CN118275598A - 一种温经汤复方制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药检测技术领域，具体涉及一种温经汤复方制剂的质量控制方法。质量控制方法包括：制备供试品溶液A，并基于供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别牡丹皮、川芎、当归和肉桂；制备供试品溶液B，并基于供试品溶液B，采用薄层色谱法鉴别牡丹皮、白芍和甘草；制备供试品溶液C，并基于供试品溶液C，采用薄层色谱法鉴别莪术；制备供试品溶液D，并基于供试品溶液D，采用薄层色谱法鉴别牛膝；制备供试品溶液E，并基于供试品溶液E，采用薄层色谱法鉴别人参。该方法将同一供试品溶液用于多种药味的薄层鉴别，显著减少了制样程序和成本，同时，实现了对温经汤中莪术的薄层鉴别，有效提升了温经汤质量控制方法的全面性。

Description

一种温经汤复方制剂的质量控制方法

技术领域

本发明涉及中药检测技术领域，具体涉及一种温经汤复方制剂的质量控制方法。

背景技术

温经汤出处为宋·陈自明《妇人大全良方》，原文记载：“当归、川芎、芍药、桂心、牡丹皮、莪术各半两，人参、牛膝、甘草各一两。右咀。每服五钱，水一盏半，煎至八分，去滓温服”。本方为煮散剂，具有温经散寒、通利血脉、活血化瘀、气血双补、肝脾兼调的特点。方中桂心温经通脉，人参甘温补气，莪术、牡丹皮、牛膝的活血祛瘀作用可增强当归、川芎、芍药的行血养血调经功效，芍药、甘草配伍可缓急止痛，全方从活血、行气、温通3方面使瘀血得出路而去。

经典名方经历临床实践和改良，具有较大的开发价值，然而，经典名方中药物种类众多、成分复杂，难以进行全面的质量控制。薄层色谱检测是《中国药典》中用于药复方制剂的重要定性检测手段。

现有的温经汤复方制剂薄层检测中，由于需要检测的药味数量多，因此存在方法繁琐、检测效率较低的问题，同时，现有检测方法的全面性也较差。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的温经汤复方制剂薄层检测方法中存在的方法繁琐、检测效率较低且全面性较差的缺陷，从而提供一种温经汤复方制剂的质量控制方法。

为此，本发明提供一种温经汤复方制剂的质量控制方法，所述温经汤复方制剂由包括当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术、人参、牛膝和甘草的原料制备得到，所述质量控制方法包括：

制备供试品溶液A，并基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别牡丹皮、川芎、当归和肉桂；

制备供试品溶液B，并基于所述供试品溶液B，采用薄层色谱法鉴别白芍和甘草；

制备供试品溶液C，并基于所述供试品溶液C，采用薄层色谱法鉴别莪术；

制备供试品溶液D，并基于所述供试品溶液D，采用薄层色谱法鉴别牛膝；

制备供试品溶液E，并基于所述供试品溶液E，采用薄层色谱法鉴别人参。

可选地，所述供试品溶液A的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加甲醇溶解后进行固液分离，取液体蒸干，所得残渣加水复溶后进行固液分离，取液体加乙醚提取，取乙醚提取液挥干，所得残渣加丙酮复溶。

示例性地，所述供试品溶液A的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品1～2g，加甲醇15～30ml，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10～20ml溶解，滤过，滤液用乙醚振摇提取2～3次，每次10～20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加0.5～1ml丙酮使溶解。

可选地，所述供试品溶液B的制备过程包括：取所述供试品溶液A制备过程中乙醚提取后的水溶液，加水饱和的正丁醇提取，取正丁醇提取液蒸干，所得残渣加甲醇复溶。

示例性地，所述供试品溶液B的制备过程包括：取所述供试品溶液A制备过程中乙醚提取后的水溶液，用以水饱和的正丁醇振摇提取2～3次，每次10～20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2～4ml使溶解。

可选地，所述供试品溶液C的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加正己烷提取后进行固液分离，取液体蒸干，所得残渣加正己烷复溶。

可选地，所述供试品溶液C的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品5～6g，加正己烷40～60ml，超声处理15～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5～1ml正己烷使溶解。

可选地，所述供试品溶液D的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加甲醇水提取后进行固液分离，取液体蒸干，所得残渣加水复溶后继续加水饱和的正丁醇提取，取正丁醇提取液蒸干，所得残渣加甲醇复溶。

示例性地，所述供试品溶液D的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品1～2g，加70～90％甲醇25～50ml，回流处理50～70分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水25～50ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2～3次，每次15～30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水振摇洗涤2-3次，每次10～20ml，取正丁醇层提取液蒸干，加甲醇1～2ml使溶解。

可选地，所述供试品溶液E的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加水溶解后继续加入水饱和的正丁醇提取，固液分离并取液体，加氨试液后放置分层，取正丁醇提取液蒸干，所得残渣加甲醇复溶。

示例性地，所述供试品溶液E的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品0.5～1g，加15～30ml水溶解，再加入25～50ml水饱和正丁醇超声处理20～40min，离心取上清液后加入3～4倍量氨试液，摇匀，放置分层，取正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇1～2ml使溶解。

可选地，基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别牡丹皮，包括如下步骤：

取所述供试品溶液A、牡丹皮对照药材溶液、丹皮酚对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，以三氯化铝试液为显色剂，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程制备所述牡丹皮对照药材溶液A的步骤；所述硅胶薄层板包括硅胶GF254薄层板和/或硅胶HSGF254薄层板；丹皮酚对照品溶液和供试品溶液A的点样量为2～4μL，牡丹皮对照药材溶液A的点样量为1～3μL；所述展开剂中，环己烷、乙酸乙酯和冰醋酸的体积比为(10～11)：(3～4)：0.2，优选为10:3:0.2；所述三氯化铝试液的浓度可以为0.01g/mL；所述紫外灯光的波长为365nm。

示例性地，在制备所述牡丹皮对照药材溶液A时，牡丹皮对照药材的用量为0.5～1g。所述丹皮酚对照品溶液由丹皮酚对照品溶于乙酸乙酯后制成，每1mL乙酸乙酯中溶解1～2mg的丹皮酚对照品。

可选地，在基于所述供试品溶液A鉴别牡丹皮时，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程，制备温经汤牡丹皮单阴性对照溶液、温经汤牡丹皮单阳性对照溶液和温经汤牡丹皮白芍双阴性对照溶液的步骤，以及对各对照溶液进行点样和检视的步骤。

可选地，基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别川芎和当归，包括如下步骤：

取所述供试品溶液A、当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、藁本内酯对照品溶液和洋川芎内酯A对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程制备所述当归对照药材溶液和所述川芎对照药材溶液的步骤；可选地，所述硅胶薄层板包括硅胶HSGF254薄层板和/或硅胶GF254薄层板；可选地，供试品溶液A、当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、藁本内酯对照品溶液和洋川芎内酯A对照品溶液的点样量为2～4μL；可选地，所述展开剂中，正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(8～9)：(3)：(1～2)：0.2，优选为8:3:1:0.2；可选地，所述紫外灯光的波长为254nm。

示例性地，在制备所述当归对照药材溶液时，当归对照药材的用量为0.5～1g。在制备所述川芎对照药材溶液时，川芎对照药材的用量为0.5～1g。所述藁本内酯对照品溶液由藁本内酯对照品溶于甲醇后制成，每1mL甲醇中溶解1～2mg的藁本内酯对照品。所述洋川芎内酯A对照品溶液由洋川芎内酯A对照品溶于甲醇后制成，每1mL甲醇中溶解1～2mg的洋川芎内酯A对照品。

可选地，在基于所述供试品溶液A鉴别川芎和当归时，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程，制备温经汤当归单阴性对照溶液、温经汤川芎单阴性对照溶液、温经汤当归川芎双阴性对照溶液、温经汤当归单阳性对照溶液、温经汤川芎单阳性对照溶液的步骤，以及对各对照溶液进行点样和检视的步骤。

可选地，基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别肉桂，包括如下步骤：

取所述供试品溶液A、肉桂对照药材溶液、肉桂酸对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程制备所述肉桂对照药材溶液的步骤；所述硅胶薄层板包括硅胶GF254薄层板和/或硅胶HSGF254薄层板；肉桂酸对照品溶液和肉桂对照药材溶液的点样量为1～3μL，供试品溶液A的点样量为4～6μL；所述展开剂中，石油醚、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(8～8.5)：(3～3.5)：0.2，优选为8:3:0.2；所述石油醚的馏程为60～90℃；所述紫外灯光的波长为254nm。

示例性地，在制备所述肉桂对照药材溶液时，肉桂对照药材的用量为1～2g。所述肉桂酸对照品溶液由肉桂酸对照品溶于无水乙醇后制成，每1mL无水乙醇中溶解0.25～0.5mg的肉桂酸对照品。

可选地，在基于所述供试品溶液A鉴别肉桂时，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程，制备温经汤肉桂单阴性对照溶液、温经汤肉桂单阳性对照溶液的步骤，以及将对照溶液进行点样和检视的步骤。

可选地，基于所述供试品溶液C，采用薄层色谱法鉴别莪术，包括如下步骤：

取所述供试品溶液C、莪术对照药材溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，以硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰后于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液C的制备过程制备所述莪术对照药材溶液的步骤；所述硅胶薄层板包括硅胶GF254薄层板和/或硅胶HSGF254薄层板；供试品溶液C、莪术对照药材溶液的点样量为15～25μL；所述展开剂中，环己烷、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(9～9.5)：(1～1.5)：0.2，优选为9:1:0.2；所述硫酸乙醇溶液中硫酸的浓度为0.1％；所述加热的温度为100～110℃；所述紫外灯光的波长为365nm。

示例性地，在制备所述莪术对照药材溶液时，莪术对照药材的用量为0.25～0.5g。

可选地，在基于所述供试品溶液C鉴别莪术时，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液C的制备过程，制备温经汤莪术单阴性对照溶液、温经汤莪术单阳性对照溶液的步骤，以及将对照溶液进行点样和检视的步骤。

可选地，基于所述供试品溶液B，采用薄层色谱法鉴别白芍和甘草，包括如下步骤：

取所述供试品溶液B、白芍对照药材溶液、甘草对照药材溶液、芍药苷对照品溶液、甘草苷对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水为展开剂，喷以硫酸乙醇溶液后加热至显色，和/或，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液B的制备过程制备所述白芍对照药材溶液和所述甘草对照药材溶液的步骤；所述硅胶薄层板包括硅胶GF254薄层板和/或硅胶HSGF254薄层板；供试品溶液B、甘草对照药材溶液和甘草苷对照品溶液的点样量为1～3μL；芍药苷对照品溶液的点样量为4～6μL；白芍对照药材溶液的点样量为2～4μL；所述展开剂中，乙酸乙酯、丙酮、甲醇和氨水的体积比为(5～6)：(2～3)：3：2，优选为5:2:3:2；所述氨水的浓度为25～28％；所述硫酸乙醇溶液中硫酸的浓度为0.1％；所述加热的温度为100～110℃；所述紫外灯光的波长为365nm。

示例性地，在制备所述白芍对照药材溶液以及所述甘草对照药材溶液时，白芍对照药材以及甘草对照药材的用量各自为0.5～1g。所述芍药苷对照品溶液由芍药苷对照品溶于甲醇后制成，每1mL甲醇中溶解2～3mg的芍药苷对照品。所述甘草苷对照品溶液由甘草苷对照品溶于甲醇后制成，每1mL甲醇中溶解0.5～1mg的甘草苷对照品。

可选地，在基于所述供试品溶液B，鉴别白芍和甘草时，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液B的制备过程，制备温经汤白芍单阴性对照溶液、温经汤牡丹皮白芍双阴性对照溶液、温经汤缺甘草单阴性对照溶液、温经汤白芍单阳性对照溶液、温经汤缺甘草单阳性对照溶液的步骤，以及对各对照溶液进行点样和检视的步骤。

可选地，基于所述供试品溶液D，采用薄层色谱法鉴别牛膝，包括如下步骤：

取所述供试品溶液D、牛膝对照药材溶液、β-蜕皮甾酮对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸为展开剂，以硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰后于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液D的制备过程制备所述牛膝对照药材溶液的步骤；所述硅胶薄层板包括硅胶GF254薄层板和/或硅胶HSGF254薄层板；供试品溶液D的点样量为1～4μL，牛膝对照药材溶液的点样量为4～7μL，β-蜕皮甾酮点样量为2～4μL；所述展开剂中，三氯甲烷、甲醇、水和甲酸的体积比为(8～9)：(2～2.5)：0.3：0.5，优选为8:2:0.3:0.5；所述硫酸乙醇溶液中硫酸的浓度为0.1％；所述加热的温度为100～110℃；所述紫外灯光的波长为365nm。

示例性地，在制备所述牛膝对照药材溶液时，牛膝对照药材的用量为1～2g。所述β-蜕皮甾酮对照品溶液由β-蜕皮甾酮对照品溶于甲醇后制成，每1mL甲醇中溶解0.2～0.4mg的β-蜕皮甾酮对照品。

可选地，在基于所述供试品溶液D鉴别牛膝时，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液D的制备过程，制备温经汤牛膝单阴性对照溶液、温经汤牛膝单阳性对照溶液的步骤，以及将对照溶液进行点样和检视的步骤。

可选地，基于所述供试品溶液E，采用薄层色谱法鉴别人参，包括如下步骤：

取所述供试品溶液E、人参对照药材溶液、混合对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-无水甲醇-水为展开剂，以硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至显色；其中，所述混合对照品溶液中含有人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rb2对照品、人参皂苷Rc对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品和人参皂苷Rg1对照品；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液E的制备过程制备所述人参对照药材溶液的步骤；所述硅胶薄层板包括硅胶HSGF254薄层板和/或硅胶GF254薄层板；供试品溶液E的点样量为4～6μL，人参对照药材溶液和混合对照品溶液的点样量为2～4μL；所述展开剂中，三氯甲烷、无水甲醇和水的体积比为(9～9.5)：(4.5～5)：1，优选为9:4.5:1；所述硫酸乙醇溶液中硫酸的浓度为0.1％；所述加热的温度为100～110℃。

示例性地，在制备所述人参对照药材溶液时，人参对照药材的用量为0.5～1g。所述混合对照品溶液由人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rb2对照品、人参皂苷Rc对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品和人参皂苷Rg1对照品溶于甲醇后制成，每1mL甲醇中溶解各人参皂苷的量各自为1～2mg。

可选地，所述温经汤复方制剂包括温经汤的固体制剂、半固体制剂或者液体制剂。示例性地，所述温经汤复方制剂为温经汤标准汤剂。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，将同一供试品溶液用于多种药味的薄层鉴别，例如，将供试品溶液A共同用于牡丹皮、川芎、当归、肉桂的薄层鉴别，将供试品溶液B共同用于白芍和甘草的薄层鉴别，这显著减少了制样程序和成本，显著降低了质量控制方法的繁琐程度，提升了薄层鉴别的效率，同时，本申请的质量控制方法还实现了对温经汤中莪术的薄层鉴别，对比现有技术，有效提升了温经汤复方制剂质量控制方法的全面性。

2.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，各供试品溶液的制备方法简单、稳定，特别是直接将供试品溶液A制备过程中乙醚提取后的水溶液用于供试品溶液B的制备，显著缩短了制样时间，这能够进一步提升鉴别效率，降低鉴别成本。

3.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，在基于供试品溶液A鉴别牡丹皮时，采用环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，三氯化铝试液为显色剂，专属性更强，成像更清晰。除了丹皮酚外，还能够检视到与牡丹皮对照药材中相对应的特异性斑点，能够有效提升检测结果的丰富度，进而提升结果的准确度。

4.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，通过使用洋川芎内酯A对照品，能够鉴别出温经汤中的川芎成分，克服了现有技术中阿魏酸难以准确区分川芎与当归的缺陷，同时，还能够鉴别出川芎和当归的共有成分藁本内酯，检视结果信息更丰富，检测结果更准确。

5.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，使用肉桂酸对照品进行温经汤中肉桂的鉴别，肉桂酸属于苯丙素类化合物，化学性质较为稳定，不容易挥发，样品的储存时间不会对检测造成干扰，相比现有技术中的桂皮醛具有更好的稳定性。

6.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，采用同一展开系统，实现了白芍及甘草的鉴别，使用同一种显色剂，在不同光源下观察即可，这显著提升了检测效率。在365nm光源下，除了甘草苷以外，还能够检视到与甘草对照药材中相对应的特异性斑点，能够有效提升检测结果的丰富度，进而提升结果的准确度。

7.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，在基于供试品溶液D鉴别牛膝时，供试品溶液的制备、薄层色谱的展开及显色均具有简单、快速的特点。

8.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，在基于供试品溶液E鉴别人参时，使用三氯甲烷-无水甲醇-水为展开剂，硫酸乙醇溶液为显色剂，能够有效鉴别出温经汤中的至少6中人参皂苷成分，且各成分的分离程度高，显色效果更加，显著增加了检视结果的信息丰富度。

9.本发明提供的温经汤复方制剂的质量控制方法，除了丹皮酚鉴别使用三氯化铝作为显色剂之外，其余成分的鉴别均使用10％硫酸乙醇为显色剂，或者无需显色剂，这进一步简化了整个质量控制方法。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1-6b是本发明实施例1中的方法学验证结果图；

图7a-12d是本发明实施例2中的方法学验证结果图；

图13-18b是本发明实施例3中的方法学验证结果图；

图19-24b是本发明实施例4中的方法学验证结果图；

图25-30b是本发明实施例5中的方法学验证结果图；

图31-36b是本发明实施例6中的方法学验证结果图；

图37-42b是本发明实施例7中的方法学验证结果图。

具体实施方式

提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。

实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

设备：

煎药锅(厂家：康雅顺电器有限公司，型号：DTL5)。

对照品：

丹皮酚对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：110708-201908)；

芍药苷对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：110736-202145)；

甘草苷对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：111610-201908)；

藁本内酯对照品(来源：上海奈启生物科技有限公司，批号：070017-202011)；

洋川芎内酯A对照品(来源：成都埃法生物科技有限公司，批号：A222011451)；

肉桂酸对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：110786-201604)；

β-蜕皮甾酮对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：111638-201907)；

人参皂苷Rb1对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：110704-202129)；

人参皂苷Rb2对照品(来源：上海奈启生物科技有限公司，批号：180016-202109)；

人参皂苷Rc对照品(来源：成都埃法生物科技有限公司，批号：AF21012552)；

人参皂苷Re对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：110754-202129)；

人参皂苷Rf对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：111719-201806)；

人参皂苷Rg1对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：110703-202034)。

对照药材：

牡丹皮对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：121490-201603)；

白芍对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：120905-202011)；

甘草对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：120904-202021)；

当归对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：120927-201617)；

川芎对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：120918-201813)；

肉桂对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：121363-201703)；

莪术对照药材(来源：成都瑞芬思生物科技有限公司，批号：DZYC-E-003)；

牛膝对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：121066-201809)；

人参对照药材(来源：中国食品药品检定研究院，批号：120917-201712)。

制备例

(1)按照如下方法制备温经汤标准汤剂供试品：

称取酒当归、川芎、肉桂、醋莪术、白芍和牡丹皮粗粒各5g，酒牛膝、人参和炒甘草各10g，混合后加纯化水1350ml，浸泡60min。将煎药锅调至武火(500W)煮沸，然后调至文火(400W)，开盖煎煮50min，煎液用150目筛网过滤，冷却至室温，记录药液体积(ml)，药液体积在720～740ml，加水定容至1000ml，冷冻干燥后，收集得到温经汤标准汤剂供试品，其中，冷冻干燥程序中各阶段的参数设置如表1所示。

表1冷冻干燥程序中各阶段的参数设置

段号	温度(℃)	时间(h)
			1	-40	4
2	-30	2
			3	-20	2
4	-10	2
			5	-5	2
6	0	5
			7	10	3
8	20	3
			9	30	10
10	35	10

(2)按照第(1)项中的制备方法，在去除药材X的情况下，制备温经汤X单阴性冻干粉，在去除药材X和Y的情况下，制备温经汤X、Y双阴性冻干粉，其中，X选自酒当归、川芎、肉桂、醋莪术、白芍、牡丹皮、酒牛膝、人参和炒甘草中的任一种，Y选自酒当归、川芎、肉桂、醋莪术、白芍、牡丹皮、酒牛膝、人参和炒甘草中除X以外的任一种。

(3)按照第(1)项中的制备方法，在仅使用药材Z的情况下，制备温经汤Z单阳性冻干粉，其中，Z选自酒当归、川芎、肉桂、醋莪术、白芍、牡丹皮、酒牛膝、人参和炒甘草中的任一种。

实施例1温经汤标准汤剂供试品中牡丹皮的薄层鉴别

一、鉴别方法

(1)供试品溶液A的制备：取温经汤标准汤剂供试品2g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，滤过，滤液用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，挥干，残渣加1ml丙酮使溶解，作为供试品溶液A。

(2)对照药材溶液的制备：取牡丹皮对照药材1g，按照供试品溶液A的制备方法制成牡丹皮对照药材溶液。

(3)对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品，加乙酸乙酯，制成每1ml含2mg丹皮酚对照品的溶液，作为丹皮酚对照品溶液。

(4)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照药材溶液2μl，供试品溶液和丹皮酚对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(10:3:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

二、方法学验证

1、专属性验证

(1)阴性对照溶液的制备：取温经汤牡丹皮单阴性供试品2g，按照供试品溶液A的制备方法制成牡丹皮单阴性对照溶液；取温经汤白芍、牡丹皮双阴性供试品2g，按照供试品溶液A的制备方法制成白芍、牡丹皮双阴性对照溶液。

(2)阳性对照溶液的制备：取温经汤牡丹皮单阳性供试品2g，按照供试品溶液A的制备方法制成牡丹皮单阳性对照溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照药材溶液和牡丹皮单阳性对照溶液各2μl，供试品溶液A、牡丹皮单阴性对照溶液、白芍、牡丹皮双阴性对照溶液、丹皮酚对照品溶液、空白溶液(丙酮)各3μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(10:3:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，结果如图1所示。

在图1中，1为牡丹皮对照药材溶液；2为供试品溶液A；3为丹皮酚对照品溶液；4为牡丹皮单阳性溶液；5为牡丹皮单阴性溶液；6为白芍、牡丹皮双阴性溶液；7为空白溶剂(丙酮)。由图1可知，供试品色谱中，斑点分离度好，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，在与丹皮酚对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无干扰的斑点，本方法的专属性良好。

2、重复性验证

由不同的实验人员，按照鉴别方法及专属性验证项下的记载配制各溶液，并重复专属性验证项下的薄层色谱试验，结果如图2所示。

在图2中，1为牡丹皮对照药材溶液；2为供试品溶液；3为丹皮酚对照品溶液；4为牡丹皮单阳性溶液；5为牡丹皮单阴性溶液；6为白芍、牡丹皮双阴性溶液；7为空白溶剂(丙酮)。由图2可以看出，经不同实验人员测定，在供试品色谱图中，与丹皮酚对照品溶液及牡丹皮对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，该薄层鉴别方法重复性较好。

3、耐用性验证

(1)不同点样量耐用性验证

分别吸取上述丹皮酚对照品溶液(2μl、3μl、4μl)、上述供试品溶液A(2μl、3μl、4μl)、上述牡丹皮对照药材溶液(1μl、2μl、3μl)，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，按鉴别方法项下的薄层条件展开，结果如图3所示。

在图3中，1为丹皮酚对照品溶液2μl；2为丹皮酚对照品溶液3μl；3为丹皮酚对照品溶液4μl；4为供试品溶液A 2μl；5为供试品溶液A 3μl；6为供试品溶液A 4μl；7为牡丹皮对照药材溶液1μl；8为牡丹皮对照药材溶液2μl；9为牡丹皮对照药材溶液3μl。由图3可以看出，在不同点样量下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同点样量的耐用性较好。

(2)不同环境温度耐用性验证

分别在常温常湿(T:23℃，RH:42％)以及低温常湿(T:6℃，RH:42％)的条件下，分别吸取上述供试品溶液A3μl、上述丹皮酚对照品溶液3μl、上述牡丹皮单阳性对照溶液2μl和上述牡丹皮对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，按鉴别方法项下的薄层条件展开，结果如图4a和图4b所示，其中，图4a为常温常湿条件下的检测结果，图4b为低温常湿条件下的检测结果。

图4a和图4b中，1为牡丹皮对照药材溶液；2为供试品溶液A；3为丹皮酚对照品溶液；4为牡丹皮单阳性溶液。由图4a和图4b可以看出，在不同环境温度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境温度的耐用性较好。

(3)不同环境湿度耐用性验证

分别在常温低湿(T:23℃，RH:22％)和常温高湿(T:23℃，RH:78％)的条件下，分别吸取上述供试品溶液A 3μl、上述丹皮酚对照品溶液3μl、上述牡丹皮单阳性对照溶液2μl和上述牡丹皮对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，按鉴别方法项下的薄层条件展开，结果如图5a和图5b所示，其中，图5a为常温低湿条件下的检测结果，图5b为常温高湿条件下的检测结果。

图5a和图5b中，1为牡丹皮对照药材溶液；2为供试品溶液A；3为丹皮酚对照品溶液；4为牡丹皮单阳性溶液。由图5a和图5b可以看出，在不同环境湿度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境湿度的耐用性较好。

(4)不同薄层板耐用性验证

分别吸取上述供试品溶液A 3μl、上述丹皮酚对照品溶液3μl、上述牡丹皮单阳性对照溶液2μl和上述牡丹皮对照药材溶液2μl，并分别点于不同的薄层板上：银龙薄层板HSGF₂₅₄(烟台市化学工业研究所，20191022)、青岛海洋薄层板GF₂₅₄(青岛海洋化工有限公司制造，2020年7月7日)、烟台江友薄层板HSGF₂₅₄(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂，2016年10月07日)；然后按鉴别方法项下的薄层条件展开，结果可以看出，使用不同的薄层板均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同品牌薄层板的耐用性较好。

(5)不同展开剂比例耐用性验证

分别吸取上述供试品溶液A 3μl、上述丹皮酚对照品溶液3μl、上述牡丹皮单阳性对照溶液2μl和上述牡丹皮对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，同法操作点样两块薄层板；然后将两块薄层板分别以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(10:4:0.2)和环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(11:3:0.2)为展开剂进行展开，检视结果如图6a和图6b所示，其中，图6a为以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(10:4:0.2)展开剂的检测结果，图6b为以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(11:3:0.2)为展开剂的检测结果。

在图6a和图6b中，1为牡丹皮对照药材溶液；2为供试品溶液A；3为丹皮酚对照品溶液；4为牡丹皮单阳性溶液。由图6a和图6b可以看出，使用不同比例的展开剂均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同展开剂比例的耐用性较好。

实施例2温经汤标准汤剂供试品中白芍和甘草的薄层鉴别

一、鉴别方法

(1)供试品溶液B的制备：取牡丹皮鉴别项下供试品溶液A制备过程中乙醚提取后的水溶液，用以水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液B。

(2)对照药材溶液的制备：取甘草对照药材和白芍对照药材各1g，分别按照供试品溶液B的制备方法制成甘草对照药材溶液和白芍对照药材溶液。

(3)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，加甲醇，制成每1ml含2mg芍药苷对照品的溶液，作为芍药苷对照品溶液；取甘草苷对照品，加甲醇，制成每1ml含1mg甘草苷对照品的溶液，作为甘草苷对照品溶液。

(4)色谱条件：分别吸取上述供试品溶液B、甘草对照药材溶液、甘草苷对照品溶液各2μl，芍药苷对照品溶液5μl，白芍对照药材溶液,3μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(5:2:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，晾干，至105℃烘箱中加热至斑点显色清晰，然后分别在白光源、365光源下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

二、方法学验证

1、专属性验证

(1)阴性对照溶液的制备：取相应阴性冻干粉各2g，分别按照供试品溶液B的制备方法制成甘草单阴性对照溶液、白芍单阴性对照溶液和白芍、牡丹皮双阴性对照溶液。

(2)阳性对照溶液的制备：取温经汤甘草单阳性冻干粉1g、温经汤白芍单阳性冻干粉2g，分别按照供试品溶液B的制备方法制成甘草单阳性对照溶液和白芍单阳性对照溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述白芍对照药材溶液3μL、芍药苷对照品溶液5μL、白芍阳性对照溶液1μL、其余溶液各2μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(5:2:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，然后分别在白光源、365nm光源下检视。检视结果如图7a和图7b所示，其中，图7a为白光源下的检视结果，图7b为365nm光源下的检视结果。

在图7a和图7b中，1为白芍对照药材溶液；2为供试品溶液B；3为芍药苷对照品溶液；4为白芍单阳性溶液；5为白芍单阴性溶液；6为白芍和牡丹皮双阴性溶液；7为甘草对照药材；8为供试品溶液B；9为甘草苷对照品溶液；10为甘草单阳性溶液；11为甘草单阴性溶液；12为空白溶剂(甲醇)。

在图7a和图7b中，在供试品色谱图中，日光下观察与芍药苷对照品溶液及白芍对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且双阴性对照溶液无干扰，符合专属性要求；在365nm下观察，在供试品色谱图中与甘草苷对照品溶液及甘草对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，符合专属性要求。

2、重复性验证

由不同的实验人员，按照鉴别方法及专属性验证项下的记载配制各溶液，并重复专属性验证项下的薄层色谱试验。结果如图8a和图8b所示，其中，图8a为白光源下的检视结果，图8b为365nm光源下的检视结果。

在图8a和图8b中，1为白芍对照药材溶液；2为供试品溶液B；3为芍药苷对照品溶液；4为白芍单阳性溶液；5为白芍单阴性溶液；6为白芍和牡丹皮双阴性溶液；7为甘草对照药材；8为供试品溶液B；9为甘草苷对照品溶液；10为甘草单阳性溶液；11为甘草单阴性溶液；12为空白溶剂(甲醇)。

由图8a和图8b可以看出，经不同实验人员测定，在供试品色谱图中，日光下观察与芍药苷对照品溶液及白芍对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且双阴性对照溶液无干扰；在365nm下观察，在供试品色谱图中与甘草苷对照品溶液及甘草对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，该薄层鉴别方法重复性较好。

3、耐用性验证

(1)不同点样量耐用性验证

分别吸取上述白芍对照药材溶液(2μl、3μl、4μl)、芍药苷对照品溶液(4μl、5μl、6μl)、供试品溶液B(1μl、2μl、3μl)、甘草对照药材溶液(1μl、2μl、3μl)、甘草苷对照品溶液(1μl、2μl、3μl)，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，按鉴别方法项下的薄层条件展开。结果如图9a和图9b所示，其中，图9a为白光源下的检视结果，图9b为365nm光源下的检视结果。

在图9a和图9b中，1为白芍对照药材溶液2μl；2为白芍对照药材溶液3μl；3为白芍对照药材溶液4μl；4为芍药苷对照品溶液4μl；5为芍药苷对照品溶液5μl；6为芍药苷对照品溶液6μl；7为供试品溶液B1μl；8为供试品溶液B 2μl；9为供试品溶液B 3μl；10为甘草对照药材溶液1μl；11为甘草对照药材溶液2μl；12为甘草对照药材溶液3μl；13为甘草苷对照品溶液1μl；14为甘草苷对照品溶液2μl；15为甘草苷对照品溶液3μl。由图9a和图9b可以看出，在不同点样量下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同点样量的耐用性较好。

(2)不同环境温度耐用性验证

分别在常温常湿(T:20℃，RH:30％)以及低温常湿(T:8℃，RH:30％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取供试品溶液B、相应对照品溶液、相应单阳性对照溶液和相应对照药材溶液，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，按照薄层条件展开。结果如图10a-d所示，其中，图10a为常温常湿条件下的白光源检视结果，图10b为常温常湿条件下的365nm光源检视结果，图10c为低温常湿条件下的白光源检视结果，图10d为低温常湿条件下的365nm光源检视结果。

在图10a-d中，1为白芍对照药材溶液；2为供试品溶液B；3为芍药苷对照品溶液；4为白芍单阳性溶液；5为甘草对照药材溶液；6为供试品溶液；7为甘草苷对照品溶液；8为甘草单阳性溶液。由图10a-d可以看出，在不同环境温度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境温度的耐用性较好。

(3)不同环境湿度耐用性验证

分别在常温低湿(T:20℃，RH:10％)和常温高湿(T:20℃，RH:75％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取供试品溶液B、相应对照品溶液、相应单阳性对照溶液和相应对照药材溶液，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，按照薄层条件展开。

结果如图11a-d所示，其中，图11a为常温低湿条件下的白光源检视结果，图11b为常温低湿条件下的365nm光源检视结果，图11c为常温高湿条件下的白光源检视结果，图11d为常温高湿条件下的365nm光源检视结果。

在图11a-d中，1为白芍对照药材溶液；2为供试品溶液B；3为芍药苷对照品溶液；4为白芍单阳性溶液；5为甘草对照药材溶液；6为供试品溶液；7为甘草苷对照品溶液；8为甘草单阳性溶液。由图11a-d可以看出，在不同环境湿度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境湿度的耐用性较好。

(4)不同薄层板耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取供试品溶液B、相应对照品溶液、相应单阳性对照溶液和相应对照药材溶液，并分别点于不同的薄层板上：银龙薄层板HSGF₂₅₄(烟台市化学工业研究所，20191022)、烟台江友薄层板HSGF₂₅₄(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂，2016年10月07日)、青岛鼎康薄层板G(青岛鼎康有限公司制造，20190508)；然后按照薄层条件展开。结果可以看出，使用不同的薄层板均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同品牌薄层板的耐用性较好。

(5)不同展开剂比例耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取供试品溶液B、相应对照品溶液、相应单阳性对照溶液和相应对照药材溶液，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，同法操作点样两块薄层板；然后将两块薄层板分别以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(5:3:3:2)、乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(6:2:3:2)为展开剂进行展开。检视结果如图12a-d所示，其中，图12a为以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(5:3:3:2)为展开剂的白光源检视结果，图12b为以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(5:3:3:2)为展开剂的365nm光源检视结果，图12c为以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(6:2:3:2)为展开剂的白光源检视结果，图12d为以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水(6:2:3:2)为展开剂的365nm光源检视结果。

在图12a-d中，1为白芍对照药材溶液；2为供试品溶液B；3为芍药苷对照品溶液；4为白芍单阳性溶液；5为甘草对照药材溶液；6为供试品溶液；7为甘草苷对照品溶液；8为甘草单阳性溶液。由图12a-d可以看出，使用不同比例的展开剂均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同展开剂比例的耐用性较好。

实施例3温经汤标准汤剂供试品中牛膝的薄层鉴别

一、鉴别方法

(1)供试品溶液D的制备：取温经汤标准汤剂供试品2g，加80％甲醇50ml，回流处理1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇，用正丁醇饱和水洗涤2次，每次20ml，正丁醇蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液D。

(2)对照药材溶液的制备：取牛膝对照药材2g，按照供试品溶液D的制备方法制成牛膝对照药材溶液。

(3)对照品溶液的制备：取β-蜕皮甾酮对照品，加甲醇，制成每1ml含0.4mgβ-蜕皮甾酮对照品的溶液，作为β-蜕皮甾酮对照品溶液。

(4)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照品溶液3μl、对照药材溶液5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(8:2:0.3:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，晾干，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

二、方法学验证

1、专属性验证

(1)阴性对照溶液的制备：取温经汤牛膝单阴性冻干品2g，按照供试品溶液D的制备方法制成牛膝单阴性对照溶液。

(2)阳性对照溶液的制备：取温经汤牛膝单阳性冻干品2g，按照供试品溶液D的制备方法制成牛膝单阳性对照溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照品溶液3μl，对照药材溶液5μl，阴性对照溶液、阳性对照溶液、供试品溶液D和空白溶液(甲醇)各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(8:2:0.3:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，晾干，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视，结果如图13所示。

在图13中，1为牛膝对照药材溶液；2为供试品溶液D；3为β-蜕皮甾酮对照品溶液；4为牛膝单阳性溶液；5为牛膝单阴性溶液；6为空白溶剂(甲醇)。由图13可以看出，在供试品色谱图中，与β-蜕皮甾酮对照品溶液及牛膝对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，符合专属性要求。

2、重复性验证

由不同的实验人员，按照鉴别方法及专属性验证项下的记载配制各溶液，并重复专属性验证项下的薄层色谱试验，结果如图14所示。

在图14中，1为牛膝对照药材溶液；2为供试品溶液D；3为β-蜕皮甾酮对照品溶液；4为牛膝单阳性溶液；5为牛膝单阴性溶液；6为空白溶剂(甲醇)。由图14可以看出，经不同实验人员测定，在供试品色谱图中，与β-蜕皮甾酮对照品溶液及牛膝对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，该薄层鉴别方法重复性较好。

3、耐用性验证

(1)不同点样量耐用性验证

分别吸取上述β-蜕皮甾酮对照品溶液(2μl、3μl、4μl)、供试品溶液D(1μl、2μl、3μl)、牛膝对照药材溶液(4μl、5μl、6μl)，分别点于同一硅胶HSG薄层板上，按鉴别方法项下的薄层条件展开，结果如图15所示。

在图15中，1为牛膝对照药材溶液4μl；2为牛膝对照药材溶液5μl；3为牛膝对照药材溶液6μl；4为供试品溶液1μl；5为供试品溶液2μl；6为供试品溶液3μl；7为β-蜕皮甾酮对照品溶液2μl；8为β-蜕皮甾酮对照品溶液3μl；9为β-蜕皮甾酮对照品溶液4μl。由图15可以看出，在不同点样量下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同点样量的耐用性较好。

(2)不同环境温度耐用性验证

分别在常温常湿(T:25℃，RH:52％)以及低温常湿(T:6℃，RH:52％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液D、β-蜕皮甾酮对照品溶液、牛膝单阳性对照溶液和牛膝对照药材溶液，分别点于同一硅胶HSG薄层板上，按鉴别方法项下的薄层条件展开。结果如图16a和图16b所示，其中，图16a为常温常湿条件下的检视结果，图16b为低温常湿条件下的检视结果。

在图16a和图16b中，1为牛膝对照药材溶液；2为供试品溶液；3为β-蜕皮甾酮对照品溶液；4为牛膝单阳性溶液；5为牛膝单阴性溶液；6为空白溶剂(甲醇)。由图16a和16b可以看出，在不同环境温度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境温度的耐用性较好。

(3)不同环境湿度耐用性验证

分别在常温低湿(T:25℃，RH:16％)和常温高湿(T:25℃，RH:75％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液D、β-蜕皮甾酮对照品溶液、牛膝单阳性对照溶液和牛膝对照药材溶液，分别点于同一硅胶HSG薄层板上，按鉴别方法项下的薄层条件展开.结果如图17a和图17b所示，其中，图17a为常温低湿条件下的检视结果，图17b为常温高湿条件下的检视结果。

在图17a和图17b中，1为牛膝对照药材溶液；2为供试品溶液；3为β-蜕皮甾酮对照品溶液；4为牛膝单阳性溶液；5为牛膝单阴性溶液；6为空白溶剂(甲醇)。由图17a和17b可以看出，在不同环境湿度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境湿度的耐用性较好。

(4)不同薄层板耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液D、β-蜕皮甾酮对照品溶液、牛膝单阳性对照溶液和牛膝对照药材溶液，并分别点于不同的薄层板上：烟台化工薄层板HSGF₂₅₄(烟台市化学工业研究所，20220325)、默克薄层板G(Germany，HX98929621)、烟台江友薄层板HSGF₂₅₄(烟台江友硅胶开发有限公司，20161007)；然后按照薄层条件展开。结果可以看出，使用不同的薄层板均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同品牌薄层板的耐用性较好。

(5)不同展开剂比例耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液D、β-蜕皮甾酮对照品溶液、牛膝单阳性对照溶液和牛膝对照药材溶液，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，同法操作点样两块薄层板；然后将两块薄层板分别以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(9:2:0.3:0.5)、三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(8:2.5:0.3:0.5)为展开剂进行展开。检视结果如图18a和18b所示，其中，图18a为以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(9:2:0.3:0.5)为展开剂的检视结果，图18b为以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(8:2.5:0.3:0.5)为展开剂的检视结果。

在图18a和18b中，1为牛膝对照药材溶液；2为供试品溶液；3为β-蜕皮甾酮对照品溶液；4为牛膝单阳性溶液；5为牛膝单阴性溶液；6为空白溶剂(甲醇)。由图18a和图18b可以看出，使用不同比例的展开剂均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同展开剂比例的耐用性较好。

实施例4温经汤标准汤剂供试品中人参的薄层鉴别

一、鉴别方法

(1)供试品溶液E的制备：取温经汤标准汤剂供试品0.5g，加15ml水溶解，再加入25ml水饱和的正丁醇超声处理30min，离心，取上清液，加入3倍量氨试液，摇匀，放置分层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液E。

(2)对照药材溶液的制备：取人参对照药材0.5g，按照供试品溶液E的制备方法制成人参对照药材溶液。

(3)对照品溶液的制备：取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rb2对照品、人参皂苷Rc对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品及人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，即得混合对照品溶液。

(4)照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述对照药材溶液和混合对照品溶液各3μL，供试品溶液5μL，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板薄层板上，以三氯甲烷-无水甲醇-水(9:4.5:1)溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

二、方法学验证

1、专属性验证

(1)阴性对照溶液的制备：取温经汤人参单阴性供试品0.5g，按照供试品溶液E的制备方法制成人参单阴性对照溶液。

(2)阳性对照溶液的制备：取温经汤人参单阳性供试品0.5g，按照供试品溶液E的制备方法制成人参单阳性对照溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述对照药材溶液、阳性对照溶液和混合对照品溶液各3μL，供试品溶液、阴性对照溶液和空白溶液(甲醇)各5μL，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板薄层板上，以三氯甲烷-无水甲醇-水(9:4.5:1)溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，结果如图19所示。

在图19中，1为人参对照药材溶液；2为供试品溶液；3为混合对照品溶液；4为人参阴性对照溶液；5为人参阳性对照溶液；6为空白溶剂(甲醇)。由图19可以看出，在供试品色谱图中，与人参对照药材溶液及混合对照品溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好，且人参阴性对照溶液无干扰，符合专属性要求。

2、重复性验证

由不同的实验人员，按照鉴别方法及专属性验证项下的记载配制各溶液，并重复专属性验证项下的薄层色谱试验，结果如图20所示。

在图20中，1为人参对照药材溶液；2为供试品溶液；3为混合对照品溶液；4为人参阴性对照溶液；5为人参阳性对照溶液；6为空白溶剂(甲醇)。由图20可以看出，经不同实验人员测定，在供试品色谱图中与人参对照药材溶液及人参混合对照品溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好，且人参阴性对照溶液无干扰，该薄层鉴别方法重复性较好。

3、耐用性验证

(1)不同点样量耐用性验证

分别吸取上述人参对照药材溶液(2μl、3μl、4μl)、供试品溶液(4μl、5μl、6μl)、混合对照品溶液(2μl、3μl、4μl)，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视，结果如图21所示。

在图21中，1为人参对照药材溶液2μl；4为供试品溶液4μl；7为人参混合对照品溶液2μl；2为人参对照药材溶液3μl；5为供试品溶液5μl；8为人参混合对照品溶液3μl；3为人参对照药材溶液4μl；6为供试品溶液6μl；9为人参混合对照品溶液4μl。由图21可以看出，在不同点样量下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同点样量的耐用性较好。

(2)不同环境温度耐用性验证

分别在常温常湿(T:19℃，RH:32％)以及低温常湿(T:6℃，RH:32％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述对照药材溶液、人参混合对照品溶液、供试品溶液E、人参阴性对照溶液和人参阳性对照溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图22a和图22b所示，其中，图22a为常温常湿条件下的检视结果，图22b为低温常湿条件下的检视结果。

在图22a和图22b中，1为人参对照药材溶液；2为供试品溶液；3为人参混合对照品溶液；4为人参阴性对照溶液；5为人参阳性对照溶液。由图22a和22b可以看出，在不同环境温度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境温度的耐用性较好。

(3)不同环境湿度耐用性验证

分别在常温低湿(T:19℃，RH:24％)和常温高湿(T:19℃，RH:84％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述对照药材溶液、人参混合对照品溶液、供试品溶液E、人参阴性对照溶液和人参阳性对照溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图23a和图23b所示，其中，图23a为常温低湿条件下的检视结果，图23b为常温高湿条件下的检视结果。

在图23a和图23b中，1为人参对照药材溶液；2为供试品溶液；3为人参混合对照品溶液；4为人参阴性对照溶液；5为人参阳性对照溶液。由图22a和23b可以看出，在不同环境湿度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境湿度的耐用性较好。

(4)不同薄层板耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述对照药材溶液、人参混合对照品溶液、供试品溶液E、人参阴性对照溶液和人参阳性对照溶液，并分别点于不同的薄层板上：默克高效硅胶G薄层板(默克集团，HX00928621)、化工银龙硅胶HSGF₂₅₄薄层板(烟台市化学工业研究所，20191022)、烟台江友硅胶HSGF₂₅₄薄层板(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂，2016年10月07日)；然后按照薄层条件展开。结果可以看出，使用不同的薄层板均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同品牌薄层板的耐用性较好。

(5)不同展开剂比例耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述对照药材溶液、人参混合对照品溶液、供试品溶液E、人参阴性对照溶液和人参阳性对照溶液，分别点于同一薄层板上，同法操作点样两块薄层板；然后将两块薄层板分别以三氯甲烷-无水甲醇-水(9:5:1)、三氯甲烷-无水甲醇-水(9.5:4.5:1)为展开剂进行展开。检视结果如图24a和24b所示，其中，图24a为以三氯甲烷-无水甲醇-水(9:5:1)为展开剂的检视结果，图24b为以三氯甲烷-无水甲醇-水(9.5:4.5:1)为展开剂的检视结果。

在图24a和24b中，1为人参对照药材溶液；2为供试品溶液；3为人参混合对照品溶液；4为人参阴性对照溶液；5为人参阳性对照溶液。由图24a和图24b可以看出，使用不同比例的展开剂均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同展开剂比例的耐用性较好。

实施例5温经汤标准汤剂供试品中川芎、当归的薄层鉴别

一、鉴别方法

(1)供试品溶液的制备：取牡丹皮鉴别项下的供试品溶液A。

(2)对照药材溶液的制备：分别取当归对照药材、川芎对照药材各0.5g，分别按照供试品溶液A的制备方法制成当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液。

(3)对照品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1ml含1mg藁本内酯对照品的溶液，即得藁本内酯对照品溶液；取洋川芎内酯A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg洋川芎内酯A对照品的溶液，即得洋川芎内酯A对照品溶液。

(4)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液A、对照药材溶液、洋川芎内酯A对照品溶液、藁本内酯对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板薄层板上，以正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:3:0.2)溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光(254nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

二、方法学验证

1、专属性验证

(1)阴性对照溶液的制备：取温经汤当归单阴性冻干粉2.0g，按照供试品溶液A的制备方法制成当归单阴性对照溶液；取温经汤川芎单阴性冻干粉2.0g，按照供试品溶液A的制备方法制成川芎单阴性对照溶液；取温经汤当归、川芎双阴性冻干粉2.0g，按照供试品溶液A的制备方法制成当归、川芎双阴性对照溶液。

(2)阳性对照品溶液的制备：取温经汤当归单阳性冻干粉、温经汤川芎单阳性冻干粉各1.0g，按照供试品溶液A的制备方法制成当归单阳性对照溶液、川芎单阳性对照溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液A、对照药材溶液、阴性对照溶液、阳性对照溶液、洋川芎内酯A对照品溶液、藁本内酯对照品溶液、空白溶液(丙酮)各3μL，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:3:0.2)溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光(254nm)下检视，结果如图25所示。

在图25中，1为当归对照药材溶液；2为川芎对照药材溶液；3为供试品溶液；4为藁本内酯对照品溶液；5为洋川芎内酯A对照品溶液；6为酒当归单阴性对照溶液；7为川芎单阴性对照溶液；8为酒当归川芎双阴性对照溶液；9为酒当归单阳性对照溶液；10为川芎单阳性对照溶液；11为空白溶剂(甲醇)。由图25可以看出，在供试品色谱图中，与当归对照药材、川芎对照药材、藁本内酯对照品和洋川芎内酯对照品色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好，且酒当归川芎双阴性对照溶液无干扰，符合专属性要求。

2、重复性验证

由不同的实验人员，按照鉴别方法及专属性验证项下的记载配制各溶液，并重复专属性验证项下的薄层色谱试验，结果如图26所示。

在图26中，1为当归对照药材溶液；2为川芎对照药材溶液；3为供试品溶液；4为藁本内酯对照品溶液；5为洋川芎内酯A对照品溶液；6为酒当归单阴性对照溶液；7为川芎单阴性对照溶液；8为酒当归川芎双阴性对照溶液；9为酒当归单阳性对照溶液；10为川芎单阳性对照溶液；11为空白溶剂(甲醇)。由图26可以看出，经不同实验人员测定，在供试品色谱图中，与当归对照药材、川芎对照药材、藁本内酯对照品和洋川芎内酯对照品色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好，且酒当归川芎双阴性对照溶液无干扰，该薄层鉴别方法重复性较好。

3、耐用性验证

(1)不同点样量耐用性验证

分别吸取上述当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、洋川芎内酯A对照品溶液、藁本内酯对照品溶液和供试品溶液，各2μl、3μl、4μl，分别点于同一硅胶HSGF₂₅₄薄层板上，按色谱条件展开并检视，结果如图27所示。

在图27中，1为当归对照药材溶液2μl；2为当归对照药材溶液3μl；3为当归对照药材溶液4μl；4为川芎对照药材溶液2μl；5为川芎对照药材溶液3μl；6为川芎对照药材溶液4μl；7为供试品溶液2μl；8为供试品溶液3μl；9为供试品溶液4μl；10为藁本内酯对照品溶液2μl；11为藁本内酯对照品溶液3μl；12为藁本内酯对照品溶液4μl；13为洋川芎内酯A对照品溶液2μl；14为洋川芎内酯A对照品溶液3μl；15为洋川芎内酯A对照品溶液4μl。由图27可以看出，在不同点样量下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同点样量的耐用性较好。

(2)不同环境温度耐用性验证

分别在常温常湿(T:22℃，RH:45％)以及低温常湿(T:6℃，RH:45％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、洋川芎内酯A对照品溶液、藁本内酯对照品溶液、供试品溶液、当归单阴性对照溶液、川芎单阴性对照溶液、当归川芎双阴性对照溶液、当归单阳性对照溶液、川芎单阳性对照溶液，分别点于同一薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图28a和图28b所示，其中，图28a为常温常湿条件下的检视结果，图28b为低温常湿条件下的检视结果。

在图28a和图28b中，1为当归对照药材溶液；2为川芎对照药材溶液；3为供试品溶液；4为藁本内酯对照品溶液；5为洋川芎内酯A对照品溶液；6为酒当归单阴性对照溶液；7为川芎单阴性对照溶液；8为酒当归川芎双阴性对照溶液；9为酒当归单阳性对照溶液；10为川芎单阳性对照溶液。由图28a和28b可以看出，在不同环境温度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境温度的耐用性较好。

(3)不同环境湿度耐用性验证

分别在常温低湿(T:21℃，RH:21％)和常温高湿(T:21℃，RH:83％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、洋川芎内酯A对照品溶液、藁本内酯对照品溶液、供试品溶液、当归单阴性对照溶液、川芎单阴性对照溶液、当归川芎双阴性对照溶液、当归单阳性对照溶液、川芎单阳性对照溶液，分别点于同一薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图29a和图29b所示，其中，图29a为常温低湿条件下的检视结果，图29b为常温高湿条件下的检视结果。

在图29a和图29b中，1为当归对照药材溶液；2为川芎对照药材溶液；3为供试品溶液；4为藁本内酯对照品溶液；5为洋川芎内酯A对照品溶液；6为酒当归单阴性对照溶液；7为川芎单阴性对照溶液；8为酒当归川芎双阴性对照溶液；9为酒当归单阳性对照溶液；10为川芎单阳性对照溶液。由图29a和29b可以看出，在不同环境湿度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境湿度的耐用性较好。

(4)不同薄层板耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、洋川芎内酯A对照品溶液、藁本内酯对照品溶液、供试品溶液、当归单阴性对照溶液、川芎单阴性对照溶液、当归川芎双阴性对照溶液、当归单阳性对照溶液、川芎单阳性对照溶液，分别点于不同的薄层板上：青岛海洋硅胶GF₂₅₄薄层板(青岛海洋化工有限公司制造，20210108)、化工银龙硅胶HSGF₂₅₄薄层板(烟台市化学工业研究所，20191022)、烟台江友硅胶HSGF₂₅₄薄层板(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂，2016年10月07日)；然后按照薄层条件展开。结果可以看出，使用不同的薄层板均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同品牌薄层板的耐用性较好。

(5)不同展开剂比例耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、洋川芎内酯A对照品溶液、藁本内酯对照品溶液、供试品溶液、当归单阴性对照溶液、川芎单阴性对照溶液、当归川芎双阴性对照溶液、当归单阳性对照溶液、川芎单阳性对照溶液，分别点于同一薄层板上，同法操作点样两块薄层板；然后将两块薄层板分别以正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9:3:1:0.2)、正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8:3:2:0.2)为展开剂进行展开。检视结果如图30a和30b所示，其中，图30a为以正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9:3:1:0.2)为展开剂的检视结果，图30b为以正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8:3:2:0.2)为展开剂的检视结果。

在图30a和30b中，1为当归对照药材溶液；2为川芎对照药材溶液；3为供试品溶液；4为藁本内酯对照品溶液；5为洋川芎内酯A对照品溶液；6为酒当归单阴性对照溶液；7为川芎单阴性对照溶液；8为酒当归川芎双阴性对照溶液；9为酒当归单阳性对照溶液；10为川芎单阳性对照溶液。由图30a和图30b可以看出，使用不同比例的展开剂均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同展开剂比例的耐用性较好。

实施例6温经汤标准汤剂供试品中肉桂的薄层鉴别

一、鉴别方法

(1)供试品溶液的制备：取牡丹皮鉴别项下的供试品溶液A。

(2)对照药材溶液的制备：取肉桂对照药材2g，按照供试品溶液A的制备方法制成肉桂对照药材溶液。

(3)对照品溶液的制备：取肉桂酸对照品，加无水乙醇，制成每1ml含0.5mg肉桂酸对照品的溶液，作为肉桂酸对照品溶液。

(4)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照品溶液、对照药材溶液各2μl，供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8:3:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

二、方法学验证

1、专属性验证

(1)阴性对照溶液的制备：取温经汤肉桂单阴性供试品2g，按照供试品溶液A的制备方法制成肉桂单阴性对照溶液。

(2)阳性对照品溶液的制备：取温经汤肉桂单阳性供试品1g，按照供试品溶液A的制备方法制成肉桂单阳性对照溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照品溶液、对照药材溶液、阳性对照溶液和空白溶液(丙酮)各2μl，阴性对照溶液和供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8:3:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，结果如图31所示。

在图31中，1为肉桂对照药材溶液；2为供试品溶液；3为肉桂酸对照品溶液；4为肉桂阴性溶液；5为肉桂单阳性溶液；6为空白溶剂(丙酮)。由图31可以看出，在供试品色谱图中，与肉桂酸对照品溶液及肉桂对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，符合专属性要求。

2、重复性验证

由不同的实验人员，按照鉴别方法及专属性验证项下的记载配制各溶液，并重复专属性验证项下的薄层色谱试验，结果如图32所示。

在图32中，1为肉桂对照药材溶液；2为供试品溶液；3为肉桂酸对照品溶液；4为肉桂阴性溶液；5为肉桂单阳性溶液；6为空白溶剂(丙酮)。由图32可以看出，经不同实验人员测定，在供试品色谱图中，与肉桂酸对照品溶液及肉桂对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，该薄层鉴别方法重复性较好。

3、耐用性验证

(1)不同点样量耐用性验证

分别吸取上述肉桂酸对照品溶液(1μl、2μl、3μl)、供试品溶液(4μl、5μl、6μl)、肉桂对照药材溶液(1μl、2μl、3μl)，分别点于同一硅胶HSGF₂₅₄薄层板上，按薄层条件展开并检视，结果如图33所示。

在图33中，1为供试品溶液4μl；2为供试品溶液5μl；3为供试品溶液6μl；4为肉桂酸对照品溶液1μl；5为肉桂酸对照品溶液2μl；6为肉桂酸对照品溶液3μl；7为肉桂对照药材溶液1μl；8为肉桂对照药材溶液2μl；9为肉桂对照药材溶液3μl。由图33可以看出，在不同点样量下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同点样量的耐用性较好。

(2)不同环境温度耐用性验证

分别在常温常湿(T:22.5℃，RH:33％)以及低温常湿(T:6℃，RH:33％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、对照品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于同一薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图34a和图34b所示，其中，图34a为常温常湿条件下的检视结果，图34b为低温常湿条件下的检视结果。

在图34a和34b中，1为肉桂对照药材溶液；2为供试品溶液；3为肉桂酸对照品溶液；4为肉桂单阳性溶液。由图34a和34b可以看出，在不同环境温度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境温度的耐用性较好。

(3)不同环境湿度耐用性验证

分别在常温低湿(T:22℃，RH:26％)和常温高湿(T:22℃，RH:78％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、对照品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于同一薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图35a和图35b所示，其中，图35a为常温低湿条件下的检视结果，图35b为常温高湿条件下的检视结果。

在图35a和35b中，1为肉桂对照药材溶液；2为供试品溶液；3为肉桂酸对照品溶液；4为肉桂单阳性溶液。由图35a和35b可以看出，在不同环境湿度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境湿度的耐用性较好。

(4)不同薄层板耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、对照品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于不同的薄层板上：银龙薄层板HSGF₂₅₄(烟台市化学工业研究所，20191022)、青岛海洋薄层板GF₂₅₄(青岛海洋化工有限公司制造，2020年7月7日)、烟台江友薄层板HSGF₂₅₄(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂，2016年10月07日)；然后按照薄层条件展开。结果可以看出，使用不同的薄层板均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同品牌薄层板的耐用性较好。

(5)不同展开剂比例耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、对照品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于同一薄层板上，同法操作点样两块薄层板；然后将两块薄层板分别以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8.5:3:0.2)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8:3.5:0.2)为展开剂进行展开。检视结果如图36a和36b所示，其中，图36a为以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8.5:3:0.2)为展开剂的检视结果，图36b为以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8:3.5:0.2)为展开剂的检视结果。

在图36a和36b中，1为肉桂对照药材溶液；2为供试品溶液；3为肉桂酸对照品溶液；4为肉桂单阳性溶液。由图36a和图36b可以看出，使用不同比例的展开剂均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同展开剂比例的耐用性较好。

实施例7温经汤标准汤剂供试品中莪术的薄层鉴别

一、鉴别方法

(1)供试品溶液C的制备：取温经汤标准汤剂供试品4g，加正己烷50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5ml正己烷使溶解，作为供试品溶液C。

(2)对照药材溶液的制备：取莪术对照药材0.25g，按照供试品溶液C的制备方法制成莪术对照药材溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各20μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(9:1:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

二、方法学验证

1、专属性验证

(1)阴性对照溶液的制备：取温经汤莪术单阴性冻干粉4g，按照供试品溶液C的制备方法制成莪术单阴性对照溶液。

(2)阳性对照溶液的制备：取温经汤莪术单阳性供试品2g，按照供试品溶液C的制备方法制成莪术单阳性对照溶液。

(3)色谱条件：照薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各20μl，阳性对照溶液和空白溶液(正己烷)各5μl，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(9:1:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视，结果如图37所示。

在图37中，1为空白溶剂(正己烷)；2为莪术单阳性溶液；3为供试品溶液；4为莪术对照药材溶液；5为莪术阴性溶液。由图37可以看出，在供试品色谱图中，与莪术对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，符合专属性要求。

2、重复性验证

由不同的实验人员，按照鉴别方法及专属性验证项下的记载配制各溶液，并重复专属性验证项下的薄层色谱试验，结果如图38所示。

在图38中，1为空白溶剂(正己烷)；2为莪术单阳性溶液；3为供试品溶液；4为莪术对照药材溶液；5为莪术阴性溶液。由图38可以看出，经不同实验人员测定，在供试品色谱图中，与莪术对照药材溶液色谱的相应位置上显相同颜色的斑点，分离度好且阴性对照溶液无干扰，该薄层鉴别方法重复性较好。

3、耐用性验证

(1)不同点样量耐用性验证

分别吸取上述供试品溶液(15μl、20μl、25μl)、莪术对照药材溶液(15μl、20μl、25μl)分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，按薄层条件展开并检视，结果如图39所示。

在图39中，1为莪术对照药材溶液15μl；2为莪术对照药材溶液20μl；3为莪术对照药材溶液25μl；4为供试品溶液15μl；5为供试品溶液20μl；6为供试品溶液25μl。由图39可以看出，在不同点样量下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同点样量的耐用性较好。

(2)不同环境温度耐用性验证

分别在常温常湿(T:24℃，RH:33％)以及低温常湿(T:7℃，RH:33％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于同一薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图40a和图40b所示，其中，图40a为常温常湿条件下的检视结果，图40b为低温常湿条件下的检视结果。

在图40a和图40b中，1为莪术单阳性溶液；2为供试品溶液；3为莪术对照药材溶液。由图40a和40b可以看出，在不同环境温度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境温度的耐用性较好。

(3)不同环境湿度耐用性验证

分别在常温低湿(T:24℃，RH:26％)和常温高湿(T:24℃，RH:78％)的条件下，按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于同一薄层板上，按鉴别方法项下的色谱条件展开、显色并检视。结果如图41a和图41b所示，其中，图41a为常温低湿条件下的检视结果，图41b为常温高湿条件下的检视结果。

在图41a和图41b中，1为莪术单阳性溶液；2为供试品溶液；3为莪术对照药材溶液。由图41a和41b可以看出，在不同环境湿度下均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同环境湿度的耐用性较好。

(4)不同薄层板耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于不同的薄层板上：银龙薄层板HSGF₂₅₄(烟台市化学工业研究所，20191022)、青岛海洋薄层板GF₂₅₄(青岛海洋化工有限公司制造，2020年7月7日)、烟台江友薄层板HSGF₂₅₄(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂，2016年10月07日)；然后按照薄层条件展开。结果可以看出，使用不同的薄层板均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同品牌薄层板的耐用性较好。

(5)不同展开剂比例耐用性验证

按照专属性验证项下的取样量，分别吸取上述供试品溶液、单阳性对照溶液和对照药材溶液，分别点于同一薄层板上，同法操作点样两块薄层板；然后将两块薄层板分别以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(9.5:1:0.2)、环己烷-乙酸乙酯-甲酸(9:1.5:0.2)为展开剂进行展开。检视结果如图42a和42b所示，其中，图42a为以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(9.5:1:0.2)为展开剂的检视结果，图42b为以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(9:1.5:0.2)为展开剂的检视结果。

在图42a和42b中，1为莪术单阳性溶液；2为供试品溶液；3为莪术对照药材溶液。由图42a和图42b可以看出，使用不同比例的展开剂均能获得良好的检测结果，说明该方法对不同展开剂比例的耐用性较好。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种温经汤复方制剂的质量控制方法，所述温经汤复方制剂由包括当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术、人参、牛膝和甘草的原料制备得到，其特征在于，所述质量控制方法包括：

制备供试品溶液A，并基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别牡丹皮、川芎、当归和肉桂；

制备供试品溶液B，并基于所述供试品溶液B，采用薄层色谱法鉴别白芍和甘草；

制备供试品溶液C，并基于所述供试品溶液C，采用薄层色谱法鉴别莪术；

制备供试品溶液D，并基于所述供试品溶液D，采用薄层色谱法鉴别牛膝；

制备供试品溶液E，并基于所述供试品溶液E，采用薄层色谱法鉴别人参。

2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述供试品溶液A的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加甲醇溶解后进行固液分离，取液体蒸干，所得残渣加水复溶后进行固液分离，取液体加乙醚提取，取乙醚提取液挥干，所得残渣加丙酮复溶；

可选地，所述供试品溶液B的制备过程包括：取所述供试品溶液A制备过程中乙醚提取后的水溶液，加水饱和的正丁醇提取，取正丁醇提取液蒸干，所得残渣加甲醇复溶；

可选地，所述供试品溶液C的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加正己烷提取后进行固液分离，取液体蒸干，所得残渣加正己烷复溶；

可选地，所述供试品溶液D的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加甲醇水提取后进行固液分离，取液体蒸干，所得残渣加水复溶后继续加水饱和的正丁醇提取，取正丁醇提取液蒸干，所得残渣加甲醇复溶；

可选地，所述供试品溶液E的制备过程包括：取温经汤复方制剂供试品，加水溶解后继续加入水饱和的正丁醇提取，固液分离并取液体，加氨试液后放置分层，取正丁醇提取液蒸干，所得残渣加甲醇复溶。

3.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别牡丹皮，包括如下步骤：

取所述供试品溶液A、牡丹皮对照药材溶液、丹皮酚对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，以三氯化铝试液为显色剂，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程制备所述牡丹皮对照药材溶液的步骤；

可选地，丹皮酚对照品溶液和供试品溶液A的点样量为2～4μL，牡丹皮对照药材溶液的点样量为1～3μL；

可选地，所述展开剂中，环己烷、乙酸乙酯和冰醋酸的体积比为(10～11)：(3～4)：0.2，优选为10:3:0.2；

可选地，所述紫外灯光的波长为365nm。

4.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别川芎和当归，包括如下步骤：

取所述供试品溶液A、当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、藁本内酯对照品溶液和洋川芎内酯A对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程制备所述当归对照药材溶液和所述川芎对照药材溶液的步骤；

可选地，供试品溶液A、当归对照药材溶液、川芎对照药材溶液、藁本内酯对照品溶液和洋川芎内酯A对照品溶液的点样量为2～4μL；

可选地，所述展开剂中，正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(8～9)：(3)：(1～2)：0.2，优选为8:3:1:0.2；

可选地，所述紫外灯光的波长为254nm。

5.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，基于所述供试品溶液A，采用薄层色谱法鉴别肉桂，包括如下步骤：

取所述供试品溶液A、肉桂对照药材溶液、肉桂酸对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液A的制备过程制备所述肉桂对照药材溶液的步骤；

可选地，肉桂酸对照品溶液和肉桂对照药材溶液的点样量为1～3μL，供试品溶液A的点样量为4～6μL；

可选地，所述展开剂中，石油醚、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(8～8.5)：(3～3.5)：0.2，优选为8:3:0.2；

可选地，所述石油醚的馏程为60～90℃；

可选地，所述紫外灯光的波长为254nm。

6.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，基于所述供试品溶液C，采用薄层色谱法鉴别莪术，包括如下步骤：

取所述供试品溶液C、莪术对照药材溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，以硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰后于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液C的制备过程制备所述莪术对照药材溶液的步骤；

可选地，供试品溶液C、莪术对照药材溶液的点样量为15～25μL；

可选地，所述展开剂中，环己烷、乙酸乙酯和甲酸的体积比为(9～9.5)：(1～1.5)：0.2，优选为9:1:0.2；

可选地，所述加热的温度为100～110℃；

可选地，所述紫外灯光的波长为365nm。

7.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，基于所述供试品溶液B，采用薄层色谱法鉴别白芍和甘草，包括如下步骤：

取所述供试品溶液B、白芍对照药材溶液、甘草对照药材溶液、芍药苷对照品溶液、甘草苷对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-氨水为展开剂，喷以硫酸乙醇溶液后加热至显色，和/或，于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液B的制备过程制备所述白芍对照药材溶液和所述甘草对照药材溶液的步骤；

可选地，供试品溶液B、甘草对照药材溶液和甘草苷对照品溶液的点样量为1～3μL；芍药苷对照品溶液的点样量为4～6μL；白芍对照药材溶液的点样量为2～4μL；

可选地，所述展开剂中，乙酸乙酯、丙酮、甲醇和氨水的体积比为(5～6)：(2～3)：3：2，优选为5:2:3:2；

可选地，所述氨水的浓度为25～28％；

可选地，所述加热的温度为100～110℃；

可选地，所述紫外灯光的波长为365nm。

8.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，基于所述供试品溶液D，采用薄层色谱法鉴别牛膝，包括如下步骤：

取所述供试品溶液D、牛膝对照药材溶液、β-蜕皮甾酮对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸为展开剂，以硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰后于紫外灯光下检视；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液D的制备过程制备所述牛膝对照药材溶液的步骤；

可选地，供试品溶液D的点样量为1～4μL，牛膝对照药材溶液的点样量为4～7μL，β-蜕皮甾酮点样量为2～4μL；

可选地，所述展开剂中，三氯甲烷、甲醇、水和甲酸的体积比为(8～9)：(2～2.5)：0.3：0.5，优选为8:2:0.3:0.5；

可选地，所述加热的温度为100～110℃；

可选地，所述紫外灯光的波长为365nm。

9.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，基于所述供试品溶液E，采用薄层色谱法鉴别人参，包括如下步骤：

取所述供试品溶液E、人参对照药材溶液、混合对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-无水甲醇-水为展开剂，以硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至显色；其中，所述混合对照品溶液中含有人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rb2对照品、人参皂苷Rc对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品和人参皂苷Rg1对照品；

可选地，所述质量控制方法还包括按照所述供试品溶液E的制备过程制备所述人参对照药材溶液的步骤；

可选地，供试品溶液E的点样量为4～6μL，人参对照药材溶液和混合对照品溶液的点样量为2～4μL；

可选地，所述展开剂中，三氯甲烷、无水甲醇和水的体积比为(9～9.5)：(4.5～5)：1，优选为9:4.5:1；

可选地，所述加热的温度为100～110℃。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的质量控制方法，其特征在于，所述温经汤复方制剂包括温经汤的固体制剂、半固体制剂或者液体制剂。