CN102058829A - 一种药物组合物及其制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了中药安脑丸及其配方原料制成的制剂的检测方法。本发明检测方法包括鉴别和/或含量测定方法，其中鉴别方法为胆酸、猪去氧胆酸的鉴别、黄连的鉴别、栀子苷的鉴别和黄芩苷的鉴别中的一种或几种，含量测定方法为栀子苷、黄芩苷、黄连、薄荷脑和冰片含量测定方法中的一种或几种。本发明所述检测方法均表现良好的线性关系、精密度、稳定性、重现性和回收率，对于严格控制安脑丸及其制剂的质量具有重要意义。

Description

一种药物组合物及其制剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物的检测方法，特别涉及安脑丸及其制剂的检测方法。

背景技术

安脑丸是记载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册77页的中药处方，标准编号为WS3-B-2517-97，标准中记载了安脑丸的处方包括：人工牛黄、猪胆粉、朱砂、冰片、水牛角浓缩粉、珍珠、黄芩、黄连、栀子、雄黄、郁金、石膏、赭石、珍珠母和薄荷脑；专利号为93100258.3专利申请公开了安脑丸的处方用量配比关系，及其常规制备工艺；现有资料公开安脑丸具有清热解毒、醒脑安神、豁痰开窍、镇惊熄风的功效，如今是一种常用的治疗急性炎症引发的高热不退、神志昏迷的临床用药。

部颁标准中记载了安脑丸的质量控制方法为胆酸、猪去氧胆酸的鉴别方法及黄连中盐酸小檗碱的鉴别方法。上述两种定性检测方法不能全面保证该处方产品的质量，缺乏定量的检测方法或针对该处方法一套质量检测方法体系，才能全面保证该处方产品的质量。而且该处方中含有毒性原料，如：雄黄、朱砂等，其中毒性成分的含量须有一定限度，这也将是本处方产品质量检测方法的关键所在，否则将会危及患者的生命。因此，研究一套针对安脑丸及其其他制剂的质量检测方法体系将是该处方亟待解决的问题。

发明内容

本发明目的在于公开中药安脑丸及其配方原料制成的制剂的检测方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明检测方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种：

鉴别包括如下方法中的一种或几种：

A.胆酸、猪去氧胆酸的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，加硅藻土0.5-1.5g，研匀，加乙醇10-30ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5-1.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸为10-20∶5-10∶2-8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液(即：8-12ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在100-110℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B.黄连的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/3-2/3，粉碎，加甲醇5-15ml，置水浴上加热回热0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液作为供试试品溶液；

对照药材溶液的制备：另取黄连对照药材30-70mg，加甲醇3-7ml，超声处理10-20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2-0.7mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为8-12∶5-10∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

C.栀子苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，加硅藻土0.5-1.5g，研匀，加乙醚10-30ml，超声处理3-7分钟，滤过，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，加乙酸乙酯20-40ml，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-1.5mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为8-12∶5-10∶1-3∶0.3-0.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液(即：8-12ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D.黄芩苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，加甲醇5-15ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点；

含量测定包括如下方法中的一种或几种：

A.栀子苷的含量测定：

照高效液相色谱法(附录VI D)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为10-15∶85-90或正丁醇-甲醇--水-磷酸为10-15∶30-50∶30-40∶0.3-0.5或正丁醇-水-磷酸为50--70∶30-40∶0.3-0.5作为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含20-40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，置100ml量瓶中，加入20-60％乙醇或丙酮-20-60％乙醇为1∶1的混合液80-90ml，加2-3％盐酸调PH2-3，超声提取10-15分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加氢氧化钠调PH＝7，滤过，滤液加乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含栀子苷(C₁₇H₂₄O₁₀)0.6-6mg或不得少于3.6mg；

B.黄芩苷的含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为10-15∶85-90或正丁醇-甲醇--水-磷酸为10-15∶30-50∶30-40∶0.3-0.5或正丁醇-水-磷酸为50--70∶30-40∶0.3-0.5或甲醇-水-磷酸＝40-50∶50-60∶0.1-0.3作为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500；

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含40-80μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，置100ml量瓶中，加入80-90％乙醇80-90ml，调PH＝7，超声提取10-15分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加2-3％盐酸3-5ml，搅匀，再加入氢氧化钠调PH＝7，静置20-30分钟，滤过；滤液加80-90％乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，净黄芩、酒黄芩含黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)不得少于8.0％；本发明每日用制剂量含黄芩苷不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

C.黄连的含量测定：

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，置100ml量瓶中，加入1-3％盐酸60-80ml，超声提取10-15分钟，滤过；滤液加1-2％盐酸乙醇溶液(即：1-2ml盐酸与100ml乙醇的混合液)至刻度，于40-50℃下水浴中加热10-20分钟，滤过；滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.02-0.06mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液1μl、对照品溶液1μl与3μl，交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为5-7∶1-3∶1-2∶1-2∶1或正丁醇-冰乙酸-甲醇-水为5-7∶0.8-1∶1-1.5∶0.5-1.5为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，展开8-15厘米，取出，挥干，照薄层色谱法(附录VIB薄层扫描法)进行荧光扫描，波长λ＝356-366nm，测量供试品与对照品荧光强度的积分值，计算，即得；每日用制剂量含小檗碱以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于0.8mg-8mg或不得少于3.2mg；

D.薄荷脑和冰片的含量测定

照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VIE)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱：HP-INNOWax毛细管色谱柱(30m*0.32mm*0.25μm)；检测器温度240℃；气化室温度240℃；柱温为程序升温，初始温度为150℃，保持4分钟，以每分钟8℃的速率升温至200℃；理论板数按丁香酚峰计算应不低于5000；

内标溶液的制备：取丁香酚，加乙酸乙酯制成每1ml含0.3-0.7mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；

校正因子测定：另取冰片对照品10-30mg，薄荷脑对照品5-15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，精密称定，加硅藻土2-4g，精密称定，研匀后，取1-3g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10-20ml与水0.5-1.5ml，密塞，摇匀，称定重量，浸渍过夜，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含冰片(C₁₀H₁₈O)不得少于8-12mg；含薄荷脑(C₁₀H₂₀O)不得少于6.4-9.6mg。

其中，鉴别优选包括如下方法中的一种或几种：

A.胆酸、猪去氧胆酸的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加硅藻土1g，研匀，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸为15∶7∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液(即：10ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B.黄连的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/2，粉碎，加甲醇10ml，置水浴上加热回热1小时，放冷，滤过，滤液作为供试试品溶液；

对照药材溶液的制备：另取黄连对照药材50mg，加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶7∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

C.栀子苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加硅藻土1g，研匀，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为10∶7∶2∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液(即：10ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D.黄芩苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点。

其中，含量测定优选包括如下方法中的一种或几种：

A.栀子苷的含量测定：

照高效液相色谱法(附录VI D)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为12∶32∶35∶0.4或正丁醇-水-磷酸为60∶35∶0.4作为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入40％乙醇或丙酮-40％乙醇为1∶1的混合液85ml，加3％盐酸调PH2-3，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加氢氧化钠调PH＝7，滤过，滤液加乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含栀子苷(C₁₇H₂₄O₁₀)不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

B.黄芩苷的含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为12∶40∶35∶0.4或正丁醇-水-磷酸为60∶35∶0.4或甲醇-水-磷酸＝45∶55∶0.2作为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500；

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入85％乙醇85ml，调PH＝7，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加3％盐酸4ml，搅匀，再加入氢氧化钠调PH＝7，静置25分钟，滤过；滤液加85％乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，净黄芩、酒黄芩含黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)不得少于8.0％；本发明每日用制剂量含黄芩苷不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

C.黄连的含量测定：

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入2％盐酸70ml，超声提取12分钟，滤过；滤液加1-2％盐酸乙醇溶液(即：1-2ml盐酸与100ml乙醇的混合液)至刻度，于45℃下水浴中加热15分钟，滤过；滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液1μl、对照品溶液1μl与3μl，交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为6∶2∶1.5∶1.5∶1或正丁醇-冰乙酸-甲醇-水为6∶0.9∶1.2∶1为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，展开12厘米，取出，挥干，照薄层色谱法(附录VI B薄层扫描法)进行荧光扫描，波长λ＝356-366nm，测量供试品与对照品荧光强度的积分值，计算，即得；每日用制剂量含小檗碱以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于0.8mg---8mg或不得少于3.2mg；

D.薄荷脑和冰片的含量测定

照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱：HP-INNOWax毛细管色谱柱(30m*0.32mm*0.25μm)；检测器温度240℃；气化室温度240℃；柱温为程序升温，初始温度为150℃，保持4分钟，以每分钟8℃的速率升温至200℃；理论板数按丁香酚峰计算应不低于5000；

内标溶液的制备：取丁香酚，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；

校正因子测定：另取冰片对照品20mg，薄荷脑对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，精密称定，加硅藻土3g，精密称定，研匀后，取2g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液15ml与水1ml，密塞，摇匀，称定重量，浸渍过夜，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含冰片(C₁₀H₁₈O)不得少于8-12mg；含薄荷脑(C₁₀H₂₀O)不得少于6.4-9.6mg。

本发明安脑丸配方制剂的原料药组成为：

人工牛黄0.5-2重量份  猪胆粉7-20重量份  黄连5-15重量份

黄芩5-15重量份   珍珠1-5重量份       栀子5-15重量份

郁金5-15重量份   赭石2-6重量份       雄黄3-9重量份

朱砂2-6重量份    薄荷脑0.5-2重量份   石膏5-12重量份

冰片0.5-4重量份  水牛角浓缩粉7-20重量份

珍珠母2-8重量份。

本发明安脑丸配方制剂的原料药组成优选为：

人工牛黄1重量份  猪胆粉13重量份       黄连10重量份

黄芩10重量份     珍珠3重量份          栀子10重量份

郁金10重量份     赭石4重量份          雄黄6重量份

朱砂4重量份      薄荷脑1重量份        石膏8重量份

冰片2重量份      水牛角浓缩粉13重量份 珍珠母5重量份。

本发明安脑丸配方制剂的原料药组成优选为：

人工牛黄0.7重量份 猪胆粉18重量份       黄连6重量份

黄芩14重量份      珍珠2重量份          栀子14重量份

郁金6重量份       赭石5重量份          雄黄4重量份

朱砂5重量份       薄荷脑0.7重量份      石膏11重量份

冰片1重量份       水牛角浓缩粉18重量份 珍珠母3重量份。

本发明安脑丸配方制剂的原料药组成优选为：

人工牛黄1.8重量份 猪胆粉9重量份        黄连14重量份

黄芩6重量份       珍珠4重量份          栀子6重量份

郁金14重量份      赭石3重量份          雄黄8重量份

朱砂3重量份       薄荷脑1.8重量份      石膏6重量份

冰片3.5重量份     水牛角浓缩粉9重量份  珍珠母7重量份。

本发明所述的质量检测方法中的安脑丸配方制剂是取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。

本发明所述的质量检测方法中的安脑丸配方制剂也可以由如下方法中的一种或几种制备而成：

工艺1：由如下步骤A、B、C、D和E组成

步骤A：制备中间体I

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0～1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30％-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0～1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

步骤B：制备中间体II

B1：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B2：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.0～1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B3：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末；

或B4：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，，分别加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.0～1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末；

步骤C：制备中间体III

C1：取猪胆粉和雄黄碎成细粉，混合，加入3-5％氢氧化钠4-8重量倍，静置12-48小时，过滤，滤液调PH值至3-5，浓缩，加入30-80％乙醇8-15重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体III；或干燥后得中间体III的粉末；

或C2：取猪胆粉碎成细粉，加入3-5％氢氧化钠4-8重量倍，静置12-48小时，过滤，滤液调PH值至3-5，浓缩，加入30-80％乙醇8-15重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得猪胆粉提取物，或干燥后得猪胆粉提取物粉末；取雄黄粉碎成细粉，加入4-8重量倍5-10％盐酸，静置8-24小时，过滤，滤液调PH值至3-5，浓缩，加入水洗至无色，即得雄黄提取物，或干燥后得雄黄提取物粉末；将猪胆粉提取物与雄黄提取物混合，得中间体III或得中间体III的粉末；

步骤D：制备药粉

D1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，混合得药粉；

或D2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加5-8重量倍水研至糊状，再按1∶60--70加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复3-6次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于25-45℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉；

步骤E：制剂

将中间体I、II、III或中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成药学上可接受的剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。

其中步骤A优选如下方法：

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

其中步骤B优选如下方法：

B1：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B2：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B3：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末；

或B4：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末。

其中步骤C优选如下方法：

C1：取猪胆粉和雄黄碎成细粉，混合，加入4％氢氧化钠6重量倍，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入50％乙醇12重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体III；或干燥后得中间体III的粉末；

或C2：取猪胆粉碎成细粉，加入4％氢氧化钠6重量倍，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入50％乙醇12重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得猪胆粉提取物，或干燥后得猪胆粉提取物粉末；取雄黄粉碎成细粉，加入6重量倍8％盐酸，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入水洗至无色，即得雄黄提取物，或干燥后得雄黄提取物粉末；将猪胆粉提取物与雄黄提取物混合，得中间体III或得中间体III的粉末。

其中步骤D优选如下方法：

D1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，混合得药粉；

或D2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加6重量倍水研至糊状，再按1∶65加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复4次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于35℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉。

其中，上述任何步骤均可由常规方法替代。

其中，上述大孔树脂柱型号均为：YPR-II，X5，AB-8，HPD-100，DX-5，D101，DA201，DM130，WLD-3或NKA-9。

本发明安脑丸及其制剂的制备方法还可以为如下方法：

工艺2：由如下步骤A、B、C和D组成

步骤A：制备中间体I

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0～1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30％-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0～1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

步骤B：制备中间体II

B1：将原料药水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠、珍珠母、猪胆粉和雄黄粉碎成细粉，混合，加入4-10重量倍的30-80％乙醇，40-60℃温浸12-48小时，过滤，取滤液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

步骤C：制备药粉

C1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，混合得药粉；

或C2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加5-8重量倍水研至糊状，再按1∶60--70加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复3-6次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于25-45℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉；

步骤D：制剂

将中间体I、II或中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成药学上可接受的剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。

其中步骤A优选如下方法：

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

其中步骤B优选如下方法：

B1：将原料药水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠、珍珠母、猪胆粉和雄黄粉碎成细粉，混合，加入7重量倍的50％乙醇，50℃温浸24小时，过滤，取滤液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末。

其中步骤C优选如下方法：

C1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，分别或混合得药粉；

或C2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加6重量倍水研至糊状，再按1∶65加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复4次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于35℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉。

其中，上述任何步骤均可由常规方法替代。

其中，上述大孔树脂柱型号均为：YPR-II，X5，AB-8，HPD-100，DX-5，D101，DA201，DM130，WLD-3或NKA-9。

本发明药物组合物检测方法可以应用于组合物的各种剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂等临床可接受的剂型，由于不同剂型的制剂其中所含的相当生药量是相同的，因此各个剂型在进行检测时，所选用样品量可统一折算为日用制剂量为计量单位，每单位制剂可以为每片、每粒、每支或每丸等。

附图说明

图1：供试品和对照品色谱分离图

图2：标准曲线

图3：阴性对照色谱图

本发明检测方法经实验表明均表现良好的线性关系、精密度、稳定性、重现性和回收率。

下述实验例或实施例进一步说明但不限于本发明。

实验例1 黄芩苷含量测定方法学试验

(1)仪器与试药

仪器：Agilent_1100高效液相色谱仪，包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，二级管陈列检测器(DAD检测器)，Agilent_Chemistation数据处理系统。

试药：正丁醇、甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯，黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供)。

(2)色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18，200×4.6mm ID，5μm；流动相分别以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为15∶35∶40∶0.4或正丁醇-水-磷酸为60∶35∶0.4或甲醇-水-磷酸＝45∶58∶0.2作为流动相：检测波长：280nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min；进样体积；10μl；自动进样，数据处理定量方法：外标峰面积法。

(3)检测波长选定

按上述色谱条件对对照品进行光谱分析，乙腈-水或甲醇-水-磷酸流动相时黄芩苷在280nm处有最大吸收，在正丁醇-甲醇--水-磷酸或正丁醇-水-磷酸为流动相时在276nm处有最大吸收，故选276nm或280nm为黄芩苷检测波长。样品黄芩苷峰的光谱图与对照品一致。

(4)对照品溶液，供试品溶液与阴性样品溶液的制备：

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明片剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入85％乙醇85ml，调PH＝7，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加3％盐酸4ml，搅匀，再加入氢氧化钠调PH＝7，静置25分钟，滤过；滤液加85％乙醇至刻度，摇匀，即得；

阴性样品溶液的制备：取不含黄芩的阴性样品2g，精密称定，同供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。

(5)空白试验及色谱图

分别吸取黄芩苷对照品溶液、本发明片剂供试品溶液及阴性样品溶液，注入高效液相色谱仪进行分析，实验结果表明阴性样品溶液对黄芩苷的含量测定没有干拢。

(6)线性关系考察

精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1248mg的溶液，再用甲醇分别稀释成0.04352mg/ml、0.07252mg/ml、0.08703mg/ml、0.11604mg/ml的溶液.分别取10μl注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件进行测定，以浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积的积分值(Mau)为纵坐标，绘制标准曲线，Y＝2.689×104X+2.3264×10-1，V＝0.99996.表明黄芩苷浓度在0.04352～0.14500mg/ml范围内具有良好的线性关系，结果见表1。

表1 黄芩苷线性考察

(7)、精密度实验

分别精密吸取黄芩苷对照品溶液10μl，连续重复进样9次，测得黄芩苷峰面积，结果见表2，表明精密度良好。

表2精密度试验

(8)稳定性试验

取供试品溶液，分别在制备后0、6、12、18、24小时测定黄芩苷的含量，测定结果见表3。结果表明在24小时内样品基本稳定。

表3 稳定性试验结果

(9)重现性实验

取同一批号(0801020)样品片剂2g，共5份，照前述方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μl，进行HPLC分析，结果见表4，表明重现性良好。

表4 重现性试验

(10)回收率试验

采用加样回收法，取已知含量的同一批样品(批号0801020，黄芩苷含量1.83486mg/g)，精密称取样品5份，各1g，分别加入黄芩苷0.04618mg/ml，按前述含量测定方法进行测定，计算回收率，结果平均回收率为101.6％。

(11)样品测定

分别对三批样品按本发明黄芩苷含量测定方法进行测定，结果见表5，根据测定结果，规定每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于0.6mg.

表5 3批样品黄芩苷的含量测定

上述实验为流动相为正丁醇-水-磷酸的数据，用同样试验方法分别考察乙腈-水或正丁醇-甲醇--水-磷酸或甲醇-水-磷酸作为流动相时，各流动相均能有理想的线性关系、精密度、稳定性、重现性和回收率。

实验例2 栀子苷含量测定方法学试验

1、仪器与试药

仪器：Agilent_1100高效液相色谱仪，包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，二级管陈列检测器(DAD检测器)，Agilent_Chemistation数据处理系统。

试药：正丁醇、甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯，黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供)。

2、色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18，200×4.6mm ID，5μm；以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为14∶36∶37∶0.4为流动相时栀子苷在280nm处有最大吸收，以正丁醇-水-磷酸为65∶32∶0.4为流动相时在276nm处有最大吸收，故选276nm或280nm为栀子苷检测波长。样品栀子苷峰的光谱图与对照品一致。

3、对照品溶液，供试品溶液与阴性样品溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明片剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入40％乙醇或丙酮-40％乙醇为1∶1的混合液85ml，加3％盐酸调PH2-3，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加氢氧化钠调PH＝7，滤过，滤液加乙醇至刻度，摇匀，即得；

阴性样品溶液的制备：取不含黄芩的阴性样品2g，精密称定，同供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。

4、空白试验及色谱图

分别吸取栀子苷对照品溶液、本发明片剂供试品溶液及阴性样品溶液，注入高效液相色谱仪进行分析，实验结果表明阴性样品溶液对栀子苷的含量测定没有干拢。

5、线性关系考察

精密称取在60℃减压干燥4小时的栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1248mg的溶液，再用甲醇分别稀释成0.04352mg/ml、0.07252mg/ml、0.08703mg/ml、0.11604mg/ml的溶液.分别取10μl注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件进行测定，以浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积的积分值(Mau)为纵坐标，绘制标准曲线，栀子苷浓度在0.02342～0.14500mg/ml范围内具有良好的线性关系，结果见表6。

表6 栀子苷线性考察

6、精密度试验

分别精密吸取栀子苷对照品溶液10μl，连续重复进样9次，测得峰面积，结果见表7，表明精密度良好。

表7 精密度试验

7、稳定性试验

取供试品溶液，分别在制备后0、6、12、18、24小时测定栀子苷的含量，测定结果见表8。结果表明在24小时内样品基本稳定。

表8 稳定性试验结果

8、重现性实验

取同一批号(0801020)样品片剂2g，共5份，照前述方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μl，进行HPLC分析，结果见表9，表明重现性良好。

表9 重现性试验

9、回收率试验

采用加样回收法，取已知含量的同一批样品(批号0801020，栀子苷含量1.7335mg/g)，精密称取样品5份，各1g，分别加入栀子苷0.04618mg/ml，按前述含量测定方法进行测定，计算回收率，结果平均回收率为101.6％。

10、样品测定

分别对三批样品按正文栀子苷含量测定方法进行测定，结果见表10，根据测定结果，规定每片含栀子以栀子苷(C₁₇H₂₄O₁₀)计，不得少于0.6mg.

表10 3批样品栀子苷的含量测定

上述实验为正丁醇-甲醇--水-磷酸的数据，用同样试验方法考察乙腈-水或正丁醇-水-磷酸为流动相均能有理想的线性关系、精密度、稳定性、重现性和回收率。

实验例3 冰片、薄荷脑含量测定方法学试验

1.仪器与材料

1.1仪器

美国VARIAN CP-3800；色谱柱：HP-INNOWax毛细管色谱柱(30m*0.32mm*0.25μm)；BP211D电子天平。

1.2材料

冰片对照品(中国药品检定所，批号110743-200504)；薄荷脑对照品(中国药品检定所，批号0728-200005)；丁香酚对照品(中国药品检定所，批号725-200209)；醋酸乙酯(天津市化学试剂一厂)；样品均为本发明片剂。

1.3色谱条件

色谱柱：HP-INNOWax毛细管色谱柱(30m*0.32mm*0.25μm)；检测器温度240℃；气化室温度：240℃；升温程序：150℃(4min)-(8℃/min)-200℃-(200℃/min)-240℃(4min)；载气：高纯氮；载气流速2.0ml/min；分流比约为：20∶1；进样量：1μl。色谱分离情况良好，见图1。

2.内标溶液的制备：取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。

3.对照品溶液的制备：取冰片对照品20mg，薄荷脑对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度。

4.供试品溶液的制备：取重量差异项下的本发明片剂1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理10分钟，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，即得。

5.准确度

精密称取0.75g供试品(批号060307)6份，分别精密加入一定量的冰片、薄荷脑对照品，按供试品溶液的制备项下的方法进行测定，结果见表11，表12。冰片回收率为102.55％，RSD为1.8％；薄荷脑回收率为101.01％，RSD为2.0％，表明回收率良好。

表11 冰片准确度试验结果

表12 薄荷脑准确度试验结果

6.精密度

6.1仪器精密度

取对照品溶液，重复进样5次，计算冰片与内标物、薄荷脑与内标物的色谱峰面积比值的RSD分别为0.7％和1.4％，结果见下表13。表明仪器精密度良好。

表13 仪器精密度试验结果

6.2重复性

取约1.5g供试品6份，精密称定，按供试品溶液的制备项下的方法进行测定，结果见下表14。结果RSD分别为2.4％和2.7％，表明重复性良好。

表14 重复性试验结果

7.线性

7.1冰片和薄荷脑对照品溶液的制备：取冰片对照品20mg，薄荷脑对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度。

7.2内标溶液配制：取丁香酚适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。

7.3线性范围：精密吸取对照品溶液0.3μl、0.5μl、1μl、2μl、3μl，注入气相色谱仪，记录峰面积，以对照品的峰面积为横坐标，对照品的进样量为纵坐标，分别计算冰片、薄荷脑的线性回归方程，见附图2。冰片：Y＝0.00000115x-0.0197，r＝0.9995，线性范围(0.26436～2.6435)μg；薄荷脑：Y＝0.00000116x-0.02，r＝0.9996，线性范围(0.1152～1.152)μg；表明在浓度范围内呈良好的线性关系。

8.样品稳定性

取约1.5g供试品，精密称定，按供试品溶液的制备项下的方法进行制备，放置室温，分别在2h、4h、6h、8h、24h、进行测定，计算，结果见下表15。结果RSD分别为0.4％和0.8％，表明稳定性良好。

表15 稳定性试验结果

9.专属性试验分别取按处方比例并以相同工艺制备不含冰片和薄荷脑的阴性对照，按供试品溶液制法分别制得阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，测得结果为：阴性对照色谱图中，在与冰片、薄荷脑对照品和供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它成分对冰片、薄荷脑的测定无干扰，见图3。

10.测定结果

按所建立的方法，对10个批号的样品进行了含量测定，见表16。结果表明，冰片的含量范围在1.2mg/片～1.7mg/片；薄荷脑的含量范围在1.0mg/片～1.7mg/片。结合十批样品测定值和大生产过程考虑，暂定本发明片剂冰片的含量限度为不得少于1.0mg/片；薄荷脑的含量限度为不得少于0.8mg/片。

表16 含量测定结果

下述实施例均能实现上述实验例所述效果。

具体实施方式

下述实施例中的原料药组成1均为：

人工牛黄1kg    猪胆粉13kg       黄连10kg

黄芩10kg       珍珠3kg          栀子10kg

郁金10kg       赭石4kg          雄黄6kg

朱砂4kg        薄荷脑1kg        石膏8kg

冰片2kg        水牛角浓缩粉13kg 珍珠母5kg。

原料药组成2均为：

人工牛黄0.7kg  猪胆粉18kg        黄连6kg

黄芩14kg       珍珠2kg           栀子14kg

郁金6kg        赭石5kg           雄黄4kg

朱砂5kg        薄荷脑0.7kg         石膏11kg

冰片1kg        水牛角浓缩粉18kg    珍珠母3kg。

原料药组成3均为：

人工牛黄1.8kg  猪胆粉9kg           黄连14kg

黄芩6kg        珍珠4kg             栀子6kg

郁金14kg       赭石3kg             雄黄8kg

朱砂3kg        薄荷脑1.8kg         石膏6kg

冰片3.5kg      水牛角浓缩粉9kg     珍珠母7kg。

鉴别方法A均为：胆酸、猪去氧胆酸的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加硅藻土1g，研匀，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸为15∶7∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液(即：10ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

鉴别方法B均为：黄连的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/2，粉碎，加甲醇10ml，置水浴上加热回热1小时，放冷，滤过，滤液作为供试试品溶液；

对照药材溶液的制备：另取黄连对照药材50mg，加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶7∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

鉴别方法C均为：栀子苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加硅藻土1g，研匀，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为10∶7∶2∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液(即：10ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

鉴别方法D均为：黄芩苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点。

含量测定方法A均为：栀子苷的含量测定：

照高效液相色谱法(附录VI D)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为12∶32∶35∶0.4或正丁醇-水-磷酸为60∶35∶0.4作为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入40％乙醇或丙酮-40％乙醇为1∶1的混合液85ml，加3％盐酸调PH2-3，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加氢氧化钠调PH＝7，滤过，滤液加乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明制剂每日用制剂量含栀子苷(C17H24O10)不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

含量测定方法B均为：黄芩苷的含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为12∶40∶35∶0.4或正丁醇-水-磷酸为60∶35∶0.4或甲醇-水-磷酸＝45∶55∶0.2作为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500；

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入85％乙醇85ml，调PH＝7，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加3％盐酸4ml，搅匀，再加入氢氧化钠调PH＝7，静置25分钟，滤过；滤液加85％乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，净黄芩、酒黄芩含黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)不得少于8.0％；本发明制剂每日用制剂量含黄芩苷不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

含量测定方法C均为：黄连的含量测定：

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入2％盐酸70ml，超声提取12分钟，滤过；滤液加1-2％盐酸乙醇溶液(即：1-2ml盐酸与100ml乙醇的混合液)至刻度，于45℃下水浴中加热15分钟，滤过；滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液1μl、对照品溶液1μl与3μl，交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为6∶2∶1.5∶1.5∶1或正丁醇-冰乙酸-甲醇-水为6∶0.9∶1.2∶1为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，展开12厘米，取出，挥干，照薄层色谱法(附录VI B薄层扫描法)进行荧光扫描，波长λ＝356-366nm，测量供试品与对照品荧光强度的积分值，计算，即得；本发明制剂每日用制剂量含小檗碱以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得少于0.8mg---8mg或不得少于3.2mg；

含量测定方法D均为：薄荷脑和冰片的含量测定

照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VIE)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱：HP-INNOWax毛细管色谱柱(30m*0.32mm*0.25μm)；检测器温度240℃；气化室温度240℃；柱温为程序升温，初始温度为150℃，保持4分钟，以每分钟8℃的速率升温至200℃；理论板数按丁香酚峰计算应不低于5000；

内标溶液的制备：取丁香酚，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；

校正因子测定：另取冰片对照品20mg，薄荷脑对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，精密称定，加硅藻土3g，精密称定，研匀后，取2g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液15ml与水1ml，密塞，摇匀，称定重量，浸渍过夜，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含冰片(C₁₀H₁₈O)不得少于8-12mg；含薄荷脑(C₁₀H₂₀O)不得少于6.4-9.6mg。

所述步骤工艺1 A1为：

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺1 A2为：

将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺1 A3为：

将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺1 A4为：

将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺1 B1为：

分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末。

所述步骤工艺1 B2为：

分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末。

所述步骤工艺1 B3为：

分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末。

所述步骤工艺1 B4为：

分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末。

所述步骤工艺1 C1为：

取猪胆粉和雄黄碎成细粉，混合，加入4％氢氧化钠6重量倍，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入50％乙醇12重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体III；或干燥后得中间体III的粉末。

所述步骤工艺1 C2为：

取猪胆粉碎成细粉，加入4％氢氧化钠6重量倍，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入50％乙醇12重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得猪胆粉提取物，或干燥后得猪胆粉提取物粉末；取雄黄粉碎成细粉，加入6重量倍8％盐酸，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入水洗至无色，即得雄黄提取物，或干燥后得雄黄提取物粉末；将猪胆粉提取物与雄黄提取物混合，得中间体III或得中间体III的粉末。

所述步骤工艺1 D1为：

分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，混合得药粉。

所述步骤工艺1 D2为：

将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加6重量倍水研至糊状，再按1∶65加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复4次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于35℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉。

所述步骤工艺2 A1为：

将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺2A 2为：

将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺2 A3为：

将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺2 A4为：

将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末。

所述步骤工艺2 B1为：

将原料药水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠、珍珠母、猪胆粉和雄黄粉碎成细粉，混合，加入7重量倍的50％乙醇，50℃温浸24小时，过滤，取滤液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末。

所述步骤工艺2 C1为：

分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，分别或混合得药粉。

所述步骤工艺2 C2为：

将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加6重量倍水研至糊状，再按1∶65加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复4次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于35℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉。

实施例1：本发明药物组合物散剂的检测方法

原料药组成1，取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成散剂，每日服用6g。

检测方法为：鉴别方法A、B、C、D、含量测定方法A、B、C和D的组合。

实施例2：本发明药物组合物散剂的检测方法

原料药组成2；

工艺步骤为：工艺1中的步骤A3、B2、C1、D2，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成散剂，每日服用6g。

检测方法为：鉴别方法A、B、含量测定方法A和B的组合。

实施例3：本发明药物组合物片剂的检测方法

原料药组成3，取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成片剂，口服，一次4片，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A和含量测定方法A的组合。

实施例4：本发明药物组合物片剂的检测方法

原料药组成1；

工艺步骤为工艺1中的步骤A4、B2、C1、D2，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成散剂，每日服用6g。

检测方法为：鉴别方法A、含量测定方法B、C和D的组合。

实施例5：本发明药物组合物颗粒剂的检测方法

原料药组成2，取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成颗粒剂，每日服用6g。

检测方法为：鉴别方法A、B、C和含量测定方法D的组合。

实施例6：本发明药物组合物颗粒剂的检测方法

原料药组成3；

工艺步骤为工艺1中的步骤A3、B3、C1、D2，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成颗粒剂，每日服用6g。

检测方法为：含量测定方法A、B、C和D的组合。

实施例7：本发明药物组合物胶囊剂的检测方法

原料药组成1，取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂，口服，一次4粒，一日2-3次。

检测方法为：含量测定方法A和C的组合。

实施例8：本发明药物组合物胶囊剂的检测方法

原料药组成2；

工艺步骤为工艺1中的步骤A4、B3、C1、D2，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成胶囊剂，口服，一次4粒，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A、C、含量测定方法A、B、C和D的组合。

实施例9：本发明药物组合物分散片的检测方法

原料药组成3；

工艺步骤为工艺2中的步骤A1、B1、C1，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成分散片，口服，一次4片，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法C、含量测定方法A、B、C和D的组合。

实施例10：本发明药物组合物分散片的检测方法

原料药组成1；

工艺步骤为工艺2中的步骤A2、B1、C1，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成分散片，口服，一次4片，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A、B、C、D和含量测定方法A的组合。

实施例11：本发明药物组合物滴丸的检测方法

原料药组成2；

工艺步骤为工艺2中的步骤A3、B1、C1，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成滴丸剂，口服，一次2丸，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A、D、含量测定方法A和B的组合。

实施例12：本发明药物组合物滴丸的检测方法

原料药组成3；

工艺步骤为工艺2中的步骤A4、B1、C1，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成滴丸剂，口服，一次2丸，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法C、D、含量测定方法A、B和C的组合。

实施例13：本发明药物组合物水丸的检测方法

原料药组成1；

工艺步骤为工艺2中的步骤A1、B1、C2，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成水丸，口服，一次2丸，一日2-3次。

检测方法为：含量测定方法A和C的组合。

实施例14：本发明药物组合物水丸的检测方法

原料药组成2；

工艺步骤为工艺2中的步骤A2、B1、C2，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成水丸，口服，一次2丸，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法D、含量测定方法A、B、C和D的组合。

实施例15：本发明药物组合物蜜丸的检测方法

原料药组成3，取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成蜜丸，口服，一次1丸，一日2-3次。

检测方法为：含量测定方法D。

实施例16：本发明药物组合物蜜丸的检测方法

原料药组成1；

工艺步骤为工艺2中的步骤A3、B1、C2，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成蜜丸，口服，一次1丸，一日2-3次。

检测方法为：含量测定方法A、B和C的组合。

实施例17：本发明药物组合物缓释剂的检测方法

原料药组成2；

工艺步骤为工艺2中的步骤A4、B1、C2，将中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成缓释剂，口服，一次1片，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A、B、C、D、含量测定方法A和D的组合。

实施例18：本发明药物组合物缓释剂的检测方法

原料药组成3；

工艺步骤为工艺1中的步骤A1、B1、C1、D1，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成缓释剂，口服，一次1片，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法B、C、D、含量测定方法B、C和D的组合。

实施例19：本发明药物组合物口服液的检测方法

原料药组成1；

工艺步骤为工艺1中的步骤A3、B1、C1、D1，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成口服液，口服，一次1支，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法B、含量测定方法A、B和C的组合。

实施例20：本发明药物组合物口服液的检测方法

原料药组成2；

工艺步骤为工艺1中的步骤A2、B2、C2、D2，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成口服液，口服，一次1支，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A、B、D、含量测定方法C和D的组合。

实施例21：本发明药物组合物注射液的检测方法

原料药组成3；

工艺步骤为工艺1中的步骤A4、B2、C2、D2，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成注射液，注射，一次1支，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A、D、含量测定方法B、C和D的组合。

实施例22：本发明药物组合物注射液的检测方法

原料药组成1；

工艺步骤为工艺1中的步骤A2、B3、C1、D1，将中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成注射液，注射，一次1支，一日2-3次。

检测方法为：鉴别方法A、D和含量测定方法D的组合。

Claims (10)

1.一种药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定方法：

薄荷脑和冰片的含量测定

照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱：HP-INNOWax毛细管色谱柱(30m*0.32mm*0.25μm)；检测器温度240℃；气化室温度240℃；柱温为程序升温，初始温度为150℃，保持4分钟，以每分钟8℃的速率升温至200℃；理论板数按丁香酚峰计算应不低于5000；

内标溶液的制备：取丁香酚，加乙酸乙酯制成每1ml含0.3-0.7mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；

校正因子测定：另取冰片对照品10-30mg，薄荷脑对照品5-15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，精密称定，加硅藻土2-4g，精密称定，研匀后，取1-3g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10-20ml与水0.5-1.5ml，密塞，摇匀，称定重量，浸渍过夜，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含冰片(C₁₀H₁₈O)不得少于8-12mg；含薄荷脑(C₁₀H₂₀O)不得少于6.4-9.6mg；

其中，该药物组合物的原料药组成为：

人工牛黄0.5-2重量份    猪胆粉7-20重量份     黄连5-15重量份

黄芩5-15重量份         珍珠1-5重量份        栀子5-15重量份

郁金5-15重量份         赭石2-6重量份        雄黄3-9重量份

朱砂2-6重量份          薄荷脑0.5-2重量份    石膏5-12重量份

冰片0.5-4重量份        水牛角浓缩粉7-20重量份

珍珠母2-8重量份；

该药物组合物的制备方法为：

取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定方法：

薄荷脑和冰片的含量测定

照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VIE)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱：HP-INNOWax毛细管色谱柱(30m*0.32mm*0.25μm)；检测器温度240℃；气化室温度240℃；柱温为程序升温，初始温度为150℃，保持4分钟，以每分钟8℃的速率升温至200℃；理论板数按丁香酚峰计算应不低于5000；

内标溶液的制备：取丁香酚，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；

校正因子测定：另取冰片对照品20mg，薄荷脑对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，精密称定，加硅藻土3g，精密称定，研匀后，取2g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液15ml与水1ml，密塞，摇匀，称定重量，浸渍过夜，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含冰片(C₁₀H₁₈O)不得少于8-12mg；含薄荷脑(C₁₀H₂₀O)不得少于6.4-9.6mg。

3.如权利要求1-2任一所述的检测方法，其特征在于该方法还包括如下鉴别方法中的一种或几种：

A.胆酸、猪去氧胆酸的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，加硅藻土0.5-1.5g，研匀，加乙醇10-30ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5-1.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸为10-20∶5-10∶2-8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液(即：8-12ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在100-110℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B.黄连的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/3-2/3，粉碎，加甲醇5-15ml，置水浴上加热回热0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液作为供试试品溶液；

对照药材溶液的制备：另取黄连对照药材30-70mg，加甲醇3-7ml，超声处理10-20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2-0.7mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为8-12∶5-10∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

C.栀子苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，加硅藻土0.5-1.5g，研匀，加乙醚10-30ml，超声处理3-7分钟，滤过，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，加乙酸乙酯20-40ml，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-1.5mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为8-12∶5-10∶1-3∶0.3-0.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液(即：8-12ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D.黄芩苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，粉碎，加甲醇5-15ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点。

4.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于该方法还包括如下鉴别方法中的一种或几种：

A.胆酸、猪去氧胆酸的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加硅藻土1g，研匀，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸为15∶7∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液(即：10ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B.黄连的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/2，粉碎，加甲醇10ml，置水浴上加热回热1小时，放冷，滤过，滤液作为供试试品溶液；

对照药材溶液的制备：另取黄连对照药材50mg，加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶7∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

C.栀子苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加硅藻土1g，研匀，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为10∶7∶2∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液(即：10ml硫酸与100ml乙醇的混合液)，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D.黄芩苷的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，粉碎，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点。

5.如权利要求1-4任一所述的检测方法，其特征在于该方法还包括如下含量测定方法中的一种或几种：

A.栀子苷的含量测定：

照高效液相色谱法(附录VI D)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为10-15∶85-90或正丁醇-甲醇--水-磷酸为10-15∶30-50∶30-40∶0.3-0.5或正丁醇-水-磷酸为50--70∶30-40∶0.3-0.5作为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含20-40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，置100ml量瓶中，加入20-60％乙醇或丙酮-20-60％乙醇为1∶1的混合液80-90ml，加2-3％盐酸调PH2-3，超声提取10-15分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加氢氧化钠调PH＝7，滤过，滤液加乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含栀子苷(C₁₇H₂₄O₁₀)0.6-6mg或不得少于3.6mg；

B.黄芩苷的含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为10-15∶85-90或正丁醇-甲醇--水-磷酸为10-15∶30-50∶30-40∶0.3-0.5或正丁醇-水-磷酸为50--70∶30-40∶0.3-0.5或甲醇-水-磷酸＝40-50∶50-60∶0.1-0.3作为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500；

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含40-80μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，置100ml量瓶中，加入80-90％乙醇80-90ml，调PH＝7，超声提取10-15分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加2-3％盐酸3-5ml，搅匀，再加入氢氧化钠调PH＝7，静置20-30分钟，滤过；滤液加80-90％乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，净黄芩、酒黄芩含黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)不得少于8.0％；本发明每日用制剂量含黄芩苷不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

C.黄连的含量测定：

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/6-1/2，置100ml量瓶中，加入1-3％盐酸60-80ml，超声提取10-15分钟，滤过；滤液加1-2％盐酸乙醇溶液(即：1-2ml盐酸与100ml乙醇的混合液)至刻度，于40-50℃下水浴中加热10-20分钟，滤过；滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.02-0.06mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液1μl、对照品溶液1μl与3μl，交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为5-7∶1-3∶1-2∶1-2∶1或正丁醇-冰乙酸-甲醇-水为5-7∶0.8-1∶1-1.5∶0.5-1.5为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，展开8-15厘米，取出，挥干，照薄层色谱法(附录VIB薄层扫描法)进行荧光扫描，波长λ＝356-366nm，测量供试品与对照品荧光强度的积分值，计算，即得；每日用制剂量含小檗碱以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于0.8mg-8mg或不得少于3.2mg。

6.如权利要求1-4任一所述的检测方法，其特征在于该方法还包括如下含量测定方法中的一种或几种：

A.栀子苷的含量测定：

照高效液相色谱法(附录VI D)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为12∶32∶35∶0.4或正丁醇-水-磷酸为60∶35∶0.4作为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入40％乙醇或丙酮-40％乙醇为1∶1的混合液85ml，加3％盐酸调PH2-3，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加氢氧化钠调PH＝7，滤过，滤液加乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每日用制剂量含栀子苷(C₁₇H₂₄O₁₀)不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

B.黄芩苷的含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为12∶88或正丁醇-甲醇--水-磷酸为12∶40∶35∶0.4或正丁醇-水-磷酸为60∶35∶0.4或甲醇-水-磷酸＝45∶55∶0.2作为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500；

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入85％乙醇85ml，调PH＝7，超声提取12分钟，滤过；滤液置100ml量瓶中，加3％盐酸4ml，搅匀，再加入氢氧化钠调PH＝7，静置25分钟，滤过；滤液加85％乙醇至刻度，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，净黄芩、酒黄芩含黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)不得少于8.0％；本发明每日用制剂量含黄芩苷不得少于0.6-6mg或不得少于3.6mg；

C.黄连的含量测定：

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/4，置100ml量瓶中，加入2％盐酸70ml，超声提取12分钟，滤过；滤液加1-2％盐酸乙醇溶液(即：1-2ml盐酸与100ml乙醇的混合液)至刻度，于45℃下水浴中加热15分钟，滤过；滤液作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液1μl、对照品溶液1μl与3μl，交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为6∶2∶1.5∶1.5∶1或正丁醇-冰乙酸-甲醇-水为6∶0.9∶1.2∶1为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，展开12厘米，取出，挥干，照薄层色谱法(附录VI B薄层扫描法)进行荧光扫描，波长λ＝356-366nm，测量供试品与对照品荧光强度的积分值，计算，即得；每日用制剂量含小檗碱以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于0.8mg---8mg或不得少于3.2mg。

7.如权利要求1-6任一所述的检测方法，其特征在于该方法中所述的药物组合物的原料药组成为：

人工牛黄1重量份    猪胆粉13重量份    黄连10重量份

黄芩10重量份       珍珠3重量份       栀子10重量份

郁金10重量份       赭石4重量份       雄黄6重量份

朱砂4重量份    薄荷脑1重量份           石膏8重量份

冰片2重量份    水牛角浓缩粉13重量份    珍珠母5重量份；

或

人工牛黄0.7重量份    猪胆粉18重量份          黄连6重量份

黄芩14重量份         珍珠2重量份             栀子14重量份

郁金6重量份          赭石5重量份             雄黄4重量份

朱砂5重量份          薄荷脑0.7重量份         石膏11重量份

冰片1重量份          水牛角浓缩粉18重量份    珍珠母3重量份；

或

人工牛黄1.8重量份    猪胆粉9重量份          黄连14重量份

黄芩6重量份          珍珠4重量份            栀子6重量份

郁金14重量份         赭石3重量份            雄黄8重量份

朱砂3重量份          薄荷脑1.8重量份        石膏6重量份

冰片3.5重量份        水牛角浓缩粉9重量份    珍珠母7重量份。

8.如权利要求1-7任一所述的检测方法，其特征在于该方法中所述的药物组合物的制备方法为如下方法中的一种：

方法1：由如下步骤A、B、C、D和E组成

步骤A：制备中间体I

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0~1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30％-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0~1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

步骤B：制备中间体II

B1：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B2：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.0~1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B3：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末；

或B4：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，，分别加入3-10％稀盐酸，用量为5-15重量倍，使成混悬液，静置12-48小时，过滤，滤液用10-20％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至3-5；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入8-10重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.0~1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末；

步骤C：制备中间体III

C1：取猪胆粉和雄黄碎成细粉，混合，加入3-5％氢氧化钠4-8重量倍，静置12-48小时，过滤，滤液调PH值至3-5，浓缩，加入30-80％乙醇8-15重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体III；或干燥后得中间体III的粉末；

或C2：取猪胆粉碎成细粉，加入3-5％氢氧化钠4-8重量倍，静置12-48小时，过滤，滤液调PH值至3-5，浓缩，加入30-80％乙醇8-15重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得猪胆粉提取物，或干燥后得猪胆粉提取物粉末；取雄黄粉碎成细粉，加入4-8重量倍5-10％盐酸，静置8-24小时，过滤，滤液调PH值至3-5，浓缩，加入水洗至无色，即得雄黄提取物，或干燥后得雄黄提取物粉末；将猪胆粉提取物与雄黄提取物混合，得中间体III或得中间体III的粉末；

步骤D：制备药粉

D1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，混合得药粉；

或D2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加5-8重量倍水研至糊状，再按1∶60--70加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复3-6次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于25-45℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉；

步骤E：制剂

将中间体I、II、III或中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成药学上可接受的剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂；

方法2：由如下步骤A、B、C和D组成

步骤A：制备中间体I

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0~1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入4-10重量倍的30％-80％乙醇，静置12-48小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取2-4次，每次0.5-2.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮2-4次，每次0.5-2.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.0~1.4，离心，上清液过大孔树脂柱，30-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

步骤B：制备中间体II

B1：将原料药水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠、珍珠母、猪胆粉和雄黄粉碎成细粉，混合，加入4-10重量倍的30-80％乙醇，40-60℃温浸12-48小时，过滤，取滤液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

步骤C：制备药粉

C1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，混合得药粉；

或C2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加5-8重量倍水研至糊状，再按1∶60--70加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复3-6次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于25-45℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉；

步骤D：制剂

将中间体I、II或中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成药学上可接受的剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于该方法中所述的药物组合物的制备方法为如下方法中的一种：

方法1：由如下步骤A、B、C、D和E组成

步骤A：制备中间体I

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

步骤B：制备中间体II

B1：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B2：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，混合；加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

或B3：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末；

或B4：分别将水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母研成细粉，分别加入6％稀盐酸，用量为10重量倍，使成混悬液，静置24小时，过滤，滤液用15％氢氧化钠(或其他碱液)调PH值至4；滤过，滤液浓缩至稠膏，浓缩液中加入9重量倍的乙醇，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，分别得水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠和珍珠母的提取物，混合后即得中间体II；或混合干燥后得中间体II的粉末；

步骤C：制备中间体III

C1：取猪胆粉和雄黄碎成细粉，混合，加入4％氢氧化钠6重量倍，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入50％乙醇12重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得中间体III；或干燥后得中间体III的粉末；

或C2：取猪胆粉碎成细粉，加入4％氢氧化钠6重量倍，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入50％乙醇12重量倍；取上清液，回收乙醇，浓缩，即得猪胆粉提取物，或干燥后得猪胆粉提取物粉末；取雄黄粉碎成细粉，加入6重量倍8％盐酸，静置24小时，过滤，滤液调PH值至4，浓缩，加入水洗至无色，即得雄黄提取物，或干燥后得雄黄提取物粉末；将猪胆粉提取物与雄黄提取物混合，得中间体III或得中间体III的粉末；

步骤D：制备药粉

D1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，混合得药粉；

或D2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加6重量倍水研至糊状，再按1∶65加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复4次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于35℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉；

步骤E：制剂

将中间体I、II、III或中间体I、II、III的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成药学上可接受的剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂；

方法2：由如下步骤A、B、C和D组成

步骤A：制备中间体I

A1：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A2：将原料药黄芩、黄连、栀子、郁金和石膏共同加热水回流提取3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A3：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至稠膏；稠膏中加入7重量倍的50％乙醇，静置24小时，取上清液回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

或A4：将郁金先加热水回流提取3次，每次1.5小时，挥发油备用；郁金药渣与原料药黄芩、黄连、石膏和栀子共同水煎煮3次，每次1.5小时，合并水煎液，浓缩至相对密度1-1.2，离心，上清液过大孔树脂柱，50％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，喷入挥发油，即得中间体I；或干燥后得中间体I的粉末；

步骤B：制备中间体II

B1：将原料药水牛角浓缩粉、人工牛黄、珍珠、珍珠母、猪胆粉和雄黄粉碎成细粉，混合，加入7重量倍的50％乙醇，50℃温浸24小时，过滤，取滤液，回收乙醇，浓缩，即得中间体II；或干燥后得中间体II的粉末；

步骤C：制备药粉

C1：分别将冰片、薄荷脑、朱砂和赭石制备极细粉，分别或混合得药粉；

或C2：将冰片、薄荷脑和赭石制备极细粉，将朱砂加6重量倍水研至糊状，再按1∶65加入水搅拌，静置，倾出混悬液，沉渣再研磨；如上法反复4次，合并各次混悬液，静置，取沉淀于35℃凉干，研粉即得朱砂极细粉；将上述四种原料药的极细粉混合得药粉；

步骤D：制剂

将中间体I、II或中间体I、II的粉末与药粉混合，按常规工艺，加入常规辅料制成药学上可接受的剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。

10.如权利要求8-9任一所述的检测方法，其特征在于该方法中所述的药物组合物的制备工艺中的任意步骤由常规方法替代；

所述大孔树脂柱型号均为：YPR-II，X5，AB-8，HPD-100，DX-5，D101，DA201，DM130，WLD-3或NKA-9。

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