CN108918735B - 一种检测荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱的高效液相方法 - Google Patents
一种检测荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱的高效液相方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种可适用于整体控制荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒质量的高效液相特征图谱检测方法。本发明的HPLC特征图谱检测方法,能整体控制荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的特征成分,确保荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒整体质量的稳定,且方法操作简单,精密度高,稳定性好,重复性好,准确度高。
Description
技术领域
本发明具体涉及一种荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱的HPLC检测方法。
背景技术
荷叶为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶,始载于《食疗本草》,具有清暑化湿,升发清阳,凉血止血等功效,用于暑热烦渴,暑湿泄泻,脾虚泄泻,血热吐魈,便血崩漏,为临床常用中药品种。荷叶中主要含有荷叶碱、原荷叶碱、前荷叶碱等多种生物碱类成分,同时也含有槲皮素等黄酮类成分。现代研究表明,荷叶中生物碱类成分具有降脂减肥、抑菌、抗病毒等药理活性,荷叶黄酮类成分具有调节血脂、抗脂质氧化、清除自由基、抗病毒、抑菌等作用,这些化学成分的整体组成与含量是荷叶发挥临床疗效的基础,因此,要确保荷叶临床疗效,需要对其药效成分进行整体质量控制。
目前,《中国药典》2015年版一部荷叶项下尚未收载采用高效液相色谱法测定成分含量或进行特征图谱控制的方法。其他有部分文献研究报道建立了荷叶药材、配方颗粒的指纹图谱,如杨鹏,陈波,陈希平,等.荷叶HPLC-UV指纹图谱研究[J].中南药学,2011,9(4):290-293;孙冬梅,陈雪婷,李养学,等.荷叶配方颗粒的HPLC指纹图谱研究[J].广东药学院学报,2013,29(2):159-162.收载了用于控制荷叶药材指纹图谱的高效液相色谱法。
然而,上述报道是均是单独针对荷叶药材和配方颗粒研究建立的指纹图谱,检测方法各不相同,因此,难以有效对比和分析荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱的差异与变化,难以深入认识荷叶药效物质基础在从药材到配方颗粒的工艺过程的传递情况,难以整体评价和控制从荷叶药材到荷叶配方颗粒成品的工艺过程。因此,建立统一的荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱测定方法,有利于整体评价从药材到配方颗粒的工艺过程的科学性、合理性,更能整体控制荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的内在质量,确保荷叶的临床疗效。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种适用于荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱测定的HPLC检测方法。
本发明的整体控荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的高效液相特征图谱检测方法,包括如下操作步骤:
1)对照品溶液制备:取对照品,溶解,即得对照品溶液;
2)供试品溶液制备:取荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒,经提取,即得供试品溶液;
3)分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;检测波长:235~280nm;流动相:甲醇-乙腈(1:1)混合溶液为流动相A,0.1%甲酸-0.2三乙胺%混合水溶液为流动相B;梯度洗脱程序如下:
其中,步骤1)所述对照品包括:荷叶碱、芦丁、金丝桃苷、紫云英苷四种对照品。
其中,步骤1)所述溶解是加入甲醇溶解。
其中,步骤2)所述提取是指:加入水,煎煮提取。
优选地,所述提取方法如下:
取荷叶标准汤剂粉末或荷叶配方颗粒,加入50倍~250倍水,超声或回流处理15~45分钟,放冷,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得荷叶标准汤剂粉末或荷叶配方颗粒的供试品溶液。
取荷叶药材或饮片粉末,加入10倍~50倍水,煎煮15~45分钟,放冷,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得荷叶药材或饮片的供试品溶液。
其中,所用色谱柱为Agilent 5TC-C18(2)或PhenomenexLuna 5μm C18(2)100A色谱柱;规格均为4.6mm×250mm,5μm。
其中,所述检测波长为270nm。
其中,所述色谱条件还包括:流速为每分钟0.8ml~1.2ml/分,柱温为30~40℃,进样量为5~20μL。
进一步地,所述色谱条件还包括:流速为1.0mL/min,柱温为35℃,进样量为10μL。
本发明的荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒高效液相特征图谱的检测方法,能整体控制荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的特征成分,确保荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒整体质量的稳定,且方法操作简单,精密度高,稳定性好,重复性好,准确度高。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1荷叶药材对照特征图谱,峰4(S):芦丁;峰5:金丝桃苷;峰7:紫云英苷;峰8:荷叶碱
图2荷叶饮片对照图谱,峰4(S):芦丁;峰5:金丝桃苷;峰7:紫云英苷;峰8:荷叶碱
图3荷叶标准汤剂对照图谱,峰4(S):芦丁;峰5:金丝桃苷;峰7:紫云英苷;峰8:荷叶碱
图4荷叶配方颗粒对照图谱,峰4(S):芦丁;峰5:金丝桃苷;峰7:紫云英苷;峰8:荷叶碱
具体实施方式
仪器与试药
1仪器
高效液相色谱仪:安捷伦1260型高效液相色谱仪、Waters2695-2996型高效液相色谱仪、岛津20AD型高效液相色谱仪;
电子天平:ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司);
超纯水机:细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司);
超声波清洗器:KQ5200DB型(600W,40KHz;昆山市超声仪器有限公司);
色谱柱:Agilent 5TC-C18(2)250×4.6mm 5μm、Phenomenex Luna 5μm C18(2)100A 250×4.60mm、SWELL C18 4.6×250mm 5μm。
2试药
乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
荷叶碱对照品(中国食品药品检定研究院,批号:111566-201605)、芦丁(中国食品药品检定研究院,批号:100080-201409)、金丝桃苷(中国食品药品检定研究院,批号:111521-201708))紫云英苷(批号:17111511);荷叶对照药材(中国食品药品检定研究院,批号:121322-201504)。
荷叶药材(批号:XLS1802021、XLS1802022、XLS1802023、XLS1802024、XLS1802025、XLS1802026、XLS1802027、XLS1802028、XLS1802029、XLS1802030、XLS1802031、XLS1802032、XLS1802033、XLS1802034、XLS1802035、XLS1802036、XLS1802037、XLS1802038、XLS1802039、XLS18020400)
荷叶饮片(批号:HY180201、HY180301、HY180302、HY180303、HY180304、HY180305、HY180306、HY180307、HY180308、HY180309、HY180310、HY180311、HY180312、HY180313、HY180314、HY180315、HY180316、HY180317、HY180318、HY180319)
荷叶配方颗粒(批号:SY1805001、SY1805002、SY1805003
荷叶标准汤剂(批号:HYBT180401、HYBT180402、HYBT180403、HYBT180404、HYBT180405、HYBT180406、HYBT180407、HYBT180408、HYBT180409、HYBT180410、HYBT180411、HYBT180412、HYBT180413、HYBT180414、HYBT180415、HYBT180416、HYBT180417、HYBT180418、HYBT180419、HYBT180420)
实施例1本发明检测方法用于荷叶药材高效液相特征图谱的检测
1对照品溶液制备:取荷叶碱,芦丁,金丝桃苷,紫云英苷对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含16,200,100,30μg的对照品溶液,即得。
2对照药材溶液制备:取1g荷叶对照药材,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水50ml,称定重量,煎煮45分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
3供试品溶液制备:取待检的1g荷叶药材,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水50ml,称定重量,煎煮45分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
4检测:分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,色谱条件如下:色谱柱:PhenomenexLuna 5μm C18(2)100A色谱柱;规格均为4.6mm×250mm,5μm;检测波长:280nm;流动相:甲醇-乙腈(1:1)混合溶液为流动相A,0.1%甲酸-0.2三乙胺%混合水溶液为流动相B;梯度洗脱程序如下:
流速为1.2mL/min,柱温为40℃。
5结果:供试品特征图谱中呈现8个特征峰,其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同;与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间均在规定值的±5%之内。规定值为:0.242(峰1)、0.933(峰2)、0.962(峰3)、1.00(峰4,S峰)、1.024(峰5)、1.038(峰6)、1.131(峰7)、1.195(峰8),该方法可准确高效地控制荷叶药材中的特征成分。
实施例2本发明检测方法用于荷叶饮片高效液相特征图谱的检测
1对照品溶液制备:取荷叶碱,芦丁,金丝桃苷,紫云英苷对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含16,200,100,30μg的对照品溶液,即得。
2对照药材溶液制备:取1g荷叶对照药材,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25ml,称定重量,煎煮30分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
3供试品溶液制备:取待检的1g荷叶饮片,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25ml,称定重量,煎煮30分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
4检测:分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,色谱条件如下:色谱柱:Agilent 5TC-C18(2),色谱柱;规格均为4.6mm×250mm,5μm;检测波长:270nm;流动相:甲醇-乙腈(1:1)混合溶液为流动相A,0.1%甲酸-0.2三乙胺%混合水溶液为流动相B;梯度洗脱程序同实施例1。流速为1.0mL/min,柱温为35℃。
5结果:供试品特征图谱中呈现8个特征峰,其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同;与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间均在规定值的±5%之内。规定值为:0.242(峰1)、0.933(峰2)、0.962(峰3)、1.00(峰4,S峰)、1.024(峰5)、1.038(峰6)、1.131(峰7)、1.195(峰8),该方法可准确高效地控制荷叶饮片中的特征成分。
实施例3本发明检测方法用于荷叶标准汤剂高效液相特征图谱的检测
1对照品溶液制备:取荷叶碱,芦丁,金丝桃苷,紫云英苷对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含16,200,100,30μg的对照品溶液,即得。
2对照药材溶液制备:取1g荷叶对照药材,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25ml,称定重量,煎煮30分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
3供试品溶液制备:取待检的0.2g荷叶标准汤剂,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水10ml,称定重量,超声处理15分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
4检测:分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,色谱条件如下:色谱柱:Agilent 5TC-C18(2),色谱柱;规格均为4.6mm×250mm,5μm;检测波长:235nm;流动相:甲醇-乙腈(1:1)混合溶液为流动相A,0.1%甲酸-0.2三乙胺%混合水溶液为流动相B;梯度洗脱程序梯度洗脱程序同实施例1,流速为0.80mL/min,柱温为30℃。
5结果:供试品特征图谱中呈现8个特征峰,其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同;与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间均在规定值的±5%之内。规定值为:0.242(峰1)、0.933(峰2)、0.962(峰3)、1.00(峰4,S峰)、1.024(峰5)、1.038(峰6)、1.131(峰7)、1.195(峰8),该方法可准确高效地控制荷叶标准汤剂中的特征成分。
实施例3本发明检测方法用于荷叶配方颗粒高效液相特征图谱的检测
1对照品溶液制备:取荷叶碱,芦丁,金丝桃苷,紫云英苷对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含16,200,100,30μg的对照品溶液,即得。
2对照药材溶液制备:取1g荷叶对照药材,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25ml,称定重量,煎煮30分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
3供试品溶液制备:取待检的0.5g荷叶配方颗粒,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水50ml,称定重量,回流处理45分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
4检测:分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,色谱条件如下:色谱柱:Agilent 5TC-C18(2),色谱柱;规格均为4.6mm×250mm,5μm;检测波长:260nm;流动相:甲醇-乙腈(1:1)混合溶液为流动相A,0.1%甲酸-0.2三乙胺%混合水溶液为流动相B;梯度洗脱程序同实施例1,流速为0.80mL/min,柱温为30℃。
5结果:供试品特征图谱中呈现8个特征峰,其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同;与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间均在规定值的±5%之内。规定值为:0.242(峰1)、0.933(峰2)、0.962(峰3)、1.00(峰4,S峰)、1.024(峰5)、1.038(峰6)、1.131(峰7)、1.195(峰8),该方法可准确高效地控制荷叶配方颗粒中的特征成分。
实验例1色谱条件与系统适用性试验
流动相选择:考察了3种不同流动相的分离效果,分别为:①甲醇为流动相A,0.1%磷酸为流动相B;②乙腈为流动相A,0.1%甲酸+0.2%三乙胺为流动相B;③甲醇-乙腈(1:1)为流动相A,以0.1%甲酸-0.2%三乙胺水为流动相B,见表1~3。
表1流动相1梯度
表2流动相2梯度
表3流动相3梯度
结果表明,在流动相3洗脱条件下色谱峰多,且理论板数、分离度、对称性均更好,故作为荷叶标准汤剂特征图谱测定方法的流动相。
波长选择:利用二极管阵列检测器对荷叶碱对照品溶液、供试品溶液进行全波段扫描,并分别提取供试品溶液在210nm、235nm、270nm、300nm、327nm波长下的色谱图。结果表明,在检测波长为270nm时色谱峰信息量较大,色谱图基线平稳,故检测波长确定为270nm。
柱温考察:分别对柱温为30℃、35℃、40℃时进行考察。结果表明,在柱温为30℃、35℃、40℃时,各特征峰相对保留时间的RSD在0%~3.69%,各特征峰相对峰面积的RSD在2.55%~21.65%,特征峰相对保留时间稳定,并且色谱图峰形、分离效果均符合要求。
流速考察:分别对流速为0.8ml/分钟、1.0ml/分钟、1.2ml/分钟时进行了考察。结果表明,在流速为0.8ml/分钟、1.0ml/分钟、1.2ml/分钟时,各特征峰相对保留时间的RSD在0.00%~5.35%,各特征峰相对峰面积的RSD在0.00%~8.54%,色谱图峰形、分离效果均符合要求。根据试验习惯荷叶标准汤剂特征图谱流速确定为1.0ml/分钟。
实验例2供试品溶液的制备考察
提取溶剂考察:取荷叶标准汤剂粉末(批号:HYBT180201)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,供试品提取溶剂分别为甲醇、50%甲醇、水25ml进行考察,密塞,称定重量,超声处理(功率600W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用提取溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。结果表明,在流动相为水时,色谱峰信息量大,分离度好,故供试品提取溶剂确定为水。
提取方法考察:取荷叶标准汤剂粉末(批号:HYBT180201)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25ml,密塞,称定重量,分别对供试品提取方法为回流、超声时进行考察,提取时间30分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。结果表明,对供试品分别进行超声提取与回流提取时效果一致。因超声提取操作更为简便,故供试品提取方法确定为超声提取。
提取时间考察:取荷叶标准汤剂粉末(批号:HYBT180201)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率600W,频率40kHz),分别对供试品提取时间为15分钟、30分钟、45分钟时进行考察,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。结果表明,在提取时间为30分钟时,即可充分提取。故供试品提取时间确定为30分钟。
溶剂加入量考察:取荷叶标准汤剂粉末(批号:HYBT180201)约0.2g,各三份,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入水10ml、25ml、50ml,密塞,称定重量,超声处理20分钟,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。结果表明,不同稀释倍数下的色谱峰峰形和峰个数没有显著差异,最终确定样品溶液稀释25倍。
实验例3精密度试验
取荷叶标准汤剂粉末(批号:HYBT180201)约0.2g,按拟定实验方法制备供试品溶液,连续进样6次,每次10μl,计算特征峰的保留时间及峰面积。结果表明,各特征峰保留时间的RSD为0.07%~0.74%,各特征峰峰面积的RSD为0.13%~3.58%。该仪器精密度良好。
实验例4色谱柱耐用性考察
在拟定的实验条件基础上,分别对色谱柱为Agilent 5TC-C18(2)250×4.6mm 5μm、SWELL C18 4.6×250mm 5μm、PhenomenexLuna 5μm C18(2)100A 250×4.60mm 5micron时进行考察。结果表明,Agilent 5TC-C18(2)250×4.6mm 5μm、PhenomenexLuna 5μm C18(2)100A 250×4.60mm 5micron理论板数、分离度、对称性均更好,故确定荷叶标准汤剂特征图谱更适用gilent 5TC-C18(2)250×4.6mm 5μm、PhenomenexLuna 5μm C18(2)100A 250×4.60mm 5micron进行检测。
实验例5稳定性试验
在以上拟定的实验条件基础上,取同一供试品溶液,分别于0h、4h、6h、12h、18h、24h时测定,测定结果显示各特征峰相对保留时间RSD为0.00%~0.67%,各特征峰相对峰面积的RSD为0.00%~5.96%,表明供试品溶液24h内稳定性良好。
实验例6重复性试验
取荷叶标准汤剂粉末(批号:HYBT180201)约0.1g,精密称定6份,按拟定实验方法进行制备及测定。结果表明,各特征峰相对保留时间的RSD为0.00%,各特征峰相对峰面积的RSD为0.77%~4.08%。该方法重复性良好。
实验例7荷叶样品对照图谱的建立
1.荷叶药材特征图谱的建立
采用最终确定的分析方法,对20批荷叶药材(XLS1802021、XLS1802022、XLS1802023、XLS1802024、XLS1802025、XLS1802026、XLS1802027、XLS1802028、XLS1802029、XLS1802030、XLS1802031、XLS1802032、XLS1802033、XLS1802034、XLS1802035、XLS1802036、XLS1802037、XLS1802038、XLS1802039、XLS18020400)进行测定,计算各特征峰相对保留时间、相对峰面积,根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则,共选择了8个重复性较好的峰作为特征峰。
结果表明,20批次荷叶药材特征峰相对峰面积RSD差异太大,因此不列入质量标准正文,20批次荷叶药材8个特征峰相对保留时间RSD均小于2.0%。最终规定:供试品特征图谱中应呈现8个特征峰,其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同;与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为:0.244(峰1)、0.935(峰2)、0.965(峰3)、1.00(峰4,S峰)、1.025(峰5)、1.039(峰6)、1.133(峰7)、1.198(峰8)。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对20批荷叶药材进行合成,建立了荷叶药材特征图谱的对照特征图谱,建立的特征图谱检测方法可以较为准确地整体控制荷叶药材的质量。
2.荷叶饮片特征图谱的建立
采用最终确定的分析方法对20批荷叶饮片样品(批号:HY180201、HY180301、HY180302、HY180303、HY180304、HY180305、HY180306、HY180307、HY180308、HY180309、HY180310、HY180311、HY180312、HY180313、HY180314、HY180315、HY180316、HY180317、HY180318、HY180319)进行测定,计算各特征峰相对保留时间、相对峰面积,根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则,共选择了8个重复性较好的峰作为特征峰。
结果表明,20批荷叶饮片各特征峰相对峰面积RSD太大,因此不列入质量标准正文,20批荷叶饮片8个特征峰相对保留时间RSD均小于2.0%。最终规定:供试品特征图谱中应呈现4个特征峰,其中4个峰应与相应的参照物峰保留时间相同,其中与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为:0.242(峰1)、0.933(峰2)、0.962(峰3)、1.00(峰4,S峰)、1.024(峰5)、1.038(峰6)、1.131(峰7)、1.195(峰8)。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对20批荷叶饮片进行合成,建立了荷叶饮片特征图谱的对照图谱,建立的特征图谱检测方法可以较为准确地整体控制荷叶药材的质量。
3.荷叶标准汤剂对照图谱的建立
采用最终确定的分析方法对20批荷叶标准汤剂样品(批号:HYBT180401、HYBT180402、HYBT180403、HYBT180404、HYBT180405、HYBT180406、HYBT180407、HYBT180408、HYBT180409、HYBT180410、HYBT180411、HYBT180412、HYBT180413、HYBT180414、HYBT180415、HYBT180416、HYBT180417、HYBT180418、HYBT180419、HYBT180420)进行测定,计算各特征峰相对保留时间、相对峰面积,根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则,共选择了8个重复性较好的峰作为特征峰。
结果表明,20批次荷叶标准汤剂特征峰相对峰面积RSD差异太大,因此不列入质量标准正文,20批次荷叶标准汤剂8个特征峰相对保留时间RSD均小于3.0%。最终规定:供试品特征图谱中应呈现8个特征峰,其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同;其中与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为:0.23(峰1)、0.93(峰2)、0.95(峰3)、1.00(峰S)、1.02(峰5)、1.03(峰6)、1.13(峰7)、1.19(峰8)。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对20批标荷叶准汤剂进行合成,建立了荷叶标准汤剂特征图谱的对照特征图谱,建立的特征图谱检测方法可以较为准确地整体控制荷叶标注汤剂的质量。
4.荷叶配方颗粒特征图谱的建立
采用拟定的方法对本品3批样品(批号:SY1805001、SY1805002、SY1805003)进行特征图谱的测定,计算相对保留时间、相对峰面积和相对峰高。
结果表明,3批次配方颗粒特征峰相对峰面积RSD差异太大,因此不列入质量标准正文,3批次荷叶标准汤剂(配方颗粒)8个特征峰相对保留时间RSD均小于5%。最终规定:供试品特征图谱中应呈现8个特征峰,其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同;其中与芦丁参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为:0.24(峰1)、0.93(峰2)、0.96(峰3)、1.00(峰S)、1.02(峰5)、1.04(峰6)、1.13(峰7)、1.19(峰8)
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对3批标荷叶准汤剂进行合成,建立了荷叶配方颗粒特征图谱的对照特征图谱,建立的特征图谱检测方法可以较为准确地整体控制荷叶配方颗粒的质量。
综上,本发明的荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒高效液相特征图谱的检测方法,能整体控制荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的特征成分,确保荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒质量的整体稳定,且方法操作简单,精密度高,稳定性好,重复性好,准确度高。
Claims (8)
1.一种荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的HPLC特征图谱的检测方法,其特征在于:它是由如下操作步骤组成:
1)对照品溶液制备:取荷叶碱、芦丁、金丝桃苷、紫云英苷对照品,溶解,即得对照品溶液;
2)供试品溶液制备:取荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒,加水煎煮提取,即得供试品溶液;
3)分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;检测波长:235~280nm;流动相:体积比1:1的甲醇-乙腈混合溶液为流动相A,0.1%甲酸-0.2三乙胺%混合水溶液为流动相B;梯度洗脱程序如下:
。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤1)所述溶解是加入甲醇溶解。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述提取方法如下:
取荷叶标准汤剂粉末或荷叶配方颗粒,加入50倍~250倍水,超声或回流处理15~45分钟,放冷,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得荷叶标准汤剂粉末或荷叶配方颗粒的供试品溶液;
取荷叶药材或饮片粉末,加入10倍~50倍水,煎煮15~45分钟,放冷,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得荷叶药材或饮片的供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)中,所用色谱柱为Agilent 5TC-C18(2)或PhenomenexLuna 5μm C18(2)100A色谱柱,规格均为 4.6mm×250 mm,5μm。
5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)中,所述检测波长为270nm。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)中,所述色谱条件还包括:流速为每分钟0.8ml~1.2ml/分,柱温为30~40℃,进样量为5~20µ L。
7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于:所述色谱条件还包括:流速为1.0mL/min。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于:所述柱温为35℃,进样量为10µ L。
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