CN114894952A - 一种当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法；本发明将当归建中汤加水溶解后，用乙醚萃取，分别得到乙醚层样品和水层样品，水层样品进一步经过AB‑8大孔树脂洗脱得到，本发明水层采用1块薄层板鉴别了甘草、芍药和大枣成分，乙醚层用1块薄层板鉴别了当归、肉桂和生姜成分；本发明采用2块薄层板鉴别了当归建中汤全方6药味，斑点显色清晰，简单、快捷、高效、稳定性和重复性好。

Description

一种当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法

技术领域

本发明属于中药成分检测技术领域，具体涉及一种当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法。

背景技术

当归建中汤收载于唐代孙思邈所著的《千金翼方》，《翼方》中对当归建中汤的记载为：“当归四两，桂心三两，甘草二两(炙)，芍药六两，生姜三两，大枣十二枚(擘)组成，右六味，㕮咀，以水一斗，煮取三升，分为三服，一日令尽”。临床研究表明，当归建中汤对产妇剖腹产后身体恢复有较好的疗效，具有温经补血的功效，并可调节血压。当归建中汤是国家中医管理局公布的《古代经典名方目录（第一批）》收载方剂之一，来源于该目录且符合要求的经典名方制剂可简化审批流程。因此，当归建中汤具有一定的研发优势(黎智辉, 邓洁, 赖华禄等. 当归建中汤的高效液相色谱指纹图谱建立[J]. 中药新药与临床药理, 2020, 31(6):6)。

中药传统汤剂成分复杂，干扰因素众多，须采用有效手段反映其质量的真实性、稳定性，提供丰富的鉴别信息。专利文献CN 201810838360.7公开了一种当归建中汤冻干粉全味药材的快速薄层鉴别方法，该专利采用4块硅胶薄层板分别鉴定了干姜、白芍、当归和桂枝、大枣和甘草六味药材，由于该专利对当归建中汤冻干粉直接采用甲醇溶解进行成分鉴别，其甲醇溶液中的成分复杂多样，因此，难以在同一块薄层板中同时鉴别多个药材，同时，该专利对鉴别干姜、大枣和甘草成分采用碱性展开剂，对白芍、当归和桂枝采用酸性展开剂，从说明书附图中给出的薄层板结果可看出斑点有较多的粘连和交叉，难以完全分离，对鉴别有较大的干扰；专利文献CN111044624A公开了一种中药制剂的质量检测方法，通过薄层色谱法鉴别的中药制剂的当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、肉桂、甘草和牛膝，该专利采用有机溶剂萃取的方法，对中药药材中的成分萃取后，对当归乙醚萃取物采用体积比为(1-3)：1的正己烷和乙酸乙酯展开剂展开，对白灼和甘草正丁醇萃取物采用酸性展开剂展开，对肉桂用乙醇冷浸提取，用体积比为(15-20)：3的石油醚和乙酸乙酯的展开，该专利对个中药药材成分分别鉴别，无法在同一薄层板中同时鉴别多个中药材，难以达到简单、快速和准确鉴定中药制剂中的多个药材或成分；专利文献CN106979999A公开了一种当归定性定量中药饮片的质量标准与制造工艺，对中药饮片进行乙醚萃取后，以阿魏酸和藁本内酯未对照品，以环已烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4:1:1:0.1）为展开剂展开，在365nm紫外光灯下检视，以相同颜色的荧光斑点进行判断和鉴别，但该专利仅用于鉴别当归一种中药材；专利文献CN106324174A公开了一种中药配方颗粒的质量标准，其说明书实施例2中记载了当归配方颗粒采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸（4:1:0.1）展开，在365nm紫外光灯下检视，以相同颜色的荧光斑点进行判断和鉴别，喷1%三氯化铁和1%铁氰化钾（1:1），在日光下观察，该方法也仅用于鉴别当归一种中药材。

基于上述现有技术中对中药材的薄层色谱鉴别方法，大部分的鉴别均采用单个中药材成分进行鉴别，难以采用相同的方法同时对中药制剂中多个中药成分进行鉴别。因此，建立一种快速、简便的鉴别中药制剂中的多味中药成分，对于全面科学鉴定中药材及其制剂的质量有重要意义。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明提供一种当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，可对当归建中汤全方六药味：当归、肉桂、白芍、甘草、生姜、大枣的成分进行鉴别。

第一方面，本发明提供的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，包括以下步骤：

S1、供试品溶液制备

取相当于5g总饮片量的当归建中汤（水煎液、冻干粉或颗粒）和水混合，加热使溶解，放冷，转移至分液漏斗中，用乙醚萃取，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，得到乙醚层供试品溶液；将水层通过AB-8大孔吸附树脂柱，用氨水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用水洗脱，弃去洗脱液，继续用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，得到水层供试品溶液；

S2、混合对照品溶液1的制备

取甘草苷对照品和芍药苷对照品适量，用甲醇制成含有0.5mg/ml甘草苷对照品和0.5mg/ml芍药苷对照品的混合对照品溶液，混匀，得到混合对照品溶液1；

S3、水层对照药材溶液的制备

取大枣对照药材，白芍对照药材，甘草对照药材，分别和水以1g : 25~80ml混合，回流提取1小时，趁热过滤，放凉，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱，用氨水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用水洗脱，弃去洗脱液，继用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，得到水层对照药材溶液；

S4、薄层色谱试验

吸取水层供试品溶液、甘草对照药材溶液、白芍对照药材溶液和大枣对照药材溶液各10ul，混合对照品溶液1吸取5ul，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比20:4:2:0.5的乙酸乙酯-甲醇-水-氨水混合溶液为展开剂进行展开，晾干，喷于质量浓度为3.8~4%的磷钼酸硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，水层供试品色谱中，在与芍药苷对照品、甘草苷对照品和甘草对照药材、白芍对照药材、大枣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

S5、混合对照品溶液2的制备

取6-姜辣素对照品、肉桂酸对照品和藁本内酯对照品适量，用甲醇制成各含0.2mg/ml的混合对照品溶液，混匀，得到混合对照品溶液2。

S6、乙醚层对照药材溶液的制备

取当归对照药材，肉桂对照药材适量，分别和水以1g : 40~80ml混合，加热回流提取1小时，趁热过滤，滤液转移至分液漏斗中，用乙醚萃取，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，得到乙醚层对照药材溶液；

S7、薄层色谱法试验

吸取乙醚层供试品溶液、当归对照药材、肉桂对照药材溶液各20ul，混合对照品溶液2吸取5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:2:0.1的环已烷-二氯甲烷-甲酸混合溶液为展开剂进行展开，晾干，于254nm下观察，供试品色谱中，在与肉桂酸对照品和肉桂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在365nm下观察，供试品色谱中，在与阿魏酸、藁本内酯对照品和当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以5%香草醛硫酸试液，置于105℃烘至斑点显色，日光下，供试品色谱中，在与6-姜辣素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

进一步地，所述步骤S1中的当归建中汤总饮片量和水的混合比例为1g : 8ml。

进一步地，所述步骤S1和S6中乙醚萃取过程为：加入乙醚振摇提取2~3次，每次加入量为样品水溶液体积的1倍。

进一步地，所述步骤S1和S3中的AB-8大孔树脂内径为1.5cm，柱高为8cm。

进一步地，所述步骤S1和S3中的AB-8大孔树脂先加水预洗至无醇味。

进一步地，所述步骤S1和S3中的氨水溶液为体积浓度1~5%。

进一步地，所述步骤S1和S3中的乙醇洗脱浓度为40%。

进一步地，所述步骤S1和S3中氨水溶液、水和乙醇洗脱用量为3:2:5（v/v/v）。

进一步地，所述步骤S1中磷钼酸硫酸溶液由磷钼酸2g，加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀制备得到。

第二方面，本发明提供了一种用于鉴别芍药、甘草和大枣的薄层色谱法；

进一步地，所述薄层色谱法采用的展开剂为乙酸乙酯、甲醇、水和氨水的混合溶剂；

优选地，所述薄层色谱法采用的展开剂为体积比20:4:2:0.5的乙酸乙酯-甲醇-水-氨水混合溶液。

第二方面，本发明提供了一种用于鉴别当归、桂枝和干姜的薄层色谱法；

进一步地，所述薄层色谱法采用的展开剂为环己烷、二氯甲烷和甲酸的混合溶剂；

优选地，所述薄层色谱法采用的展开剂为体积比4:2:0.1的环已烷-二氯甲烷-甲酸混合溶液。

本发明提供的归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法还可用于其他中药药材成分鉴别中。

本发明采用的薄层色谱法按照《中国药典》通则0502进行，符合《中国药典》通则0502检测规范。

本发明鉴别方法中使用的仪器信息：

电子天平，梅特勒-托利多，型号：XPR105DR，AL104-2；电热鼓风干燥箱：上海一恒科学仪器有限公司DHG-9245A；电热板：上海力辰邦西仪器科技有限公司DB-XAB；自动点样仪：瑞士卡玛公司；自动成像仪：瑞士卡玛公司。

本发明鉴别方法中使用的对照品和对照药材信息：

当归建中汤（自制3批，211201、211202、211213）；甘草苷（111610-201908，中国食品药品检定研究院）；芍药苷（110736-202145，中国食品药品检定研究院）；大枣对照药材（121040-201809，中国食品药品检定研究院）；白芍对照药材（120905-202011，中国食品药品检定研究院）；甘草对照药材（111610-201908，中国食品药品检定研究院）；6-姜辣素（111833-202007，中国食品药品检定研究院）；肉桂酸对照品（121363-201703，中国食品药品检定研究院）；阿魏酸对照品（110773-201915，中国食品药品检定研究院）；藁本内酯对照品（111737-201608，中国食品药品检定研究院）；当归对照药材（120927-201617，中国食品药品检定研究院）；肉桂对照药材（121363-201703，中国食品药品检定研究院）；AB-8大孔树脂（分析纯，Solarbio）；甲醇（分析纯，广州化学试剂厂）；乙醚（分析纯，广州化学试剂厂）；乙酸乙酯（分析纯，广州化学试剂厂）；环己烷（分析纯，广州化学试剂厂）；二氯甲烷（分析纯，广州化学试剂厂）；甲酸（分析纯，广州化学试剂厂）；磷钼酸（分析纯，购自阿拉丁）；硅胶G薄层板（Merck）。

本发明对当归建中汤水溶后采用有机溶剂乙醚进行萃取，分别对乙醚层和水层进行鉴别，其中将萃取后的水层进行AB-8大孔树脂吸附洗脱，采用定量的氨水、水依次洗脱，根据样品混合物中各组分在固定相和洗脱剂中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来，本发明的供试样品pH约为5，经氨水洗脱后应为分子化，有利于水洗脱，进一步采用乙醇进行洗脱，收集到的馏分采用碱性展开剂进行薄层色谱板展开，分别鉴定出了大枣、白芍和甘草三种药材成分；而乙醚层采用酸性展开剂进行薄层色谱板展开，分别鉴定出了当归、肉桂和生姜三种药材成分。

另一方面，本发明采用2块薄层色谱板检鉴别了当归建中汤中6药味，其中乙醚层采用环己烷-二氯乙烷-甲酸（4:2:0.1）的酸性展开剂，对乙醚层中的当归、肉桂和生姜中的6-姜辣素、阿魏酸和藁本内酯对照品进行分离，在365nm、阿魏酸（深蓝色）和藁本内酯（亮蓝色）在365nm下均获得清晰的斑点，同时喷以5%香草醛硫酸试液，105℃显色出6-姜辣素（蓝色）清晰的斑点，分离效果好，无拖尾、交叉等影响辨别的现象。

进一步，本发明得到的当归建中汤水层样品用乙酸乙酯-甲醇-水-氨水（20:4:2:0.5）的酸性展开剂展开，将水层中的甘草、白芍中的甘草苷和芍药苷以及大枣对照药材进行分离，通过喷磷钼酸硫酸溶液，在色谱板上获得分离度良好且清晰的甘草苷（黄色）、芍药苷（蓝色）、大枣（蓝色）斑点和颜色，其中大枣中特性成分斑点的Rf<0.4，甘草苷和芍药苷的斑点的Rf>0.5，无拖尾、交叉等影响辨别的现象。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

（1）对当归建中汤样品进行有机溶剂萃取，获得有机层和水层，同时本发明采用AB-8大孔树脂对水层用氨水、水和乙醇依次洗脱，洗脱剂用量为5:2:3（v/v/v），分别对有机层和水层的乙醇洗脱馏分采用1块薄层色谱板即鉴别出当归建中汤全方6药味，相比现有技术中需要4块薄层色谱板对当归建中汤全方6药味鉴别效果有显著的进步。

（2）本发明采用乙酸乙酯-甲醇-水-氨水（20:4:2:0.5）碱性展开剂可将甘草、白芍和大枣在同一块薄层色谱板上分离，且显色斑点清晰、不拖尾、无交叉，而现有技术中，单一白芍药材的检测均采用酸性展开剂进行鉴别，因此本发明通过碱性展开剂同时对甘草、大枣和白芍在同一块薄层色谱板上进行分离和鉴别，克服现有技术中不能在同一展开剂和同一薄层色谱板上展开的甘草、大枣和白芍三种中药材的技术难点。

（3）本发明采用酸性环已烷-二氯甲烷-甲酸（4:2:0.1）酸性展开剂，将当归、桂枝和生姜在同一块薄层色谱板上分离，且显色斑点清晰、不拖尾、无交叉，而现有技术中，对单一生姜药材的薄层色谱鉴别通常采用碱性展开剂进行展开，因此，本发明通过采用酸性展开剂同时对当归、桂枝和生姜在同一块薄层色谱板上进行分离和鉴别，克服现有技术中不能在同一展开剂和同一薄层色谱板上展开的当归、桂枝和生姜三种中药材的技术难点。

（4）本发明色薄层色谱鉴别方法可简单、快速、有效的分离和鉴别当归建中汤全方6药味，对当归建中汤的质量控制有了进一步地提高。

附图说明

图1为水层供试样品、对照样品和阴性样品的薄层色谱板显色后日光灯下的斑点，其中序号1~10分别为大枣对照药材、大枣阴性样、样1水层、样2水层、样3水层、白芍对照药材、白芍阴性样、混合对照品溶液1（芍药苷、甘草苷）、甘草对照药材、甘草阴性。

图2为乙醚层供试样品、对照样品和阴性样品的薄层色谱板在254nm灯下的荧光斑点，其中序号1~9分别为肉桂对照药材、当归阴性样、肉桂阴性样、生姜阴性（生姜是鲜品，没有对照药材）、混合对照品溶液2（6-姜辣素、肉桂酸和藁本内酯），当归对照药材，样1乙醚层、样2乙醚层、样3乙醚层。

图3为乙醚层供试样品、对照样品和阴性样品的薄层色谱板在365nm灯下的荧光斑点，其中序号1~9分别为肉桂对照药材、当归阴性样、肉桂阴性样、生姜阴性（生姜是鲜品，没有对照药材）、混合对照品溶液2（6-姜辣素、肉桂酸和藁本内酯），当归对照药材，样1乙醚层、样2乙醚层、样3乙醚层。

图4为乙醚层供试样品、对照样品和阴性样品的薄层色谱板显色后日光灯下的斑点，其中序号1~9分别为肉桂对照药材、当归阴性样、肉桂阴性样、生姜阴性（生姜是鲜品，没有对照药材）、混合对照品溶液2（6-姜辣素、肉桂酸和藁本内酯），当归对照药材，样1乙醚层、样2乙醚层、样3乙醚层。

具体实施方式

本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。

本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。

基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围，以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。

实施例1

本实施例中当归建中汤和阴性样的制备方法如下：

当归四两（甘肃2批、青海），白芍六两（浙江、安微、四川），肉桂三两（广东、广西2批），生姜三两（四川、云南2批），甘草二两（内蒙、甘肃、宁夏）和大枣十二枚（河南、新疆、河北）用随机函数搭配成3批（211201批，211202批，211213批），分别以水一斗，煮取三升，冻干得当归建中汤样品。

大枣阴性样：即不含大枣，其它5药味组成含量均相同，制备方法同上。

白芍阴性样：即不含白芍，其它5药味组成含量均相同，制备方法同上。

甘草阴性样：即不含甘草，其它5药味组成含量均相同，制备方法同上。

肉桂阴性样：即不含肉桂，其它5药味组成含量均相同，制备方法同上。

当归阴性样：即不含当归，其它5药味组成含量均相同，制备方法同上。

生姜阴性样：即不含生姜，其它5药味组成含量均相同，制备方法同上。

试验例一、当归建中汤全方六药味的薄层鉴别

当归建中汤全方六药味的具体鉴别步骤如下：

S1、供试品溶液制备

取上述制备的当归建中汤样品相当总饮片量5g，加水40ml，加热使溶解，放冷，转移至分液漏斗中，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml溶解，得到乙醚层供试品溶液；将水层通过AB-8大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为8cm，加水预洗至无醇味），用30ml体积浓度为4%的氨水溶液洗脱，弃去氨液，再用水20ml洗脱，弃去水液，继续用40%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，即得水层供试品溶液；

S2、混合对照品溶液1的制备

取甘草苷对照品和芍药苷对照品适量，用甲醇制成含有0.5mg/ml甘草苷对照品和0.5mg/ml芍药苷对照品的混合对照品溶液，混匀，得到混合对照品溶液1；

S3、水层对照药材溶液的制备

取大枣对照药材约1.0g，白芍对照药材约1.5g，甘草对照药材约0.5g，分别加水40ml，回流提取1小时，趁热过滤，放凉，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为8cm，加水预洗至无醇味），用体积浓度为4%的氨水溶液洗脱，弃去氨液，再用水20ml洗脱，弃去水液，继续用40%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，即得水层对照药材溶液；

S4、薄层色谱法试验

吸取上述水层供试品溶液、甘草对照药材溶液、白芍对照药材溶液和大枣对照药材溶液各10ul，混合对照品溶液1 5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20:4:2:0.5的乙酸乙酯-甲醇-水-氨水混合溶液为展开剂，展开，晾干，喷于磷钼酸硫酸溶液（磷钼酸2g，加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀，即得），在105℃加热至斑点显色清晰，水层供试品色谱中，在与芍药苷对照品、甘草苷对照品和甘草对照药材、白芍对照药材、大枣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，具体见附图1；

S5、混合对照品溶液2的制备

取6-姜辣素对照品、肉桂酸对照品、藁本内酯对照品适量，用甲醇制成每1ml各含0.2mg 4种对照品的混合对照品溶液，混匀，得到混合对照品溶液2。

S6、乙醚层对照药材溶液的制备

取当归对照药材约0.5g，肉桂对照药材约1.0g，分别加水40ml，加热回流提取1小时，趁热过滤，滤液转移至分液漏斗中，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml溶解，得到乙醚层对照药材溶液；

S7、薄层色谱法试验

吸取上述乙醚层供试品溶液、当归对照药材、肉桂对照药材溶液各20ul，混合对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:2:0.1的环已烷-二氯甲烷-甲酸混合溶液为展开剂，展开，晾干，于254nm下观察，供试品色谱中，在与肉桂酸和肉桂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；于365nm下观察，供试品色谱中，在与藁本内酯对照品和当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以5%香草醛硫酸试液，置105℃烘至斑点显色，日光下，供试品色谱中，在与6-姜辣素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，具体见附图2和附图3。

需要说明的是，本实施例中大枣阴性样、白芍阴性样、甘草阴性样、肉桂阴性样、当归阴性样、生姜阴性样与3批当归建中汤样品均采用步骤S1的方法进行处理，分别在附图1中标记为大枣阴性样、白芍阴性样、甘草阴性样和样1水层、样2水层、样3水层，在附图2~4中标记为肉桂阴性样、当归阴性样、生姜阴性样、样1乙醚层、样2乙醚层、样3乙醚层。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、供试品溶液制备

取相当于5g总饮片量的当归建中汤分别和水混合，加热使溶解，放冷，转移至分液漏斗中，用乙醚萃取，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，得到乙醚层供试品溶液；将水层通过AB-8大孔吸附树脂柱，用氨水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用水洗脱，弃去洗脱液，继续用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，得到水层供试品溶液；

S2、混合对照品溶液1的制备

取甘草苷对照品和芍药苷对照品，用甲醇制成含有甘草苷对照品和芍药苷对照品各含0.5mg/ml的混合对照品溶液，混匀，得到混合对照品溶液1；

S3、水层对照药材溶液的制备

取大枣对照药材，白芍对照药材，甘草对照药材，分别和水混合，回流提取，趁热过滤，放凉，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱，用氨水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用水洗脱，弃去洗脱液，继用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，得到水层对照药材溶液；

S4、薄层色谱试验

吸取水层供试品溶液、甘草对照药材溶液、白芍对照药材溶液和大枣对照药材溶液各10ul，混合对照品溶液1吸取5ul，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-氨水混合溶液为展开剂进行展开，晾干，喷于磷钼酸硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，水层供试品色谱中，在与芍药苷对照品、甘草苷对照品和甘草对照药材、白芍对照药材、大枣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

S5、混合对照品溶液2的制备

取6-姜辣素对照品、肉桂酸对照品和藁本内酯对照品，用甲醇制成各含0.2mg/ml的混合对照品溶液，混匀，得到混合对照品溶液2；

S6、乙醚层对照药材溶液的制备

取当归对照药材，肉桂对照药材适量，分别和水混合，加热回流提取，趁热过滤，滤液转移至分液漏斗中，用乙醚萃取，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，得到乙醚层对照药材溶液；

S7、薄层色谱法试验

吸取乙醚层供试品溶液、当归对照药材、肉桂对照药材溶液各20ul，混合对照品溶液2吸取5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-二氯甲烷-甲酸混合溶液为展开剂进行展开，晾干，于254nm下观察，供试品色谱中，在与肉桂酸和肉桂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；于365nm下观察，在与藁本内酯对照品和当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以香草醛硫酸试液，置于105℃烘至斑点显色，日光下，供试品色谱中，在与6-姜辣素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.根据权利要求1所述的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，所述步骤S1和S6中乙醚萃取过程为：加入乙醚振摇提取2～3次，每次加入量为样品水溶液体积的1倍。

3.根据权利要求1所述的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，所述乙酸乙酯-甲醇-水-氨水混合溶液中，乙酸乙酯、甲醇、水和氨水的体积比为20:4:2:0.5。

4.根据权利要求1所述的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，所述环已烷-二氯甲烷-甲酸混合溶液中，环已烷、二氯甲烷和甲酸的体积比为4:2:0.1。

5.根据权利要求1所述的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，所述步骤S1和S3中的氨水溶液为体积浓度1～5％。

6.根据权利要求1所述的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，所述步骤S1和S3中的乙醇洗脱的体积浓度为40％。

7.根据权利要求1所述的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，所述步骤S1和S3中氨水溶液、水和乙醇洗脱用量为3:2:5(v/v/v)。

8.根据权利要求1所述的当归建中汤全方六药味的薄层鉴别方法，其特征在于，所述步骤S1中磷钼酸硫酸溶液由磷钼酸2g，加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀制备得到。

9.一种用于同时鉴别芍药、甘草和大枣的薄层色谱法，其特征在于，所述薄层色谱法采用的展开剂为乙酸乙酯、甲醇、水和氨水的混合溶剂。

10.一种用于同时鉴别当归、桂枝和干姜的薄层色谱法，其特征在于，所述薄层色谱法采用的展开剂为环己烷、二氯甲烷和甲酸的混合溶剂。

Images