CN105628798A

CN105628798A - 苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法

Info

Publication number: CN105628798A
Application number: CN201410594590.5A
Authority: CN
Inventors: 萧伟; 杨素德; 王伟; 李家春; 章晨峰
Original assignee: Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-10-29
Filing date: 2014-10-29
Publication date: 2016-06-01

Abstract

本发明公开了苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法，该方法包括供试品溶液的制备、对照指纹图谱的建立和供试液指纹图谱的测定。本发明通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法，可以全面、客观、准确的检测和评价苁蓉总苷胶囊的质量，为保证临床疗效具有重要意义。

Description

苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的质检方法，具体涉及一种苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法。

背景技术

中药指纹图谱是中药基础研究以及新药研发常用的一种研究手段，在中药制剂评价和中药生产的质量控制有广泛应用。肉苁蓉为我国二级保护物种，收载于《国际野生植物保护目录》，药用价值极高，素有“沙漠人参”的美誉，具有补肾阳，益精血，润肠通便的功效，肉苁蓉主要含苯乙醇苷类、环烯醚萜、多糖等成分，其中苯乙醇苷类成分为肉苁蓉补肾益精的主要成分，具抗氧化、神经保护、改善学习记忆、免疫调节等作用。

苁蓉总苷胶囊，为江苏康缘药业股份有限公司生产，具有补肾益髓，健脑益智的功效，用于髓海不足证的轻中度血管性痴呆，主要成分为苯乙醇苷类化合物，为了更好地进行质量控制，很有必要在现有技术的基础之上设计一种能有效、快捷的控制苁蓉总苷胶囊的内在质量的指纹图谱检测方法，为苁蓉总苷胶囊质量评价提供依据。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价苁蓉总苷胶囊的质量，对控制苁蓉总苷胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。

技术方案：为了实现以上技术目的，本发明采取的技术方案为：

苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，其包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：

取苁蓉总苷胶囊内容物，精密称定，加50％甲醇溶解，制成0.2mg/mL的供试品溶液；

(2)高效液相色谱法测定苁蓉总苷胶囊的对照指纹图谱：取15批不同批号的苁蓉总苷胶囊，按步骤(1)方法制备得到供试品溶液，在适当的色谱条件下用高效液相色谱仪测得各批次苁蓉总苷胶囊的指纹图谱，将15批苁蓉总苷胶囊指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)，生成对照指纹图谱；

(3)高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤(1)苁蓉总苷胶囊供试品溶液按步骤(2)相同的色谱条件进样，测得供试品溶液的指纹图谱；

(4)将步骤(3)得到的供试品溶液指纹图谱和步骤(2)得到的对照指纹图谱，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)进行评价，相似度大于0.9。

作为优选方案，以上所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，步骤(4)得到的供试品溶液指纹图谱和步骤(3)得到的对照指纹图谱，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)评价出14个共有指纹峰，具体保留时间，相对保留时间保护范围，见下表：

其中峰7为松果菊苷，设为参照峰。

作为优选方案，以上所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，步骤(2)和步骤(3)中色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：A相为甲醇或乙腈，B相为0.1％甲酸或0.1％的磷酸溶液,梯度洗脱，柱温：30～35℃；流速：0.8～1mL/min；检测波长：300～330nm。

作为更加优选的方案，流动相：A相为甲醇，B相为0.1％甲酸溶液,梯度洗脱，柱温：30℃；流速：1mL/min；检测波长：330nm,进样量：5μl。

作为优选方案，以上所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，所述的梯度洗脱方式如下表所示：

时间/分钟	甲醇/体积百分数	0.1％甲酸/体积百分数
			0～15	18～28	82～72
15～30	28～32	68～72
			30～40	32	68
40～50	32～50	50～68

作为优选方案，以上所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，所述的色谱柱为WatersC₁₈柱。

本发明所述的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法在评价苁蓉总苷胶囊成品质量中的应用。

本发明将供试品指纹图谱与对照指纹图谱经计算机相似度评价软件(选用中国药典委推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”)计算，获得指纹图谱相似度数值，依据相似度数值，应用于苁蓉总苷胶囊的质量控制，以指纹图谱相似度应大于0.90为检验质控标准；本发明提供的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法，用于生产检验，质量控制，所得产品具有较高的质量稳定性，可确保产品安全有效。

本发明提供的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法的最佳条件筛选过程：

1、仪器与试剂

高效液相色谱仪(Ultimate3000；)XP6电子天平(METTLERTOLEDO；)离心机(Centrifuge5415D)；苁蓉总苷胶囊(江苏康缘药业股份有限公司制备)。

试剂：甲醇(色谱纯)，水(超纯水)，其余试剂均为分析纯。

2、流动相种类的筛选

由于苁蓉总苷胶囊活性成分复杂，含有乙醇苷类、环烯醚萜和多糖等成分，本发明通过大量实验筛选了甲醇－水，乙腈－水，甲醇－甲酸水溶液和乙腈－甲酸水溶液体系等流动相，最后通过比较不同流动相的显示峰的数目，分离度和峰形等对比色谱检测结果，最后优选的流动相为：A相为甲醇，B相为0.1％甲酸溶液，各色谱峰分离很好，保留时间适宜，达到指纹图谱信息最大化原则，且重现性和稳定性优，通过优选出流动相之后，为了得到更优的分离效果，本发明通过大量实验筛选梯度洗脱方式，最终得到如下最佳梯度洗脱方式:：

。

3、检测波长的选择

本发明采用二极管阵列检测器，在200nm至400nm范围内扫描，结果表明松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷等14个成分均在在330nm处有最大吸收，提供的化学成分信息量大，因此，本发明优选330nm作为测定波长，可得到理想的色谱图。

4、柱温的选择

本发明分别在20℃、25℃、30℃，35℃和40℃柱温下分析苁蓉总苷胶囊，对比各柱温下的色谱图，实验结果表明，在30℃柱温条件下，色谱峰分离情况最好，柱压也较低，因此，本发明优选30℃为最佳柱温条件。

5、色谱柱的选择

本发明通过大量实验筛选了不同的色谱柱，采用多种不同型号的色谱柱进行测定：

(1)DiamonsilODSC₁₈(250×4.5mm，5μm)；

(2)KromasilC₁₈(250×4.5mm，5μm)；

(3)phenomenexlunaC₁₈(250×4.6mm，5μm)；

(4)AlltimaC₁₈(150×4.6mm，5μm)；

(5)wtatersC₁₈(4.6mm×150mm,5μm)

对比色谱检测结果表明，色谱柱wtatersC₁₈柱(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱可将样品达到基线分离，各色谱峰分离度良好，重现性和稳定性好，可以建立稳定的指纹图谱。

通过上述大量实验筛选，本发明优选得到的最佳色谱条件为：色谱柱wtatersC₁₈柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：A相为甲醇，B相为0.1％甲酸溶液,梯度洗脱，柱温：30℃；流速：1mL/min；检测波长：330nm,进样量：5μl。

一、本发明所述的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法的精密度试验：

取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述权利要求1所述的供试品溶液的制备方法，制备得到供试品溶液，按上述权利要求1所述的高效液相的色谱条件，连续进样6次进行测定。以第1次进样所得指纹图谱做为对照，计算相似度，结果相似度结果均不小于0.95，均符合指纹图谱的技术要求，表明该方法精密度良好。

二、本发明所述的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法的稳定性试验

取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述权利要求1所述的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述权利要求1所述的高效液相的色谱条件，于0、1、2、4、8、12和24小时分别测定一次指纹图谱，共测7次，以0小时进样所得指纹图谱为对照计算相似度，相似度结果均不小于0.98，表明供试品溶液24小时内成分稳定，符合指纹图谱的技术要求，表明本发明检测方法的稳定性好。

三、本发明所述的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法的重复性试验

取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述权利要求1所述的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，同法制备供试品溶液6份，按上述权利要求1所述的高效液相的色谱条件，依法测定，结果计算相似度，相似度结果均不小于0.98，符合指纹图谱的技术要求，表明本发明检测方法的重复性好。

根据以上方法学考察结果，表明该方法测定苁蓉总苷胶囊指纹图谱精密度、重复性、稳定性均较好，可以全面、客观、准确的检测和评价苁蓉总苷胶囊的质量，为保证临床疗效具有重要意义。

有益效果：本发明提供的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法及其原料药材检测方法，具有以下优点：

本发明针对现有技术检测方法的诸多不足，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，梯度洗脱方式，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的指纹图谱检测方法，可建立良好的指纹图谱。采用本发明提供的苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法，可以同时检测苁蓉总苷胶囊中的14个活性成分，从而可以全面、客观、准确的检测和评价苁蓉总苷胶囊的质量，为保证临床疗效具有重要意义。

附图说明

图1为苁蓉总苷胶囊的对照指纹图谱。

图2为苁蓉总苷胶囊供试品指纹图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1苁蓉总苷胶囊对照指纹图谱的建立及应用

1、苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，其包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：

(2)高效液相色谱法测定苁蓉总苷胶囊的对照指纹图谱：取15批不同批号的苁蓉总苷胶囊，按步骤(1)方法制备得到供试品溶液，在适当的色谱条件下用高效液相色谱仪测得各批次苁蓉总苷胶囊的指纹图谱，将15批苁蓉总苷胶囊指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)，生成对照指纹图谱，如图1所示；

(3)高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取15批苁蓉总苷胶囊，按步骤(1)方法制备得到苁蓉总苷胶囊供试品溶液，按步骤(3)相同的色谱条件进样，测得供试品溶液的指纹图谱；如图2所示；

步骤(3)得到的供试品溶液指纹图谱和步骤(2)得到的对照指纹图谱，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)评价出14个共有指纹峰，具体保留时间和相对保留时间，如下表：

其中峰7为松果菊苷，设为参照峰，15批苁蓉总苷胶囊指纹图谱相似度均大于0.9，如表1所示。

表115批苁蓉总苷胶囊指纹图谱相似度数据

批号	相似度	批号	相似度	批号	相似度
						120501	0.975	120502	0.977	120503	0.969
120801	0.988	120802	0.989	120803	0.983
						121001	0.991	121002	0.993	121003	0.995
130701	0.967	130702	0.959	130703	0.955
						131001	0.989	131001	0.983	131002	0.983

步骤(2)和步骤(3)中色谱条件为：色谱柱：规格为4.6mm×150mm,5μm的WatersC₁₈柱；流动相：A相为甲醇，B相为0.1％甲酸溶液,梯度洗脱，柱温：30℃；流速：1mL/min；检测波长：330nm,进样量：5μl。所述的梯度洗脱方式如下表所示：

时间/分钟	甲醇/体积百分数	0.1％甲酸/体积百分数
			0～15	18～28	82～72
15～30	28～32	68～72

30～40	32	68
			40～50	32～50	50～68

。

由以上表1的计算结果表明，各批次苁蓉总苷胶囊指纹图谱相似度较高，均大于0.90，表明生产工艺较稳定，质量均一性好。同时也证明，采用本发明提供的指纹图谱检测方法可以全面客观的反映苁蓉总苷胶囊的质量，为保证临床安全疗效具有重要的意义。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：

(2)高效液相色谱法测定苁蓉总苷胶囊的对照指纹图谱：取15批不同批号的苁蓉总苷胶囊，按步骤(1)方法制备得到供试品溶液，在适当的色谱条件下用高效液相色谱仪测得各批次苁蓉总苷胶囊的指纹图谱，将15批苁蓉总苷胶囊指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，生成对照指纹图谱；

(3)高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤(1)苁蓉总苷胶囊供试品溶液按步骤(3)相同的色谱条件进样，测得供试品溶液的指纹图谱；

(4)将步骤(3)得到的供试品溶液指纹图谱和步骤(2)得到的对照指纹图谱，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行评价，相似度大于0.9。

2.根据权利要求1所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：A相为甲醇或乙腈，B相为0.1％甲酸或0.1％的磷酸溶液,梯度洗脱，柱温：25～35℃；流速：0.8～1mL/min；检测波长：300～330nm。

3.根据权利要求2所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：A相为甲醇，B相为0.1％甲酸溶液,梯度洗脱，柱温：30～35℃；流速：0.8～1mL/min；检测波长：330nm。

4.根据权利要求3所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述的梯度洗脱方式如下表所示：

时间/分钟甲醇/体积百分数 0.1％甲酸/体积百分数 0～15 18～28 82～72 15～30 28～32 68～72 30～40 32 68 40～50 32～50 50～68

5.根据权利要求2所述的苁蓉总苷胶囊的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述的色谱柱为WatersC₁₈柱。