CN101862373A - 一种夏桑菊颗粒的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种夏桑菊颗粒的质量控制方法，该方法包括采用高效液相色谱法测定夏枯草的特征成分迷迭香酸的含量。本发明所建立的薄层色谱和高效液相色谱方法简便，有很好的实用性；建立了夏桑菊颗粒的指纹图谱，有助于对夏桑菊颗粒质量的全面把握，同时指认了主要色谱峰，弥补了夏桑菊颗粒指纹图谱的模糊性，共同组成夏桑菊颗粒的质量标准体系，达到有效控制夏桑菊颗粒质量的目的。
Description
技术领域
本发明属于中药领域，具体是涉及一种夏桑菊颗粒的质量控制方法。
背景技术
夏桑菊颗粒为岭南地区的特色药物，精选夏枯草、桑叶、野菊花，经现代工艺精制加工而成，是《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂(第十五册)收载的第11类中药，具有清肝明目、疏风散热，除湿痹，解疮毒之功效，适用于治疗风热感冒引起的目赤头痛，高血压，头晕耳鸣，咽喉肿痛，疔疮肿毒等症状。
目前，国内外生产夏桑菊颗粒的企业105家。但是，在质量标准研究方面，主要还是集中在定性鉴别方面，如《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂(第十五册)采用薄层色谱法鉴别是否含有熊果酸。在定量方面，黄晓文，谢艳婷，冯嘉欣，谢銮凤采用《HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量》(广东药学院学报，2008年03期)；熊国营，徐君，梁兆昌采用《高效液相色谱法测定夏桑菊颗粒中绿原酸的含量》(江西中医学院学报，2004年06期)；黄淑彰采用《HPLC法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的含量》(现代中药研究与实践，2004年03期)。但是蒙花苷、绿原酸、熊果酸均不是夏桑菊颗粒最主要的有效成分和特征性成分，单独以这些指标不足以说明夏桑菊颗粒的质量，也不能区别市面上众多厂家生产的质量参差不齐的产品。
文献″夏桑菊颗粒指纹图谱的建立及其在质量控制中的应用″(柯雪红，孙维广，姚江雄，花汝凤，陈锦富，中成药2008年07期)及专利号为200710026346.9的中国专利″夏桑菊制剂指纹图谱的建立及指纹图谱″建立了夏桑菊颗粒的指纹图谱，并指认了夏桑菊中的绿原酸。但是该专利指认的成分只有一个，且随着研究的发展，发现绿原酸并不是夏桑菊颗粒的特征性成分，不足以区别夏桑菊颗粒的质量。
进一步研究发现，夏枯草是夏桑菊颗粒中的君药。《中国药典》规定夏枯草的药用部位为果穗，而夏枯草的特征性成分熊果酸、齐墩果酸、迷迭香酸、咖啡酸在夏枯草的根、茎、叶、果穗等不同部位均有一定含量，不能作为《中国药典》规定的夏枯草的药用部位--果穗的特征性成分。
化合物salviaflaside是咖啡酰缩酚酸苷类化合物，其主要药理活性未见报道。[Zhao，Lin Min；He，Wen Yi；Liang，Xiao Tian；Li，Lian Niang.Salviaflaside andsalviaflaside methyl ester two new depsidic glycosides from Salvia flava.ChineseChemical Letters(1996)，7(5)，449-452.]得到化合物salviaflaside，具有如下结构式：
本发明的发明人经过长期的实验分析得出，salviaflaside化合物只存在于夏枯草果穗中，是夏枯草果穗的特征性成分。然而，现有技术中对夏桑菊颗粒的质量控制方法没有针对其君药成分夏枯草，且建立的指纹图谱指认的成分单一，夏桑菊颗粒的质量控制具有模糊性，因此，需要建立一种完善的质量标准体系。
发明内容
本发明的目的是提供一种夏桑菊颗粒的质量控制方法，通过该质量控制方法能够系统地保证夏桑菊颗粒质量的有效性，区别市面上质量参差不齐的夏桑菊颗粒产品。
实现本发明目的技术方案如下：
一种夏桑菊颗粒的质量控制方法，采用高效液相色谱法测定夏枯草的特征成分迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备
精密称取迷迭香酸对照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备
取夏桑菊颗粒，精密称定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，称重，超声15～60min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，其中色谱条件为：
流速：0.5～1.5mL.min-1；
检测波长：325～335nm；
柱温：25～40℃；
流动相：流动相A为乙腈，比例为10～30％，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％～2％的水溶液，比例为90～70％；或流动相A为甲醇，比例为30～40％，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％～1％的水溶液，比例为70～60％；
优选地，所述色谱条件为：
流速：1.0mL.min-1；
检测波长：329nm；
柱温：30℃；
流动相：流动相A为乙腈，比例为20％，流动相B为醋酸体积浓度为1.0％的水溶液，比例为80％；或流动相A为甲醇，比例为35％，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％的水溶液，比例为65％。
优选地，所述夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量不少于1.50mg/10g。
本发明的夏桑菊颗粒的质量控制方法还包括采用薄层色谱法鉴别夏枯草，包括以下步骤：
(1)制备对照品溶液
精密称取迷迭香酸对照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸对照品溶液；
(2)制备供试品溶液
取夏桑菊颗粒，精密称定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，称重，超声15～60min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)点样、展开、显色：
分别吸取对照品溶液、供试品溶液点样于同一薄层板上，以体积比为6～8∶2～4∶0.5～1的氯仿∶甲醇∶甲酸或体积比为6～8∶4～5∶0.5～1的氯仿∶甲醇∶水为展开剂，展开，取出，晾干，用0.5～2％的香草醛浓硫酸显色，加热至斑点清晰；供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选地，所述步骤(3)中的展开剂为体积比为8∶2∶0.5的氯仿∶甲醇∶甲酸或体积比为6∶4∶1的氯仿∶甲醇∶水。
本发明的夏桑菊颗粒的质量控制方法还包括采用高效液相色谱方法建立夏桑菊颗粒的指纹图谱，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备
分别取对照品咖啡酸、绿原酸、salviaflaside、迷迭香酸、蒙花苷适量，加甲醇或乙醇溶解，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备
取夏桑菊颗粒，精密称定，加1～4倍量甲醇或乙醇，称重，超声15～60min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)液相色谱分析
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，其中色谱条件为：
流速：0.5～1.5mL.min-1；
检测波长：280～305nm；
柱温：25～40℃；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为醋酸体积浓度为1％的水溶液，进行梯度洗脱。
优选地，所述色谱条件为：
流速：1.0mL.min-1；
检测波长：290nm；
柱温：30℃；
所述梯度洗脱的程序为：
0～10min，流动相A的比例为5％，流动相B的比例为95％；
10～20min，流动相A的比例由5％到8.6％，流动相B的比例由95％到91.5％；
20～45min，流动相A的比例由8.6％到17.6％，流动相B的比例由91.5％到82.4％；
45～70min，流动相A的比例由17.6％到25.1％，流动相B的比例由82.4％到74.9％；
70～80min，流动相A的比例由25.1％到32.1％，流动相B的比例由74.9％到67.9％；
80～90min，流动相A的比例由32.1％到37.1％，流动相B的比例由67.9％到62.9％。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1.本发明以迷迭香酸为主要指标建立夏桑菊颗粒含量测定和薄层鉴别的质量控制方法，迷迭香酸是夏桑菊颗粒中君药夏枯草的特征成分，同时也是夏桑菊颗粒的有效成分，有利于保证夏桑菊颗粒的有效性；
2.本发明建立的指纹图谱中指认了咖啡酸、绿原酸、salviaflaside、迷迭香酸和蒙花苷，其中咖啡酸、迷迭香酸和salviaflaside是夏桑菊颗粒中君药夏枯草的有效成分，salviaflaside是夏枯草果穗中的特征性成分，只存在于果穗部位，不存在于根、茎、叶等其他部位，可以有效地防止使用夏枯草其他部位冒充果穗入药；本发明建立的指纹图谱弥补了现有夏桑菊颗粒指纹图谱的模糊性；
3.本发明建立的质量控制方法从定性和定量方面系统地保证了夏桑菊颗粒的质量，共同构成夏桑菊颗粒的质量标准体系，从而有效地区分市面上质量参差不齐的夏桑菊颗粒，保证用药的有效性和患者的利益。
附图说明
图1是夏桑菊颗粒的HPLC色谱图；
图2是夏桑菊颗粒的薄层色谱图；
图3是夏桑菊颗粒的指纹图谱；
图4是根据夏桑菊颗粒的指纹图谱建立的夏桑菊颗粒的标准对照图谱。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明。
以下实施例1-6为夏桑菊颗粒中夏枯草的特征成分迷迭香酸的含量测定方法。
实施例1
采用高效液相色谱测定迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
1、对照品溶液制备
精密称取迷迭香酸对照品适量，用甲醇溶解，得浓度为0.22μg/μL的对照品溶液。
2、供试品溶液制备
称夏桑菊颗粒约2.5g，精密称定，加甲醇10mL，称重，超声30min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品。
3、液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
色谱条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
流速：1.0mL.min-1；
检测波长：329nm；
柱温：30℃；
流动相：流动相A为乙腈，比例为20～30％，流动相B为醋酸体积浓度为1.0％的水溶液，比例为80％。
液相色谱所得的图谱见图1，其中A、B、C分别为夏桑菊颗粒样品、迷迭香酸对照品、阴性样品的图谱，峰1为迷迭香酸峰；
4、标准曲线的绘制
分别精密吸取迷迭香酸对照品溶液1，2，3，5，10，15，20，25，30和40μL进样分析，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量(μg)为横坐标(X)，得回归方程：Y＝4541216.83X-411008.21(r＝0.9999)，线性范围为：0.22～8.80μg。
5、精密度试验
按照《中国药典》附录记载的方法，分别精密吸取同一供试品溶液10μL，连续进样6次，按上述色谱条件测定迷迭香酸的峰面积，其RSD为0.50％。
6、稳定性试验
按照《中国药典》附录记载的方法，精密吸取同一供试品溶液10μL，分别在2，4，6，8，10，12，24h进样，按上述色谱条件测定迷迭香酸的峰面积，其RSD为1.01％。
7、重复性试验
按照《中国药典》附录记载的方法，取同一份样品6份，精密称定，按照1项下制备供试品溶液，按上述色谱条件测定迷迭香酸的峰面积，其RSD为0.77％。
8、回收率试验
按照《中国药典》附录记载的方法，取同一批已知含量的夏桑菊颗粒样品约1.25g，精密称定，分别精密加入一定量迷迭香酸对照品溶液，按供试品制备方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，计算回收率。平均回收率为101.08％，RSD为1.75。
9、含量测定结果
分别测定选自广州星群(药业)股份有限公司、广州花城制药厂、四川禾邦制药有限公司、广西亿康药业股份有限公司等厂家的夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量，结果见表1。
表1 不同生产厂家的夏桑菊颗粒中迷迭香酸含量
表1结果表明，所测样品中迷迭香酸的含量差别很大，说明现在市面上流通的夏桑菊颗粒中质量也是参差不齐。考虑到夏桑菊颗粒中主药夏枯草所含的迷迭香酸及保证一定的转移率，为了保证夏桑菊颗粒的质量，夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量应不能少于1.50mg/10g。
实施例2
采用高效液相色谱测定迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
1、对照品溶液制备：同实施例1。
2、供试品溶液制备：称夏桑菊颗粒约2.5g，精密称定，加甲醇10mL，称重，超声60min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品。
3、液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
流速：1.5mL.min-1；
检测波长：335nm；
柱温：25℃；
流动相：流动相A为乙腈，比例为10％，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％的水溶液，比例为90％。
其他步骤同实施例1。
实施例3
采用高效液相色谱测定迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
1、对照品溶液制备：同实施例1。
2、供试品溶液制备：称夏桑菊颗粒约2.5g，精密称定，加甲醇10mL，称重，超声15min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品。
3、液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
流速：0.5mL.min-1；
检测波长：325nm；
柱温：40℃；
流动相：流动相A为乙腈，比例为30％，流动相B为醋酸体积浓度为2％的水溶液，比例为70％。
其他步骤同实施例1。
实施例4
采用高效液相色谱测定迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
1、对照品溶液制备：同实施例1。
2、供试品溶液制备：称夏桑菊颗粒约2.5g，精密称定，加甲醇10mL，称重，超声45min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品。
3、液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
流速：1mL.min-1；
检测波长：328nm；
柱温：30℃；
流动相：流动相A为甲醇，比例为30％，流动相B为醋酸体积浓度为1.0％的水溶液，比例为70％。
其他步骤同实施例1。
实施例5
采用高效液相色谱测定迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
1、对照品溶液制备：同实施例1。
2、供试品溶液制备：称夏桑菊颗粒约2.5g，精密称定，加甲醇10mL，称重，超声45min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品。
3、液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
流速：1.2mL.min-1；
检测波长：330nm；
柱温：30℃；
流动相：流动相A为甲醇，比例为40％，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％的水溶液，比例为60％。
其他步骤同实施例1。
实施例6
采用高效液相色谱测定迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
1、对照品溶液制备：同实施例1。
2、供试品溶液制备：称夏桑菊颗粒约2.5g，精密称定，加甲醇10mL，称重，超声30min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品。
3、液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
流速：1.0mL.min-1；
检测波长：330nm；
柱温：30℃；
流动相：流动相A为甲醇，比例为35％，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％的水溶液，比例为65％。
其他步骤同实施例1。
以下实施例7-10为采用薄层色谱法鉴别夏桑菊颗粒中的夏枯草。
实施例7
采用薄层色谱法鉴别夏桑菊颗粒中的夏枯草，包括以下步骤：
1、对照品溶液的制备
取对照品迷迭香酸，加甲醇溶解，配置成浓度分别为0.3074mg/mL的对照品溶液。
2、供试品溶液的制备
分别取夏桑菊颗粒样品及同法制成的缺夏枯草阴性样品各10g，加甲醇15ml，超声30min，取出，静置，放凉，补重，滤过，作为供试品溶液。
3、点样、展开、显色
分别吸取对照品溶液、供试品溶液点样于同一薄层板上，以体积比为8∶2∶0.5的氯仿∶甲醇∶甲酸展开剂，展开，取出，晾干，用1％香草醛浓硫酸显色，加热至斑点清晰，得夏桑菊颗粒薄层色谱，见图2。其中1～13为夏桑菊颗粒样品，14为缺夏枯草的夏桑菊颗粒阴性样品。
从图2可以看出，供试品色谱中，在对照品色谱的相应位置上，有相同颜色的斑点，而阴性对照没有相应斑点；迷迭香酸仅存在于夏桑菊颗粒组成君药夏枯草之中，而桑叶和野菊花中没有该化合物，指标专属性强。因此，该方法不仅简单，易重复，而且具有明显的实用性，可以作为夏桑菊颗粒的质量标准之一。
实施例8
采用薄层色谱法鉴别夏桑菊颗粒中的夏枯草，包括以下步骤：
1、对照品溶液的制备：同实施例7。
2、供试品溶液的制备
分别取夏桑菊颗粒样品及同法制成的缺夏枯草阴性样品各10g，加甲醇15ml，超声15min，取出，静置，放凉，补重，滤过，作为供试品溶液；
3、点样、展开、显色
分别吸取对照品溶液、供试品溶液点样于同一薄层板上，以体积比为7∶3∶1的氯仿∶甲醇∶甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，用0.5％香草醛浓硫酸显色，加热至斑点清晰，得夏桑菊颗粒的薄层色谱。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例9
采用薄层色谱法鉴别夏桑菊颗粒中的夏枯草，包括以下步骤：
1、对照品溶液的制备：同实施例7。
2、供试品溶液的制备
分别取夏桑菊颗粒样品及同法制成的缺夏枯草阴性样品各10g，加甲醇15ml，超声60min，取出，静置，放凉，补重，滤过，作为供试品溶液；
3、点样、展开、显色
分别吸取对照品溶液、供试品溶液点样于同一薄层板上，以体积比为6∶4∶1的氯仿∶甲醇∶水为展开剂，展开，取出，晾干，用1.5％香草醛浓硫酸显色，加热至斑点清晰，得夏桑菊颗粒的薄层色谱。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例10
采用薄层色谱法鉴别夏桑菊颗粒中的夏枯草，包括以下步骤：
1、对照品溶液的制备：同实施例7。
2、供试品溶液的制备
分别取夏桑菊颗粒样品及同法制成的缺夏枯草阴性样品各10g，加甲醇15ml，超声45min，取出，静置，放凉，补重，滤过，作为供试品溶液；
3、点样、展开、显色
分别吸取对照品溶液、供试品溶液点样于同一薄层板上，以体积比为6∶5∶0.5的氯仿∶甲醇∶水为展开剂，展开，取出，晾干，用2％香草醛浓硫酸显色，加热至斑点清晰，得夏桑菊颗粒薄层色谱。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例11 夏桑菊颗粒的指纹图谱的建立
采用高效液相色谱法建立夏桑菊颗粒的指纹图谱，包括以下步骤：
1、对照品溶液制备
分别取对照品绿原酸，芦丁，木犀草苷，salviaflaside，迷迭香酸，蒙花苷适量，加甲醇溶解，作为对照品溶液。
2、供试品溶液制备
取夏桑菊颗粒约5g，精密称定，加甲醇10mL，称重，超声30min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品。
3、色谱条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
流速：1.0mL.min-1；
检测波长：290nm；
柱温：30℃；
进样体积：10μL；
流动相：流动相A：乙腈；流动相B：醋酸体积浓度为1.0％的水溶液，进行系统梯度洗脱，梯度见表2。
表2 流动相系统梯度
4、精密度
取供试品一份，按照3的色谱分析条件，连续进样6次，计算保留时间及峰面积的精密度，结果表明实施例7方法的精密度符合要求，其RSD值小于5％
5、重现性
平行制备6份药材供试品溶液，进行分析，以主要成分峰面积为标准，考察方法重现性，其RSD值小于5％，表明该实施例方法的重现性在误差范围内。
6、稳定性
制备的供试品溶液，在室温下放置不同时间，进行分析，以主要成分的峰面积计算，考察样品的稳定性，其RSD值小于5％，表明样品至少在48h内是稳定的。
7、夏枯草药材的指纹图谱
按照上述色谱条件，将18个厂家的夏桑菊颗粒制成供试品溶液进样分析，得到夏桑菊颗粒的指纹图谱，见图3，指纹图谱中共有19个色谱峰作为共有峰。其中色谱峰2号、4号、11号、15号和18号分别为咖啡酸，绿原酸，salviaflaside，迷迭香酸和蒙花苷。11号色谱峰来源于夏枯草果穗中的特征成分，15号为夏桑菊颗粒中最主要的色谱峰，也来源夏枯草，因此均是影响夏枯草药材质量的关键峰。这19个色谱峰的保留时间见表3，平均保留时间见表4，以15号峰的保留时间为标准，其他色谱峰的保留时间与之相比，从而求得各色谱峰的相对保留时间值，见表5；共有峰的平均峰面积见表6，相对峰面积见表7。
表3 19个色谱峰的保留时间
表4 色谱峰的平均保留时间
表5 色谱峰的相对保留时间
表6 色谱峰平均峰面积
表7 色谱峰相对峰面积
8、用相似度软件对夏桑菊颗粒指纹图谱的处理
通过药典会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，建立夏桑菊颗粒的标准对照图谱，见图4。各特征峰的平均保留时间分别为：5.47min、8.24min、10.28min、13.07min、17.10min、22.94min、25.74min、38.15min；46.58min、47.02min、50.29min、51.82min、54.32min、57.82min、58.50min、61.31min、71.49min、71.93min、80.69min，其中平均保留时间为8.24min、13.07min、50.29min、58.50min、71.93min的2号、4号、11号、15号和18号分别为咖啡酸，绿原酸，salviaflaside，迷迭香酸和蒙花苷。其中11号色谱峰来源于夏枯草果穗中的特征成分，15号为夏桑菊颗粒中最主要的色谱峰，也来源夏枯草，因此均是影响夏枯草药材质量的关键峰。
本发明建立的夏桑菊颗粒的指纹图谱，其方法稳定、可靠，辅以夏桑菊颗粒主要色谱峰的指认，可以作为夏桑菊颗粒的质量标准之一。
Claims (7)
1.一种夏桑菊颗粒的质量控制方法，其特征是，采用高效液相色谱法测定夏枯草的特征成分迷迭香酸的含量，包括以下步骤：
(1)制备对照品溶液
精密称取迷迭香酸对照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸对照品溶液；
(2)制备供试品溶液
取夏桑菊颗粒，精密称定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，称重，超声15～60min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)液相色谱测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，其中色谱条件为：
流速：0.5～1.5mL.min-1；
检测波长：325～335nm；
柱温：25～40℃；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％～2％的水溶液，流动相A和B的比例分别为10～30％和90～70％；或流动相A为甲醇，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％～1％的水溶液，流动相A和B的比例分别为30～40％和70～60％。
2.根据权利要求1所述的夏桑菊颗粒的质量控制方法，其特征是，所述色谱条件为：
流速：1.0mL.min-1；
检测波长：329nm；
柱温：30℃；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为醋酸体积浓度为1.0％的水溶液，流动相A和B的比例分别为20％和80％；或流动相A为甲醇，流动相B为醋酸体积浓度为0.5％的水溶液，流动相A和B的比例分别为35％和65％。
3.根据权利要求1或2所述的夏桑菊颗粒的质量控制方法，其特征是，所述夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量不少于1.50mg/10g。
4.根据权利要求1所述的夏桑菊颗粒的质量控制方法，其特征是，还包括采用薄层色谱法鉴别夏枯草，包括以下步骤：
(1)制备对照品溶液
精密称取迷迭香酸对照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸对照品溶液；
(2)制备供试品溶液
取夏桑菊颗粒，精密称定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，称重，超声15～60min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)点样、展开、显色：
分别吸取对照品溶液、供试品溶液点样于同一薄层板上，以体积比为6～8∶2～4∶0.5～1的氯仿∶甲醇∶甲酸或体积比为6～8∶4～5∶0.5～1的氯仿∶甲醇∶水为展开剂，展开，取出，晾干，用0.5～2％的香草醛浓硫酸显色，加热至斑点清晰；供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.根据权利要求4所述的夏桑菊颗粒的质量控制方法，其特征是，所述步骤(3)中的展开剂为体积比为8∶2∶0.5的氯仿∶甲醇∶甲酸或体积比为6∶4∶1的氯仿∶甲醇∶水。
6.根据权利要求1所述的夏桑菊颗粒的质量控制方法，其特征是，还包括采用高效液相色谱方法建立夏桑菊颗粒的指纹图谱，包括以下步骤：
(1)制备对照品溶液
分别取对照品咖啡酸、绿原酸、salviaflaside、迷迭香酸、蒙花苷适量，加甲醇或乙醇溶解，作为对照品溶液；
(2)制备供试品溶液
取夏桑菊颗粒，精密称定，加1～4倍量甲醇或乙醇，称重，超声15～60min，取出，静置，放凉，补重，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)液相色谱分析
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，其中色谱条件为：
流速：0.5～1.5mL.min-1；
检测波长：280～305nm；
柱温：25～40℃；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为醋酸体积浓度为1％的水溶液，进行梯度洗脱。
7.根据权利要求6所述的夏桑菊颗粒的质量控制方法，其特征是，所述色谱条件为：
流速：1.0mL.min-1；
检测波长：290nm；
柱温：30℃；
所述梯度洗脱的程序为：
0～10min，流动相A的比例为5％，流动相B的比例为95％；
10～20min，流动相A的比例由5％到8.6％，流动相B的比例由95％到91.5％；
20～45min，流动相A的比例由8.6％到17.6％，流动相B的比例由91.5％到82.4％；
45～70min，流动相A的比例由17.6％到25.1％，流动相B的比例由82.4％到74.9％；
70～80min，流动相A的比例由25.1％到32.1％，流动相B的比例由74.9％到67.9％；
80～90min，流动相A的比例由32.1％到37.1％，流动相B的比例由67.9％到62.9％。
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