CN105353065A

CN105353065A - 一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途

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Publication number: CN105353065A
Application number: CN201510975434.8A
Authority: CN
Inventors: 刘丽娟; 周洁
Original assignee: Heilongjiang University
Current assignee: Heilongjiang University
Priority date: 2015-12-22
Filing date: 2015-12-22
Publication date: 2016-02-24
Anticipated expiration: 2035-12-22
Also published as: CN105353065B

Abstract

一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途，涉及一种荔枝核指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途。本发明方法为：一、制备供试品溶液；二、制作指纹图谱，将供试品溶液注入高效液相色谱仪；本发明荔枝核的指纹图谱有15个共有特征峰，这些共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于实现的特点。本发明荔枝核标准指纹图谱的用途是指荔枝核指纹图谱作为标准指纹图谱用于荔枝核药材的真伪、产地和品质的鉴别和质量控制。本发明应用于医药领域。

Description

一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途

技术领域

本发明涉及一种荔枝核指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途。

背景技术

荔枝核，即无患子科植物荔枝LitchichinensisSonn.的干燥成熟种子。主要含有挥发类成分、皂苷类、黄酮类、氨基酸类、糖类、有机酸和脂肪酸类等成分，具有行气散结、祛寒止痛的功效，用于寒疝腹痛、睾丸肿痛、胃脘痛、妇女气滞血瘀刺痛等症。现代研究表明，荔枝核具有抗氧化、降血压、调血脂、抗肝损伤的作用，而且在抗炎、抑制肿瘤等方面也取得了良好的效果。在质量控制方面，2010版《中华人民共和国药典》一部收载了荔枝核药材，但仅仅进行了粉末鉴别来控制其质量。由于中药的产地、来源、采收季节、加工方法等情况复杂，需要采用更科学、合理的方法控制其质量，这对保证临床用药的安全有效是十分必要的。指纹图谱作为从整体上对中药进行质量控制的一种技术目前已被广泛认可，其优势比起单一组分甚至多组分定性定量方法更加明显。目前文献中尚未见到关于荔枝核指纹图谱的研究报道，因此，为科学有效地控制其内在质量，有必要建立荔枝核的指纹图谱。

发明内容

本发明的目的是提供一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途。

本发明荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，是按以下步骤进行：

一、供试品溶液的制备：a、取荔枝核药材，用粉碎机将其粉碎，加5倍质量的质量百分浓度为95％乙醇，浸泡10～12h，超声20～30min，过滤，分别收集固相物A和液相物A，将固相物A加入5倍质量的质量百分浓度为95％乙醇中浸泡2～3h，超声20～30min，过滤，收集液相物B，然后将液相物A和B混合，得到浸提液，将浸提液减压浓缩得浸膏；

b、将浸膏用少量蒸馏水溶解后上到大孔树脂色谱柱上，先用蒸馏水洗涤4个柱体积，再用质量浓度为30％的乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液，然后减压浓缩洗脱液至干，得到干燥固体C；

c、将步骤b得到的干燥固体C，用色谱甲醇溶解成浓度为2mg/mL的溶液，用微孔滤膜进行过滤，滤液即为供试品溶液；

二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以体积比为9:1的甲醇和乙腈的混合溶液为A相，以体积比为0.2:100的磷酸和水的混合液为B相进行梯度洗脱；其中，高效液相色谱条件为：色谱柱填料ThermoC18，规格为250×4.6mm，5μm；柱温为35℃；流速0.8mL/min，检测波长280nm，进样量10μL；在此条件下分析供试品溶液，得到荔枝核的指纹图谱。

三、标准指纹图谱的确定：确定了15个共有特征峰；以8号峰为对照峰，共有特征峰的相对保留时间分别为：1号共有特征峰相对保留时间为0.380±0.002％，2号峰相对保留时间为0.435±0.002％，3号峰相对保留时间为0.485±0.002％，4号峰相对保留时间为0.571±0.001％，5号峰相对保留时间为0.661±0.001％，6号峰相对保留时间为0.737±0.003％，7号峰相对保留时间为0.842±0.002％，8号峰相对保留时间为1.000，9号峰相对保留时间为1.684±0.006％，10号峰相对保留时间为1.832±0.005％，11号峰相对保留时间为1.934±0.003％，12号峰相对保留时间为2.053±0.010％，13号峰相对保留时间为2.301±0.002％，14号峰相对保留时间为2.387±0.003％，15号峰相对保留时间为2.882±0.005％，上述共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。

本发明荔枝核标准指纹图谱的用途是指荔枝核指纹图谱作为标准指纹图谱用于荔枝核质量控制中。

本发明的有益效果：

本发明的荔枝核标准指纹图谱有15个共有特征峰，这些共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。本发明的荔枝核标准指纹图谱作为标准指纹图谱经多批样品验证后可用于荔枝核质量控制中，用于从整体上评价和控制荔枝核药材的质量，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定荔枝核整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为添加对照成分的可能性。本发明荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法具有可重复性强、精密度高和稳定可靠、易于掌握的优点，适用于荔枝核药材的真伪、产地和品质的鉴别和质量控制。

附图说明

图1为试验1提供的荔枝核标准指纹图谱；其中1至15为荔枝核的15个共有特征峰；

图2为S1-S10是10批荔枝核药材指纹图谱。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式一、供试品溶液的制备：a、取荔枝核药材，用粉碎机将其粉碎，加5倍质量的质量百分浓度为95％乙醇，浸泡10～12h，超声20～30min，过滤，分别收集固相物A和液相物A，将固相物A加入5倍质量的质量百分浓度为95％乙醇中浸泡2～3h，超声20～30min，过滤，收集液相物B，然后将液相物A和B混合，得到浸提液，将浸提液减压浓缩得浸膏；

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中的微孔滤膜过滤是采用0.45μm微孔滤膜进行过滤的。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤二中梯度洗脱顺序为：0min→20min→40min→45min→50min，体积比为9:1的甲醇和乙腈混合溶液15％→20％→30％→35％→50％。其它与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式采用一种荔枝核高效液相色谱指纹图谱的建立方法得到的荔枝核标准指纹图谱。

本实施方式的荔枝核标准指纹图谱有15个共有特征峰，这些共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四不同的是：荔枝核的标准指纹图谱有15个共有特征峰；以8号峰为对照峰，共有特征峰的相对保留时间分别为：1号共有特征峰相对保留时间为0.380±0.002％，2号峰相对保留时间为0.435±0.002％，3号峰相对保留时间为0.485±0.002％，4号峰相对保留时间为0.571±0.001％，5号峰相对保留时间为0.661±0.001％，6号峰相对保留时间为0.737±0.003％，7号峰相对保留时间为0.842±0.002％，8号峰相对保留时间为1.000，9号峰相对保留时间为1.684±0.006％，10号峰相对保留时间为1.832±0.005％，11号峰相对保留时间为1.934±0.003％，12号峰相对保留时间为2.053±0.010％，13号峰相对保留时间为2.301±0.002％，14号峰相对保留时间为2.387±0.003％，15号峰相对保留时间为2.882±0.005％，这15个共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。其它与具体实施方式四相同。

具体实施方式六：本实施方式荔枝核标准指纹图谱的用途是指荔枝核指纹图谱作为标准指纹图谱用于荔枝核质量控制中。

本实施方式的荔枝核标准指纹图谱作为标准指纹图谱经多批样品验证后可用于荔枝核质量控制中，用于从整体上评价和控制荔枝核药材的质量，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定荔枝核整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为添加对照成分的可能性。

通过以下试验验证本发明的有益效果：

试验1：

1、试验方法：本试验荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，是按以下步骤进行：

一、供试品溶液的制备：a、取荔枝核药材，用粉碎机将其粉碎，加5倍质量的质量百分浓度为95％乙醇，浸泡12h，超声20min，过滤，分别收集固相物A和液相物A，将固相物A加入5倍质量的质量百分浓度为95％乙醇中浸泡2h，超声20min，过滤，收集液相物B，然后将液相物A和B混合，得到浸提液，将浸提液减压浓缩得浸膏；

二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以体积比为9:1的甲醇和乙腈的混合溶液为A相，以体积比为0.2:100的磷酸和水的混合液为B相进行梯度洗脱；其中，高效液相色谱条件为：1、色谱柱填料ThermoC18，规格为250×4.6mm，5μm；柱温为35℃；采用梯度洗脱方式0min→20min→40min→45min→50min，体积比为9:1的甲醇和乙腈混合溶液15％→20％→30％→35％→50％；流速0.8mL/min，检测波长280nm，进样量10μL；

2、试验仪器：HITACHIL-2000高效液相色谱仪；HITACHIL-2400紫外检测器；AT-130色谱柱柱温箱；HITACHID-2000色谱工作站。

3、试验材料：10批荔枝核药材来自海南、安徽、广东、广西、福建、江苏等地。

按照本试验的荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，对10批荔枝核药材建立了高效液相色谱指纹图谱，得到的谱图导入中药色谱指纹图谱相似度计算软件(中华人民共和国药典委员会，2004年版)，确定了15个共有特征峰，以8号峰为对照峰，共有特征峰的相对保留时间分别为：1号共有特征峰相对保留时间为0.380±0.002％，2号峰相对保留时间为0.435±0.002％，3号峰相对保留时间为0.485±0.002％，4号峰相对保留时间为0.571±0.001％，5号峰相对保留时间为0.661±0.001％，6号峰相对保留时间为0.737±0.003％，7号峰相对保留时间为0.842±0.002％，8号峰相对保留时间为1.000，9号峰相对保留时间为1.684±0.006％，10号峰相对保留时间为1.832±0.005％，11号峰相对保留时间为1.934±0.003％，12号峰相对保留时间为2.053±0.010％，13号峰相对保留时间为2.301±0.002％，14号峰相对保留时间为2.387±0.003％，15号峰相对保留时间为2.882±0.005％，上述共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。

本试验得到的荔枝核的标准指纹图谱如图1所示。由图1可以看出，通过本方法可以清晰地得到具有15个共有特征峰的荔枝核的标准指纹图谱，为整体评价荔枝核的质量提供了良好的依据。

4、方法学考察

4.1方法重现性试验

取同一批荔枝核药材6份，按照试验方法中荔枝核供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，进行指纹图谱测定，分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行统计，结果如表1所示，RSD％均不超过3％，显示本发明的方法重现性良好。

4.2指纹图谱精密度试验

取方法重现性试验用的供试品溶液一份，连续进样5次，分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积进行统计，RSD％均不超过3％(如表2)，结果显示本发明的方法精密度良好。

4.3指纹图谱稳定性试验

取方法重现性试验用的供试品溶液一份，进行指纹图谱测定，考察供试品溶液48小时内的稳定性，分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积进行统计，RSD％均不超过3％(如表3)，结果显示供试品溶液在48小时内稳定。

以上试验结果显示，该测定方法稳定可靠，指纹图谱相对稳定。

表1重现性试验结果(n＝6)

表2精密度试验结果(n＝5)

表3稳定性试验结果(n＝5)

Claims

1.一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

2.根据权利要求1所述的一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于梯度洗脱顺序为：步骤一中的微孔滤膜过滤是采用0.45μm微孔滤膜进行过滤的。

3.根据权利要求1所述的一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤二中梯度洗脱顺序为：0min→20min→40min→45min→50min，体积比为9:1的甲醇和乙腈混合溶液15％→20％→30％→35％→50％。

4.采用权利要求1所述的一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法得到的荔枝核标准指纹图谱。

5.根据权利要求4所述的荔枝核标准指纹图谱，其特征在于荔枝核的指纹图谱有15个共有特征峰，以8号峰为对照峰，共有特征峰的相对保留时间分别为：1号共有特征峰相对保留时间为0.380±0.002％，2号峰相对保留时间为0.435±0.002％，3号峰相对保留时间为0.485±0.002％，4号峰相对保留时间为0.571±0.001％，5号峰相对保留时间为0.661±0.001％，6号峰相对保留时间为0.737±0.003％，7号峰相对保留时间为0.842±0.002％，8号峰相对保留时间为1.000，9号峰相对保留时间为1.684±0.006％，10号峰相对保留时间为1.832±0.005％，11号峰相对保留时间为1.934±0.003％，12号峰相对保留时间为2.053±0.010％，13号峰相对保留时间为2.301±0.002％，14号峰相对保留时间为2.387±0.003％，15号峰相对保留时间为2.882±0.005％，这15个共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。

6.荔枝核标准指纹图谱的用途，其特征在于荔枝核标准指纹图谱作为标准指纹图谱用于荔枝核质量控制中。