CN103197003B - 一种柴胡药材的鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种柴胡药材的鉴定方法，该方法包括以下步骤：步骤1、对照品溶液的制备；步骤2、供试品溶液的制备；步骤3、将步骤1和步骤2所述的溶液分别注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；步骤4、对色谱图的相似性进行比较，两者相似表明供试品合格。
Description
技术领域：
本发明涉及一种中药药材的的鉴定方法，特别涉及一种柴胡药材的的HPLC鉴定方法。
背景技术：
柴胡属(BupleurumL.)植物是伞形科(Umbelliferae)植物中的一个大属，据报道全球有柴胡属植物约200种，主要分布在欧亚大陆及北非，我国已报道有42种，17种变种及7种变型。我国药典规定柴胡(BupleurumChinenseDC.)或狭叶柴胡(B.ScorzonerifoliumWilld.)为正品供药用，二者一般习称为“北柴胡”及“南柴胡”[1]。我国柴胡资源丰富，北柴胡主产于辽宁、甘肃、河北、山东等地，南柴胡主要产于湖北、四川、江苏、安徽等地。柴胡性味苦，微寒，归肝胆实经，具有解表和里，疏肝解郁，升提中气之功效，可祛肠胃中结气、饮食积聚、寒热邪气而推陈致新，主治感冒发热、寒热往来、胸胁腹痛、黄疸肝炎及月经不调等症。近代药理研究表明柴胡不仅具有镇痛、解热、镇咳、抗炎、抗病原体、抗溃疡等作用，还具有保肝、调节免疫的功能，尤其是对心血管系统也有显著作用。为有效控制药材质量，本文根据所含化学成分的特性和指纹图谱研究方法，对不同产地的柴胡药材进行高效液相指纹图谱研究。
不同产地的柴胡药材，如果含有不同的成分甚至含有有害成分，则会导致不良后果，为鉴别柴胡药材，保证药材的同一性，本发明提供了一种便捷快速，灵敏度高的鉴别方法，同时建立一种柴胡药材的指纹图谱。
发明内容：
本发明提供一种柴胡药材的鉴定方法，该方法包括以下步骤：
步骤1、对照品溶液的制备；
步骤2、供试品溶液的制备；
步骤3、将步骤1和步骤2所述的溶液分别注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；
步骤4、对色谱图的相似性进行比较，两者相似表明供试品合格。
其中，步骤1对照品溶液的制备，方法如下：
取柴胡皂苷a对照品一定量，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.1mg/ml柴胡皂苷a溶液。
其中，步骤2供试品溶液的制备，方法如下：
取柴胡药材4g，加入50ml水，回流提取，第一次1h，第二次1h，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加95％醇沉，过夜，抽滤，滤液减压浓缩后，定容至25ml量瓶中。
其中，步骤3的色谱条件如下：
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱(250mm×4.6mmID，5μm，Agilent)
流动相：乙腈∶水(含0.05％磷酸)梯度洗脱如下：
检测波长：220nm
流速：1.0mL·min-1
柱温：25℃
进样量：10μL
本发明还提供一种柴胡药材的指纹图谱，该指纹图谱是柴胡皂苷a的用本发明的方法测定的高效液相色谱图。
本发明通过试验验证，正经本发明的指纹图谱切实可行。
本发明的指纹图谱的建立，是经过筛选获得的，筛选过程如下
精密度
取柴胡药材(山西)4g，按“供试品溶液的制备”项下操作，在上述色谱条件下重复进样6次。结果表明，各峰的相对保留时间的RSD为0.3％，相对峰面积的RSD为1.6％，符合指纹图谱要求。
重复性试验
取柴胡药材(山西)4g，按“供试品溶液的制备”项下操作，平行制备6份供试品溶液。结果表明，各峰的相对保留时间的RSD为0.8％，相对峰面积的RSD为4.6％。
稳定性试验
取柴胡药材(山西)4g，，按“供试品溶液的制备”项下操作，在上述色谱条件下，分别在0，2，4，6，8h进样分析。结果表明，各峰的相对保留时间的RSD为1.1％，相对峰面积的RSD为3.7％，说明供试品溶液在室温放置8小时内稳定。
流动相的选择
考察了乙腈-水，乙腈-0.1％磷酸水溶液，乙腈-0.05％磷酸水溶液，甲醇-0.1％冰乙酸水溶液，乙腈-0.1％冰乙酸水溶液以及乙腈-0.1％冰乙酸水溶液梯度洗脱，根据主要成分的性质，采取，乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脱，分离效果较好，保留时间适中。
色谱柱的选择
考察了相同条件下，十八烷基键合硅胶、八烷基键合硅胶以及苯基、氨基键合硅胶的固定相对柴胡药材中各成分分离度的影响，结果显示，使用十八烷基硅烷键合硅胶柱，柴胡中各成分分离度高，色谱峰尖锐，分离时间短。
柴胡色谱指纹图谱特征峰的确立
参照物的选择柴胡皂苷a为柴胡中的主要药效成分之一，易于辨认，并且易于购得，因此选择柴胡皂苷a(4号峰)为药材指纹图谱的参照物。
特征峰的确定以9批柴胡药材为研究对象，进行指纹图谱研究。获得包括柴胡皂苷a(4号峰)在内的11个特征峰。
柴胡样品共有模式确立
将9批柴胡药材采用药典委员会规定使用的色谱指纹图谱处理软件，依据推荐药材的色谱指纹图谱建立共有模式。
指纹图谱评价
对采自全国各地的9批柴胡药材进行了指纹图谱分析，不同产地、批次柴胡中主要成分的量有较一定差异，但指纹图谱中主要色谱峰的整体图貌基本一致。
本发明通过以上指纹图谱的建立，进一步的确立了柴胡药材的鉴定方法，采用该方法可以准确辨别出和其他成分混合在一起的柴胡药材，以及不同产地的柴胡药材，根据和标准指纹图谱的比较，得出柴胡药材的鉴别结论，越和标准指纹图谱接近，产品质量越好，相似度可以使用计算机方法确认，如相似度为90以上为合格，相似度为95以上为相符，相似度为98以上为相同。
参考文献
[1]ChP(中国药典).2010.VolI(一部)：264
[2]屠鹏飞.中药指纹图谱指定的方法学探讨[C].现代化中药产业关键技术系列研讨会——国际色谱指纹评价中药质量研讨会.广州：广州药学会，2001.
附图说明
图1不同产地药材指纹图谱
图2对照指纹图谱
具体实施方式：
以下通过实施例，进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
一种柴胡药材的的鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
步骤1、对照品溶液的制备；
步骤2、供试品溶液的制备；
步骤3、将步骤1和步骤2所述的溶液分别注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；
步骤4、对色谱图的相似性进行比较，两者相似表明供试品合格。
其中，步骤1对照品溶液的制备，方法如下：取柴胡皂苷a对照品一定量，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.1mg/ml柴胡皂苷a溶液。其中，步骤2供试品溶液的制备，方法如下：取柴胡药材4g，加入50ml水，回流提取，第一次1h，第二次1h，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加95％醇沉，过夜，抽滤，滤液减压浓缩后，定容至25ml量瓶中。
其中，步骤3的色谱条件如下：
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱(250mm×4.6mmID，5μm，Agilent)
流动相：乙腈∶水(含0.05％磷酸)梯度洗脱如下：
检测波长：220nm
流速：1.0mL·min-1
柱温：25℃
进样量：10μL。
实施例2
一种柴胡药材的标准指纹图谱，按照以下方法测定：取柴胡皂苷a对照品一定量，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.1mg/ml柴胡皂苷a溶液，将溶液注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；色谱条件如下：
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱(250mm×4.6mmID，5μm，Agilent)
流动相：乙腈∶水(含0.05％磷酸)梯度洗脱如下：
检测波长：220nm
流速：1.0mL·min-1
柱温：25℃
进样量：10μL。
实施例3
一种柴胡药材的指纹图谱，按照以下方法测定：取柴胡药材4g，加入50ml水，回流提取，第一次1h，第二次1h，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加95％醇沉，过夜，抽滤，滤液减压浓缩后，定容至25ml量瓶中，将溶液注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；色谱条件如下：
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱(250mm×4.6mmID，5μm，Agilent)
流动相：乙腈∶水(含0.05％磷酸)梯度洗脱如下：
检测波长：220nm
流速：1.0mL·min-1
柱温：25℃
进样量：10μL。
Claims (3)
1.一种柴胡药材的鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
步骤1、对照品溶液的制备；取柴胡皂苷a对照品一定量，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.1mg/ml柴胡皂苷a溶液，
步骤2、供试品溶液的制备；取柴胡药材4g，加入50ml水，回流提取，第一次1h，第二次1h，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加95％醇沉，过夜，抽滤，滤液减压浓缩后，定容至25ml量瓶中，
步骤3、将步骤1和步骤2所述的溶液分别注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；色谱条件如下：
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱，型号为250mm×4.6mmID,5μm,Agilent
流动相：乙腈:含0.05％磷酸的水溶液进行梯度洗脱，过程如下：
检测波长：220nm
流速：1.0mL·min-1
柱温：25℃
进样量：10μL
步骤4、对色谱图的相似性进行比较，两者相似表明供试品合格。
2.一种柴胡药材的标准指纹图谱，其特征在于，该指纹图谱是柴胡皂苷a的高效液相色谱图，按照以下方法测定：取柴胡皂苷a对照品一定量，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.1mg/ml柴胡皂苷a溶液，将溶液注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；色谱条件如下：
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱，型号为250mm×4.6mmID,5μm,Agilent
流动相：乙腈:含0.05％磷酸的水溶液进行梯度洗脱，过程如下：
检测波长：220nm
流速：1.0mL·min-1
柱温：25℃
进样量：10μL。
3.一种柴胡药材的指纹图谱，其特征在于，该指纹图谱是柴胡药材提取物的高效液相色谱图，按照以下方法测定：取柴胡药材4g，加入50ml水，回流提取，第一次1h，第二次1h，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加95％醇沉，过夜，抽滤，滤液减压浓缩后，定容至25ml量瓶中，将溶液注入HPLC色谱仪中，得到色谱图；色谱条件如下：
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱，型号250mm×4.6mmID,5μm,Agilent
流动相：乙腈:含0.05％磷酸的水溶液进行梯度洗脱，过程如下：
检测波长：220nm
流速：1.0mL·min-1
柱温：25℃
进样量：10μL。
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