CN105287875B - 一种四物汤配方颗粒的制备方法及其质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种四物汤配方颗粒的制备方法及其质量控制方法，其制备方法为：熟地黄、当归、白芍、川芎饮片，加入总投料量5‑15倍重量的水，提取2次，收集芳香水，合并两煎滤液，真空减压浓缩，取浓缩液加入β‑环糊精和二氧化硅搅拌均匀后得清膏，将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，干法制粒，即得。其质量控制方法包括红外指纹图谱、薄层定性鉴别及HPLC含量测定。本发明按照传统方法合煎，较目前单味配方颗粒服用时各药味相加，更能充分发挥中药配伍的优势，体现了中医药整体的观念，确保达到减毒增效的目的，为临床用药提供新的选择，并建立了完善的质量标准，结合光谱法和色谱法2种方法进行质量控制，从整体到具体，可有效控制复方颗粒的质量。

Description

一种四物汤配方颗粒的制备方法及其质量控制方法

技术领域

本发明属于中药配方颗粒技术领域，具体涉及一种四物汤配方颗粒的制备方法及其质量控制方法。

背景技术

四物汤是由熟地黄、当归、白芍、川芎四味饮片组成，为治疗“营血虚滞”的著名方剂，该方最早见于唐代蔺道人的《仙授理伤续断秘方》，宋代《太平惠民和剂局方》首先记载了四物汤治疗妇产科疾病，并拓展了其临床应用。四物汤中用药仅有4 味，但药简意赅，功专效稳，为治疗血证之基本方。方中熟地黄味甘性微温，质润而腻，为滋阴补血之要药。当归甘温质润，归经肝心，长于补血，兼能活血，本方用之，一则可助熟地黄补血之力，二则可行经隧脉道之滞，为方中臣药。白芍酸甘质柔，归肝、脾经，功擅养血敛阴，与熟地、当归相协则本方滋阴养血之功益著，并可缓挛急而止腹痛。川芎辛散温通，归肝、心经，上行头目，下行血海，中开郁结，旁道络脉，为血中之气药，顺其血行而防血瘀，长于活血行气，与当归相伍则畅达血脉之力益彰，二者并为方中佐药。本方配伍特点有二：一为补血与活血之品并用，补血不滞血，和血不伤血。二为方中诸药皆归肝经，因而本方重在调补肝血。

四物汤处方具有补血、和血功效。药效学研究和临床研究显示，该方具有抗缺氧、免疫调节、抗自由基损伤、血液系统作用及双向调节子宫平滑肌的作用，原方或其加减方现代临床常用于治疗胎位不正、月经失调、功能性子宫出血、子宫肌瘤等妇科疾病。还可用于内科、皮肤科疾病的治疗，且取得了较好的治疗效果。

中药汤剂作为传统的中医临床用药的主要剂型，具有随证加减、灵活组方、易于吸收、起效较快等优点，深受广大患者的信赖。却因调配、携带、临时煎煮、久置容易发生霉败变质、汤液味苦、量大等缺点不能适应现代人的生活要求。为了保持汤剂的优势，克服汤剂的种种不足，中药免煎剂应运而生。中药配方颗粒是在中医药理论的指导下，经过科学炮制的传统中药饮片，用现代化的技术精制而成，与传统饮片相比，具有质量稳定，调配方便准确、携带保管方便等优点，与传统汤剂相比，具有以下提取特点：1.多成分提取，保持多药性特性，每味中药往往含有多种成分；2.采用多成分工艺，保持单味药的多药效性，最大限度的保留了药物的有效成分；3.仿照传统中药汤剂的煎煮模式，保持了中药汤剂的特点，体现中医特色。

在国内，已有数百种单味配方颗粒上市，但由于目前中药配方颗粒都是单味中药提取物，使用时“单味提取，混合冲服”，人们担心 “共煎”和“分煎”的差异性问题。这种“共煎”和“分煎”差异的存在，使复方配方颗粒为临床用药提供了新的选择。

解决单味配方颗粒存在争议的问题，充分发挥传统方剂配伍的优势，达到减毒增效的效果，尤为重要。复方配方颗粒不仅传承了中药单味配方颗粒的优点，同时又考虑了饮片在煎煮过程中的相互作用，符合中医传统用药理论，具有较大的价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种四物汤配方颗粒的制备方法及其质量控制方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种四物汤配方颗粒的制备方法，所述配方颗粒由熟地黄、当归、白芍、川芎四味饮片按质量比为1-5:1-5:1-5:1-5制成，包括如下步骤：

a、取熟地黄、当归、白芍、川芎饮片，加入总投料量5-15倍重量的水，煎煮提取0.5-2小时，即一煎；一煎后药渣加入总投料量4-10倍重量的水，煎煮提取0.5-1.5小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在50-100℃条件下相对密度为1.00~1.14的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，得喷干粉，将喷干粉加入麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目的四物汤配方颗粒。

优选的，所述的四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄、当归、白芍、川芎饮片，加入总投料量8倍重量的水，煎煮提取1小时，即一煎；一煎后药渣加入总投料量6倍重量的水，煎煮提取1小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，真空减压浓缩至在50-100℃条件下相对密度为1.05~1.08的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水清膏进行喷雾干燥，得喷干粉，将喷干粉加入麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目的四物汤配方颗粒。

本发明的当归、川芎中含有挥发油，为了最大限度的提取有效成分，本发明在两次煎煮提取过程中，采用挥发油收集装置，收集芳香水，这里的芳香水是指挥发油成分的近饱和或饱和水溶液。

优选的，步骤c中，所述β-环糊精的加入量占浓缩液固含量重量的1-25%，优选5-20%；二氧化硅的加入量占浓缩液固含量重量的0.1-5%，优选0.5-1%。其中二氧化硅的堆密度为0.14～0.20g/ml，通过七号筛（125μm）的样品量应不低于供试量的85%。

优选的，步骤d中，麦芽糊精的加入量占喷干粉重量的0-25%。

优选的，步骤d中，所述喷雾干燥的工艺参数为：控制进风温度170℃~185℃，出风温度85℃~95℃。

本发明还提供了一种上述制备方法制备的四物汤配方颗粒的质量控制方法，可先进行红外光谱进行扫描，作为整体性鉴别，通过软件操作，若与标准图谱比较，相似度低于90%，则判定为不合格，无需做薄层色谱定性鉴别和高效液相色谱的含量测定。如果相似度超过90%，则在进一步采用薄层色谱法进行定性鉴别和采用高效液相法进行含量测定。

具体包括以下方法中的一种或几种：

（1）采用红外指纹图谱进行质量控制，包括步骤如下：

样品的提取：取四物汤配方颗粒适量，研细，取0.5g，加无水乙醇20 ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，得到无水乙醇提取物；

红外光谱检测：用傅里叶变换红外光谱仪，测定范围为4000cm^-1－400cm^-1，DTGS检测器，分辨率4cm^-1，扫描次数16次，扫描过程时时扣除水和二氧化碳的干扰，环境相对湿度低于60%，溴化钾压片法进行检测；四物汤配方颗粒红外指纹图谱具有以下特征：最强峰：峰位1054.84cm^-1，具有1104.78 cm^-1、996.70 cm^-1两个峰与最强峰形成峰簇，次强峰：峰位2935.53cm^-1，较强峰：峰位1415.41cm^-1，具有1385.06 cm^-1、1343.54 cm^-1两个峰与较强峰形成峰簇，在1624.92 cm^-1、1263.08 cm^-1各具有一个峰，同时依据峰强从高到低出现925.14cm^-1、777.72cm^-1、868.40cm^-1、818.33cm^-14个峰；

其中本发明所述的红外指纹图谱可以是与其相关性达到90%以上的红外指纹图谱。

（2）采用薄层色谱定性鉴别：

取四物汤配方颗粒0.8g，研细，加水40ml使溶解，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录ⅥB试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸4:1:1:0.3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）采用薄层色谱定性鉴别：

取四物汤配方颗粒1g，研细，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇溶液萃取2次，每次25ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液；另取白芍对照药材1g，加水60ml，煎煮30分钟，滤过，滤液用水饱和正丁醇溶液萃取2次，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录ⅥB试验，吸取上述供试品溶液5µl，对照药材溶液2µl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）采用薄层色谱定性鉴别：

取四物汤配方颗粒2g，研细，加水50ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次50ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液；另取5-羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录ⅥB试验，吸取上述供试品10µl，对照品1µl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯2:3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（5）四物汤配方颗粒的含量测定，采用高效液相色谱法，具体步骤如下：

色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%醋酸溶液10:90为流动相；流速：1ml/min；检测波长为240nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备 取芍药苷、阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含芍药苷100μg、阿魏酸20μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备，取四物汤配方颗粒，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1g颗粒含白芍以芍药苷C₂₃H₂₈O₁₁计，不得少于4.0mg，含当归、川芎以阿魏酸C₁₀H₁₀O₄计，不得少于0.4mg。

本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

（1）四物汤按照传统方法合煎制成复方配方颗粒，较目前单味配方颗粒服用时各药味简单相加，更能充分发挥中药配伍的优势，体现了中医药整体的观念，确保达到减毒增效的目的，为临床用药提供新的选择；

（2）本发明在煎煮提取过程中收集芳香水，提取浓缩液用β-环糊精和二氧化硅搅包合后，再与芳香水混合后进行喷雾干燥，此方法喷雾过程不易粘壁，喷雾干燥粉末流动性较好、不易吸潮，能够保留挥发油的原有气味,且能最大限度的保留四物汤中阿魏酸的含量；

（3）本发明采用光谱法，即红外光谱，进行质量控制，同时又采用色谱法，即薄层色谱法和高效液相色谱法，进行质量控制，光谱法是利用物质对光的吸收或者本身受到激发而得到特定光谱来进行分析的，具有整体性分析功能优势，而且分析速度很快、成本很低，但对于具体单一成分较差，色谱法是一种分离方法,目的是将混合物分离为各种纯物质,然后再用光谱等方法进行分别检测，具有鉴别和定量分析具体的单一成分，但整体性较差，本发明结合了2种方法进行质量控制，先进行快速的红外光谱鉴别，从整体到具体，较好地保证了产品质量；

（4）本发明提供了利用中红外色谱仪建立四物汤配方颗粒红外特征图谱的质量控制方法，

本发明将红外光谱技术应用于中药的质量控制，突出了中药复方的整体效应，同时将复杂的问题简单化，将四物汤配方颗粒作为一个整体，观察其“整体性”，从整体上保证药品安全有效、质量可控。本发明红外光谱鉴别选择无水乙醇作为溶媒提取后进行压片，排除了淀粉、多糖等成分干扰，所得的红外特征图谱比直接压片法峰形更好，具有鉴别四物汤配方颗粒颗粒的特征性；

（5）本发明对四物汤配方颗粒建立了利用高效液相色谱法同时测定颗粒中芍药苷和阿魏酸两种主要指标性成分含量的质量控制方法，该质量标准实现了对处方中白芍、当归、川芎3味饮片含量同时进行控制，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现药品安全有效、质量可控。

附图说明

图1为四物汤配方颗粒的标准红外指纹图谱。

图2为实施例1四物汤配方颗粒的红外指纹图谱。

图3为实施例2的薄层色谱图，其中1为阿魏酸，2为缺当归、川芎的四物汤配方颗粒阴性样品，3-5为四物汤配方颗粒。

图4为实施例3的薄层色谱图，其中1为白芍对照药材，2为缺白芍的四物汤配方颗粒阴性样品，3-5为四物汤配方颗粒。

图5为实施例4的薄层色谱图，其中1为5-羟甲基糠醛，2为缺熟地黄的四物汤配方颗粒阴性样品，3-5为四物汤配方颗粒。

图6为实施例5的对照品溶液的HPLC色谱图。

图7为实施例5的四物汤配方颗粒样品溶液的HPLC色谱图。

图8为实施例5的四物汤配方颗粒缺白芍阴性样品溶液的HPLC色谱图。

图9为实施例5的四物汤配方颗粒缺当归、川芎阴性样品溶液的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。

实施例1：

一种四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄550g，当归550g，白芍550g，川芎550g，加入17.6kg的水，煎煮提取1小时，即一煎；一煎后药渣加入13.2kg的水，煎煮提取1小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在60℃条件下相对密度为1.06的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅（堆密度为0.15g/ml），β-环糊精的加入量占浓缩液含固量重量的10%，二氧化硅的加入量占浓缩液含固量重量的0.8%，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，控制进风温度175℃-185℃，出风温度85-95℃，得喷干粉，将喷干粉加入适量麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目、色泽均匀的四物汤配方颗粒。

制备后，对配方颗粒采用红外指纹图谱定性鉴别，具体方法如下：

取本品适量，研细，取0.5g，加无水乙醇20 ml，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，滤过，滤液蒸干，得到无水乙醇提取物；将无水乙醇提取物采用红外指纹图谱进行质量鉴别，红外指纹图谱鉴别方法为：用傅里叶变换红外光谱仪，测定范围为4000cm^-1~400cm^-1，DTGS检测器，分辨率4cm^-1，扫描次数16次，扫描过程时时扣除水和二氧化碳的干扰，环境相对湿度低于60%，溴化钾直接压片法进行检测；四物汤配方颗粒红外指纹图谱如图2所示，具有以下特征：最强峰：峰位1054.84cm^-1，具有1104.78 cm^-1、996.70 cm^-1两个峰与最强峰形成峰簇，次强峰：峰位2935.53cm^-1，较强峰：峰位1415.41cm^-1，具有1385.06 cm^-1、1343.54cm^-1两个峰与较强峰形成峰簇，在1624.92 cm^-1、1263.08 cm^-1各具有一个峰，同时依据峰强从高到低出现925.14cm^-1、777.72cm^-1、868.40cm^-1、818.33cm^-14个峰。

实施例2：

一种四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄1000g，当归900g，白芍800g，川芎800g，加入28.0kg的水，煎煮提取1.5小时，即一煎；一煎后药渣加入21.0kg的水，煎煮提取1小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在60℃条件下相对密度为1.07的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅（堆密度为0.20g/ml），β-环糊精的加入量占浓缩液含固量重量的5%，二氧化硅的加入量占浓缩液含固量重量的0.8%，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，控制进风温度175℃-185℃，出风温度85-95℃，得喷干粉，将喷干粉加入适量麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目、色泽均匀的四物汤配方颗粒。

制备后，对配方颗粒采用薄层色谱定性鉴别，具体方法如下：

取本品0.8g，研细，加水40ml使溶解，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4:1:1:0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，如图3所示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例3：

一种四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄250g，当归250g，白芍200g，川芎200g，加入9.0kg的水，煎煮提取1小时，即一煎；一煎后药渣加入7.2kg的水，煎煮提取1小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在60℃条件下相对密度为1.05的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅（堆密度为0.18g/ml），β-环糊精的加入量占浓缩液含固量重量的15%，二氧化硅的加入量占浓缩液含固量重量的0.5%，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，控制进风温度175℃-185℃，出风温度85-95℃，得喷干粉，将喷干粉加入适量麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目、色泽均匀的四物汤配方颗粒。

制备后，对配方颗粒采用薄层色谱进行定性鉴别，具体方法如下：

取本品1g，研细，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇溶液萃取2次，每次25ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液；另取白芍对照药材1g，加水60ml，煎煮30分钟，滤过，滤液用水饱和正丁醇溶液萃取2次，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液5µl，对照药材溶液2µl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视，如图4所示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例4：

一种四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄700g，当归700g，白芍600g，川芎500g，加入25kg的水，煎煮提取２小时，即一煎；一煎后药渣加入15kg的水，煎煮提取1小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在60℃条件下相对密度为1.08的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅（堆密度为0.16g/ml），β-环糊精的加入量占浓缩液含固量重量的20%，二氧化硅的加入量占浓缩液含固量重量的0.5%，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，控制进风温度175℃-185℃，出风温度85-95℃，得喷干粉，将喷干粉加入适量麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目、色泽均匀的四物汤配方颗粒。

制备后，对配方颗粒采用薄层色谱进行定性鉴别，具体方法如下：

取本品2g，研细，加水50ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次50ml，合并乙酸乙酯，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液；另取5-羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品10µl，对照品1µl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(2:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视，如图5所示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例5：

一种四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄200g，当归250g，白芍250g，川芎200g，加入7.2kg的水，煎煮提取1.5小时，即一煎；一煎后药渣加入5.4kg的水，煎煮提取1小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在60℃条件下相对密度为1.06的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅（堆密度为0.14g/ml），β-环糊精的加入量占浓缩液含固量重量的10%，二氧化硅的加入量占浓缩液含固量重量的0.5%，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，控制进风温度175℃-185℃，出风温度85-95℃，得喷干粉，将喷干粉加入适量麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目、色泽均匀的四物汤配方颗粒。

制备后，对配方颗粒进行含量测定，采用高效液相色谱法，具体步骤如下：

1、 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪、Waters 2489紫外检测器，Empower 2 PersonalSingle System SW化学工作站。BS110S万分之一天平（赛多利斯）、XP26 百万分之一天平（METTLER TOLEDO）、CQ-25-6超声波清洗器（上海音波声电科技公司）。水为怡宝净水，其他试剂均为分析纯。

试药：四物汤配方颗粒（广东一方制药有限公司生产，批号：20141101）。

芍药苷（中国药品生物制品检定所提供，批号：110736-201035）

阿魏酸（中国药品生物制品检定所提供，批号：110773-201012）

乙腈（色谱纯）、其他试剂均为分析纯，纯净水。

2、溶液的制备

2.1 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含芍药苷100μg、阿魏酸20μg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取本品，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3 阴性样品溶液的制备

采用上述四物汤配方颗粒的制备方法分别制备缺白芍阴性样品和缺当归、川芎阴性样品，按供试品溶液的制备方法，分别制备相应的阴性样品溶液。

3、 液相色谱条件

色谱柱：Kromasil 100-5 C₁₈ 柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%醋酸（10∶90）；流速：1ml/min；检测波长：240nm；柱温30℃。

4 、方法学验证

4.1 专属性考察

按上述四物汤配方颗粒的含量测定方法，四物汤配方颗粒中芍药苷、阿魏酸峰应与相邻的峰分离度大于1.5，阴性样品色谱在芍药苷、阿魏酸峰相应位置上无干扰。结果见图6-图9。

4.2 线性关系考察

分别精密吸取芍药苷、阿魏酸对照品溶液0.5、1、2、4、8、12、16μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值对芍药苷、阿魏酸进样量进行回归处理。实验结果见表1、表2。

表1 芍药苷对照品进样量与峰面积线性关系

表2 阿魏酸对照品进样量与峰面积线性关系

实验结果表明，芍药苷进样量在0.1031~1.6496μg的范围内时与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为Y=1052006X-4783，r²=1.000。阿魏酸进样量在0.0209~0.3344μg的范围内时与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为Y=3337200X+1928，r²=0.9997。

4.3 稳定性考察

取同一四物汤配方颗粒（批号：20141101）供试液，按上述色谱条件分别于0，2，4，6，8，12小时进样，测定芍药苷、阿魏酸峰面积。实验结果见表3、表4。

表3 四物汤配方颗粒芍药苷含量测定溶液稳定性试验结果

表4 四物汤配方颗粒阿魏酸含量测定溶液稳定性试验结果

在12小时内测得四物汤配方颗粒中芍药苷的峰面积RSD为1.10%、阿魏酸的峰面积RSD为1.36%。实验结果表明，供试品溶液在12小时内稳定。

4.4 精密度试验

取一份四物汤配方颗粒供试品溶液（批号：20141001），按上述色谱条件，重复进样6次，测定芍药苷、阿魏酸峰面积。实验结果见表5、表6。

表5 四物汤配方颗粒芍药苷含量测定精密度试验结果

表6 四物汤配方颗粒阿魏酸含量测定精密度试验结果

从上表可知本法精密度较好，符合含量测定要求。

4.5 重复性考察

取同一四物汤配方颗粒，按上述方法平行制备供试品溶液六份，分别测定芍药苷、阿魏酸含量。实验结果见表7、表8。

表7 四物汤配方颗粒芍药苷含量测定重复性试验结果

表8 四物汤配方颗粒阿魏酸含量测定重复性试验结果

芍药苷平均含量为6.198mg/g，RSD为0.37%；阿魏酸平均含量为0.606mg/g，RSD为1.29%，所以此样品中含量测定方法重复性较好。

4.6 回收率试验

取已知含量的四物汤配方颗粒粉末约0.2mg（批号：20141101， 芍药苷含量：6.198mg/g、阿魏酸含量：0.606mg/g），精密称定，共六份，置具塞锥形瓶中，精密加入含芍药苷、阿魏酸混合对照品（芍药苷浓度为0.05352mg/ml，阿魏酸浓度为0.005724mg/ml）25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件进行测定，计算回收率。实验结果见表9、10。

表9 四物汤配方颗粒芍药苷含量测定回收率试验结果

表10 四物汤配方颗粒阿魏酸含量测定回收率试验结果

由此可见，该四物汤配方颗粒中芍药苷、阿魏酸的含量测定方法准确、可靠。

5、 样品含量测定

取本品适量，研细，取约0.4g，精密称定，按上述的含量测定方法测定不同批次四物汤配方颗粒中芍药苷、阿魏酸的含量。结果见表11：

表11 不同批次的四物汤配方颗粒中芍药苷、阿魏酸的含量测定结果

本品每1g颗粒含白芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于4.0mg，含当归、川芎以阿魏酸(C₁₀H₁₀O₄)计，不得少于0.4mg。

对比例：

取实施例5四物汤配方颗粒制备方法步骤a制得的水煎液，真空减压浓缩至在60℃条件下相对密度为1.06的浓缩液，进行喷雾干燥，控制进风温度175℃-185℃，出风温度85-95℃，得喷干粉，将喷干粉加入适量麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目、色泽均匀的四物汤配方颗粒。按上述质量控制方法中的含量测定方法进行测定，测定结果如下表12所示：

表12 四物汤配方颗粒中各成分含量测试结果

由上表可以看出，实验例中在煎煮提取过程中收集芳香水，提取浓缩液用β-环糊精和二氧化硅搅包合后，再与芳香水混合后进行喷雾干燥，得到的四物汤配方颗粒的气味明显比对比例浓郁，且其阿魏酸的含量也较对比例明显升高，说明本发明制备方法不仅能够保留挥发油的原有气味,且可最大限度的保留四物汤的有效成分。

Claims (7)

1.一种四物汤配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，包括以下方法：

（1）采用红外指纹图谱进行质量检测，包括步骤如下：

样品的提取：取四物汤配方颗粒适量，研细，取0.5g，加无水乙醇20 ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，得到无水乙醇提取物；

红外光谱检测：用傅里叶变换红外光谱仪，测定范围为4000cm^-1－400cm^-1，DTGS检测器，分辨率4cm^-1，扫描次数16次，扫描过程时扣除水和二氧化碳的干扰，环境相对湿度低于60%，溴化钾压片法进行检测；四物汤配方颗粒红外指纹图谱具有以下特征：最强峰：峰位1054.84cm^-1，具有1104.78 cm^-1、996.70 cm^-1两个峰与最强峰形成峰簇，次强峰：峰位2935.53cm^-1，较强峰：峰位1415.41cm^-1，具有1385.06 cm^-1、1343.54 cm^-1两个峰与较强峰形成峰簇，在1624.92 cm^-1、1263.08 cm^-1各具有一个峰，同时依据峰强从高到低出现925.14cm^-1、777.72cm^-1、868.40cm^-1、818.33cm^-14个峰；

（2）采用薄层色谱定性鉴别：

取四物汤配方颗粒0.8g，研细，加水40ml使溶解，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录ⅥB试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸4:1:1:0.3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）采用薄层色谱定性鉴别：

取四物汤配方颗粒1g，研细，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇溶液萃取2次，每次25ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液；另取白芍对照药材1g，加水60ml，煎煮30分钟，滤过，滤液用水饱和正丁醇溶液萃取2次，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录ⅥB试验，吸取上述供试品溶液5µl，对照药材溶液2µl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）采用薄层色谱定性鉴别：

取四物汤配方颗粒2g，研细，加水50ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次50ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液；另取5-羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录ⅥB试验，吸取上述供试品10µl，对照品1µl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯2:3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（5）四物汤配方颗粒的含量测定，采用高效液相色谱法，具体步骤如下：

色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%醋酸溶液10:90为流动相；流速：1ml/min；检测波长为240nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备 取芍药苷、阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含芍药苷100μg、阿魏酸20μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备，取四物汤配方颗粒，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1g颗粒含白芍以芍药苷C₂₃H₂₈O₁₁计，不得少于4.0mg，含当归、川芎以阿魏酸C₁₀H₁₀O₄计，不得少于0.4mg；

所述配方颗粒由熟地黄、当归、白芍、川芎四味饮片按质量比为1-5:1-5:1-5:1-5制成，所述四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄、当归、白芍、川芎饮片，加入总投料量5-15倍重量的水，煎煮提取0.5-2小时，即一煎；一煎后药渣加入总投料量4-10倍重量的水，煎煮提取0.5-1.5小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在50-100℃条件下相对密度为1.00~1.14的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，得喷干粉，将喷干粉加入麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目的四物汤配方颗粒。

2.根据权利要求1所述的四物汤配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，所述四物汤配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：

a、取熟地黄、当归、白芍、川芎饮片，加入总投料量8倍重量的水，煎煮提取1小时，即一煎；一煎后药渣加入总投料量6倍重量的水，煎煮提取1小时，即二煎；在两次煎煮提取过程中，收集芳香水；

b、合并两煎滤液，滤过，滤液真空减压浓缩至在50-100℃条件下相对密度为1.05~1.08的浓缩液；

c、取上述浓缩液加入β-环糊精和二氧化硅，搅拌均匀后得清膏；

d、将芳香水与清膏混匀后进行喷雾干燥，得喷干粉，将喷干粉加入麦芽糊精干法制粒，制得粒度在16-40目的四物汤配方颗粒。

3.根据权利要求1或2所述的四物汤配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，步骤c中，所述β-环糊精的加入量占浓缩液含固量重量的1-25%；二氧化硅的加入量占浓缩液含固量重量的0.1-5%。

4.根据权利要求3所述的四物汤配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，步骤c中，所述β-环糊精的加入量占浓缩液含固量重量的5-20%；二氧化硅的加入量占浓缩液含固量重量的0.5-1%。

5.根据权利要求1或2所述的四物汤配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，步骤c中，所述二氧化硅的堆密度为0.14～0.20g/ml，通过七号筛的样品量不低于供试量的85%。

6.根据权利要求1或2所述的四物汤配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，步骤d中，麦芽糊精的加入量占喷干粉重量的0-25%。

7.根据权利要求1或2所述的四物汤配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，步骤d中，所述喷雾干燥的工艺参数为：控制进风温度170℃~185℃，出风温度85℃~95℃。

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