CN110715987B - 一种余江夏天无的质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种余江夏天无的质量控制方法，包括步骤有：对照溶液的制备、供试品溶液的制备、HPLC法建立余江夏天无对照指纹图谱、测定余江夏天无检测样品的指纹图谱、计算检测样品的相似度，本发明通过建立余江夏天无的指纹图谱，具有重复性好，稳定性高等优点，可有效对余江夏天无进行鉴定并监控其质量，提升特色药材余江夏天的质量控制。

Description

一种余江夏天无的质量控制方法
技术领域
本发明属于中药质量控制方法，具体涉及一种余江夏天无的质量控制方法。
背景技术
夏天无为罂粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.的干燥块茎，为我国常用中草药。经现代医学研究证明，夏天无的块茎中含有能活血通络、行气止痛的化学成分，对风湿性关节炎、跌打损伤、中风偏瘫等多种疾病疗效显著。主产于江西、浙江、安徽、江苏、福建、湖南、湖北、河南等地区，夏天无为江西道地药材，主产于江西省余江县，是全国最大的夏天无种植区。“余江夏天无”质量上乘，为国家地理标志保护产品。
夏天无收载于2015年版《中国药典》一部，质量控制指标为盐酸巴马汀和原阿片碱，但均不是夏天无的特有成分,存在于罂粟科的多种植物中,因此并不能确切地反映夏天无药材的质量。余江夏天无是江西省余江县特产，中国国家地理标志产品，属道地药材，成分和药性上优于其他产地夏天无，具有独特性和道地性，因此，迫切需要建立余江夏天无的HPLC特征指纹图谱，加强鉴别余江夏天无的质量控制手段，为余江夏天无的品种鉴别和道地性研究奠定基础，为江西特色药材夏天无及其制剂的质量控制提供依据。
发明内容
本发明的目的在于解决上述技术问题，提供一种余江夏天无的质量控制方法，所述方法应用中药指纹图谱技术，具有重复性好，稳定性高等优点，可有效对余江夏天无进行鉴定并监控其质量，提升特色药材余江夏天的质量控制。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种余江夏天无的质量控制方法，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取羟基白毛莨宁、α-别隐品碱、延胡索单酚、黄连碱、原阿片碱，四氢药根碱、延胡索乙素、掌叶防己碱、小檗碱、腾荷包牡丹定碱、毛莨碱宁、盐酸罂粟碱、咖洛定、盐酸巴马汀，隐品巴马汀对照品适量，精密称定，用甲醇溶液制成含上述成分各40μg/ml的混合对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：取夏天无细粉约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)HPLC法建立余江夏天无对照指纹图谱：以Waters ACQUITY BEH SHIELD RP18(2.1mm×100mm，1.8μm)为色谱柱，柱温为28-32℃，流动相为乙腈(A)—0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0)(B)，梯度洗脱，流速为0.8-1.2ml/min，进样量5-15μl，检测波长265nm，将至少15批余江夏天无供试品注入液相色谱仪，记录色谱图，利用中药指纹图谱相似度评价软件生成余江夏天无对照指纹图谱；
(4)按步骤(3)方法测定余江夏天无检测样品的指纹图谱；
(5)计算余江夏天无检测样品的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度。
作为本发明优选的实施方案，所述柱温为30℃。
作为本发明优选的实施方案，所述流速为0.6ml/min。
作为本发明优选的实施方案，所述进样量为10μl。
作为本发明优选的实施方案，所述梯度洗脱的条件为：0-5min，A20％→40％；5-20min，A40％→60％；20-30min，A60％→80％。
综上，与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：
本发明应用中药指纹图谱技术建立余江夏天无的质量控制方法，具有重复性好，稳定性高等优点，可对余江夏天无进行鉴定并监控其质量，提升特色药材余江夏天的质量控制。
说明书附图
图1对照品溶液特征峰指认图谱；
图2余江夏天无供试品溶液图谱；
图3 15批余江夏天无供试品指纹图谱叠加图；
图4不同产地夏天无供试品指纹图谱相似度评价。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实验例1
一、余江夏天无对照指纹图谱建立
1、色谱条件的筛选
分别对Waters ACQUITY BEH SHIELD RP18柱,SUPELCOSIL LC-18-DB柱，Diamonsil C8柱，KROMASIL-c18柱，Shim-packVP-ODS，Hypersil DSC C-18柱，EclipseXDBC-18柱以及流动相甲醇-乙酸钠/冰乙酸缓冲溶液(75:25pH5.0)，乙腈-0.2％冰醋酸(2:79，三乙胺调节PH4.5)，甲醇-水(30:70)加pH6.8醋酸-醋酸铵缓冲液5ml，乙腈-0.2％醋酸溶液(三乙胺调ph5.0)，甲醇-磷酸盐缓冲液(65:35)，1％三乙胺-甲醇40:60等条件下进行了考察，结果表明在以下条件下检测峰最多，分离效果最好。
即：色谱柱Waters ACQUITY BEH SHIELD RP18(2.1mm×100mm，1.8μm),柱温为30℃，流动相为乙腈(A)--0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0)(C)，梯度洗脱(0-5min，A20％→40％；5-20min，A40％→60％；20-30min，A60％→80％)，流速为0.6ml/min，进样量10μl，检测波长265nm。
2、对照品溶液的制备取羟基白毛莨宁、α-别隐品碱、延胡索单酚、黄连碱、原阿片碱，四氢药根碱、延胡索乙素、掌叶防己碱、小檗碱、腾荷包牡丹定碱、毛莨碱宁、盐酸罂粟碱、咖洛定、盐酸巴马汀，隐品巴马汀对照品适量，精密称定，用甲醇溶液制成含上述成分各40μg/ml的混合对照品溶液。
3、供试品溶液的制备取夏天无细粉约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
4、余江夏天无HPLC对照指纹图谱的建立
测定法：夏天无药材购自江西余江，共15批，经鉴定为药材夏天无RhizomaCorydalis Decumbentis。样品信息见表1。
表1夏天无HPLC特征图谱样品
样品编号 来源 批号 样品编号 来源 批号
1 江西余江 20160708 9 江西余江 20180211
2 江西余江 20160714 10 江西余江 20180405
3 江西余江 20160826 11 江西余江 20180412
4 江西余江 20161013 12 江西余江 20180517
5 江西余江 20170417 13 江西余江 20190609
6 江西余江 20170620 14 江西余江 20190211
7 江西余江 20170712 15 江西余江 20190312
8 江西余江 20170803
按照上述色谱条件方法记录15批余江夏天无药材0～30min HPLC特征图谱。通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)对15批余江夏天无药材HPLC特征图谱进行相似度计算(见表2)，并生成了对照特征图谱，建立余江夏天无HPLC对照特征图谱(见图2和图3)，并通过对照品加入法指认了其中15个特征峰：1号峰为羟基白毛莨宁(保留时间2.446)，2号峰为ɑ-别隐品碱(保留时间2.648)，3号峰为延胡索单酚(保留时间2.905)，4号峰为黄连碱(保留时间6.457)，5号峰为延胡索乙素(保留时间9.314)，6号峰为四氢药根碱(保留时间9.865)，7号峰为原阿片碱(保留时间12.385)，8号峰为掌叶防己碱(保留时间13.154)，9号峰为小檗碱(保留时间13.924)，10号峰为腾荷包牡丹定碱(保留时间14.265)，11号峰为毛莨碱宁(保留时间16.216)，12号峰为盐酸罂粟碱(保留时间17.622)，13号峰为咖洛定(保留时间18.068)，14号峰为盐酸巴马汀(保留时间25.837)，15号峰为隐品巴马汀(保留时间27.439)(见图1)。
表2 15批余江夏天无药材HPLC特征图谱相似度计算结果
Figure BDA0002244058680000051
5、特征峰相对保留时间的确定
15批余江夏天无HPLC特征图谱有15个特征峰，其中7号峰为原阿片碱，峰面积相对较大，重复性好，作为参照峰(S)，依据2015年版《中国药典》一部关于中药特征图谱的规定，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，在规定值的±5％。将相对保留时间的平均值作为规定值，分别为:0.197(峰1)，0.214(峰2)，0.235(峰3)，0.521(峰4)，0.752(峰5)，0.797(峰6)，1.000(峰7)，1.062(峰8)，1.124(峰9)，1.152(峰10)，1.309(峰11)，1.423(峰12)，1.459(峰13)，2.085(峰14)，2.216(峰15)。15批余江夏天无的15个特征峰相对保留时间见表3。
表3 15批余江夏天无的15个特征峰相对保留时间
批号 1 2 3 4 5 6 7(S) 8 9 10 11 12 13 14 15
20160708 0.197 0.214 0.235 0.521 0.751 0.797 1.OOO 1.062 1.124 1.152 1.309 1.423 1.459 2.085 2.216
20160714 0.196 0.214 0.236 0.522 0.752 0.797 1.OOO 1.063 1.125 1.156 1.311 1.42 1.46 2.087 2.212
20160826 0.197 0.213 0.235 0.521 0.752 0.795 1.OOO 1.064 1.126 1.152 1.305 1.425 1.461 2.085 2.215
20161013 0.196 0.215 0.235 0.522 0.753 0.795 1.OOO 1.06 1.124 1.154 1.304 1.425 1.458 2.084 2.218
20170417 0.196 0.216 0.235 0.52 0.753 0.796 1.OOO 1.064 1.12 1.15 1.313 1.426 1.458 2.089 2.214
20170620 0.196 0.213 0.234 0.521 0.75 0.795 1.OOO 1.066 1.125 1.151 1.308 1.428 1.462 2.09 2.216
20170712 0.198 0.215 0.235 0.52 0.751 0.795 1.OOO 1.062 1.12 1.153 1.312 1.418 1.459 2.082 2.218
20170803 0.197 0.216 0.235 0.52 0.75 0.799 1.OOO 1.06 1.124 1.15 1.31 1.43 1.462 2.084 2.216
20180211 0.195 0.214 0.235 0.52 0.752 0.798 1.OOO 1.061 1.125 1.15 1.305 1.425 1.459 2.086 2.221
20180405 0.196 0.214 0.238 0.519 0.752 0.798 1.OOO 1.059 1.126 1.154 1.312 1.418 1.458 2.091 2.209
20180412 0.198 0.213 0.234 0.52 0.752 0.795 1.OOO 1.062 1.124 1.152 1.305 1.425 1.462 2.082 2.218
20180517 0.197 0.215 0.237 0.521 0.751 0.798 1.OOO 1.065 1.125 1.153 1.308 1.422 1.46 2.081 2.216
20190609 0.196 0.214 0.237 0.52 0.75 0.796 1.OOO 1.06 1.121 1.152 1.306 1.426 1.457 2.093 2.22
20190211 0.196 0.214 0.235 0.522 0.752 0.798 1.OOO 1.063 1.123 1.154 1.308 1.421 1.459 2.092 2.214
20190312 0.197 0.213 0.236 0.519 0.753 0.798 1.OOO 1.058 1.125 1.15 1.312 1.42 1.456 2.085 2.215
平均值 0.197 0.214 0.235 0.521 0.752 0.797 1.OOO 1.062 1.124 1.152 1.309 1.423 1.459 2.086 2.216
二、余江夏天无与不同产地夏天无HPLC特征图谱的比较
比较余江夏天无与不同产地夏天无HPLC特征图谱中特征峰数目及相对峰面积，并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2.0版)评价相似度，结果表明，余江夏天无HPLC特征图谱与不同产地夏天无的特征峰数目及相对峰面积有显著差异，相似度为0.4～0.8，见表4和图4。
表4不同产地的夏天无对照特征图谱的相似度
Figure BDA0002244058680000061
Figure BDA0002244058680000071
三、余江夏天无检测的方法学考察
1、精密度试验
精密吸取同一夏天无(批号20170620)供试品溶液，连续进样6次，以5号峰为参照峰(S)，各特征峰相对保留时间的RSD＜2.0％，相对峰面积的RSD＜2.0％，表明仪器精密度良好。
2、稳定性试验
精密吸取同一夏天无(批号20170620)供试品溶液，分别于供试品溶液制备后第0，2，6，12，18，24h进样，以3号峰为参照峰(S)，各特征峰相对保留时间的RSD％＜2.0％，相对峰面积的RSD％＜2.0％，表明供试品溶液在制备后24h内稳定。
3、重复性试验
取同一夏天无(批号20170620)粉末约2g，平行5份，精密称定，按2.1项下方法处理，得供试品溶液，分别进样，记录特征图谱，以5号峰为参照峰(S)，各特征峰相对保留时间的RSD％＜2.0％，相对峰面积的RSD％＜2.0％，表明该方法的重复性良好。

Claims (4)

1.一种余江夏天无的质量控制方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取羟基白毛莨宁、α-别隐品碱、延胡索单酚、黄连碱、原阿片碱，四氢药根碱、延胡索乙素、掌叶防己碱、小檗碱、腾荷包牡丹定碱、毛莨碱宁、盐酸罂粟碱、咖洛定、盐酸巴马汀，隐品巴马汀对照品适量，精密称定，用甲醇溶液制成含上述成分各40μg/ml的混合对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：取夏天无细粉约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)HPLC法建立余江夏天无对照指纹图谱：以WatersACQUITY BEH SHIELD RP18为色谱柱，色谱柱规格为2.1mm×100mm，1.8μm，柱温为28-32℃，流动相是流动相A为乙腈，流动相B为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，其中0.05mol/L磷酸二氢钾溶液的配制方法为每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0，梯度洗脱，流速为0.8-1.2ml/min，进样量5-15μl，检测波长265nm，将至少15批余江夏天无供试品注入液相色谱仪，记录色谱图，利用中药指纹图谱相似度评价软件生成余江夏天无对照指纹图谱；
(4)按步骤(3)方法测定余江夏天无检测样品的指纹图谱；
(5)计算余江夏天无检测样品的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度；
所述梯度洗脱的条件为：0-5min，A20％→40％；5-20min，A40％→60％；20-30min，A60％→80％。
2.根据权利要求1所述的余江夏天无的质量控制方法，其特征在于所述柱温为30℃。
3.根据权利要求1所述的余江夏天无的质量控制方法，其特征在于所述流速为0.6ml/min。
4.根据权利要求1所述的余江夏天无的质量控制方法，其特征在于所述进样量为10μl。
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