CN103926345A

CN103926345A - 夏桑菊制剂特征图谱的检测方法

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Publication number: CN103926345A
Application number: CN201410158076.7A
Authority: CN
Inventors: 姚江雄; 许招懂; 方铁铮; 黎志坚; 林丽美; 蒋莉娟
Original assignee: GUANGZHOU XINGQUN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: GUANGZHOU XINGQUN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-04-18
Filing date: 2014-04-18
Publication date: 2014-07-16
Anticipated expiration: 2034-04-18
Also published as: CN103926345B

Abstract

本发明公开了一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，步骤如下：对照品溶液的制备：分别称取绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷对照品，用甲醇溶解，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：称取夏桑菊制剂，置于容量瓶，加体积分数为60%-100%甲醇溶液溶解，超声，放冷，补足至刻度，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；分别吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定。本发明以绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷为参照指标，得出夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，同时确定了制备供试品溶液和对照品溶液，及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数；该方法具有操作简便、结果稳定、重现性好等优点。

Description

夏桑菊制剂特征图谱的检测方法

技术领域

本发明涉及中药制剂的质量控制领域，特别是涉及夏桑菊制剂特征图谱的检测方法。

背景技术

夏桑菊制剂由中药材夏枯草、桑叶、野菊花为原料，经水提取后，按常规的制药工艺制成，具有清肝明目、疏风散热，除湿痹，解疮毒的功能，用于风热感冒，目赤头痛、高血压、头晕耳鸣、咽喉肿痛，疗疮肿毒等症。夏桑菊制剂在中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十五册收载有夏桑菊颗粒剂，是深受欢迎的中药制剂，现已有夏桑菊颗粒剂，夏桑菊口服液，夏桑菊饮料等剂型上市。

国家标准对夏桑菊颗粒的质量控制主要采用薄层色谱法鉴别是否有主药夏枯草的熊果酸的成分；黄淑彰在文献“现代中药研究与实践”2004,18（3）：33报道了采用HPLC法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的分析方法；黄晓文等在“广东药学院学报”2008，报道了采用HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量方法；林丽美等在杂志“中成药”2012，报道了采用薄层色谱法对夏桑菊颗粒中的迷迭香酸和蒙花苷进行定性鉴别；并通过RP-HPLC法测定夏桑菊中迷迭香酸和蒙花苷的含量。

以上针对个别成分进行鉴别或含量测定的方法，难以全面表征夏桑菊制剂的物理化学特征，因此，对复方夏桑菊制剂的质量控制方法有待进一步完善。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法。

解决上述技术问题的具体技术方案如下：

一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，采用高效液相色谱仪进行测定，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：分别精密称取绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷对照品，用甲醇溶解，作为对照品溶液，所述对照品溶液中对照品的浓度为0.1-0.3mg/mL(μg/μl)；

(2)供试品溶液的制备：精密称取夏桑菊制剂，置于容量瓶，加体积分数为60%-100%甲醇水溶液溶解，超声处理，放冷，补足至刻度，过滤，取续滤液，作为供试品溶液，所述供试品溶液中夏桑菊制剂的浓度为0.05-0.5g/mL；

(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定；

色谱条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；柱温：30-40℃；检测器：紫外检测；检测波长为200-400nm；流速：0.8-1.0mL·min^-1；进样量：5-25μm；以乙腈-1.0%的冰乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0-50min，(5-9)%乙腈→(31-35)%乙腈，(95-91)%→(69-65)%1.0%的冰乙酸水溶液。

在其中一些实施例中，步骤(3)所述的色谱条件为：柱温：34-36℃；检测波长为：318-322nm；流速为0.8-0.85mL·min^-1；所述梯度洗脱为：0-50min，8%乙腈→33%乙腈，92%→67%1.0%的冰乙酸水溶液。

在其中一些实施例中，步骤(1)所述对照品溶液中对照品的浓度为0.15-0.3mg/mL。

在其中一些实施例中，步骤(2)所述供试品溶液中夏桑菊制剂的浓度为0.05-0.4g/mL。

在其中一些实施例中，步骤(2)所述供试品溶液中夏桑菊制剂的浓度为0.1-0.4g/mL。

在其中一些实施例中，步骤(2)所述供试品溶液中夏桑菊制剂的浓度为0.1-0.2g/mL。

在其中一些实施例中，步骤(2)所述超声处理的功率为240-260w，功率为33-35kHz。

本发明的原理是根据夏桑菊制剂及中主要的活性成分是药材夏枯草、桑叶、野菊花的提取物，其特征图谱能从色谱的整体面貌上把握夏桑菊制剂的质量，所说的夏桑菊制剂包括固体制剂和液体制剂，如夏桑菊含糖颗粒剂、无糖颗粒剂、片剂、胶囊剂、合剂和口服液等。用本方法测定按国家标准制备的夏桑菊制剂均能得到相同、相近似的特征图谱。

本发明所述夏桑菊制剂特征图谱的检测方法具有以下优点和有益效果：

（1）本发明经发明人大量的实验和研究，以绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷为参照指标，得出可全面表征夏桑菊制剂物理化学特征的特征图谱的检测方法，同时确定了制备供试品溶液和对照品溶液，及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数；该方法具有操作简便、结果稳定、精密度高、重现性好等优点。

（2）采用该方法所获得的特征图谱中有7个特征共有峰，其能有效地表征夏桑菊制剂的质量，有利于全面监控产品质量，及鉴别产品的真伪；特征图谱注重各个构成特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，既避免了因测定一、二个化学成分而判定夏桑菊颗粒制剂整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性。

附图说明

图1为实施例1中夏桑菊颗粒剂78个样品匹配后特征图谱；

图2为实施例1中夏桑菊颗粒剂的HPLC共有模式的特征图谱；

图3为实施例3中夏桑菊含糖颗粒剂46个样品匹配后特征图谱。

具体实施方式

以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1夏桑菊颗粒特征图谱的构建

1、仪器、试剂与材料

1.1仪器

KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；

BPZ11D型电子分析天平（Sartorius公司）；

Waters2695-2996高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器（Waters公司）。

1.2试剂

冰乙酸（色谱纯，北京化工厂)；

甲醇（色谱纯，TEDIA公司）；

乙腈（色谱纯，TEDIA公司）；

水为哇哈哈纯净水。

1.3对照品

绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸、蒙花苷由广州白云山星群（药业）有限公司提供。

1.4材料

1.4.1广州白云山星群（药业）有限公司生产的夏桑菊颗粒（2008-2011年样品，每批4小袋），具体参见:表1：

表1星群夏桑菊颗粒样品表

2008年样品	2009年样品	2010年样品	2011年样品
				1FA10001(1月)	12GA10005（1月）	24HA10033(1月)	37IA10001(1月)
2FA10122(2月)	13GA10011（2月）	25HA10066(1月)	38IA10119(1月)
				3FA10133(3月)	14GA10049（3月）	26HA10043(2月)	39IA10165(2月)
4FA10242(4月)	15GA10088（4月）	27HA10231(3月)	40IA10279(3月)
				5FA10264(5月)	16GA10131（5月）	28HA10308(4月)	41IA10280(4月)
6FA10291(6月)	17GA10204（6月）	29HA10352(5月)	42IA10287(5月)
				7FA10320(7月)	18GA10258（7月）	30HA10473(6月)	43IA10446(6月)
8FA10474(9月)	19GA10303（8月）	31HA10506(7月)	44IA10642(7月)
				9FA10485(10月)	20GA10414（9月）	32HA10550(8月)	45IA10540(8月)

10FA10499(11月)	21GA10452(10月）	33HA10558(9月)	46IA10686(9月)
				11FA10507(12月)	22GA10491（11月）	34HA10572(10月)
	23GA10579（12月）	35HA10658(11月)
						36HA10693(12月)

1.4.2其他厂家夏桑菊颗粒样品（每批4小袋），具体参见表2：

表2其他厂家夏桑菊颗粒样品表

2方法与结果

2.1、色谱条件

色谱柱：Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，紫外检测器，以乙腈（A）-1.0%冰乙酸水（B）为流动相系统梯度洗脱（0-50min，8%A→33%A），流速为0.8mL·min^-1，检测波长320nm；柱温35℃。

2.2、对照品溶液的制备

分别称取对照品绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷适量，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶解，分别配制成浓度为0.2720、0.3050、0.1680和0.2700μg/μl。

2.3、供试品溶液的制备

分别将表1和表2中各样品研细，精密称定2.5g，置50ml容量瓶中，加入75%甲醇溶液40ml，超声30min（功率250W，频率33kHz）溶解，放冷后，补加75%甲醇稀释至刻度,摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4、测定：精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到特征图谱。通过78批次HPLC图谱比较，进行相似度评价，确定其特征共有峰。

3、实验结果

经检测，78个样品所得的特征图谱（如图1所示）中有7个特征共有峰，现将图谱的保留时间、峰面积的平均值汇总，具体如下：

1号峰，平均保留时间RT为11.654min，RSD为0.2%，峰面积为225.354，RSD为20.59%；

2号峰，平均保留时间RT为12.594min，RSD为0.19%，峰面积为205.181，RSD为21.39%；

3号峰，平均保留时间RT为27.189min，RSD为0.22%，峰面积为73.357，RSD为34.36%；

4号峰，平均保留时间RT为33.256min，RSD为0.2%，峰面积为625.544，RSD为26.49%；

5号峰，平均保留时间RT为41.032min，RSD为0.2%，峰面积为73.431，RSD为29.56%；

6号峰，平均保留时间RT为42.733min，RSD为0.22%，峰面积为161.934，RSD为45.23%；

7号峰，平均保留时间RT为46.973min，RSD为0.21%，峰面积为105.301，RSD为28.14%；

生成的共有模式特征图谱，参见图2，所述特征图谱中，夏桑菊颗粒的特征图谱中有7个特征共有峰，其中1号峰为绿原酸参照峰，3号峰为异迷迭香酸苷参照峰，4号峰为迷迭香酸参照峰，6号峰为蒙花苷。

实施例2

一种夏桑菊口服液特征图谱的检测方法，采用高效液相色谱仪进行测定，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：分别精密称取绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷对照品，用甲醇溶解，分别配制成浓度为0.1100、0.1512、0.1730和0.1478μg/μl。

(2)供试品溶液的制备：精密称取夏桑菊口服液2g，加体积分数为60%甲醇溶液溶解，定容至10mL，超声处理30min（功率240W，频率33kHz），放冷，补足至刻度，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；

(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，所得特征图谱含有如图1所示的7个特征峰，且经指认：1号峰为绿原酸参照峰（RT=11.654min），3号峰为异迷迭香酸苷参照峰（RT=27.189min），4号峰为迷迭香酸参照峰（RT=33.256min），6号峰为蒙花苷（RT=42.733min）；

色谱条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；柱温：30℃；检测器：紫外检测；检测波长为200nm；流速：0.8mL·min^-1；进样量：5μL；以乙腈-1.0%的冰乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0-50min，5%乙腈→31%乙腈，95%→69%1.0%的冰乙酸水溶液。

实施例3

一种夏桑菊含糖颗粒特征图谱的检测方法，采用高效液相色谱仪进行测定，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：分别精密称取绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷对照品，用甲醇溶解，分别配制成浓度为0.2520、0.2920、0.1610和0.2615μg/μl。

(2)供试品溶液的制备：分别精密称取46批次的夏桑菊含糖颗粒2g，用体积分数60%的甲醇溶液溶解，定容至20mL，超声处理30min（功率260W，频率35kHz），放冷，补足至刻度，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；

(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，所得特征图谱含有如图3所示的7个特征峰，且经指认：1号峰为绿原酸参照峰（RT=11.654min），3号峰为异迷迭香酸苷参照峰（RT=27.189min），4号峰为迷迭香酸参照峰（RT=33.256min），6号峰为蒙花苷（RT=42.733min）；

色谱条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；柱温：40℃；检测器：紫外检测；检测波长为400nm；流速：1.0mL·min^-1；进样量：25μL；以乙腈-1.0%的冰乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0-50min，9%乙腈→35%乙腈，91%→65%1.0%的冰乙酸水溶液。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪进行测定，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷对照品，分别用甲醇溶解，作为对照品溶液，所述对照品溶液中对照品的浓度为0.1-0.3mg/mL；

色谱条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；柱温：30-40℃；检测器：紫外检测；检测波长为200-400nm；流速：0.8-1.0mL·min^-1；进样量：5-25μL；以乙腈-1.0%的冰乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0-50min，(5-9)%乙腈→(31-35)%乙腈，(95-91)%→(69-65)%1.0%的冰乙酸水溶液。

2.根据权利要求1所述的一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述的色谱条件为：柱温：34-36℃；检测波长为：318-322nm；流速为0.8-0.85mL·min^-1；进样量：11-12μL；所述梯度洗脱为：0-50min，8%乙腈→33%乙腈，92%→67%1.0%的冰乙酸水溶液。

3.根据权利要求1或2所述的一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述对照品溶液中对照品的浓度为0.15-0.3mg/mL。

4.根据权利要求1或2所述的一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述供试品溶液中夏桑菊制剂的浓度为0.1-0.4g/mL。

5.根据权利要求1或2所述的一种夏桑菊制剂特征图谱的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述超声处理的功率为240-260w，功率为33-35kHz。