CN108802245B - 一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法。本发明还提供了一种鉴别天花粉或含天花粉为原料制备的药物的方法。本发明采用HPLC对23批天花粉标准汤剂、天花粉药材、天花粉饮片、3批天花粉配方颗粒及各生产工序样品进行了特征图谱研究，得到4个分离度、重复性均较好的特征图谱，为天花粉从药材、饮片到配方颗粒及配方颗粒各生产工序的全面质量控制提供了一定的依据。

Description

一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法

技术领域

本发明涉及一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法。

背景技术

天花粉是历史悠久、使用广泛的中药，具有清热生津、排脓消肿的功效。天花粉蛋白具有引产、抗肿瘤的功效。2005年版《中华人民共和国药典(一部)》收载的天花粉为葫芦科植物栝楼Tri-chosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes Uniflora Hao的干燥根，主产于河南、山东、江苏、贵州、安徽等地。目前全国各地所用天花粉的原植物很多，不同植物来源的天花粉的疗效不完全一样，某些伪品还有一定的不良反应。

目前报道的天花粉的检测方法较多，如鲁建江，天花粉多糖的提取及含量测定，天津药学，2001年4月第13卷第2期，从天花粉中提取多糖并测定其含量。方法:用水提醇沉法提取天花粉多糖,用酚-硫酸比色法测定多糖含量。该实验证明天花粉多糖含量不是很高,提取方法有待进一步改进。彭朝霞，HPLC测定天花粉中葫芦素B的含量，中国现代应用药学杂志2009年11月第26卷第11期，由于葫芦素B具有较大毒性，其毒性反应是与其剂量密切相关的。该文献公开了检测天花粉中葫芦素B的方法，有文献报道采用氨基酸作为天花粉中的检测指标，如：曹敏，等，薄层色谱法鉴别天花粉及其相似品的氨基酸，传统医药，正品天花粉在瓜氨酸和丙氨酸对照品色谱相应结果位置上显相同的紫红色斑点，大苞栝楼的根则在丙氨酸对照品色谱处无相应斑点。杨玉琴，等，不同产地天花粉药材中瓜氨酸的含量，时珍国医国药2009年第20卷第6期，对15个不同产地的天花粉药材进行瓜氨酸含量测定,在含量上有一定差异,但贵州天花粉中瓜氨酸含量较高,且生长周期越长瓜氨酸含量就越高。

天花粉中含有较多的氨基酸成分，已有检测方法的有瓜氨酸、γ-氨基丁酸(刘文，天花粉中瓜氨酸与γ-氨基丁酸的含量测定)，采用柱前衍生反相高效色谱峰进行检测，样品处理过程较复杂。此外，色氨酸也是植物体内生长素生物合成重要前体物质，在高等植物中普遍存在，同时，色氨酸被广泛应用于饲料中(宋吉英，HPLC法测定玉米蛋白粉和乳猪教槽料中色氨酸的含量)采用0.0085mol/L乙酸钠：甲醇(95:5)。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法。本发明还提供了一种鉴别天花粉或含天花粉为原料制备的药物的方法。

本发明提供了一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法，它是采用HPLC指谱图谱检测，其操作步骤如下：

a、供试品溶液的制备：

取待检样品，加入10-50份体积重量比的稀乙醇，回流或超声处理20min-40min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

b、参照物溶液的制备：

取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶液，即得；

c、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以乙腈、水为流动相进行洗脱，其色谱条件为：

以氨基键合硅胶为填充剂(Agilent Polaris 5NH₂ 250×4.6mm)；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8-1.2ml；检测波长：224-300nm，柱温25-35℃。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000；

其中，所述的药物包括天花粉药材、饮片、标准汤剂、天花粉配方颗粒。

其中，a步骤所述的提取方法为超声提取，超声时间20min；加入25份体积重量比的稀乙醇。

其中，c步骤所述的流速为每分钟1.0ml，检测波长：270nm；柱温30℃。

本发明还提供了一种鉴别天花粉或含天花粉为原料制备的药物的方法，它包括如下步骤：

a、取待检样品；

b、按权利要求1-4任意一项所述的检测方法检测；

c、分析检测结果。

其中，所述的待检样品包括天花粉药材、饮片、标准汤剂、天花粉配方颗粒。

其中，指纹图谱中至少含有4个特征峰，相对保留时间为：0.38(峰1)、0.46(峰2)、0.88(峰3)、1.00(峰S)±5％之内。

本发明确定天花粉药材、天花粉标准汤剂、天花粉配方颗粒中有色氨酸成分；采用高效液相色谱的方法将天花粉药材、天花粉标准汤剂、天花粉配方颗粒中色氨酸分开，进行测定；建立天花粉药材、汤剂、配方颗粒中色氨酸的检测方法。

本发明采用HPLC对23批天花粉标准汤剂、天花粉药材、天花粉饮片、3批天花粉配方颗粒及各生产工序样品进行了特征图谱研究，得到4个分离度、重复性均较好的特征图谱，为天花粉从药材、饮片到配方颗粒及配方颗粒各生产工序的全面质量控制提供了一定的依据。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1天花粉标准汤剂对照特征图谱(其中，峰4(S)：色氨酸)

图2流动相选择

图3色氨酸紫外吸收光谱图

图4天花粉标准汤剂3D色谱图

图5天花粉标准汤剂不同波长色谱图

图6柱温考察

图7流速考察

图8提取溶剂考察

图9提取方法考察

图10提取时间考察

图11溶剂加入量考察

图12取样量考察

图13色谱峰指认

图14天花粉标准汤剂色谱柱耐用性考察

图15天花粉标准汤剂特征图谱-1

图16天花粉标准汤剂特征图谱-2

图17天花粉标准汤剂特征图谱-3

图18天花粉标准汤剂对照特征图谱(其中，峰4(S)：色氨酸)

图19天花粉药材特征图谱-1

图20天花粉药材特征图谱-2

图21天花粉药材特征图谱-3

图22天花粉药材特征图谱-4

图23天花粉饮片特征图谱-1

图24天花粉饮片特征图谱-2

图25天花粉饮片特征图谱-3

图26提取工序天花粉标准汤剂特征图谱比较

图27浓缩工序天花粉标准汤剂特征图谱对比

图28喷雾干燥、天花粉标准汤剂特征图谱对比

图29天花粉中间体与天花粉标准汤剂特征图谱对比

图30成品与天花粉标准汤剂特征图谱对比

具体实施方式

实施例1本发明天花粉检测方法

【炮制】应符合《中华人民共和国药典》2015年版一部天花粉【炮制】项下的相关规定。具体办法为：天花粉饮片：略泡，润透，切厚片，干燥。

【制法】取饮片100g，加水煎煮二次，一煎加9倍水，浸泡30分钟，煮沸，保持微沸煎煮20分钟，200目筛网过滤，立即冷却至室温；二煎加7倍水，煮沸，保持微沸煎煮15分钟，200目筛网过滤，合并水煎液，立即冷却至室温，浓缩，冷冻干燥，分装，即得。

【特征图谱】照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验以氨基键合硅胶为填充剂(Agilent Polaris5NH₂250×4.6mm)；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长：270nm。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000。

参照物溶液的制备取色氨酸对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品特征图谱中应呈现4个特征峰，其中与色氨酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。规定值为：0.38(峰1)、0.46(峰2)、0.88(峰3)、1.00(峰S)。

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对23批标天花粉准汤剂进行合成，建立了天花粉标准汤剂特征图谱的对照特征图谱(见图1)。

实施例2本发明天花粉及含天花粉原料制备的药物的特征图谱条件筛选

1材料、试剂与仪器

1.1实验仪器及材料

高效液相色谱仪：安捷伦1260型高效液相色谱仪、Waters2695-2996型高效液相色谱仪、岛津20AD型高效液相色谱仪；

电子天平：ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司)；

超纯水机：细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司)；

超声波清洗器：KQ5200DB型(600W，40KHz；昆山市超声仪器有限公司)；

色谱柱：安捷伦Polans 5NH2 250×4.6mm PN A2013250*046、安捷伦Polans 5NH2250×4.6mm、迪玛Platisil 5um NH2 250×4.6mm。

1.2试剂及试药

乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

色氨酸(中国药品生物制品检定所，批号：140686-201303，含量以99.9％计)。

2、拟定的色谱条件与系统适用性试验

以氨基键合硅胶为填充剂(Agilent Polaris 5NH₂ 250×4.6mm)；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长：270nm。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000。见表1。

表1拟定的流动相梯度

3参照物溶液的制备

取色氨酸对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

4供试品溶液的制备

取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5测定法

精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

6色谱条件与系统适用性试验

6.1流动相选择

在以上拟定的实验条件基础上，考察了3种不同流动相的分离效果，分别为：见表2-4，图2。

表2流动相1梯度

表3流动相2梯度

表4流动相3梯度

结果表明，乙腈-水溶液梯度1洗脱条件下色谱峰多，且理论板数、分离度、对称性均更好，故作为天花粉标准汤剂特征图谱测定方法的流动相。

6.2波长选择

在以上拟定的实验条件基础上，利用二极管阵列检测器对色氨酸对照品溶液、供试品溶液进行全波段扫描，并分别提取供试品溶液在224nm、270nm、230nm、300nm波长下的色谱图。见图3，图4，图5。

结果表明，在检测波长为270nm时色谱峰信息量较大，色谱图基线平稳，故检测波长确定为270nm。

6.3柱温考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对柱温为25℃、30℃、35℃时进行考察。结果见表5、6，图6。

表5柱温考察—特征峰相对保留时间比值

表6柱温考察—特征峰相对峰面积比值

结果表明，在柱温为25℃、30℃、35℃时，各特征峰相对保留时间的RSD在1.77％～2.27％，各特征峰相对峰面积的RSD在4.39％～4.94％，特征峰相对保留时间和相对峰面积较稳定，并且色谱图峰形、分离效果均符合要求。故不固定柱温，暂定柱温为30℃作为后续实验考察的柱温。

6.4流速考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时进行了考察。见表7、8，图7。

表7流速考察—特征峰相对保留时间比值

表8流速考察—特征峰相对峰面积比值

结果表明，在流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时，各特征峰相对保留时间的RSD在2.0％～13.29％，各特征峰相对峰面积的RSD在1.57％～2.20％，色谱图峰形、分离效果均符合要求。根据试验习惯天花粉标准汤剂特征图谱流速确定为1.0ml/min。

综上所述，天花粉标准汤剂特征图谱色谱条件与系统适应性试验确定为：以氨基键合硅胶为填充剂(Agilent Polaris 5NH₂ 250×4.6mm)；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长：270nm，流速为每分钟1.0ml。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000。见表9。

表9天花粉标准汤剂特征图谱最终流动相梯度

7供试品溶液的制备考察

7.1提取溶剂考察

取本品粉末(批号：THFBT180201)约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，供试品提取溶剂分别为甲醇、乙醇、稀乙醇、水25ml进行考察，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图8。

结果表明，在提取溶剂为稀乙醇时，色谱峰信息量大，分离度好。故供试品提取溶剂确定为稀乙醇。

7.2提取方法考察

取本品粉末(批号：THFBT180201)约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，分别对供试品提取方法为回流、超声时进行考察，提取时间30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图9。

结果表明，对供试品分别进行超声提取与回流提取时效果一致。因超声提取操作更为简便，故供试品提取方法确定为超声提取。

7.3提取时间考察

取本品粉末(批号：THFBT180201)约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)，分别对供试品提取时间为20分钟、30分钟、40分钟时进行考察，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图10。

结果表明，在提取时间为20分钟时，即可充分提取。故供试品提取时间确定为20分钟。

7.4溶剂加入量考察

取本品粉末(批号：THFBT180201)约0.1g，各三份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入稀乙醇10ml、25ml、50ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。见图11。

结果表明，不同稀释倍数下的色谱峰峰形和峰个数没有显著差异，最终确定样品溶液稀释25倍。

7.5取样量考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对取样量为0.1g、0.3g、0.5g时进行考察。见图12。

结果表明，在取样量为0.1g时，色谱图峰形较好，峰面积适中。故取样量确定为0.1g。

综上所述，天花粉标准汤剂特征图谱方法确定如下：取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

8天花粉标准汤剂特征图谱方法

色谱条件与系统适用性试验以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长：270nm，流速为每分钟1.0ml。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000。见表10。

表10天花粉标准汤剂特征图谱最终流动相梯度

参照物溶液的制备取色氨酸对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

测定法精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

9方法学考察

9.1色谱峰指认

供试品溶液的制备：取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

对照品溶液的制备：取色氨酸适量，加稀乙醇制成每1ml含10ug的溶液，即得。

阴性对照溶液的制备：按以上拟定的实验条件，制备缺天花粉标准汤剂阴性对照溶液。

对天花粉标准汤剂特征图谱峰进行定位。见图13。

9.2精密度试验

取本品粉末(批号：THFBT180201)约0.1g，按拟定实验方法制备供试品溶液，连续进样6次，每次10μl，计算特征峰的保留时间及峰面积。见表12，表13。

表12精密度试验—特征峰保留时间

表13精密度试验—特征峰峰面积

结果表明，各特征峰保留时间的RSD为0.12％～0.3％，各特征峰峰面积的RSD为0.28％～1.68％。该仪器精密度良好。

9.3重复性考察

取本品粉末(批号：THFBT180201)约0.1g，精密称定6份，按拟定实验方法进行制备及测定。见表14、15。

表14重复性考察—特征峰相对保留时间比值

表15重复性考察—特征峰相对峰面积比值

结果表明，各特征峰相对保留时间的RSD为0.26％～0.61％，各特征峰相对峰面积的RSD为1.58％～1.86％。该方法重复性良好。

9.4中间精密度考察

9.4.1不同仪器考察

在以上拟定的实验条件基础上，取本品粉末(批号：THFBT180201)，精密定，制备供试品溶液，分别在安捷伦1260、岛津20AD、Waters2695-2996型高效液相色谱仪上进行考察(色谱柱均为安捷伦Polans 5NH2 250×4.6mm PN A2013250*046)。计算所得结果，见表16、17。

表16不同仪器考察—特征峰相对保留时间

表17不同仪器考察—特征峰相对峰面积

结果表明，用上述3种仪器对供试品进行检测时，各特征峰相对保留时间的RSD为0.65％～1.50％，各特征峰相对峰面积的RSD为4.70％～11.10％。9.4.2不同人员和时间考察

在以上拟定的实验条件基础上，由不同人员(A、B)在不同时间(T1、T2)分别取本品粉末(批号：THFBT180201)约0.1g精密称定一份，制备供试品，进行测定。计算所得结果平均值，见表18、19。

表18不同人员与时间考察—特征峰相对保留时间

表19不同人员与时间考察—特征峰相对峰面积

结果表明，不同样品制备人员和不同样品制备时间条件下，各特征峰相对保留时间RSD为0.16％～0.45％，各特征峰相对峰面积的RSD为0.32％～1.33％。

9.5耐用性考察

9.5.1色谱柱耐用性考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对色谱柱为Agilent Polaris 5NH2250×4.6mm PN A2013250X046、迪玛Platisil 5um NH2,4.6×250mm、Agilent Polaris 5NH2250×4.6mm PN 2013250X046时进行考察。见图14。

结论：由图14可知，Agilent Polaris 5NH2 250×4.6mm PN A2013250X046理论板数、分离度、对称性均更好，故确定天花粉标准汤剂特征图谱只适用Agilent Polaris 5NH2250×4.6mm PN A2013250X046色谱柱进行检测。

9.5.2稳定性考察

在以上拟定的实验条件基础上，取同一供试品溶液，分别于0h、4h、6h、12h、18h、24h时测定。见表20、21。

表20 24小时稳定性考察—特征峰相对保留时间

表21 24小时稳定性考察—特征峰峰面积

结果表明，各特征峰相对保留时间RSD为0.43％～0.79％，各特征峰相对峰面积的RSD为1.84％～2.22％

9.6天花粉标准汤剂特征图谱特征峰的确定及对照图谱的建立

采用最终确定的分析方法对23批样品进行测定，计算各特征峰相对保留时间、相对峰面积。见图15至17，表22、23。

表22 23批天花粉标准汤剂相对保留时间比值

表23 23批天花粉标准汤剂相对峰面积比值

根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了4个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，23批次天花粉标准汤剂特征峰相对峰面积RSD差异太大，因此不列入质量标准正文，23批次天花粉标准汤剂4个特征峰相对保留时间RSD均小于3.0％。最终规定：供试品特征图谱中应呈现4个特征峰，其中与色氨酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。规定值为：0.38(峰1)、0.46(峰2)、0.88(峰3)、1.00(峰S)。

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对23批标天花粉准汤剂进行合成，建立了天花粉标准汤剂特征图谱的对照特征图谱。见图18。用以上拟定天花粉特征图谱方法对23批天花粉药材进行检测，结果如下，见表24，见图19-22。

表24 23批天花粉药材相对保留时间比值

用以上拟定天花粉特征图谱方法对23批天花粉饮片进行检测，计算相对保留时间比值。结果如下，见表25，见图23-25。

表25 23批天花粉饮片相对保留时间比值

用以上拟定天花粉特征图谱方法对3批天花粉水煎液进行检测，结果如下，见表26，见图26

表26 3批天花粉水煎液相对保留时间比值

用以上拟定天花粉特征图谱方法对3批天花粉浓缩液进行检测，计算相对保留时间比值。结果如下，见表27,见图27

表27 3批天花粉浓缩液相对保留时间比值

用以上拟定天花粉特征图谱方法对3批天花粉喷干粉进行检测，计算相对保留时间比值。结果如下，见表28见图28。

表28 3批天花粉喷干粉相对保留时间比值

用以上拟定天花粉特征图谱方法对3批天花粉中间体进行检测，计算相对保留时间比值。结果如下，见表29,见图29

表29 3批天花粉中间体相对保留时间比值

用以上拟定天花粉特征图谱方法对3批天花粉配方颗粒成品进行检测，计算相对保留时间比值。结果如下，见表30,见图30。

表30 3批天花粉配方颗粒成品相对保留时间比值

由以上结果可知，本方法可适用于天花粉标准汤剂、药材、饮片、配方颗粒检测，也适用于天花粉配方颗粒各个生产工序的检测。

Claims (5)

1.一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法，其特征在于：它是采用HPLC指纹图谱检测，其操作步骤如下：

a、供试品溶液的制备：

取待检样品，加入10-50份体积重量比的稀乙醇，回流或超声处理20min-40min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

b、参照物溶液的制备：

取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶液，即得；

c、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以乙腈、水为流动相进行洗脱，其色谱条件为：

色谱柱以氨基键合硅胶为填充剂，所述色谱柱的规格为Agilent Polaris 5 NH₂ 250×4.6mm；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8-1.2ml；检测波长：224-300nm，柱温25-35℃；理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000；

；

所述的天花粉为天花粉药材；所述药物为饮片、标准汤剂或天花粉配方颗粒。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：a步骤具体为：取待检样品，加入25份体积重量比的稀乙醇，超声处理20min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：c步骤所述的流速为每分钟1.0ml，检测波长：270nm；柱温30℃。

4.一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的鉴别方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a、取待检样品；

b、按权利要求1-3任意一项所述的检测方法检测；

c、分析检测结果。

5.根据权利要求4所述的鉴别方法，其特征在于：指纹图谱中至少含有4个特征峰，相对保留时间为：0.38(峰1)、0.46(峰2)、0.88(峰3)、1.00(峰S)±5％之内。

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