CN114200046B - 一种蠲痹汤组合物指纹图谱的构建方法及检测方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种蠲痹汤组合物指纹图谱的构建方法及检测方法和应用。本发明指纹图谱的构建方法包括以下步骤：取蠲痹汤组合物，加入提取溶剂，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；取马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷等11种对照品，制成对照品参照物溶液；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液1～2μL，注入液相色谱仪进行色谱分析，测定，记录色谱图，分别得到供试品指纹图谱和参照物色谱图谱，制定蠲痹汤组合物的标准指纹图谱。本发明指纹图谱可全面反映出蠲痹汤的质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制蠲痹汤制剂产品质量的目的。

Description

一种蠲痹汤组合物指纹图谱的构建方法及检测方法和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种蠲痹汤组合物指纹图谱的构建方法及检测方法和应用。
背景技术
蠲痹汤出自清代程国彭所撰综合性医书《医学心悟》卷三“痹(鹤膝风)”篇。“通治风寒湿三气，合而成痹”。组成为羌活、独活各一钱，桂心五分，秦艽一钱，当归三钱，川芎七分，甘草五分(炙)，海风藤二钱，桑枝三钱，乳香、木香各八分。主治中风身体烦痛，项背拘急，手足冷痹，腰膝沉重，举动艰难。方中羌活、独活、秦艽、肉桂祛风散寒胜湿；当归、川芎、乳香理气养血、活血止痛；桑枝、海风藤通经活络止痛。现代药理研究证明：羌活水溶性成分能抑制迟发型变态反应及炎症反应；独活水提物具有抗炎镇痛作用；当归和川芎中的阿魏酸具有增强心肌的血液供应、缓解心肌缺血的作用；秦艽具有抗炎、镇痛、解热作用，通过神经体液系统间接影响脑垂体，促使肾上腺皮质功能加强，皮质激素分泌增加；全方具有抗炎、镇痛、调节免疫、改善微循环作用，从而增加神经组织供血供氧，促进周围神经损伤的修复，是临床上治疗风寒湿痹的常用方剂，具有疏风散寒、祛湿宣痹之功效。
蠲痹汤属于2018年国家中医药管理局会同国家药品监督管理局制订《古代经典名方目录(第一批)》中的100首经典名方第79首。经典名方是指以古代医籍记载的古代经典名方制备方法为依据制备而得的中药药用物质的标准，除成型工艺外，其余制备方法应当与古代医籍记载基本一致。成型工艺一般采用冷冻干燥、喷雾干燥等不破坏物质组成的方式。经典名方临床疗效确切，运用现代科学技术将经典名方开发承携带方便、便于服用的中药制剂，不仅是对中医药的传承，也能更好的促进经典名方的临床应用。颗粒剂制备工艺相对简单、易赋形，服用、携带方便，在服用形式上与传统汤剂最为一致，能较大限度的保留传统汤剂的优点，因此以汤剂形式服用的经典名方选择颗粒剂最为适宜。
中药指纹图谱是控制中药质量的重要分析手段，可确保其内在质量均一和稳定。经过十几年的研究和运用，该项技术已日趋成熟，在中药质量标准控制中得到更广泛应用。中药指纹图谱的制作和应用常包括：(1)采集具有代表性的中药样品，采取适当的方法制备供试品溶液，根据确定的分析方法，对一定批次的中药样品进行分析，将所得的多批次数据进行处理，得到标准指纹图谱；(2)将样品按照与标准指纹图谱制作相同的方法进行样品处理、分离分析后，将所得的指纹图谱与标准指纹图谱进行相似度比较，一般相以度大于0.9即可视为该样品为合格。目前关于蠲痹汤的指纹图谱文献甚少，关于该方的成分分析以及质量控制方面也尚无报道。因此，该方具有较大的开发价值。为了更全面、更有效地控制蠲痹汤制剂临床用药的质量，使其安全性和疗效更加有所保障，需要对蠲痹汤组合物采用更为先进的质量检测手段，达到有效地控制蠲痹汤制剂产品质量的目的。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种蠲痹汤组合物指纹图谱的构建方法及检测方法，旨在解决现有技术中没有关于蠲痹汤组合物的指纹图谱文献报道的缺陷，有效的控制了蠲痹汤制剂的质量。
本发明的技术方案是：
一种蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
S1供试品溶液的制备：取蠲痹汤组合物，加入提取溶剂，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
S2参照物溶液的制备：取马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品，精密称定，分别加入体积分数为50％～80％的甲醇水溶液，制成参照物溶液；
S3检测：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液1～2μL，注入液相色谱仪进行色谱分析，测定，记录色谱图，分别得到供试品指纹图谱和参照物色谱图谱，制定蠲痹汤组合物的标准指纹图谱。
进一步地，所述步骤S1所述提取溶剂为体积分数为50％～80％的甲醇水溶液。
进一步地，所述步骤S3所述色谱分析条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温：20℃～30℃；以乙腈-体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.2mL/mL～0.5mL/mL，检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长220nm～330nm；理论板数按龙胆苦苷峰计算≥10000。
进一步地，所述指纹图谱的检测波长254nm。
进一步地，所述梯度洗脱具体操作为：
0～8分钟，乙腈8％→11％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液92％→89％；
8～15分钟，乙腈11％→17％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液89％→83％；
15～20分钟，乙腈17％→22.5％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液83％→77.5％；
20～30分钟，乙腈22.5％→42.5％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液77.5％→57.5％；
30～36分钟，乙腈42.5％→61％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液57.5％→39％；
36～40分钟，乙腈61％→100％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液39％→0％。
进一步地，所述步骤S3所述蠲痹汤组合物的标准指纹图谱包括11个特征峰，以4号峰龙胆苦苷色谱峰为S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：1号峰相对保留时间RRT为0.504，2号峰相对保留时间RRT为0.642，3号峰相对保留时间RRT为0.703，4号(S)峰相对保留时间RRT为1.000，5号峰相对保留时间RRT为1.334，6号峰相对保留时间RRT为1.528，7号峰相对保留时间RRT为2.008，8号峰相对保留时间RRT为2.138，9号峰相对保留时间RRT为2.670，10号峰相对保留时间RRT为2.691，11号峰相对保留时间RRT为2.951。
进一步地，所述步骤S3所述蠲痹汤组合物的标准指纹图谱中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11号色谱峰依次与马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品色谱峰保留时间相对应。
本发明的另一目的在于所述的蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法得到的标准指纹图谱在蠲痹汤组合物的质量检测和质量控制中的应用。
一种的蠲痹汤组合物的检测方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取待测蠲痹汤组合物，加入提取溶剂，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：取马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品，精密称定，分别加入体积分数为50％～80％的甲醇水溶液，制成对照品参照物溶液；
(3)检测：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液1～2μL，注入液相色谱仪进行色谱分析，测定，获得待测蠲痹汤组合物的图谱；
比较待测蠲痹汤组合物的图谱与所述的蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法制定的蠲痹汤组合物的标准对照指纹图谱。
进一步地，所述步骤S3色谱分析条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温：20℃～30℃；以乙腈-体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.2mL/mL～0.5mL/mL，检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长220nm～330nm；理论板数按龙胆苦苷峰计算≥10000。
进一步地，所述指纹图谱的检测波长254nm。
进一步地，所述梯度洗脱具体操作为：
0～8分钟，乙腈8％→11％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液92％→89％；
8～15分钟，乙腈11％→17％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液89％→83％；
15～20分钟，乙腈17％→22.5％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液83％→77.5％；
20～30分钟，乙腈22.5％→42.5％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液77.5％→57.5％；
30～36分钟，乙腈42.5％→61％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液57.5％→39％；
36～40分钟，乙腈61％→100％，体积分数为0.1％的磷酸水溶液39％→0％。
与现有技术相比，本发明具有以下优势：
(1)本发明提供的蠲痹汤组合物指纹图谱可全面反映出蠲痹汤的质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制蠲痹汤制剂产品质量的目的。
(2)本发明提供的蠲痹汤组合物指纹图谱参照中药注射剂指纹图谱的要求，对本发明涉及的中药组合物指纹图谱进行了研究，经过指纹图谱的检测波长、供试品制备溶剂等条件进行系统的优选，建立了指纹图谱方法，在对多批本中药组合物指纹图谱检测结果的基础上，逐渐积累数据，生成了对照指纹图谱，作为本品指纹图谱标准，从而达到能够更全面、有效地控制制剂质量的目的。
(3)本发明在建立蠲痹汤组合物的UPLC指纹图谱测定方法过程中，以相似度为指标进行精密度、稳定性和重复性试验考察研究，保证了方法的稳定性和适应性。
(4)蠲痹汤组合物化学成分复杂，本发明在建立起指纹图谱中，确认了11个共有特征峰，并指认了这11个成分，表征了羌活、独活、秦艽、桑枝、当归、川芎、炙甘草、乳香、肉桂等9个药味，克服了单一成分难以反映整体质量的缺陷，可以从整体上更全面的控制复方制剂的内在质量。
(5)本发明提供的蠲痹汤组合物指纹图谱采用国家药典委员会提供中药色谱指纹图谱相似度评价系统作为本中药组合物指纹图谱相似度计算软件，经多批样品的试验研究，所得出的评价结论基本一致，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统评价指纹图谱的相似度，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
附图说明
图1为供试品溶液的三维全波长扫描色谱图；
图2为供试品溶液在不同波长下的指纹图谱色谱图；
图3为不同提取溶剂制备的供试品溶液检测所得指纹图谱色谱图；
图4为供试品色谱、对照品色谱与空白样品图谱比较；
图5为10份第一蠲痹汤组合物相似度的色谱图的拟合图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
本发明试药及仪器：
试药：
马钱苷酸对照品(批号：110773-201614，中国药品生物制品检定研究院)；
桑皮苷A对照品(批号：110715-201720，中国药品生物制品检定研究院)；
绿原酸对照品(批号：112002-201702，中国药品生物制品检定研究院)；
龙胆苦苷对照品(批号：110713-201813，中国药品生物制品检定研究院)；
阿魏酸对照品(批号：111895-201504，中国药品生物制品检定研究院)；
紫花前胡苷对照品(批号：111626-201610，中国药品生物制品检定研究院)；
桂皮醛对照品(批号：110713-201813，中国药品生物制品检定研究院)；
甘草酸铵对照品(批号：111895-201504，中国药品生物制品检定研究院)；
藁本内酯对照品(批号：111626-201610，中国药品生物制品检定研究院)；
蛇床子素对照品(批号：110822-201710，中国药品生物制品检定研究院)；
11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品(批号：111626-201610，中国药品生物制品检定研究院)；
蠲痹汤颗粒(自制；批号：JB210801-JB210810)，甲醇(美国BCR公司，色谱纯)、乙腈(美国BCR公司，色谱纯)试剂为分析纯，水为超纯水。
仪器：
Waters H-class超高效液相色谱仪；Waters PDA检测器；Empower工作站；
Waters Acquity UPLC BEH C18(100×2.1mm，1.7μm)色谱柱；
万分之一分析天平(AL104，梅特勒-托利多公司)；
十万分之一分析天平(MS105DU，梅特勒-托利多公司)；
超声清洗机(KQ-500DE昆山市超声仪器有限公司)；
超纯水系统(默克股份有限公司，MILLIPORE Synergy UV)。
TRL-05型冷冻干燥机(大连双瑞科技有限公司)。
实施例1、参照物溶液的制备
取马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品适量，精密称定，分别加体积分数为80％的甲醇水溶液制成每1mL各含马钱苷酸46.44μg、桑皮苷A 47.38μg、绿原酸51.76μg、龙胆苦苷50.75μg、阿魏酸90.24μg、紫花前胡苷50.42μg、桂皮醛88.65μg、甘草酸铵95.68μg、藁本内酯99.81μg、蛇床子素55.25μg、11-羰基-β-乙酰乳香酸51.67μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。
实施例2、蠲痹汤组合物的制备
取羌活3.73kg、独活3.73kg、肉桂1.87kg、秦艽3.73kg、当归11.19kg、川芎2.61kg、蜜炙甘草1.87kg、海风藤7.46kg、桑枝11.19kg、乳香2.98kg、木香2.98kg，共十一味饮片，加水煎煮两次，第一次加533kg水，煎煮1h，第二次加425kg水，煎煮1h，合并两次提取液，趁热用200目滤布滤过，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，制粒，即得蠲痹汤组合物。
实施例3、指纹图谱检测波长的考察
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；流速0.4mL/mL，柱温：30℃。
表1：指纹图谱流动相梯度程序
时间(分钟) 乙腈(％) 体积分数为0.1％的磷酸水溶液(％)
0～8 8→11 92→89
8～15 11→17 89→83
15～20 17→22.5 83→77.5
20～30 22.5→42.5 77.5→57.5
30～36 42.5→61 57.5→39
36～40 61→100 39→0
采用二极管阵列检测器对供试品溶液进行全波长检测，并同时收集220nm、254nm、300nm、330nm波长处的图谱(见图1～2)，综合考察，蠲痹汤组合物在254nm波长处的峰信息量最大，因此最后确定254nm为蠲痹汤组合物指纹图谱的检测波长。
实施例4、供试品提取溶剂的考察
分别考察不同溶剂甲醇、体积分数为80％的甲醇水溶液和水对蠲痹汤组合物指纹图谱的提取效果。
供试品溶液的制备：取蠲痹汤组合物0.5g，精密称定，平行三份，分别加甲醇、体积分数为80％的甲醇水溶液和水25mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；分别精密吸取1μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。
结果见图3，其它溶剂制备的样品相较于体积分数为80％的甲醇水溶液制备的样品，色谱峰有缺失，体积分数为80％的甲醇水溶液对蠲痹汤组合物提取峰个数最多、峰面积最大，因此选择体积分数为80％的甲醇水溶液作为蠲痹汤组合物指纹图谱的提取溶剂。
实施例5、方法学研究
5.1专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液(批号：JB210801)、体积分数为80％的甲醇水溶液空白溶剂各1μL，注入液相色谱仪，按照指纹图谱方法测定，结果供试品色谱中与对照品色谱相应位置上有色谱峰(见图4)，从左到右峰1～11依次为：马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸，空白样品上没有相应峰，表明阴性无干扰，本方法专属性强。
5.2指纹图谱精密度试验
按照指纹图谱精密度规定方法操作，取样品(批号：JB210801)制备供试品溶液，连续进样6次，导出色谱图运用2012版中药色谱指纹图谱相似度软件计算相似度，结果相似度均在0.90以上，表明仪器精密度良好。
5.3指纹图谱稳定性试验
按照指纹图谱稳定性测定方法操作，取样品(批号：JB210801)制备供试品溶液，于制备完成后的第0、4、8、12、20、24h分别进样测定，导出色谱图运用2012版中药色谱指纹图谱相似度软件计算相似度，结果相似度均在0.90以上，说明供试品溶液在制备完成后的24h内稳定性良好。
5.4指纹图谱重复性试验
按照指纹图谱重复性测定方法操作，取样品(批号：JB210801)制备供试品溶液，共6份，分别进样测定，导出色谱图运用2012版中药色谱指纹图谱相似度软件计算相似度，结果相似度均在0.90以上，说明本指纹图谱测定方法重复性良好。
5.5指纹图谱重现性试验
由不同实验人员在不同日期按照指纹图谱重复性测定方法操作，取样品(批号：JB210801)制备供试品溶液，平行6份，分别进样测定，导出色谱图运用2012版中药色谱指纹图谱相似度软件计算相似度，结果相似度均在0.90以上，说明本指纹图谱测定方法中间精密度良好。
以上试验结果表明，应用此方法具有稳定性好、重复性好，可重现的优点，能全面反映蠲痹汤组合物的整体和内在质量。
实施例6、共有峰的确定及对照指纹图谱的建立
采用10批不同批次饮片随机组合，分别制备10份蠲痹汤组合物，依法制备供试品溶液，进样，测定，根据10批次供试品溶液色谱图各色谱峰的情况，选择稳定的共有特征峰为11个，以参照物龙胆苦苷色谱峰为S峰，计算10批样品共有峰相对保留时间，结果如下所示：
1号峰相对保留时间RRT为0.504，RSD％为0.02％；
2号峰相对保留时间RRT为0.642，RSD％为0.02％；
3号峰相对保留时间RRT为0.703，RSD％为0.04％；
4号峰相对保留时间RRT为1.000，RSD％为0.05％；
5号峰相对保留时间RRT为1.334，RSD％为0.04％；
6号峰相对保留时间RRT为1.528，RSD％为0.03％；
7号峰相对保留时间RRT为2.008，RSD％为0.02％；
8号峰相对保留时间RRT为2.138，RSD％为0.02％；
9号峰相对保留时间RRT为2.670，RSD％为0.02％；
10号峰相对保留时间RRT为2.691，RSD％为0.04％；
11号峰相对保留时间RRT为2.951，RSD％为0.06％；
其中，4号S峰是参照物的色谱峰。
所述的11个共有特征峰的相对保留时间偏差RSD均小于2％，此结果表明10批样品中均出现这11个色谱峰，相对保留时间偏差小表明出峰时间稳定，误差小，可作为共有峰进行相似度评价。
运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)对10批蠲痹汤组合物样品进行拟合(见图5、表2)，生成蠲痹汤对照指纹图谱并计算10批样品相似度，结果表明，10批蠲痹汤组合物相似度在0.975～0.994之间，相似度较高，表明不同批次的蠲痹汤组合物质量一致性较好。
表2：10份第一蠲痹汤组合物相似度评价结果
Figure BDA0003388770810000101
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (5)

1.一种蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1供试品溶液的制备：取蠲痹汤组合物，加入提取溶剂，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
S2参照物溶液的制备：取马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品，精密称定，分别加入体积分数为50％～80％的甲醇水溶液，制成对照品参照物溶液；
S3检测：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液1～2μL，注入液相色谱仪进行色谱分析，测定，记录色谱图，分别得到供试品指纹图谱和参照物色谱图谱，制定蠲痹汤组合物的标准指纹图谱；
所述步骤S1所述提取溶剂为体积分数为50％～80％的甲醇水溶液；
所述步骤S3所述色谱分析条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温：20℃～30℃；以乙腈-体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.2mL/mL～0.5mL/mL，检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长220nm～330nm；理论板数按龙胆苦苷峰计算≥10000；
所述梯度洗脱具体操作为：
0～8分钟，乙腈8%→11%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液92%→89%；
8～15分钟，乙腈11%→17%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液89%→83%；
15～20分钟，乙腈17%→22.5%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液83%→77.5%；
20～30分钟，乙腈22.5%→42.5%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液77.5%→57.5%；
30～36分钟，乙腈42.5%→61%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液57.5%→39%；
36～40分钟，乙腈61%→100%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液39%→0%。
2.根据权利要求1所述的蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤S3所述蠲痹汤组合物的标准指纹图谱包括11个特征峰，以4号峰龙胆苦苷色谱峰为S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：1号峰相对保留时间 RRT为0.504，2号峰相对保留时间RRT为0.642，3号峰相对保留时间RRT为0.703，4号(S)峰相对保留时间RRT为1.000，5号峰相对保留时间RRT为1.334，6号峰相对保留时间RRT为1.528，7号峰相对保留时间RRT为2.008，8号峰相对保留时间RRT为2.138，9号峰相对保留时间RRT为2.670，10号峰相对保留时间RRT为2.691，11号峰相对保留时间RRT为 2.951。
3.根据权利要求1所述的蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤S3所述蠲痹汤组合物的标准指纹图谱中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11号色谱峰依次与马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品色谱峰保留时间相对应。
4.根据权利要求1-3任一项所述的蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法得到的标准指纹图谱在蠲痹汤组合物的质量检测和质量控制中的应用。
5.一种蠲痹汤组合物的UPLC检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取待测蠲痹汤组合物，加入提取溶剂，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
（2）参照物溶液的制备：取马钱苷酸、桑皮苷A、绿原酸、龙胆苦苷、阿魏酸、紫花前胡苷、桂皮醛、甘草酸铵、藁本内酯、蛇床子素、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品，精密称定，分别加入体积分数为50％～80％的甲醇水溶液，制成对照品参照物溶液；
（3）检测：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液1～2μL，注入液相色谱仪进行色谱分析，测定，获得待测蠲痹汤组合物的图谱；
比较待测蠲痹汤组合物的图谱与权利要求1-3任一项所述的蠲痹汤组合物UPLC指纹图谱的构建方法制定的蠲痹汤组合物的标准指纹图谱；
所述步骤（1）所述提取溶剂为体积分数为50％～80％的甲醇水溶液；
所述步骤（3）色谱分析条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温：20℃～30℃；以乙腈-体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.2mL/mL～0.5mL/mL，检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长220nm～330nm；理论板数按龙胆苦苷峰计算≥10000；
所述梯度洗脱具体操作为：
0～8分钟，乙腈8%→11%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液92%→89%；
8～15分钟，乙腈11%→17%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液89%→83%；
15～20分钟，乙腈17%→22.5%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液83%→77.5%；
20～30分钟，乙腈22.5%→42.5%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液77.5%→57.5%；
30～36分钟，乙腈42.5%→61%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液57.5%→39%；
36～40分钟，乙腈61%→100%，体积分数为0.1％的磷酸水溶液39%→0%。
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