营养要求高的细菌，如肺炎球菌，化脓性链球菌等。

药物培养基：分别于普通琼脂培养基，4％琼脂培养基，巧克力平板培养基中加入本发明制剂剂、双黄连粉针剂，本发明制剂终浓度为250g/ml,125g/ml,62.5g/ml,31.25g/ml,15.62g/ml,7.81g/ml。双黄连终浓度600g/ml,300g/ml,150g/ml,75g/ml,37.5g/ml,18.75g/ml,9.37g/ml,4.687g/ml,2.343g/ml,1.171g/ml。药物平板用于MIC测定。

4、最小抑菌浓度(MIC)测定

采用平皿稀释法,将细菌分别接种于各自适用的平板培养基中，置37℃培养24h后，从平板中刮取单一菌落，以无菌生理盐水稀释，用麦氏比浊管测定细菌浓度，配制成9×10⁶CFU/ml细菌稀释液，从各种细菌稀释管中分别取0.05ml菌液，点种于各药物平板及不含药物的对照平板上，37℃培养24h后观察结果，以无细菌生长平皿所含抗生素的最小浓度即为最小抑菌浓度。化脓性链球菌、肺炎链球菌和流感嗜血杆菌置于5％CO₂孵箱中培养24h观察结果。

结果

体外抑菌试验表明，本发明制剂剂对化脓性链球菌、肺炎球菌有明显的抑菌作用,对流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，但抑制作用没有上述细菌明显，对铜绿假单胞菌的抑制作用较弱。详见表1。

表1本发明制剂剂对6种细菌体外MIC测定结果

三、本发明制剂剂体内抗菌试验

材料与方法 

1、药品

待测药物：本发明制剂，批号：20120601。

对照药物：双黄连片，哈尔滨圣泰制药有限公司。0.53g/片，批号：20121203，批准文号：(96)卫药准字Z-85号，作为本次试验阳性对照药物。

2、动物

Swiss小鼠 雌雄均用，3-4W龄，18-22g，雌雄分别分组，由吉林大学白求恩医学部实验动物中心提供。医动字第10-5219号。

3、实验菌株 

肺炎球菌9904，为阳性产酶株。实验前动物接种传代2次，以增强毒力。4、药物配制 

根据LD₅₀、LD₀计算的本发明制剂剂体内试验药物用量为：15.6g/kg、7.8g/kg、3.9g/kg、1.95g/kg、0.975g/kg。阳性对照药双黄连为1g/kg，为人用量的10倍。

5、试验方法 

将小鼠随机分组，每组10只，雌雄均用。菌原液用生理盐水稀释所需浓度，经腹腔注射相当于100％最小致死量的菌液感染小鼠。在感染后即刻与6h后腹腔注射药物，观察7d记录小鼠死亡情况，用Bliss法计算每种药物的ED₅₀和95％的可信限。

结果

体内试验结果表明本发明制剂剂对肺炎球菌菌株所致小鼠感染有明显的保护作用，其ED₅₀和95％可信限分别为4.7466g/kg,3.5235-6.3944g/kg。详见表3

表3本发明制剂剂对肺炎球菌感染小鼠的体内保护试验

临床试验

本实验共入组病例500例，其中试验组300例，阳性对照组100例，安慰剂组100例，阳性对照药为上海强生制药有限公司泰诺，按症状疗效进行划分。

痊愈：用药72小时后单项症状疗效指数减少≥95％。

显效：用药72小时后单项症状疗效指数减少≥70％，＜95％。

有效：用药72小时后单项症状疗效指数减少≥30％，＜70％。

无效：用药72小时后单项症状疗效指数减少＜30％或病情加重。

由以上数据可表明本药物可明显的治疗风热症感冒。

Claims (4)

1.一种治疗风热症感冒的中药，其特征是：由金银花乙醇回流提取物和连翘、锦灯笼、紫箕贯众、黄芩、甘草及醇提后的金银花水煎提取物的混合物，其中，各原料的用量比例为：金银花8-14重量份、连翘8-14重量份、锦灯笼6-10重量份、紫箕贯众5-9重量份、黄芩5-9重量份、甘草4-8重量份。

2.根据权利要求1 所述的一种治疗风热症感冒的中药，其特征是：其中各原料的用量比例为：金银花10重量份、连翘10重量份、锦灯笼9重量份、紫箕贯众8重量份、黄芩8重量份、甘草6重量份。

3.根据权利要求1或2所述的一种治疗风热症感冒的中药，其特征是：添加有辅料和/或载体，剂型为片剂或颗粒剂或胶囊剂或口服液。

4.一种权利要求1或2所述的一种治疗风热症感冒的中药的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）取金银花8-14重量份、连翘8-14重量份、锦灯笼6-10重量份、紫箕贯众5-9重量份、黄芩5-9重量份、甘草4-8重量份；

（2）将步骤（1）所取金银花用80%乙醇回流提取2次，每次2小时，加乙醇量分别为药材的8倍，滤过，回收乙醇至无醇味，得浓缩液，备用；

（3）将步骤（1）所取的连翘、锦灯笼、紫箕贯众、黄芩、甘草及经步骤（2）乙醇回流提取后的金银花加水煎煮3次，每次2小时，加水量分别为药材的8倍，浓缩至相对密度约为1.12时，加入乙醇至含醇量为60%，滤过，回收乙醇至无醇味，与上述的金银花浓缩液混合，浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，减压干燥成干膏，得治疗风热症感冒的中药。