CN115808473A - 一种可用于中药复方当归四逆汤质量控制的新方法 - Google Patents
一种可用于中药复方当归四逆汤质量控制的新方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115808473A CN115808473A CN202111077483.1A CN202111077483A CN115808473A CN 115808473 A CN115808473 A CN 115808473A CN 202111077483 A CN202111077483 A CN 202111077483A CN 115808473 A CN115808473 A CN 115808473A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- angelica
- quality control
- decoction
- control method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 235000001287 Guettarda speciosa Nutrition 0.000 title claims abstract description 69
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 48
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title abstract description 22
- 244000061520 Angelica archangelica Species 0.000 title description 56
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 58
- 241000382455 Angelica sinensis Species 0.000 claims abstract description 54
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 42
- BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-M Aristolochate I Natural products C1=C([N+]([O-])=O)C2=C(C([O-])=O)C=C3OCOC3=C2C2=C1C(OC)=CC=C2 BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 27
- BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N aristolochic acid I Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C2=C(C(O)=O)C=C3OCOC3=C2C2=C1C(OC)=CC=C2 BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 241000758794 Asarum Species 0.000 claims abstract description 26
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims abstract description 19
- 244000037364 Cinnamomum aromaticum Species 0.000 claims abstract description 17
- 235000014489 Cinnamomum aromaticum Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 claims abstract description 15
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 13
- 235000017443 Hedysarum boreale Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 235000007858 Hedysarum occidentale Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000001947 glycyrrhiza glabra rhizome/root Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 244000126002 Ziziphus vulgaris Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000722953 Akebia Species 0.000 claims abstract description 6
- 235000006545 Ziziphus mauritiana Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 235000008529 Ziziphus vulgaris Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 241000125175 Angelica Species 0.000 claims abstract 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 78
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 39
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 34
- FYRHTIWFKXZWAD-UHFFFAOYSA-N Sarisan Chemical compound C1=C(CC=C)C(OC)=CC2=C1OCO2 FYRHTIWFKXZWAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 23
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 claims description 22
- KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N (E)-cinnamaldehyde Chemical compound O=C\C=C\C1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N 0.000 claims description 19
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 claims description 19
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 claims description 19
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 claims description 19
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 claims description 19
- KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N cinnamic aldehyde Natural products O=CC=CC1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229940117916 cinnamic aldehyde Drugs 0.000 claims description 19
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N monobenzone Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- IQVQXVFMNOFTMU-FLIBITNWSA-N (Z)-ligustilide Chemical compound C1CC=CC2=C1C(=C/CCC)/OC2=O IQVQXVFMNOFTMU-FLIBITNWSA-N 0.000 claims description 18
- IQVQXVFMNOFTMU-DHZHZOJOSA-N Z-ligustilide Natural products C1CC=CC2=C1C(=C/CCC)\OC2=O IQVQXVFMNOFTMU-DHZHZOJOSA-N 0.000 claims description 18
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 18
- KSDSYIXRWHRPMN-UHFFFAOYSA-N 4'-O-beta-D-Galactopyranoside-6''-p-Coumaroylprunin-4',5,7-Trihydroxyflavanone Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)C=C1 KSDSYIXRWHRPMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- DEMKZLAVQYISIA-ONJCETCRSA-N Liquiritin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)c1ccc([C@@H]2Oc3c(C(=O)C2)ccc(O)c3)cc1 DEMKZLAVQYISIA-ONJCETCRSA-N 0.000 claims description 17
- DEMKZLAVQYISIA-UHFFFAOYSA-N Liquirtin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(C2OC3=CC(O)=CC=C3C(=O)C2)C=C1 DEMKZLAVQYISIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N Paeoniflorin Chemical compound C([C@]12[C@H]3O[C@]4(O)C[C@](O3)([C@]1(C[C@@H]42)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C)OC(=O)C1=CC=CC=C1 YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N 0.000 claims description 17
- DEMKZLAVQYISIA-ZRWXNEIDSA-N liquiritin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([C@H]2OC3=CC(O)=CC=C3C(=O)C2)C=C1 DEMKZLAVQYISIA-ZRWXNEIDSA-N 0.000 claims description 17
- YKRGDOXKVOZESV-UHFFFAOYSA-N paeoniflorin Natural products O1C(C)(C2(CC34)OC5C(C(O)C(O)C(CO)O5)O)CC3(O)OC1C24COC(=O)C1=CC=CC=C1 YKRGDOXKVOZESV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- GSZUGBAEBARHAW-UHFFFAOYSA-N sophoraflavone B Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(C=2OC3=CC(O)=CC=C3C(=O)C=2)C=C1 GSZUGBAEBARHAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 claims description 14
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 claims description 14
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 14
- VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N Licoricesaponin B2 Natural products C1C(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)CC1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000001685 glycyrrhizic acid Substances 0.000 claims description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 6
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 claims description 4
- 244000236658 Paeonia lactiflora Species 0.000 claims description 3
- 235000008598 Paeonia lactiflora Nutrition 0.000 claims description 3
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RKFAZBXYICVSKP-AATRIKPKSA-N alpha-asarone Chemical compound COC1=CC(OC)=C(\C=C\C)C=C1OC RKFAZBXYICVSKP-AATRIKPKSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 3
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 claims description 3
- WVVOBOZHTQJXPB-UHFFFAOYSA-N N-anilino-N-nitronitramide Chemical compound [N+](=O)([O-])N(NC1=CC=CC=C1)[N+](=O)[O-] WVVOBOZHTQJXPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FPLYNRPOIZEADP-UHFFFAOYSA-N octylsilane Chemical group CCCCCCCC[SiH3] FPLYNRPOIZEADP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 2
- KIWBPDUYBMNFTB-UHFFFAOYSA-N Ethyl hydrogen sulfate Chemical compound CCOS(O)(=O)=O KIWBPDUYBMNFTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- FGDQGIKMWOAFIK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;phosphoric acid Chemical compound CC#N.OP(O)(O)=O FGDQGIKMWOAFIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 claims 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 claims 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 15
- 235000006484 Paeonia officinalis Nutrition 0.000 abstract description 9
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract description 5
- 244000170916 Paeonia officinalis Species 0.000 abstract 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 57
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 46
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 31
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- 241001106477 Paeoniaceae Species 0.000 description 6
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 5
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 5
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 4
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 235000011477 liquorice Nutrition 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 3
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M (E)-Ferulic acid Natural products COC1=CC(\C=C\C([O-])=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M 0.000 description 2
- QQUHMASGPODSIW-UHFFFAOYSA-N Albiflorin Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC12C(=O)OC3(C)CC(O)C1CC32OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QQUHMASGPODSIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007162 Ferula assa foetida Nutrition 0.000 description 2
- 244000228957 Ferula foetida Species 0.000 description 2
- 235000012850 Ferula foetida Nutrition 0.000 description 2
- HJBUYKZTEBZNSH-ZRWXNEIDSA-N Neoliquiritin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(C(=O)C[C@H](O2)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 HJBUYKZTEBZNSH-ZRWXNEIDSA-N 0.000 description 2
- HJBUYKZTEBZNSH-ONJCETCRSA-N Neoliquiritin Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(C(=O)C[C@@H](O2)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 HJBUYKZTEBZNSH-ONJCETCRSA-N 0.000 description 2
- 206010034568 Peripheral coldness Diseases 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- QQUHMASGPODSIW-ICECTASOSA-N albiflorin Chemical compound O([C@@]12C[C@H]3[C@H](O)C[C@@]1(OC(=O)[C@]32COC(=O)C=1C=CC=CC=1)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QQUHMASGPODSIW-ICECTASOSA-N 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 2
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 2
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 235000001785 ferulic acid Nutrition 0.000 description 2
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 description 2
- 229940114124 ferulic acid Drugs 0.000 description 2
- KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N ferulic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N trans-isoferulic acid Natural products COC1=CC=C(C=CC(O)=O)C=C1O QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N (+)-sesamin Chemical compound C1=C2OCOC2=CC([C@H]2OC[C@H]3[C@@H]2CO[C@@H]3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N 0.000 description 1
- 240000008027 Akebia quinata Species 0.000 description 1
- 235000007756 Akebia quinata Nutrition 0.000 description 1
- NFHFNBFYZIJLKZ-UHFFFAOYSA-N Asarinin Natural products CC1(OCC2C1COC2c3ccc4OCOc4c3)c5ccc6OCOc6c5 NFHFNBFYZIJLKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001289295 Asarum sieboldii Species 0.000 description 1
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- AQHWOHJRLSNGFD-UHFFFAOYSA-N N-anilino-N-nitronitramide ethanol Chemical compound C(C)O.[N+](=O)([O-])N(NC1=CC=CC=C1)[N+](=O)[O-] AQHWOHJRLSNGFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000736199 Paeonia Species 0.000 description 1
- 241000264847 Siniperca chuatsi Species 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N epiasarinin Natural products C1=C2OCOC2=CC(C2OCC3C2COC3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012907 medicinal substance Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及一种中药复方当归四逆汤的质量控制方法。所述复方制剂当归四逆汤由以下药味和质量组成：当归9份，桂枝9份，白芍9份，炙甘草9份，木通6份，细辛6份，大枣24份(掰开)。所述当归四逆汤基准物质制备方法如下：取当归9份，白芍9份，桂枝9份，细辛9份，木通6份，炙甘草6份，大枣24份(掰开)，加水15～25倍量，煎煮2～3h，滤过，冷冻干燥成粉，即得。所述质量控制方法包括多成分含量测定、HPLC指纹图谱分析、薄层色谱鉴别以及马兜铃酸I的限量检查。本发明的质量控制方法可对当归四逆汤进行质量控制，方法简单可行，可操作性强，能对当归四逆汤的有效成分进行鉴别和含量测定，也可对当归四逆汤制剂质量进行有效控制。
Description
技术领域
本发明属于中药分析领域，涉及一种中药复方的质量控制方法，特别涉及一种中药复方当归四逆汤的质量控制。
背景技术
古代经典名方，是指目前仍广泛应用、疗效确切、具有明显特色与优势的清代及清代以前医籍所记载的方剂。我国颁布的《中医药法》中首次提出了在申请经典名方的药品批准文号时，经典名方可以仅提供非临床安全性研究资料即可获得批准。2018年《古代经典名方目录(第一批)》正式出台，同年6月国家药品监督管理局发布了《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定》，提出符合要求的经典名方制剂申报生产，可仅提供药学及非临床安全性研究资料，免报药效研究及临床试验资料，鼓励并支持科研工作者对经典名方进行深入研究，以推动来源于古代经典名方的中药复方制剂的稳步发展。
中药经典名方的开发应遵循“原汁原味”的原则。汤剂是经方的传统用药形式，那么如何保证现代制剂与传统汤药之间的质量一致性呢？经典名方基准物质就是沟通传统汤药与现代制剂之间的桥梁。经典名方基准物质是指以古代医籍中所记载的古代经典名方制备方法为依据制备而得的药用物质，除成型工艺外，其它制备方法应当与古代医籍记载基本一致。采用一系列现代技术方法表征经典名方基准物质的质量是保证经典名方开发成现代制剂的关键环节。
当归四逆汤首见于医圣张仲景所著的《伤寒论》厥阴篇中，乃张仲景自拟之方，在原文 351条有云：“①手足厥寒，脉细欲绝者，当归四逆汤主之。②下利脉大者，虚也，以强下之故也。设脉浮革，因而肠鸣者，属当归四逆汤”，是治疗血虚寒凝证的首选方剂，原方由当归三两，桂枝三两(去皮)，芍药三两，细辛三两，炙甘草二两，通草二两，大枣二十五枚(掰开)组成，是温经散寒的代表方剂。《伤寒论》中记载当归四逆汤的煎煮方法为“上七味，以水八升，煮取三升，去渍，温服一升，日三服。”
当归四逆汤应用历史悠久，疗效确切，现代临床上广泛应用于糖尿病周围神经病变、痛经、关节炎等的治疗中，但至今尚无以当归四逆汤原方为基础的中成药问世。现有药典中对中药饮片及复方制剂的质量控制一般包括三个部分，即性状鉴别，理化检查与色谱分析，其中色谱分析包括薄层色谱鉴别，指纹图谱及多成分含量测定等。当归四逆汤由七味药材组成，制备与使用方法明确，但化学成分十分复杂，临床多用其加减方，因此研究难度大，要想生产出“原汁原味”的现代制剂，对其基准物质进行充分的质量表征至关重要。目前所见该方在含量控制方面指标单一，薄层定性方法多集中于当归、白芍、甘草的薄层鉴别，且对于其中的马兜铃酸I的含量未进行限定，难以全面反映当归四逆汤的整体质量情况，因此目前急需一种能够全面反映当归四逆汤整体的质量控制方法。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有复方制剂质量控制指标单一，难以全面反映中药复方当归四逆汤的质量情况，建立完善的当归四逆汤的质量控制方法。
为此，本发明提供如下技术方案：
1.可选地，采用高效液相色谱法建立当归四逆汤中多种成分的同步测定方法，即芍药苷、甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸、藁本內酯、细辛脂素的同步测定方法，色谱条件为：采用辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱进行分离，以乙腈(A)-0.05％磷酸溶液(B)为流动相，按下表顺序梯度洗脱；检测波长：275nm；柱温：25℃；流量：1mL/min；各成分的理论塔板数均不应低于3000。
2.可选地，采用高效液相色谱法测定七种成份含量，供试品溶液按照如下方法制备：
精密称取当归四逆汤干粉0.2g，加入25mL75％甲醇溶液，称重后超声(250W，40kHz) 30min，放冷，用75％甲醇溶液补足减失重量后，采用0.22μm滤膜过滤，取续滤液，即得。
3.可选地，采用高效液相色谱法测定七种成份含量，对照品溶液按照如下方法制备：精
密称取各对照品适量，加甲醇制成每毫升含芍药苷320μg，甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、
藁本內酯和细辛脂素各80μg，甘草酸铵160μg的混合溶液，即得。
4.可选地，测定方法为：取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。
5.可选地，所述当归四逆汤质量控制方法还包括用高效液相色谱法建立当归四逆汤指纹图谱，色谱条件和供试品制备方法均与含量测定方法一致。
6.可选地，所述对照指纹图谱包括22个共有峰，各峰相对保留时间与参照峰相对保留时间比值分别为：1号峰相对保留时间RRT为0.34±0.38％，2号峰相对保留时间RRT为0.37±0.37％，3号峰相对保留时间RRT为0.39±0.34％，4号峰相对保留时间RRT为 0.43±0.36％，5号峰相对保留时间RRT为0.49±0.28％，6号峰相对保留时间RRT为0.56±0.28％，7号峰相对保留时间RRT为0.58±0.28％，8号峰相对保留时间RRT为0.60±0.22％，9号峰相对保留时间RRT为0.65±0.24％，10号峰相对保留时间RRT为0.82±0.04％，11号峰相对保留时间RRT为0.84±0.03％，12号峰相对保留时间RRT为0.91±0.02％，13号峰相对保留时间RRT 为1，14号峰相对保留时间RRT为1.07±0.75％，15号峰相对保留时间RRT为1.09±1.40％， 16号峰相对保留时间RRT为1.26±0.02％，17号峰相对保留时间RRT为1.29±0.06％，18号峰相对保留时间RRT为1.41±0.04％，19号峰相对保留时间RRT为2.16±0.03％，20号峰相对保留时间RRT为2.21±0.03％，21号峰相对保留时间RRT为2.39±0.03％，22号峰相对保留时间RRT为2.42±0.03％，其中13号峰(肉桂酸)为参照物的色谱峰。
7.可选地，测定所述当归四逆汤指纹图谱时的参照物溶液为含量测定项下的混合对照品溶液。
8.可选地，所述当归四逆汤质量控制方法还包括用薄层色谱法鉴别当归四逆汤中的当归、白芍、桂枝、细辛和炙甘草。
9.可选地，薄层色谱鉴别时供试品溶液按如下方法制备：取15批当归四逆汤干粉各2g，精密称定，再精密加入乙醇25mL，超声(250W，40kHz)提取30min后，滤过，减压蒸干滤液，残渣加1mL乙醇溶解，即得。
10.可选地，在薄层色谱鉴别时，当归、桂枝与细辛的展开剂为正己烷-乙酸乙酯(4∶1)，白芍与炙甘草的展开剂为乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)
11.可选地，在薄层色谱鉴别时，当归薄层板在紫外365nm下观察，桂枝的显色剂为二硝基苯肼溶液，细辛的显色剂为10％硫酸乙醇溶液，白芍与炙甘草的显色剂为5％香草醛硫酸溶液，桂枝、细辛、白芍、炙甘草薄层板均为105℃加热至显色后在日光下观察。
12.可选地，在薄层色谱鉴别时，当归、细辛、桂枝所用薄层板为硅胶G板，白芍与炙甘草所用薄层板为1％NaOH制硅胶G板。
13.可选地，所述当归四逆汤干粉通过如下方法制得：取当归9g，白芍9g，桂枝9g，细辛9g，木通6g，炙甘草6g，大枣24g(掰开)，加水1600mL，煎煮2h，滤过，减压冷冻干燥24h，即得当归四逆汤冻干粉，并计算干膏率。
14.可选地，所述的质量控制方法，还包括采用LC-MS法对当归四逆汤中的马兜铃酸I进行限量检查。
15.可选地，采用LC-MS/MS法对当归四逆汤冻干粉中的马兜铃酸I进行含量测定时，其色谱方法为：采用ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1×50mm，1.7μm)进行分离，流动相为甲醇(A)-水(含0.1％甲酸和5mmoL甲酸铵)(B)，梯度洗脱，洗脱程序为：0.01～4.00min，20％～100％A；4.00～4.10min，100％～20％A；4.10～7.00min，20％A；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：1μL。质谱条件为：离子源：电喷雾离子源(ESI)，正离子电离模式；选择反应监测模式(SRM)；去簇电压(DP)：45V；碰撞能量(CE)：16V；鞘气流速(CUR)： 20psi；碰撞气流速(CAD)：12psi；离子源温度：600℃；离子喷雾电压：5500V；母离子： 359.3Da；子离子：297.8Da。
16.可选地，采用LC-MS/MS法对于当归四逆汤冻干粉中的马兜铃酸I进行含量测定时，供试品的制备方法为：准确称取0.5g当归四逆汤冻干粉于50mL具塞锥形瓶中，精密加入25mL70％甲醇溶液，称重后超声(250W，40kHz)提取30min，放冷后用70％甲醇溶液补足减失重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
本发明的技术方案，具有以下优点：
1.本发明提供的当归四逆汤质量控制方法通过高效液相色谱法可以同时实现对当归四逆汤中七种成分的含量测定，涉及了当归、白芍、桂枝、细辛、炙甘草5种药味，供试品溶液的制备方法及色谱方法简单，便捷，所测结果准确，可靠，本发明考虑到现有技术在中药制剂的质量控制方面仅有少数一个或两个指标性成分，难以全面反映当归四逆汤的整体质量，因此提出了可以全面地控制当归四逆汤的质量的多成分含量测定方法。
2.本发明提供的当归四逆汤的的多成分同步测定方法中，对于多指标成分，如芍药苷、甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸、藁本內酯以及细辛脂素七种成分，可实现一次进样，一个波长条件下得到多个成分的含量信息、方法快捷且高效、避免了成本及时间上的浪费。
3.本发明提供的当归四逆汤质量控制中的指纹图谱方法可以较全面的反映出当归四逆汤的质量信息，能够达到从整体出发，实现当归四逆汤全面的质量控制的目的。
4.本发明提供的当归四逆汤的质量控制方法中的多成分含量测定和指纹图谱测定采用同一种方法，并对供试品制备方法、高效液相色谱仪、色谱柱、流动相、检测波长等条件进行了系统的优选，方法学考察结果均符合相关要求，最终确定的方法便捷，高效，节约了分析成本。
5.本发明提供的当归四逆汤的质量控制方法采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统作为当归四逆汤指纹图谱相似度计算软件，所得相似度较好，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统评价指纹图谱的相似度，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
6.本发明提供的当归四逆汤的质量控制方法中的薄层色谱鉴别方法中，当归、白芍、桂枝、细辛和炙甘草共五个药材的鉴定采用同一种供试品制备方法，即制备一次样品就可实现当归四逆汤中5种药味的鉴别研究，提供了分析效率，节约了分析成本。
7.本发明提供的当归四逆汤的质量控制方法中的薄层色谱方法中，本专利可采用一种方法同时鉴别多种成分，如同步进行当归中藁本內酯、桂枝中桂皮醛、细辛中细辛脂素的鉴别，以及甘草中甘草苷、甘草酸和白芍中芍药苷的鉴别，可实现一次鉴别操作得出多个结果。
8.本发明提供的当归四逆汤的质量控制方法中的马兜铃酸I含量测定方法，可实现对于当归四逆汤冻干粉中微量的马兜铃酸I的准确定量，严格控制当归四逆汤的毒性，为当归四逆汤临床应用的安全性提供了保障。
9.本发明提供的当归四逆汤的质量控制方法通过综合运用薄层色谱鉴别、多成分含量测定和指纹图谱测定对目标中药中药复方当归四逆汤的质量进行全方位立体监控，结果更全面、更详实。
附图说明：
图1为当归四逆汤Agilent C8色谱柱考察结果色谱叠加图：1：温度25℃，流速1mL/min； 2：温度20℃，流速1mL/min；3：温度30℃，流速1mL/min；4：温度25℃，流速1.1mL/min；5：温度25℃，流速0.9mL/min；
图2为当归四逆汤Caprisil柱考察结果色谱叠加图：1：温度30℃，流速1mL/min；2：温度20℃，流速1mL/min；3：温度25℃，流速1mL/min；4：温度25℃，流速0.9mL/min； 5：温度25℃，流速1.1mL/min；
图3为当归四逆汤Industries柱考察结果色谱图：1：温度25℃，流速1.1mL/min；2：温度25℃，流速0.9mL/min；3：温度30℃，流速1mL/min；4：温度20℃，流速0.9mL/min； 5：温度25℃，流速1mL/min；
图4为当归四逆汤Waters柱考察结果色谱叠加图：1：温度25℃，流速1.1mL/min；2：温度25℃，流速1mL/min；3：温度20℃，流速1mL/min；4：温度30℃，流速1mL/min；5：温度25℃，流速0.9mL/min；
图5为当归四逆汤Welch柱考察结果色谱叠加图：1：温度25℃，流速1.1mL/min；2：温度25℃，流速0.9mL/min；3：温度30℃，流速1mL/min；4：温度20℃，流速1mL/min； 5：温度25℃，流速1mL/min；
图6为当归四逆汤色谱条件中其他条件相同只有色谱柱不同时的色谱叠加图，所有色谱柱均为C8色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，从上至下品牌依次为Kromasil色谱柱，Capricil 色谱柱，Waters色谱柱，Agilent色谱柱，Industries色谱柱，Welch色谱柱；
图7为当归四逆汤样品与混合对照品溶液的HPLC图(上为样品溶液，下为混标溶液)，图中1为芍药苷，2为甘草苷，3为肉桂酸，4为桂皮醛，5为甘草酸，6为藁本內酯，7为细辛脂素；
图8为当归四逆汤及各阴性样品的HPLC叠加图，图中色谱图自下而上分别为全方，大枣阴性，当归阴性，木通阴性，细辛阴性，白芍阴性，桂枝阴性，炙甘草阴性色谱图；
图9为当归四逆汤基准物质HPLC对照指纹图谱，图中峰2为芍药内酯苷，峰4为芍药苷，峰6为新甘草苷，峰7为甘草苷，峰8为阿魏酸，峰13为肉桂酸，峰14为桂皮醛，峰 17为甘草酸，峰19为藁本内酯，峰20为细辛脂素；
图10为15批当归四逆汤基准物质HPLC指纹图谱叠加图；
图11与图13为当归四逆汤中当归及细辛的薄层鉴别图，图中薄层板从左至右点样顺序为藁本內酯对照品，缺当归阴性样品，当归对照药材，当归四逆汤全方4，细辛脂素对照品，细辛对照药材，缺细辛阴性样品，全方14，全方12；
图12与图14为当归四逆汤中当归及细辛的薄层鉴别图，图中薄层板从左至右点样顺序为藁本內酯对照品，缺当归阴性样品，复方1-8，细辛脂素对照品，缺细辛阴性样品，复方 9-15；
图15为当归四逆汤中桂枝的薄层鉴别图，图中薄层板从左至右点样顺序为当归四逆汤全方4，桂皮醛对照品，缺桂枝阴性，桂枝对照药材；
图16为当归四逆汤中桂枝的薄层鉴别图，图中薄层板从左至右点样顺序为桂皮醛，缺桂枝阴性，1-15批复方，全方5，桂皮醛对照品，缺桂枝阴性；
图17为当归四逆汤中白芍与炙甘草的薄层鉴别图，图中薄层板从左至右点样顺序为芍药苷对照品，缺白芍阴性样品，白芍对照药材，全方5，甘草酸与甘草苷对照品，缺炙甘草阴性样品，甘草对照药材；
图18为当归四逆汤中自芍与炙甘草的薄层鉴别图，图中薄层板从左至右点样顺序为芍药苷对照品，缺白芍阴性样品，复方1-8，甘草苷与甘草酸铵对照品，缺炙甘草阴性样品，复方 9-15；
图19为马兜铃酸I的LC-MS/MS图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，下面结合具体实例对本发明进行进一步的说明，但所举实例不做为对本发明的限定。
实施例1.当归四逆汤冻干粉的制备
取当归9g，白芍9g，桂枝9g，细辛9g，木通6g，炙甘草6g，大枣24g(掰开)，加水1600mL，煎煮2h，100目筛滤过，滤液放冷后，冷冻干燥24h，即得当归四逆汤冻干粉，同时计算干膏率，共15批，干膏率见实施例2中表4。
干膏率＝冻干粉量/投入药材量×100％
实施例2.当归四逆汤多成分含量测定研究
2.1.仪器和试药
Waters e2695-型高效液相色谱仪，包括在线脱气机、四元梯度洗脱泵、自动进样器、柱温箱、2695溶剂管理系统，2998型二极管阵列检测器和Empower色谱工作站(美国Waters公司)；XS105DU型1/10万天平(瑞士，梅特勒-托利多公司)；KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；冷冻干燥机(德国，Marin Christ公司)；煎药壶(型号：JYH-A30A1，小熊电器股份有限公司)。
甲醇和乙腈为HPLC级(美国Fisher公司)；磷酸为色谱级(美国MREDA公司)；水为纯净水(屈臣氏集团香港有限公司)。
对照品：藁本內酯(批次：RFS-G01001909016)，纯度≥99％，购自成都瑞芬思对照品有限公司；芍药苷(批次：110736-201035)，含量以96.5％计；甘草苷(批次：111610-201908)，含量以95.0％计；甘草酸铵(批次：110731-202021)，含量以96.2％计；肉桂酸(批次： 110786-201604)，含量以98.8％计；桂皮醛(批次：110710-202022)，含量以99.6％计；细辛脂素(批次：111889-201705)，含量以100％计，均购自中国食品药品检定研究院。
2.2混合对照品溶液的制备
精密称取各对照品适量，加甲醇制成每毫升含芍药苷320μg，甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、藁本內酯和细辛脂素各80μg，甘草酸铵160μg的混合溶液，即得。
2.3供试品溶液制备
精密称取当归四逆汤冻干粉0.2g于50mL具塞锥形瓶中，加入25mL75％甲醇溶液，称重后超声(250W，40kHz)提取30min，放冷，用75％甲醇溶液补足减失重量后，采用0.22μm滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.4.色谱条件
色谱柱：Kromasil 100 C-8柱(4.6×250mm，5μm)，流动相：乙腈(A)-0.05％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序见下表；检测波长：275nm；柱温：25℃；流速：1mL/min；
2.5方法学考察
2.5.1线性范围考察
取2.2项下的混合对照品溶液，按照倍比稀释法依次稀释2倍、2倍、5倍、5倍、5倍和2倍得到7个浓度的混合对照品溶液，分别进样10μL，按2.4项下的色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分进样量为横坐标(X，μg)、峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，各成分线性关系考察结果见表1。
表1 7个成分的线性关系考察结果
2.5.2精密度试验
取同一供试品溶液，按2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，在2.4项下色谱条件重复进样6次，记录各成分的峰面积并计算其RSD，结果各成分峰面积的RSD均小于2％，具体结果见表2，表明仪器精密度良好。
2.5.3重复性试验
取同一复方冻干粉，按2.3项下供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，在2.4项色谱条件下进样测定，记录6份供试品溶液中各色谱峰的峰面积并计算其含量，具体结果见表2，表明仪器重复性良好。
2.5.4稳定性试验
取同一供试品溶液，在2.4项下色谱条件下分别在供试品溶液制备后的0h、2h、4h、8h、 16h、24h进样测定，记录其峰面积并计算RSD，结果显示各成分峰面积的RSD均小于2％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
表2 7个成分的精密度，稳定性和重复性考察结果
2.5.5加样回收实验
精密称取各对照品适量，置于同一容量瓶中，加75％甲醇制成每毫升含芍药苷31.73μg、甘草苷4.085μg、肉桂酸0.6892μg、桂皮醛0.4000μg、甘草酸14.74μg、藁本內酯0.7088μg、细辛脂素0.8768μg的混合对照品溶液作为提取溶剂。平行称取0.1g当归四逆汤冻干粉6份于50mL 具塞锥形瓶中，精密称定，按照对照品∶样品约1∶1的比例精密加入制备好的混合对照品溶液 25mL，称定重量后超声(250W，40kHz)提取30min，放冷，补足减失重量后摇匀，用0.22μm 微孔滤膜过滤，取续滤液按2.4项下的色谱条件进液相测定，计算加样回收率，并求得其RSD，结果见表3。
表3 加样回收试验结果
以上结果说明各项方法学结果均符合含量测定要求，可用于当归四逆汤中芍药苷、甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸、藁本內酯及细辛脂素的同步测定。
在确定液相条件方法时，分别对液相条件中的流动相组成、流速、温度、固定相类型四个条件进行考察。分别考察了乙腈-0.08％磷酸水、乙腈-0.05％磷酸水、乙腈-0.1％甲酸水、乙腈-水、甲醇-水五种流动相组成；分别考察了0.9mL·min-1，1.0mL·min-1与1.1mL·min-1三种流速；分别考察了20℃、25℃两个温度；固定相共考察了Kromasil色谱柱、Capricil色谱柱、 Waters色谱柱、Agilent色谱柱、Industries色谱柱、Welch色谱柱共六种品牌的C8色谱柱，色谱柱的规格均为长250mm，内径4.6mm，粒度5μm；检测波长考查了230nm，260nm，275nm和 300nm下色谱峰的分离情况。通过对图谱中各成分分离效果的考察确定色谱条件为：采用 Kromasil C8(4.6×250mm，5μm)色谱柱为固定相进行分离，乙腈-0.05％磷酸为流动相，梯度洗脱；温度25℃，流速1mL·min-1，检测波长275nm，在此条件下各成分分离度最好，检测到的色谱峰最多。
在确定供试品溶液制备方法时，分别对供试品溶液制备中的提取溶剂(50％甲醇、75％甲醇、甲醇、50％乙醇、75％乙醇、水六种提取溶剂)、提取方式(超声与回流两种提取方式)、料液比(50、100、125、150、200、250倍六种料液比)，提取时间(15min、30min 、45min、60min)进行了考察，结果显示125倍75％甲醇超声提取30min，各成分提取完全，遂确定该方法为当归四逆汤含量测定时的供试品溶液制备方法。
2.6.按照2.3项下供试品溶液制备方法制备15批当归四逆汤供试品溶液，每批平行两份，按照2.4项下色谱条件进样测定，测得结果见表4。
由以上数据对当归四逆汤冻干粉含量测定结果总结：15批当归四逆汤基准物质的出膏率介于：25.18％-34.04％。
15批制剂芍药苷含量范围：5.4198～11.2673mg/g，转移率为71.45％～91.52％；其中15批制剂的芍药苷的提取率为：73.66％～95.22％；
15批制剂甘草苷含量范围：1.023～3.6698mg/g，转移率为59.25％～96.88％；其中15批制剂的甘草苷的提取率为：52.05％～88.17％；
15批制剂肉桂酸含量范围：0.1456～0.4441mg/g，转移率为73.15％～95.26％；其中15批制剂的肉桂酸的提取率为：74.63％～93.64％；
15批制剂桂皮醛含量范围：0.0991～0.3219mg/g，转移率为1.34％～3.30％；其中15批制剂的桂皮醛的提取率为：6.12％～11.02％；
15批制剂甘草酸含量范围：3.1591～7.7319mg/g，转移率为61.22％～99.11％；其中15批制剂的甘草酸的提取率为：47.56％～75.23％；
15批制剂藁本内酯含量范围：0.1464～0.4717mg/g，转移率为8.75％～20.18％，其中15批制剂的藁本內酯的提取率为6.42％～15.78％；
15批制剂细辛脂素含量范围：0.2373～0.4010mg/g，转移率24.34％～32.43％；其中15批制剂的细辛脂素的提取率为：0.45％～9.59％；
实施例3.当归四逆汤指纹图谱的研究
3.1色谱条件同实施例2中2.3项下条件。
3.2.参照物溶液的制备取实施例2中的2.2项下的混合对照品溶液，作为参照物溶液。
3.3供试品溶液的制备取实施例2中2.3项下的供试品溶液，即得。
3.4测定法取本品，照实施例2中2.4项下的色谱方法试验，记录色谱图，所述指纹图谱包括22个共有峰，以13号峰肉桂酸为参照峰。
3.5方法学考察
3.5.1精密度考察
取同一供试品溶液，按实施例2中2.4项下色谱条件重复进样6次，以峰13肉桂酸作为参照峰，记录各成分的相对保留时间与相对峰面积，并计算其RSD，结果各成分相对保留时间与相对峰面积的RSD均小于3％，具体结果见表5，表明仪器精密度良好。
3.5.2重复性试验
取同一当归四逆汤冻干粉，按实施例2中2.3项下供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，在2.4项下的色谱条件进样测定，以峰13肉桂酸作为参照峰，记录6份平行制备的供试品溶液的相对保留时间与相对峰面积并计算其RSD，结果二者的RSD均小于3％，具体结果见表5，表明该方法重复性良好。
3.5.3稳定性试验
取同一供试品溶液，在2.4色谱条件下分别在供试品溶液制备后的0h、2h、4h、8h、16h、 24h进样测定，以峰13肉桂酸作为参照峰，记录其它共有峰的相对保留时间和相对峰面积并计算其RSD，结果二者的RSD均小于3％，具体结果见表5，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
表5 精密度、重复性和稳定性考察结果
以上结果说明该方法可满足指纹图谱测定的方法学要求，可用于当归四逆汤指纹图谱的测定。
3.6.通过与对照品对比，共有峰归属为：峰2为芍药内酯苷，峰4为芍药苷，峰6为新甘草苷，峰7为甘草苷，峰8为阿魏酸，峰13为肉桂酸，峰14为桂皮醛，峰17为甘草酸，峰19为藁本内酯，峰20为细辛脂素。
3.7.当归四逆汤样品测定
按照实施例2中的供试品制备方法与色谱条件，记录15批当归四逆汤基准物质色谱图，并记录其相对保留时间，结果显示15批样品各共有峰的相对保留时间的RSD均小于1％，结果见表6。
表6 15批当归四逆汤基准物质HPLC指纹图谱中共有峰的相对保留时间
6.指纹图谱相似度计算
将上述图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行分析，并计算各图谱与对照图谱的相似度，结果见表7。
从表中可看出，各样品指纹图谱图谱与对照指纹图谱的相似度介于0.91～0.996之间，相似度良好，可用于对当归四逆汤的质量控制中。根据结果可知，当归四逆汤供试品指纹图谱中应出现22个共有峰，应分别呈现与对照品参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。
实施例4.当归四逆汤基准物质中当归、白芍、桂枝、细辛和炙甘草的薄层色谱鉴别
4.1仪器及材料
仪器：ZF-1型四用暗箱紫外分析仪(北京天创尚邦仪器设备有限公司)
试药：纯净水(屈臣氏集团香港有限公司)；95％乙醇(分析纯，国药集团)
对照品：藁本內酯(批号：111737-201910)，供薄层色谱鉴别用；芍药苷(批号：110736-201035)，含量以96.5％计；甘草苷(批号：111610-201908)，含量以95.0％计；甘草酸铵(批号：110731-202021)，含量以96.2％计；桂皮醛(批次：110710-202022)，含量以99.6％计；细辛脂素(批号：111889-201705)，含量以100％计；当归对照药材(批号：120927-201617)，白芍对照药材(批号：120905-201610)，桂枝对照药材(批号：121191-201906)，细辛对照药材(批号：121204-201807)，甘草对照药材(批号：120904-202021)，均购自中国食品药品检定研究院。
4.2供试品溶液制备
取当归四逆汤冻干粉2g，加95％乙醇溶液25mL，超声(250W，40kHz)提取30min，过滤，滤液蒸干，残渣加1mL乙醇溶解，即得。
4.3阴性供试品溶液制备
取当归四逆汤阴性样品冻干粉各2g，按照供试品溶液制备方法制备得到阴性供试品溶液溶液。
4.4对照药材溶液的制备
取当归、白芍、桂枝、细辛、甘草对照药材各0.5g，按照供试品溶液制备方法制备得到对照药材溶液。
4.5当归、细辛和桂枝的薄层色谱鉴别
照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液，当归、桂枝、细辛对照药材溶液与其阴性供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。
上述薄层板于365nm下检测，供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，相同位置处阴性样品无斑点。
上述薄层板喷以二硝基苯肼乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与桂枝对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，相同位置处阴性样品无斑点。
上述薄层板喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与细辛对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，相同位置处阴性样品无斑点。
4.6白芍与炙甘草薄层色谱鉴别
照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取取供试品溶液，白芍、甘草对照药材溶液与其阴性供试品溶液各3μL，分别点于同一1％NaOH硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水 (15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，相同位置处阴性样品无斑点。
实施例5.当归四逆汤中马兜铃酸I含量测定
5.1仪器与试药
仪器：岛津Nexera X2超高效液相色谱仪，包括DGU-20A5R在线脱气机，SIL-30AC自动进样器，CTO-30A柱温箱以及LC-30AD液相色谱系统；AB SCIEX TRIPLE QUARD TM4500质谱仪；XS105DU型1/10万天平(瑞士，梅特勒-托利多公司)；KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；冷冻干燥机(德国，Marin Christ公司)；煎药壶(型号：JYH-A30A1，小熊电器股份有限公司)
试剂：马兜铃酸I对照品(批号：110746-201912，含量以99.1％计，中国食品药品检定研究院)，甲醇(HPLC级，美国Fisher公司)，超纯水(屈臣氏)，甲酸铵(分析纯)，甲酸(HPLC级，美国ROE SCIENTIFIC INC公司)。
5.2对照品储备液的制备
取马兜铃酸I对照品，精密称定，加甲醇(含5％水，0.1％甲酸和5mmoL/L甲酸铵)溶液配置成每毫升含马兜铃酸I 20μg的溶液，即得。
5.3供试品溶液的制备
参照2020版《中国药典》中细辛与九味羌活丸中马兜铃酸I的检测方法，确定供试品的制备方法为：准确称取0.5g当归四逆汤冻干粉于50mL具塞锥形瓶中，加入25mL70％甲醇溶液，称重后超声(250W，100MHz)提取30min，放冷后用70％甲醇溶液补足减失重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
5.4色谱-质谱条件
色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1×50mm，1.7μm)；流动相：甲醇(A)-水(含0.1％甲酸和5mmoL甲酸铵)(B)，梯度洗脱，洗脱程序见下表；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：1μL。
质谱条件：离子源：电喷雾离子源(ESI)，正离子电离；选择反应监测(SRM)；去簇电压(DP)：45V，碰撞能量(CE)：16V；鞘气流速(CUR)：20psi；碰撞气流速(CAD)： 12psi；离子源温度：600℃；离子喷雾电压：5500V；母离子：359.3Da，子离子：297.8Da。
5.5方法学考察
5.5.1线性范围考察
取配置好的对照品储备液2.5mL置于50mL容量瓶中，用配置好的甲醇(含5％水、0.1％甲酸和5mmoL/L甲酸铵)溶液定容至刻度作为对照品溶液1(浓度1μg/mL)；按照倍比稀释法依次吸取5mL对照品溶液定容至10mL容量瓶中，共稀释得到12个系列对照品溶液，各对照品溶液取1μL，进液质测定，记录其峰面积。以马兜铃酸I对照品浓度为横坐标(X， ng/g)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，回归方程见表8。取S/N＝3计算检测限，S/N＝10 计算定量限。
表8线性考察结果
5.5.2精密度试验
取5.5.1项下用于测定定量下限，以及低，中，高共四个浓度的对照品溶液，进样测定，每个对照品溶液进样6针，重复进样三天，记录其峰面积并计算其RSD，结果不同浓度的马兜铃酸I的峰面积的RSD均符合要求，具体结果见表9，表明仪器精密度良好。
表9精密度试验结果
5.5.3重复性试验
取同一复方冻干粉，按5.3项下供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，在5.4项的色谱- 质谱条件下进样测定，记录6份平行供试品的峰面积并通过5.5.1项下回归方程计算其含量，结果见表10，表明仪器重复性良好。
表10重复性试验结果
5.5.4稳定性试验
按5.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，选取复方四供试品溶液作为稳定性试验用样品。分别在制样后的0h、1h、2h、4h、6h、8h、24h进样分析，记录峰面积并计算其RSD，结果见表11，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
表11稳定性试验结果
5.5准确度试验
按5.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，准确称取0.25g当归四逆汤冻干粉于25mL容量瓶中，平行称取9份，标为1～9号；其中1～3号中对照品加入量/样品中量为50％组；4～6号中对照品加入量/样品加入量为100％组；7～9号中，对照品加入量/样品加入量为150％组。分别向1～3号中加入1mL对照品溶液1的稀释液(为上述对照品溶液1稀释25倍所得，浓度为 41.42ng/mL)，向4～6号中加入2mL对照品溶液1的稀释液，7～9号中加入3mL对照品溶液1的稀释液，然后再分别加入70％的甲醇溶液溶解并定容至刻度。以上溶液在5.4项色谱-质谱条件下进样测定，记录峰面积，按照准确度的计算公式：
准确度＝[(测得量-样品中含有量)/对照品加入量]×100％
计算准确度及其RSD，结果低、中、高浓度的平均准确度介于78.53％～109.21％，RSD介于3.44％～7.39％之间，结果见表12。
表12准确度试验结果
5.6样品测定
按照5.3项下供试品制备方法制备15批当归四逆汤基准物质供试品溶液，每批平行两份，每份进样2针，在5.4项的色谱-质谱条件下进样测定，测定结果见表13。
表13 15批当归四逆汤基准物质中马兜铃酸I的含量测定结果
限度标准制定：《中国药典》(2020版)中对细辛中马兜铃酸I的的含量进行了限定，规定细辛按干燥品计算，含马兜铃酸I(C17H11NO7)不得过0.001％。由于中药复方当归四逆汤中细辛占全方的12.5％，占比较重，且已对复方中马兜铃酸I的含量进行了检测，因此有必要对当归四逆汤复方中马兜铃酸I的限量制定标准。按《中国药典》(2020版)对细辛中马兜铃酸I的限量0.001％(即10μg/g)作为最高含量，细辛日服用量为1～3g，因此马兜铃酸I的最大用量为30μg/d(10μg/g×3g/d＝30μg/d)。当归四逆汤全方总重为72g，其基准物质的出膏率为 25％～34％之间，所以一日服用当归四逆汤提取物的量为18g～24.48g。那么马兜铃酸I的含量范围应该是：30μg/25g-30μg/18g之间，即1.2μg/g～1.67μg/g之间，即1200ng/g～1670ng/g之间。以上15批当归四逆汤基准物质中马兜铃酸I的含量均落在该范围内，所以都是合格的。限量标准暂定为不得高于1000ng/g，即1μg/g。
然而，本领域的技术人员可以对本发明进行各种变动而不脱离本发明的精神和范围，由此所延伸的变化及变动仍处于本发明创造的保护范围之内。
Claims (19)
1.当归四逆汤质量控制方法，其特征在于，包括七种活性成分的同步测定方法，指纹图谱分析方法，薄层色谱鉴别方法以及有毒物质限量测定方法。
2.根据权利1要求的质量控制方法，所述当归四逆汤出自东汉张仲景的《伤寒论》，全方由当归9份，白芍9份，桂枝9份，细辛9份，木通6份，炙甘草6份，大枣24份(掰开)组成。
3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述当归四逆汤基准物质通过如下方法制备获得：取当归9份，白芍9份，桂枝9份，细辛9份，木通6份，炙甘草6份，大枣24份(掰开)，加水20～25倍量，煎煮2～3h，滤过，干燥成粉，即得。
4.根据权利要求3所述的当归四逆汤基准物质的制备方法，其出膏率应介于20％～40％之间。
5.根据权利1要求的质量控制方法，其特征在于，采用高效液相色谱法同步测定当归四逆汤中芍药苷、甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、甘草酸、藁本內酯、细辛脂素七种活性成分的含量，所用色谱条件为：采用辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱进行分离，以乙腈-磷酸溶液为流动相梯度洗脱，检测波长275nm，柱温介于25～35℃，流速介于0.9～1.1mL/min。
6.根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于，用于七种成分同步测定的供试品的制备方法如下：取当归四逆汤粉末0.1～0.5g，精密加入50～250倍量的50％～100％甲醇溶液，称定重量，超声(250W，40kHz)提取30～60min，放冷，再次称定重量，用提取用甲醇溶液补重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
7.根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于，进样量为5～20μL。
8.根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于，当归四逆汤粉末中芍药苷含量范围应介于5～12mg/g之间，甘草苷含量范围应介于1～4mg/g，肉桂酸含量范围应介于0.1～0.5mg/g，桂皮醛含量范围应介于0.05～0.4mg/g，甘草酸含量范围应介于3～8mg/g，藁本内酯含量范围应介于0.1～0.5mg/g，细辛脂素含量范围应介于0.2～0.5mg/g。
9.权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于，所述含量测定方法还可用于当归四逆汤基准物质指纹图谱的建立，依据10批以上供试品所制得的图谱，制定对照指纹图谱，以参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其他共有色谱峰的相对保留时间，所述对照指纹图谱应包括10～30个共有峰。
10.权利要求9所述的质量控制方法，其特征在于，将当归四逆汤指纹图谱导入中药指纹图谱相似度分析系统，计算各供试品指纹图谱与对照指纹图谱之间的相似度，各供试品指纹图谱与对照指纹图谱之间的相似度均不应低于0.9。
11.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，还包括采用薄层色谱法鉴别当归四逆汤中的当归、白芍、桂枝、细辛、炙甘草。
12.根据权利要求11所述的质量控制方法，其特征在于，采用薄层色谱法鉴别当归四逆汤中的当归、白芍、桂枝、细辛、炙甘草的供试品制备方法为：取当归四逆汤粉末1～5g，加入10～50倍量的50％～95％乙醇溶液，超声(250W，40kHz)处理30～60min，过滤，取续滤液，即得。
13.根据权利要求11所述的质量控制方法，其特征在于，当归，细辛，桂枝所用薄层板为硅胶G板，白芍与炙甘草所用薄层板为碱性硅胶G板。
14.根据权利要求11所述的质量控制方法，其特征在于，当归、桂枝与细辛的展开剂为正己烷-乙酸乙酯，白芍与炙甘草的展开剂为乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水。
15.根据权利要求11所述的质量控制方法，其特征在于，当归薄层板在紫外下观察，桂枝、细辛、白芍、炙甘草的显色剂为二硝基苯肼溶液或硫酸乙醇溶液或香草醛浓硫酸溶液，均为显色后在日光下观察。
16.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，采用LC-MS/MS方法对当归四逆汤中的马兜铃酸I进行限量检查。
17.根据权利要求16所述的质量控制方法，其特征在于，供试品的制备方法为：准确称取0.5～1g当归四逆汤干粉于具塞锥形瓶中，加入50～100倍的70％～90％甲醇溶液，称重后超声(250W，40kHz)提取30～60min，放冷后加提取用甲醇溶液补足减失重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
18.根据权利要求16所述的质量控制方法，其特征在于，采用LC-MS/MS法对当归四逆汤干粉中的马兜铃酸I进行含量测定的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相为甲醇(A)-水(B)，梯度洗脱；流速：0.4～0.6mL/min；柱温：30～40℃；进样量：0.5～2μL；质谱条件为：电喷雾离子源(ESI)，正离子电离模式；选择反应监测模式。
19.据权利要求15所述的质量控制方法，其特征在于，当归四逆汤干粉中的马兜铃酸I含量不得高于1μg/g。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111077483.1A CN115808473A (zh) | 2021-09-15 | 2021-09-15 | 一种可用于中药复方当归四逆汤质量控制的新方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111077483.1A CN115808473A (zh) | 2021-09-15 | 2021-09-15 | 一种可用于中药复方当归四逆汤质量控制的新方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115808473A true CN115808473A (zh) | 2023-03-17 |
Family
ID=85481647
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111077483.1A Pending CN115808473A (zh) | 2021-09-15 | 2021-09-15 | 一种可用于中药复方当归四逆汤质量控制的新方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115808473A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117805273A (zh) * | 2023-12-28 | 2024-04-02 | 浙江苏可安药业有限公司 | 一种克痢痧胶囊中5种马兜铃酸类物质的定量检测方法及应用 |
| CN118130694A (zh) * | 2024-05-08 | 2024-06-04 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种四逆散加减颗粒的质量控制方法 |
-
2021
- 2021-09-15 CN CN202111077483.1A patent/CN115808473A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117805273A (zh) * | 2023-12-28 | 2024-04-02 | 浙江苏可安药业有限公司 | 一种克痢痧胶囊中5种马兜铃酸类物质的定量检测方法及应用 |
| CN118130694A (zh) * | 2024-05-08 | 2024-06-04 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种四逆散加减颗粒的质量控制方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110907546B (zh) | 一种补肾健骨中药的hplc指纹图谱检测方法 | |
| CN115718145A (zh) | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 | |
| CN110412155B (zh) | 一种两地汤的hplc特征图谱的检测方法 | |
| CN115808473A (zh) | 一种可用于中药复方当归四逆汤质量控制的新方法 | |
| CN113063885B (zh) | 用于制备保元汤的组合物，保元汤制品，及其指纹图谱测定和质量检测方法 | |
| CN108459128B (zh) | 一种当归四逆汤组合物的质量控制方法 | |
| CN108802245B (zh) | 一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的检测方法 | |
| CN113759035B (zh) | 小承气汤指纹图谱的构建方法 | |
| CN112666277B (zh) | 一种香附药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒hplc特征图谱的构建及检测方法 | |
| CN108459129B (zh) | 一种防己茯苓汤组合物的质量控制方法 | |
| CN106596777B (zh) | 丹灯通脑制剂的质量控制方法 | |
| CN110243986B (zh) | 一种活血消瘿片hplc指纹图谱及其制备方法 | |
| CN114994220B (zh) | 一种七清败毒颗粒的指纹图谱的构建方法和其成分含量的测定方法及应用 | |
| CN113484429B (zh) | 桃核承气汤物质基准的建立方法 | |
| CN112526045B (zh) | 一种同时检测或鉴别舒心降脂片中有效成分的方法 | |
| CN109142563A (zh) | 一种龟龄集uplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN113759011B (zh) | 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法 | |
| CN114636779A (zh) | 三化汤基准样品冻干粉指纹图谱的构建方法及其指纹图谱 | |
| CN109781884B (zh) | 一种前列欣胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN110308213B (zh) | 滋肾育胎丸指纹图谱构建方法及其在质量检测中的应用 | |
| CN114660218A (zh) | 一种含有“清上蠲痛汤”的药物组合物及检测方法 | |
| CN113049702B (zh) | 基于指纹图谱建立的葛根汤的质量检测方法及其生产方法 | |
| CN115166066B (zh) | 芪珠升白口服液的质量评价方法 | |
| CN103267812B (zh) | 一种八珍颗粒的质量检测方法 | |
| CN107014930B (zh) | 华盖散颗粒指纹图谱的测定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |