NO331678B1 - Fremgangsmate for fremstilling av et preparat for anvendelse ved kronisk stabil angina pectoris. - Google Patents

Abstract

Oppfinnelsen tilveiebringer preparater omfattende ekstrakter av Radix Salviae Miltiorrhizae, Radix Notoginseng og Borneol. Nevnte preparater omfattenden otoginsenoid Ri og ginsenosid Rgi som er aktive forbindelser for terapeutiske applikasjoner. Oppfinnelsen tilveiebringer også en fremgangsmåte for å fremstille de nevnte preparatene og en fremgangsmåte for å identifisere og bestemme mengden av individuelle effektive forbindelser i nevnte preparater. Endelig tilveiebringer oppfinnelsen ulike anvendelser av preparatene.

Description

Bakgrunn for oppfinnelsen

Kronisk stabil angina pectoris skyldes myokardial transitt iskemi. Aspirin, nitrater, beta-adrenoceptorblokkerende medikamenter og kalsiumkanalblokkerende elementer anvendt alene eller i kombinasjon med hverandre er vanlig anvendte medikamenter for angina pectoris.

Aspirin som et anti-trombosemiddel er en symptomatisk behandling for kronisk stabil angina pectoris.

Nitrater anvendes for å behandle en anginaepisode og kan vellykket anvendes i profylakse av pasienter med forutsigbare symptomer. Med alle nitrater kan brysom hodepine forhindre anvendelse derav i visse følsomme individer.

Beta-adrenoceptorblokkerende medikamenter, selv om de er etablert som en hjørnestein i behandlingen av angina, er spesifikt kontraindikert i pasienter med obstruktiv luftveissykdom og alvorlig ventrikulær dysfunksjon og relativt kontraindikert i diabetes og i de med perifer vaskulær sykdom, bradykardi eller hjerteblokkade.

Kalsiumantagonister er så visst effektive i angina og deres effekter oppnås relaksasjon av glatt muskulatur i hjertearterier og perifer sirkulasjon og øker myokardial tilførsel og reduserer myokardialt arbeid.

Selv om det er fremskritt i medikamentkombinasjonsterapi i angina, hvor de fleste pasientene behandles med nitrater og et beta-adrenoseptorblokkerende medikament eller en kalsiumantagonist er det et behov for medikament for kronisk stabil angina pectoris som er svært effektivt, som kan tas i et lengre tidsrom og har svært lav toksisitet.

I lys av problemene relatert til de ovenfor nevnte medikamentene er det blitt utført en stor innsats for å tilpasse urtemedisin som et alternativ til standardbehandlingen av kronisk stabil angina pectoris. Tradisjonell kinesisk medisin (TCM) har bidratt mye til dette.

US patent nr. 5 288 485 og 5 433 957 henviser til et ekstrakt av hypericum erectum thunb for å kurere og forebygge sykdom forårsaket av sykdom i blodsirkulasjon slik som angina pectoris.

US patent nr. 5 776 463 henviser til et oralt farmasøytisk preparat inneholdende blomsterblader fra agurkurt eller ekstrakter fra agurkurtblomsterbladet for forebyggingen og behandlingen av stress som er assosiert med sirkulatoriske hjertesykdommer, inkludert angina.

I tillegg til hypericum erectum thunb og borage-blomsterblader har også mange andre urteplanter blitt anvendt for å behandle angina. En slik plante er Valeriana officinalis latifolia. Yang GY et al. (1994) rapporterte at 82 pasienter med angina pectoris hadde blitt behandlet med Valeriana officinalis latifolia. Blant disse var ST-T-iskemiske endringer synlig på ECG i 50 tilfeller før behandling. Dets totale effektive verdi for enkel angina (uten påviselig iskemiske funn) var 87,80 %; angina med iskemiske funn, 88,00 %. I tillegg ble det oppdaget av Valeriana officinalis latifolia også kunne senke plasmalipider. Ingen toksiske virkninger på lever, nyre og hemopoetisk vev ble funnet (1).

Wu Y (1990) rapporterte at i en studie av 267 pasienter med angina pectoris var behandlingen med xintongkang-kapsel effektiv i 93,3 % av pasientene.

Et annet urtepreparat kalt Shenshao tongguan pian ble anvendt for å behandle angina pectoris. I 1990 rapporterte Hu JX et al. at Shenshao tongguan pian er sammensatt hovedsakelig av saponin fra stilken og bladene til ginseng og Radix Paeoniae Alba, osv. Den totale effektive verdien for behandling av angina pectoris var 94,71 % og ECG-forbedringsverdien var 63,38 %. I tillegg avslørte også laboratorie undersøkelser at Shenshao tongguan pian kunne fremme utstrømmingen av venstre ventrikkel, senke blodviskositeten og hemme aggregeringen av blodplater. Både akutte og kroniske toksisitetstester viste at Shenshao tongguan pian ikke er toksisk eller har bivirkninger.

Kuo-guan-granulat er et annet urtepreparat for angina pectoris. Li Y et al. (1990) rapporterte at endringene i sink, kobber og erytrocytt glutationperoksidase i plasma ble målt gjennom atomisk absorpsjonsspektrometri og DTNB-fargeutvikling i 31 pasienter som led av koronar hjertesykdom med angina pectoris før og etter inntak av Kuo-Guan-granulat i 1 måned. Resultatene indikerte at sink og erytrocytt glutationperoksidase i plasma ble senket og kobber ble høyere i pasientene enn i den normale kontrollgruppen før behandling (p < 0,01), sink og erytrocytt glutationperoksidase i plasma økte og kobber sank etter behandling (p < 0,01). Dette antyder at den terapeutiske mekanismen for Kuo-Guan-granulat for koronar hjertesykdom med angina pectoris kan være relatert til dets regulering av sporelementforstyrrelse i kroppen.

Saponin fra Tribulus terrestris var et annet urtepreparat for behandling av angina pectoris.

Fufang Danshen Pian er en folkemedisin av Dan Shen-tablett som er indikert for behandling av kronisk stabil angina pectoris som følge av koronar arterieiskemi og har vært offisielt angitt i utgavene av kinesisk farmakopoeia siden 1977 og benyttet for klinisk anvendelse i årtier.

Fufang Danshen Pian inneholder flere aktive botaniske ekstrakter, inkludert Danshen (Radix Salviae Miltiorrhizae) og Sanchi (Radix Notoginseng). Begge plantene ble først dokumentert i Shen Nong Ben Cao Jing (Shen-nongs urtefarmakopoeia) avsluttet i 200. Fufang Danshen Pian inneholder også syntetisk borneol, en versjon av et naturlig borneol (Bingpian). Naturlig borneol ble først dokumentert i Tang Ben Cao (urtefarmakopoeia fra Tang-dynastiet) ferdigstilt rundt 659.

Li Cheng-zhu et al. (1979) rapporterte i Acta Acad Med Prim Shanghai en eksperimentell studie av trombotisk inhiberingsvirkninger av Radix Silviae Miltiorrhizae. Virkningene på in vitro trombose, platelett- og koaguleringsfunksjoner, fibrinolyse ble observert i kaniner. Etter injeksjon av Radix Silviae Miltiorrhiziae ble det funnet at tre mekanismer spilte en viktig rolle i inhiberingen av trombose in vitro: (1) inhibering av platelettfunksjon; (2) inhibering av koaguleringsfunksjon; og (3) fremme fibrinolyse. De to førstnevnte mekanismen var mest intense. Disse resultatene er i samsvar med de i behandling av trombotiske sykdommer, spesielt trombotiske arterielle sykdommer.

Chiang WT et al. (1982) rapporterte i Acta Acad Med Prim Shanghai virkningen av «Danshensu» og andre to vannløselige komponenter i salvia miltiorrhiza på iskemisk myokardium i hund og isolerte koronararterier fra gris. Virkningen av tre nye vannløselige komponenter, dvs. Danshensu (DS-182, D(+)-3,4-dihydroksyfenyleddiksyre), protokatualdehyd (PCAD) og en uren diterpensyre (DS-187) isolert fra Salvia miltiorrhiza Bunge ble sammenlignet med de av dipyridamol. Resultatene avslørte (1) i mus at DS-182 ga signifikant beskyttelse mot hypoksia, mens PCAD var ineffektiv; (2) DS-182 kunne oppheve den pituitrin-induserte elektrografiske iskemiske ST-T-økningen men hadde ingen påvirkning på den reduserte hjerterytmen. DS-187, PCAD og dipyridamol viste kun ufullstendig beskyttelsesevne; (3) i hundemodellen for akutt infarkt fremstilt gjennom legering av den bakre nedstigende grenen av den venstre koronararterien var fordelene oppnådd gjennom intravenøs injeksjon av DS-182 overlegen i forhold til DS-187 og PCAD med hensyn til funksjonen av den venstre ventriklen, det systoliske topptrykket i venstre ventrikkel (LVPSP) og det endediastoliske trykket i venstre ventrikkel (LVEDP). I motsetning til dette ga PCAD bivirkninger på LVPSP og LVEDP. Intravenøst administrert dipyridamol, selv om det ikke endret LVEDP, undertrykte LVPSP signifikant med markert hypotensiv virkning. Alle disse komponentene fra salvia og dipyridamol reduserer signifikant den endelige myokardinfarktstørrelsen (N-BT-bedømmelse); DS-182 var mest effektiv, dipyridamol og DS-187 deretter, mens PCAD kom sist; (4) i det isolerte perfuserte koronararteriepreparatet fra gris reduserte DS-182 signifikant motstanden i koronaråren mens hverken DS-187, PCAD eller natriumtansinon II-A-sulfonat (DS-201), en annen salvia-komponent, økte dette. Den sammentrekkende virkningen av morfin og propranolol på det isolerte koronararteriepreparatet ble antagonisert gjennom den tidligere administreringen av DS-182. Alt dette antyder at Danshensu kan være det aktive prinsippet i Salvia miltiorrhiza i behandlingen av iskemisk hjertesykdom og at den samtidige anvendelsen med propranolol eller morfin kan være fordelaktig.

Li Cheng-zhu et al. (1983) rapporterte i Chin J Integr Med om anti-koaguleringsvirkning av Radix Silviae Miltioorrhizae. Danshensu er en vannløselig monomer ekstrahert fra Radix Silviae Miltiorrhizae. Det er også hovedingrediensen i kommersielt solgt Radix Silviae Miltiorrhizae-injeksjon. Den foreliggende studien viste at Danshensu hemmer trombose in vitro, aggregering av plateletter (indusert gjennom ADP) og indre og ytre koaguleringssystemer; reduserer antallet plateletter og fremmer degraderingen av fibrin eller fibrinogen. Virkningene toppes 30 min. etter en enkel injeksjon av 20 mg/kg i kaniner, varer i 1 time og gjenopprettes gradvis. 4,5 timer etter injeksjon var alt gjenopprettet til normalt men trombosetest in vitro.

Chen Zhanghua (1987) rapporterte i Acta Acad Med Prim Shanghai virkningene av «Danshensu» på eksperimentell mikrosirkulatorisk forstyrrelse og melkesyre konsentrasjoner i plasma. Naturlig Danshensu er en vannløselig monomer ekstrahert fra Radix Salviae Miltiorrhizae (RSM). Mikrosirkulatorisk forstyrrelse i kaniner ble indusert gjennom intravenøs injeksjon av dekstran med høy molekylvekt. Naturlig Danshensu (dosering 4-6 mg/kg) økte markert antallet kapillærårer i konjunktiva bulbi og reduserte også konsentrasjonen av melkesyre i plasma i kaniner. Mesenteriale mikrosirkulatoriske sykdommer ble fremstilt gjennom lokalt noradrenalindrypp (4 g) i mus. Naturlig Danshensu dilaterte arteriene og akselererte hastigheten til blodgjennomstrømningen og eliminerte på denne måten mikrosirkulatorisk blodstasis. I blodåreeksperimenter var de observerte virkningene av syntetisk Danshensu samsvarende. Resultatene viste at det ikke var noen signifikant forskjell mellom naturlig og syntetisk Danshensu i lindring av mikrosirkulatoriske forstyrrelser.

Sun Xi-ming et al. (1991) rapporterte en ny farmakologisk virkning av et Danshen-ekstrakt (Salvia miltiorrhiza). Publikasjonen rapporterer at et Danshen-ekstrakt (Salvia miltiorrhiza) som inneholder natriumsaltene av D(+)-(3,4-dihydroksyfenyl) melkesyre ble funnet å utøve en ny farmakologisk virkning ved å senke biosyntesen av kolesterol i celler og anti-lipoproteinoksidering gjennom celledyrkningsstudier. Ved sammenligning med kontrollen var den elektroforetiske migreringshastigheten markert lavere og MDA-innholdet og cytotoksisiteten sank merkbart. Disse resultatene indikerer at salter av D(+)-(3,4-dihydroksyfenyl) melkesyre kan være effektivt i forebyggingen og behandling av aterosklerose.

Zheng Ruo-xuan et al. (1992) rapporterte i Chin J Integr Med konserveringsvirkningen av Radix Salviae Miltiorrhizae på myokardial iskemi indusert gjennom koronarligering i mus. Opplagte konserveringseffekter på akutt myokardialt iskemi i mus gjennom koronarligering kunne oppnås etter i.p. vannekstrakt av Radix Salviae Miltiorrhizae (5 g ubearbeidet medikament/kg). S-T-segmentøkning på ECG som følge av myokardiskemi i behandlingsgruppen var mye lavere, iskemistørrelse i den venstre ventriklen var mindre og overlevelsesraten var høyere sammenlignet med kontrollen.

Wu Yao-zhong et al. (1995) rapporterte i Acta Nanjing Univ Trad Chin Mater Med virkningen av Radix Salviae Miltiorrhizae i å fremme blodsirkulasjon gjennom å fjerne blodstasis. Farmakologisk forskning på Radix Salviae Miltiorrhizae er kjent. Reologiske studier for Radix Salviae Miltiorrhizae gjennom vurdering av PGI2, ET og TXA2 fremstilt gjennom plateletter er imidlertid sjeldne. Påvirkningen av Radix Salviae Miltiorrhizae på trombose, PT-KPTT-, FG-, ESR- og HCT-endringer og platelettaggregering i kaniner er vurdert i den foreliggende studien. Konklusjoner er at Radix Salviae Miltiorrhizae reduserer syntesen av TXA2 og senker virkningen av økning av platelettaggregering og trombose.

Shi Lin et al. (1990) rapporterte i Acta Pharmacol Sin virkningene av totale saponiner fra Panax Notoginseng på økning av PGI2 i halspulsårearterie og senkning av TXA2 i blodplateletter. Totale saponiner fra Panax Notoginseng (PNS) blir gitt oralt 100 mg/(kg.dag) til kaniner i 8 uker. Aterosklerotisk aortaplakkdannelse ble holdt tilbake sammenlignet med kontrollgruppen. Radioimmunoassay ble anvendt for å undersøke virkningen av PNS på innholdet av prostasyklin i halspulsårearterie og tromboksan A2 i rotters blodplateletter. Oral administrering av PNS 25, 50, 100 mg/(kg.dag) i 10 dager forårsaket en økning av prostasyklin i halspulsårearterie og en senkning av tromboksan A2 i blodplateletter sammenlignet med kontrollgruppen. Disse resultatene viste at anti-aterosklerotisk virkning av PNS kan være et resultat av korrigeringen av ubalansen mellom prostasyklin og tromboksan A2.

Li Xing et al. (1990) rapporterte i Acta Pharmacol Sin om beskyttende virkninger av Panax Notoginseng saponin på eksperimentell myokardi al skade indusert gjennom iskemi og reperfusjon i rotter. Virkningen av total saponin fra Panax Notoginseng (PNS) og rensede ginsenoider Rbiog Rgifra PNS på myokard skade indusert gjennom hjerteiskemi og reperfusjon ble undersøkt ved anvendelse av rottehjerter in situ og in vitro. Pentobarbitalbedøvede rotter som på forhånd var behandlet med PNS (100 og 200 mg/kg) tilveiebrakte signifikant reduksjon i myokardinfarkt-størrelse etter venstre nedstigende koronararterieligering (40 min.) og reperfusjon (120 min.) sammenlignet med kontrollen. PNS 12,5 og 25 mg/l, Rbi10 mg/l og Rgi10 mg/l senket signifikant CPK-frigjøring fra hjertet, svekket myokardial Ca<++->akkumulering, reduserte malondialdehyd (MDA)-produksjonen og forebygget reduksjonen av superoksiddismutase (SOD)-aktivitet sammenlignet med kontrollen i perfuserte isolerte rottehjerter med global iskemi (40 min.) og reperfusjon (15 min.). Resultatene viste at PNS, Rbiog Rbiforebygget hjerteiskemi og virkningen ble betraktet å være relatert til inhiberingen av lipidperoksidering.

Huang Cong et al. (1991) rapporterte i Chin Bull Pharmacol virkningen av Panax Notoginseng Saponin på myokardiskemi og reperfusjonsskade i bevisstløse kaniner. Virkningen av Panax Notoginseng Saponin (PNGS) på myokardiskemi og reperfusjonsskade i bevisstløse kaniner ble undersøkt med observasjon av endringer i elektrokardiogram (ECG), virkningen av kreatinfosfokinase (CPK) og laktatdehydrogenase (LD) og størrelsen på iskemiarealet. PNGS ved dosen 50 mg/kg og 100 mg/kg reduserte signifikant størrelsen på myokardiskemiområdet. Disse resultatene antyder at PNGS har de beskyttende virkningene på myokardiskemi og reperfusjonsskade.

Mo Qi-xian et al. (1987) rapporterte i Propriet Trad Chin Med Res dynamikkene til<3>H-borneol. For å belyse virkningene av borneols aromatisitet ble dynamikkene til<3>H-borneol utført gjennom intravenøs injeksjon og oral administrering. Resultatene avslørte at halveringstiden var 2,8 min. etter én enkel intravenøs injeksjon av H-borneol. Det antyder at medikamentet raskt ble distribuert til de relevante organer og vev etter administrering og ga raskt virkning. In vivo-fordelingen var konsentrert på organer og vev som har rikelig blodgjennomstrømning, slik som hjerte, lunger, lever, nyrer og hjerne etc. Dette tilveiebringer kliniske applikasjoner forsikker teoretisk basis. Siden den sviktende halveringstiden var 5,3 timer etter oral administrering av medikamentet antyder dette at oral borneol ikke kan medføre akkumulering men dårlig biotilgjengelighet. Ytterligere studier bør gjennomføres for å diskutere forholdet med medikamentdose og doseringsform.

Chen Tie-feng et al. (1990) rapporterte i Acta Pharmacol Sin økningen av absorpsjonen av tetrametylpyrazin gjennom syntetisk borneol. Sprague-Dawley rotter gitt ig tetrametylpyrazinfosfat (TMP) 5 mg/kg med eller uten borneol 5 mg/kg på forhånd. TMP-konsentrasjonene i plasma ble analysert gjennom GC-metode og data ble behandlet gjennom NONLIN-program. Cmax var henholdsvis 931 og 562 ng/ml, (p<0,01); mens AUC var henholdsvis 68849 og 37174 (p<0,05). Det er foreslått at borneol øker absorpsjonen av TMP men ikke elimineringen.

Xu Wei et al. (1995) rapporterte i Pharmacol Chin Med Clin virkningen av mentol og borneol på fordelingen av sulfadiazinnatrium og Evans blå i rotte- og muse-hjerne. Mentol (1,5 g/kg, i.g.) og borneol (1,5 g/kg) forlenget sulfadiazinnatrium-fordelingens halveringstid ti/2i rotter. Den ovenfor angitte doseringen av mentol og borneol gitt oralt økte også konsentrasjonen av sulfadiazinnatrium i rottehjernen. Mentol (i.g. 0,5 g/kg i 3 dager) og borneol (i.g. 0,5 g/kg i 3 dager) fremmet konsentrasjonen av Evans blå i musehjernen mens konsentrasjonsverdien var signifikant lavere enn det i mus som lider av iskemireperfusjonsskaden. Resultatene foreslår at metanol og borneol kunne øke sulfadiazinnatrumoverføringen i hjerne-blodbarrierer uten å skade herne-blodbarrierer.

[ USA er koronar arterosklerotisk hjertesykdom den vanligste årsaken til kardiovaskulær funksjonshemming og død.

Aterosklerose er en arteriell tilstandkarakterisertgjennom gulaktige plakk av kolesterol, lipider og cellulære debris i de indre lagene av veggene på større og middels store arterier. Tilstanden begynner som en fettstrek og bygges gradvis opp til en fibrøs plakk eller ateromatøs lesjon. Blodåreveggene blir tykke, fibrotiske og forkalkede. Arterielumen snevres inn.

Mange aterosklerotiske plakk forblir stabile og utvikles gradvis. Andre kan gå i stykker og resultere i blødning, platelettaktivering og følgelig intravaskulær trombose. Koronar trombose forårsaker delvis eller fullstendig blodåreokklusjon, svekket blodgjennomstrømning og følgelig medfører til ustabil angina eller myokardialt infarkt. Alternativt kan istykkerrevne plakk bli restabilisert, og ofte forårsake mer alvorlig stenose.

Trening og mentalt stress øker hjertemuskelens oksygenbehov. Under normale fysiologiske betingelser møtes behovet for økt oksygenbehov i hjertemuskelen gjennom arteriosedillatering og følgelig økt blodgjennomstrømning. I nærværet av aterosklerose kan arteriolene dillatere maksimalt for å møte basisbehov. Slike dillaterte arterioler kan ha sviktende evne .til å møte det økte oksygenbehovet i hjertemuskelen. Når oksygenbehovet overgår oksygentilførselen opptrer iskemi i myokardium. Alternativt kan alvorlig blodåreokklusjon begrense blodgjennom-strømningen og dermed forårsake myokardiskemi. Kliniske manifestasjoner av forbigående myokardiskemi er angina pectoris som er et forbigående brystsmerte-anfall som ofte sprer seg til armene, spesielt den venstre armen med eller uten medfølgende følelse av kvelning og forestående død.

Angina pectoris fordeles på to undergrupper: stabil og ustabil. Stabil angina pectoris er forårsaket av det økte oksygenbehovet i myokard i de fleste tilfeller. Stabil angina angriper på denne måten i den forutsigbare frekvens og varighet ved provosering ved økt oksygenkrav i hjertemuskelen, slik som trening, mentalt stress osv. I kontrast til dette angriper ustabil angina pectoris uten provosering og er vanligvis forårsaket av økt oksygentilførsel til myokardium. Plakkødeleggelse, platellettplugging og koronar trombose reduserer oksygentilførselen til myokardium.

Angina pectoris behandles med ulike medikamenter, kirurgiske fremgangsmåter, koronar arterie-«bypass-graft», ballongangioplasti, stentplassering osv. Terapi for stabil angina pectoris er primært for å minimalisere oksygenbehov i myokard såvel som et forebyggende omfang. Terapi for det akutte syndromet ustabil angina pectoris er primært for å inhibere platellettaktivering og trombolyse.

For tiden tilgjengelige terapeutiske midler for kronisk stabil angina pectoris er nitroglyserin, andre nitrater, kalsiumkanalblokkere og beta-andrenerge reseptorblokkere. Disse medikamentene, administrert alene eller i kombinasjon med andre medikamenter lindrer eller forebygger heller enn kurerer angina.

Når angina angriper administreres nitroglyserin under tungen for å lette symptomene. Nitroglyserin er også anvendt for å forebygge anginaangrep forårsaket av trening og stress. Nitrater anvendes for å forebygge anginaangrep. Nitroglyserin og nitrater medierer sin effekt primært gjennom å relaksere vaskulær glatt muskulatur, redusere myokardaktivitet og følgelig redusere hjertemuskelens oksygenbehov. Bivirkningene er bankende hodepine, svimmelhet, svakhet, ortostatisk hypotensjon, takkykardi osv.

Beta-adrenerge reseptorblokkere slik som propranolol anvendes for å forebygge angina pectoris gjennom å redusere oksygenkravet i hjertemuskel gjennom trening og stress. De viktigste kontraindikasjoner er bronkospastisk sykdom, bradyarytmier og åpenbare hjertefeil. I individer med astma og andre former for luftveisobstruk-sjon kan betablokkere forverre tilstanden.

Kalsiumantagonister anvendes for å forebygge angina pectoris gjennom redusering av oksygenbehovet i myokardium. Myokardium er avhengig av kalsiuminfluks for normale funksjoner. Gjennom inhibering av kalsiuminfluks kan kalsiumantagonister relaksere glatt musklatur i blodåren, senke myokardaktivitet, redusere oksygenbehov gjennom myokardium og følgelig forebygge angina pectoris. Kalsiumantagonister har bivirkninger. De milde bivirkningene er rødming, ødem, svimmelhet, kvalme etc. Overdreven inhibering av kalsiuminfluks til myokardium kan forårsake alvorlige bivirkninger slik som hjertearrest, radiokardi, artioventrikulær blokkering, kongestiv hjertesvikt etc. Kombinert med beta-adrenerge medikamenter er bivirkningene ved kalsiumantagonister ofte forsterket.

I Kina har Panax Notoginseng og Radix Salviae Miltorrhizae blitt anvendt for behandling av kardiovaskulær sykdom siden 200 e.kr. (Shen-nongs urtefarmakopoeia). Panax Notoginseng har blitt anvendt for behandling av angina pectoris. Radix Salviae Miltiorrhizae har blitt anvendt for å fremme blodsirkulering og splitting av blodstasis. Flere prekliniske og kliniske studier demonstrerer virkningen og sikkerheten av Panax Notoginseng og Radix Salviae Miltiorrhizae.

Tradisjonell kinesisk medisin er blandingen av flere urter som krever avkoking. En modifisert form av kinesisk medisin for behandling av koronar hjertesykdom er Dan Shen-tablett. Dan Shen-tablett er en større fettaktig ball, ofte så stor som 1 cm i diameter. Dan Shen-tabletter er laget av ekstraktet av Radix Salviae Miltiorrhizae, pulver av Panax Notoginseng og syntetisk borneol, er blitt angitt i den kinesiske farmakopoeia siden 1977 og har blitt anvendt for å behandle kardiovaskulær sykdom i tiår.

Den beskrevne Danshen-pillen (DSP) eller kalt Cardioton pille er en ny generasjon kinesisk medisin for koronare hjertesykdommer. Kinesisk medisin består av ulike urter som varierer fra resept til resept med hensyn til typen urter såvel som proporsjonen av urter. For å kontrollere kvaliteten fremstilles DSP med den standardiserte formel. De terapeutiske komponentene i DSP er de vannløselige ekstraktene av Radix Salviae Miltiorrhizae 10-30 % og noen ganger tilnærmingsvis 20 %, de vannløselige ekstraktene av Panax Notoginseng (2-6 %) og borneol (1-3 %). For raskt å lette angina raskt har DSP videre blitt fremstilt som små piller som umiddelbart kan løses ved administrering under tungen, leveres raskt til myokardium og følgelig raskt lindre angina.

DSP har blitt vist å være ikke-toksisk og effektivt for forebyggingen og behandlingen av kardiovaskulær sykdom forårsaket av koronar arterieiskemi i pre-kliniske og kliniske studier. Den overlegne virkningen av DSP i forhold til Dan Shen-tabletter for behandling av koronar arteriesykdom har videre blitt vist i prekliniske såvel som i kliniske studier.

DSP har blitt angitt i vedlegget til den kinesiske farmakopoeia siden 1998, godkjent av det kinesiske helsedepartementet, markedsført som et medikament i Kina siden 1993 og anvendt av mer enn 5 millioner mennesker.

Den kinesiske farmakope (Pharmacopoeia of the People's Rebublic of China, 1985, del I, side 437-438) beskriver innholdsstoffer og fremgangsmåter for fremstilling av blandede Salviae Miltiorrhiaze tabletter innholdende 450 g Radix Salviae Miltiorrhiaze, 141 g Radix Notoginseng og 8g borneolum syntheticum. Nevnte farmakope beskriver også HPLC metode for analyse av tablettene.

R. Li et al. (Yiyao Gongye-Pharmaceutical Industry, Shanghai, CN, vol. 17, nr. 11, 1986, side 513-514 beksriver tabletter inneholdende Salvia Miltiorrhiza-ekstrakt, Panax ginseng og borneol.

K. Ni et al., Yaowu Fenxi Zazhi-Chinese Journal of Pharmaceutical Ananlysis, Zhongguo Yaoxuehui, Beijing, CN, vol 9, nr. 2, 1989, side 74-77 beskriver anvendelse av tynnsjiktskromatografi for kvantitativ analyse av fire aktive komponenter i Salviae Miltiorrhiaze og Radix Notoginseng i Salviae Miltiorrhiaze-tabl etter.

Sammendrag av oppfinnelsen

Den beskrevne Dan Shen-pillen (DSP) er en ny generasjon av kinesisk medisin for behandling av koronar hjertesykdom fremstilt med den standardiserte formel. DSP omfatter den standardiserte mengden av ekstraktene av Panax Notoginseng, ekstraktene av Radix Salviae Miltorrhizae og borneol.

Panax Notoginseng er indikert for å lindre og forebygge angina. Radix Salviae Miltorrhizae er indikert for å inhibere platelettaktivering, for å forebygge koronar trombose og følgelig for å fremme blodsirkulasjon. Borneol er inkludert for den effektive leveringen av terapeutiske komponenter til myokardium.

DSP er fremstilt som en liten pille, tilnærmingsvis 25 mg, som kan løses umiddelbart ved administrering under tungen og følgelig besørges terapeutiske virkning raskt. Virkningen av DSP som lindrer og forebygger angina har blitt vist i pre-kliniske og kliniske studier.

Oppfinnelsen tilveiebringer en fremgangsmåte for fremstilling av et preparat, så som en DSP, egnet ved behandling av kronisk stabil angina pectoris, der fremgangsmåten omfatter trinnene: (a) ekstrahere Radix Saliviae Milthorrhizae og Panax Notoginseng separat ved refluks i varm vann og separat filtrering; (b) konsentrere filtratene separat; (c) raffinere konsentratene separat ved anvendelse av harpikskolonner og konsentrere, og oppnå raffinert vannløselig ekstrakt av Radix Saliviae Milthorrhizae og raffinert vannløselig ekstrakt av Panax Notoginseng; (d) blande de raffinerte, vannløselige ekstraktene fra trinn (c) med passende

mengde borneol.

I følge en utførelsesform tilveiebringes en fremgangsmåte der

(1) ekstrahering av vannløselige komponenter fra Panax Notoginseng omfatter følgende trinn: (a) fortynne urter i 5-7 timer i vann; (b) ekstrahere vannløselige komponenter fra Panax Notoginseng ved koking i en tank ved et lufttrykk på mellom 0,04-0,06 mPa i 2 timer (c) repetere ekstraksjonen under tilsvarende betingelser i 1,5 time; (d) filtrere ekstraktet med et nett med maskevidde på 100 mesh (e) raffinere filtratet ved å anvende makropore-adsorbsjonsharpiks og eluere med etanol; (f) konsentrere de eluerte ekstraktene under dekomprimerte betingelser med lufttrykktilførsel på 0,04 - 0,06 mPa og vakuum på -0,076 -0,088 mPa inntil tettheten er 1,33-1,35; (2) ekstrahering av vannløselige komponenter fra Radix Saliviae Miltorrhizae omfatter de følgende trinn: (a) fortynne urter i 5-7 timer i vann; (b) ekstrahere vannløselige komponenter fra Radix Saliviae Miltorrhizae ved koking i en tank med lufttrykk mellom 0,04-0,06 mPa i 2 timer; (c) repetere ekstraksjonen under samme betingelser i 1,5 timer; (d) filtrere ekstraktet med et nett med maskevidde på 100 mesh (e) konsentrere filtratet under dekomprimerte betingelser med lufttilførsel på 0,04 - 0,06 mPa inntil 1 kg opprinnelig mengde urter blir til en liter; (f) presipitere konsentratet med etanol; (g) filtrere den etanolpresipiterte løsningen med et nett med maskevidde på 100 mesh; (h) konsentrere filtratet under dekomprimerte betingelser med lufttrykktilførsel på 0,04- 0,06 mPa og vakuum på -0,076 -0,088 mPa inntil tettheten er 1,33-1,35; (i) raffinere konsentratet ved polyamidkromatografi og eluere med etanol; (j) konsentrere de raffinerte ekstraktene til tettheten på 1,33-1,35; (3) og som ytterligere omfatter å produsere pillen som består av de følgende trinn: (a) blande ekstrakter fra Panax Notoginseng, ekstrakter av Radix Salviae Miltorrhizae, syntetisk borneol og polyetylenglykol 6000 ved et forhold på 4,0:20,6:1,9:79,5; (b) smelte blandingen; (c) fremstille piller av den smeltede blandingen ved å anvende en dryppmaskin med følgende karakteristika: temperaturen i dryppannen er konstant 89-93 °C, avkjølingsløsningen er flytende parafin med en temperatur lavere enn 8 °C, den indre diameter på drypphodet er 1,8 mm, den ytre diameter på drypphodet er 2,4 mm, avstanden mellom drypphodet og overflaten av avkjølingsløsningen er 15 cm, (d) sentrifugere pillene ved 800-1100 rpm i 15 minutter for å fjerne oljer.

I følge enda en utførelsesform omfatter fremgangsmåten ytterligere trinnene å: (e) fraksjonere blandingen ved hjelp av høyeffekt flytende kromatografi

(HPLC),

(f) sammenligne retensjonstiden for fraksjonene av blanding med

reten sjon sti den for saponin RI, saponin Rgi og saponin Re, og

(g) bestemme de aktive fraksjonene av blandingen ved å undersøke hvorvidt retensjonstiden er ekvivalent med tilbakeholdstiden for saponin RI, saponin Rgi og saponin Re.

Endelig tilveiebringes en utførelsesform der fremgangsmåten ytterligere omfatter trinnene: (e) fraksjonere blandingen ved hjelp av tynnsjiktkromatografi (TLC), (f) sammenligne posisjonen og fargen til fraksjonene i blandingen med posisjonen og fargen til 3,4-dihydroksyfenylmelkesyre og protokatechuinaldehyd, og (g) bestemme om blandingen inneholder fraksjonene for hvilke posisjon og farge er ekvivalent med posisjonen og fargen på 3,4-dihydroksyfenylmelkesyren og protokatechuinaldehydet.

Detaljert beskrivelse av figurene

Fig. 1. Prøve nr.: 19990806

Fig. 2. Prøve nr.: 19990815

Fig. 3. Prøve nr.: 19990823

Posisjonen av fingeravtrykktoppene: gruppe I består av topp 1 og 2 (retensjonstid i området fra 7-15 min.); gruppe II består av toppene 3 og 4 (retensjonstid i området fra 15-20 min.); gruppe III består av topp 5, 6, 7 og 8 (retensjonstid i området fra 20-40 min.). Fra helhetssyn er overfloden av topper i gruppe I størst og høyden på topp 1 er nær topp 2. Toppene i gruppe II står side ved side, har omtrent samme høyder og rikeligheten er svært liten. Gruppe III er sammensatt av fire topper og deres høyde øker trinn for trinn. Disse tre gruppene utgjør det representative fingeravtrykk av forbindelsen Danshenforbindelsesdryppepiller.

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen

Denne oppfinnelsen beskriver et fremstilling av et preparat som angitt over. Et preparat fremstilt i henhold til foreliggende oppfinnelse omfatter vannløselige ekstrakter av ekstrakter av Radix Salviae Miltorrhizae og Panax Notoginseng, samt borneol.

Preparater fremstilt i følge den foreliggende oppfinnelse kan slik Radix Salviae Miltorrhizae og Panax Notoginseng er blitt anvendt i Kina for behandling av koronar hjertesykdom siden 200 e.kr. Panax Notoginseng har blitt anvendt for å behandle angina og Radix Salviae Miltorrhizae har blitt anvendt for å fremme blodsirkulasjon. Borneol anvendes for å lette den raske leveringen av terapeutiske komponenter til målorganer. Naturlig borneol har blitt anvendt i Kina siden 600 e.kr. Ettersom borneol nesten er utslettet omfatter DSP syntetisk borneol.

Preparater fremstilt i følge den foreliggende oppfinnelse er følgelig anvendelig for: (a) behandling av koronar hjertesykdom; (b) behandling av koronar hjertesykdom i forbindelse med andre medikamenter; (c) primær forebygging av koronar hjertesykdom; (d) primær forebygging av koronar hjertesykdom i forbindelse med andre medikamenter; (e) sekundær forebygging av koronar hjertesykdom; (f) sekundær forebygging av koronar hjertesykdom i forbindelse med andre medikamenter; og

(g) redusering av nitratinntak av anginapasienter; og

(h) redusering av serumkolesterolnivå.

Preparater fremstilt i følge oppfinnelsen kan anvendes for behandling av koronar aterosklerotisk sykdom slik som, men ikke begrenset til, lindring av angina pectoris, forebygging av angina pectoris forårsaket av trening og stress, og å fremme blodsirkulasjon gjennom inhibering av platelettaggregering og på den måten forhindre koronar trombedannelse. Preparater fremstilt i følge oppfinnelsen kan også anvendes for å redusere nitroglyserininntaket som ofte anvendes for å lindre og forebygge angina. Preparater fremstilt i følge oppfinnelsen kan også anvendes for å redusere plasmakolesterolnivå for på den måten å forebygge dannelsen av nye ateroskleroselesjoner. Aterosklerose er ofte initiert gjennom kolesterolstrek-deponering på årevegger.

EKSPERIMENTELLE DETALJER

Fremstilling av Dan Shen-piller (DSP)

DSP er en lite pille, tilnærmingsvis 25 mg, hvorav terapeutiske komponenter omfatter vannløselige ekstrakter av Notoginseng, vannløselige ekstrakter av Salviae og syntetisk borneol.

For fremstilling av DSP ekstraheres Notoginseng og Salviae separat med varmt vann i sirkuleringssystemer og filtreres. Filtratene kondenseres under dekomprimerte betingelser. De foredlede vannløselige ekstraktene oppnådd på denne måten ble blandet med syntetisk borneol og farmasøytiske bærere. Blandingen lages til en liten pille ved anvendelse av en spesifikk dryppmaskin. Kvaliteten til DSP kontrolleres gjennom standardisering av kvantiteten såvel som forholdet av dets viktigste terapeutiske komponenter Saponin, fenolsyre slik som Danshensu og borneol. Tynnsjiktkromatografi, høyttrykks væskekromatografi, fingeravtrykk og andre analyttiske teknikker anvendes for å identifisere og kvantifisere terapeutiske komponenter i DSP.

Fremstilling av DSP

1. Ekstrahering av vannløselige komponenter av Panax Notoginseng (a) Fortynning av urter med 5-7 ganger vann. (b) Ekstrahering av vannløselige komponenter fra Panax Notoginseng gjennom koking i en tank med lufttrykket mellom 0,04-0,06 mPa i 2 timer.

(c) Ekstraheringen repeteres under den samme betingelse i 1,5 timer.

(d) Ekstraksjonen filtreres med 100-mesh nett.

(e) Filtratet renses ved anvendelse av makroporøst adsorpsjonsresin eluert med etanol. (g) De eluerte ekstrakter konsentreres under dekomprimerte betingelser med luftinntak på 0,04-0,06 mPa og vakuumet til -0,076—0,088 mPa inntil tettheten er 1,33-1,35. 2. Ekstraksjon av vannløselige komponenter av Radix Salviae Miltorrhizae (a) Fortynning av urter med 5-7 ganger vann. (b) Ekstrahering av vannløselige komponenter av Radix Salviae Miltorrhizae gjennom koking i en tank med lufttrykket mellom 0,04-0,06 mPa i 2 timer.

(c) Ekstraheringen repeteres under den samme betingelsen i 1,5 timer.

(d) Ekstraksjonen filtreres med 100-mesh nett.

(e) Filtratene konsentreres under dekomprimerte betingelser med vakuumtrykket -0,076~-0,088 mPa inntil 1 kg innledende urte blir 1 liter.

(f) Konsentratene presipiteres med etanol.

(g) Etanolpresippitatløsningen filtreres gjennom 100-mesh nett.

(h) Filtratene konsentreres under dekomprimerte betingelser med luftinngangstrykk på 0,04-0,06 mPa og vakuumtrykk på 0,076—0,088 mPa. (i) Konsentratene renses gjennom polyamidkromatografi eluert med etanol.

(j) De rensede ekstraktene konsentreres til tetthet på 1,33-1,35.

3. DSP-produksjon

(a) Bland ekstraktene fra Panax Notoginseng, ekstraktene fra Radix Salviae Miltorrhizae, syntetisk borneol og polyetylenglykol 6000 ved forholdet 4,0:20,6:1,9:79,5.

(b) Smelt blandingen.

(c) Fremstill den smeltede blandingen til DSP ved anvendelse av dryppmaskinen med de følgende karakteristika: temperaturen på dryppbegeret er konstant 89-93°C, avkjølingsløsningen er flytende parafin hvorav temperaturen er lavere enn 8°C, den indre diameteren på drypphodet er 1,88 mm, den ytre diameteren til drypphodet er 2,4 mm, avstanden mellom drypphodet og overflaten på avkjølingsløsningen er 15 cm.

(d) Sentrifugering av pillene ved 800-1100 rpm i 15 min. for å fjerne oljer.

Kvalitetskontroll av DSP

DSP inneholder de identifiserte terapeutiske komponentene protokatechuinaldehyd og saponin såvel som ulike andre komponenter. Komponentene av disse forbindelsene i urter varierer fra prøve til prøve av urter. For å standardisere innholdet av terapeutiske komponenter i DSP og på den måten å kontrollere DSP-kvaliteten er det blitt utviklet en fremgangsmåte for å identifisere og kvantifisere terapeutiske midler i medikamentene. Et eksempel på fremgangsmåten omfatter:

(a) Løs 30 DSP i 3 ml etanol og ultrasoniker i 10 min.

(b) Sentrifuger i 5 min.

(c) Fraksjoner supernatanten ved anvendelse av standard analyttiske teknikker ved anvendelse av tynnsjiktkromatografi, høytrykks væskekromatografi osv. (d) Identifiser de terapeutiske komponentene i DSP slik som natrium Danshensu, proteokatchuialdehyd, saponin osv. gjennom sammenligning av DSP-fraksjoner med de relevante rensede standarder med hensyn til posisjonen, størrelsen og fargen. (e) Identifiser og kvantifiser terapeutiske komponenter i DSP gjennom sammenligning av posisjonen, størrelsen og fargen til DSP-fraksjonene med posisjonen, størrelsen og fargen til de relevante rensede standarder. (f) Identifiser terapeutiske komponenter i DSP gjennom sammenligning av den relative retensjonstiden og relative området av topper i fingeravtrykkene med den relative retensjonstiden og relative områder av topper i standard fingeravtrykk.

TLC-identifisering av DSP

En fremgangsmåte for å identifisere natrium Danshensu og protokatchuialdehyd av et urtepreparat som kan anvendes for behandling av kronisk stabil angina pectoris gjennom tynnsjiktkromatografi omfatter trinnene:

a) fremstilling av analysen omfattende trinnene:

i. putt 30 pelletter av nevnte preparat i 3 ml metanol og løs gjennom ultrasonikering i 10 min. for å danne en løsning; ii. sentrifuger løsningen i 5 min. og samle supernatanten; iii. bring 10 ul av løsningen i kontakt med en silikon G-gelplate inneholdende 0,5 % CMC-Na; iv. fremkall platen med en fremkallerløsning omfattende kloroform, aceton og metansyre i forholdet 10:4:1,6; v. tørk og desinfiser platen med ammoniakk og legg platen opp i 15 min.; vi. sjekk platen under ultrafiolett lys, hvorved prikken som representerer den nevnte bestanddelen bør være ved den tilsvarende posisjonen som standarden og vise den samme fargen. b) anvendelse av natrium Danshensu og protokatechuialdehyd som standarder.

Fremgangsmåte for å identifisere gypenosid av et urtepreparat som kan anvendes for

behandling av kronisk stabil angina pectoris gjennom tynnsjiktkromatografi omfattende trinnene:

a) fremstilling av analysen omfattende trinnene:

i. Putt 30 pelletter av nevnte preparat i 5 ml ammoniakkløsning og løs gjennom ultrasonikering for å danne en løsning; ii. Putt nevnte løsning i den makroporøse adsorpsjonsresinkolonnen; hastigheten er 0,5/min.; iii. Etter vasking av den makroporøse adsorpsjonsresinkolonnen med 20 ml destillert vann elueres den makroporøse adsorpsjonsresinkolonnen med 2 ml metanolløsning; iv. Samle eluatet; v. Bring 10 u.1 av nevnte ekstraksjonsmiddel på en silikon G-gelplate inneholdende 0,5 % CMC-Na; vi. Fremkall platen med 10 ml fremkallerløsning som er en lavere lags klaringsmiddelsløsning av kloroform, aceton og vann i forholdet 6:3:1 etter 2 timer ved 10°C; vii. Etter tørking og spraying med 10 % etanolsulfat bakes platen ved 105°C i flere minutter; viii. Sjekk platen under normalt lys, prikken som representerer nevnte preparat bør være ved tilsvarende posisjon som standardene og vise den samme fargen. b) anvendelse av total gypenosid, saponin RI og ginsenosid Rgi som standarder.

Fingeravtrykk av Cardiotonpille

1. Fremstilling av fingeravtrykk

(1) Kromatografisk system og system egnet for alkylsilanbindende silisium-18 ble anvendt som den stasjonære fase og blandingen av A og B som mobilfase. A var metanol og B var blandingen av vann-«N,N-dimetylformamid»-iseddikk (100:45:4). Konsentrasjonen av A endres fra 5 % til 30 % når tiden for gradienteluering forløper fra 0-25 minutter. Påvisningsbølgelengden ble satt til 281 nm. Antallet teoretiske plater for kolonnen var ikke mindre enn 2000 når beregnet med toppen til Dansehensu.

(2) Apparatur og reagenser

Kromatograf: HP 1100 væskekromatograf

Detektor: HP VWD-stett ultrafiolett detektor

Kolonne: Alltech Company 5u, 250x4,6 mm, ODS-kolonne

Pre-kolonne: Alltech Company, Alltima Ci85u pre-kolonne

Temperatur for kolonnen: 30°C.

(3) Fremstilling av kontrollprøven

Henholdsvis salviansyre B, Danshensu og protokatchuinaldehyd ble løst i metanol for å fremstille tre kontrolløsninger hvor hver ml tilsvarende inneholdt 50 u,g, 40 u,g og 10 ug.

(4) Fremstilling av testprøven

10 piller av Cardiotonpillen ble puttet i en 25 ml måleflaske og tilsatt 20 ml metanol, ultrasoniker i 20 min., tillatt avkjøling, løsningen fortynnet til skalalinjen med metanol, sentrifugert og supernatanten tatt som restløsningen.

(5) Prosedyre

Nøyaktig 10 ul hver av henholdsvis kontrolløsningene og testløsningen ble injisert inn i kolonnen, kromatogramkartet registrert og innholdet beregnet.

2. Fingeravtrykk av ulike Cardiotonpilleprøver

20 prøver av Cardiotonpilleprøver ble testet med den ovenfor nevnte fremgangsmåte og statistiske data er vist som i tabell 1, tabell 2 og tabell 3. Disse data avslørte at Cardiotonpillen hadde spesifikke fingeravtrykk i seg selv og fingeravtrykkene inneholdt 8 kjente topper, dvs. disseloppene burde eksistere samtidig i hver av DSP-prøven. Ved å ta protokatechuinaldehydtoppen som referansetopp, hvis relative retensjonstid var 1, var den gjennomsnittelige verdien til relativ retensjonstid av de åtte toppene 0,672, 1,000, 1,417, 1,512, 2,016, 2,235, 2,407, 2,757. Verdiene av relativ retensjonstid og relativt område for de åtte toppene var svært stabile og blant de åtte kjente toppene var topp nr. 1 Danshensu, topp nr. 2 protokatechuinaldehyd og topp nr. 7 salviansyre B og forholdet av relativ arealverdi var henholdsvis 0,476-0,668: 1: 0,391-0,641.

Fingeravtrykk av tre prøver av Cardiotonpille er også tilveiebragt i fig. 1-3.

Kvantitativ analyse av Danshensu i DSP

Kromatografi og systemisk adaptive betingelser, apparat og reagenser:

1. Fremstilling av fingeravtrykk

(1) Kromatogram- og systemtilpasningsparametere.

Alkylsilanbindende silisium-18 ble anvendt som fyllmateriale og vann-acetonitril-iseddikksyre (87:12:1) som mobilfase. Påvisningsbølgelengde ble satt til 281 nm. Antallet teoretisk plate bør ikke være mindre enn 2500 når beregnet med toppen til Danshensu og separeringsgraden bør møte kravene.

(2) Apparat og reagenser.

Kromatograf: HP 1100 flytende kromatograf

Detektor: HP VWD-stett ultrafiolett detektor

Kolonne: Alltech Company 5u., 250 x 4,6 mm, ODS-kolonne

Pre-kolonne: Alltech Company, Alltima Cl8 5u, pre-kolonne

Temperatur til kolonnen: 30°C

Acetonitril: kromatografisk ren, Tianjin Siyou Biomedical & Technical Co. Ltd.

Iseddikksyre: analyttisk ren, Tianjin Tianhe Reagent Company

(3) Fremstilling av kontrollprøve.

Anvendelse av 25,0 mg natriumsalviansyre og 5,0 mg protokatechuinaldehyd som kontrollprøvene: begge prøvene ble nøyaktig veid og puttet i de 50 ml måleflaskene. Mobilfase ble tilsatt for å løse dem og løsningene ble fortynnet opp til skalalinjen på flaskene, rist dem godt og oppbevar dem som beholdningsløsning. En liten mengde paraaminobenzosyre ble nøyaktig veid, løst som en løsning av 0,2 mg/ml med mobil fase og tatt som den interne beholdningsløsningen. Passende mengder natriumsalviansyre A, protokatechuinaldehyd og internstandardløsninger ble pipetert med deres nøyaktig avleste volumer, fortynnet med mobilfasen for å fremstille en løsning som inneholdt 50 u,g natriumsalviansyre A, 10 u,g protokatechuinaldehyd og 80 \ ig ved paraaminobenzosyre. Den fremstilte løsningen ble tatt som kontroll-løsningen.

(4) Fremstilling av testprøven.

10 piller Cardiotonpille og 1 ml internstandard beholdningsløsning, ble puttet i en

25 ml måleflaske, løst med mobilfase og løsningen fortynnet til skalalinjen.

10 ml av henholdsvis kontroll-løsningen og testprøveløsningene ble insjisert og kromatogramkartet registrert.

Fremstilling av kontroll-løsningen: nøyaktig 25,0 mg natriumtanshinol ble veid og puttet i en målefalske. Mobilfasen ble tilsatt, løst og fortynnet til skalaen. Løsningen ble ristet opp og oppbevart som kontrollbeholdningsløsningen. Paraaminobenzosyre ble veid nøyaktig og fortynnet til 0,2 mg/ml-løsning med mobilfasen. Løsningen ble oppbervart som den interne standardbeholdnings-løsningen. Passende doser av kontrollbeholdningsløsningen og den interne standardbeholdningsløsningen ble tatt og gjort til kontroll-løsningen omfattende 50 u,g natriumtanshinol og 80 u.g paraaminobenzosyre pr. ml.

Fremstilling av testløsningen: 10 piller av denne artikkelen og 1 ml av den interne beholdningsløsningen ble tatt og puttet i en 25 ml måleflaske, løst til skalaen og gjort til testløsningen. 10 1 av henholdsvis kontroll-løsningen og 10 1 av testløsningen ble tatt, fingeravtrykkene tatt og resultatene beregnet.

Urtepreparatet omfattende DSP bør inneholde 0,14-0,18 mg Danshensu pr. pille.

Kvantitativ analyse av ginsenosid Rgi og Shanchinosid RI i DSP

(1) Kromatografisystem og system tilpasset for alkylsilanbindende silitium-18 ble anvendt som stasjonærfasen, og blandingen av vann og acetonitril som mobilfase. Konsentrasjonen av acetonitril var 25 % fra 0-15 min. og 35 % etter femtende minutt. Forstøverglassets gjennomstrømningshastighet var 2,5 l/min. og drivtubetemperaturen var satt ved 93,8°C. Antallet teoretiske plater på kolonnen var ikke mindre enn 5000 når beregnet med toppen av ginsenosid Rgi.

(2) Apparat og reagenser

Kromatograf: Agilent 1100 væskekromatograf

Detektor: Alltech ELSD 2000-detektor (fordampende lysspredningsdetektor) Kolonne: Alltech Company 5u, 250 x 4,6 mm, ODS-Cig-kolonne

Prekolonne: Alltech Company, Alltima Ci85u. pre-kolonne

Temperatur til kolonnen: 30°C

(3) Fremstilling av kontrollprøven

Ginsenosid Rgi og Sanchinosid RI ble løst i metanol for å fremstille to kontroll-løsninger på 1 ml hver tilsvarende inneholdende 0,98 mg og 0,25 mg.

(4) Fremstilling av testprøven

50 Cardiotonpiller ble puttet i en 5 ml måleflasje, og 4 % ammoniakk tilsatt til skalalinjen, ultrasonikert i 20 min. Løsningen ble påført til en på forhånd klargjort Cig-kolonne (STRATA C18-E-kolonne fra Phenomenex Company, 500 mg og 3 cc rør), 10 ml vann eluert, eluatet fjernet, deretter 2 ml metanol eluert, eluatet fjernet i en måleflaske og fortynnet til skalalinjen med metanol. Løsningen ble tatt som testløsningen.

(5) Prosedyre

Nøyaktig 10 u.1 hver av henholdsvis kontroll-løsningene og testløsningen ble injisert på kolonnen, kromatografkartet registrert og innholdet beregnet.

(6) Resultat

20 prøver av Cardiotonpilleprøver ble testet med den ovenfor nevnte metoden og statistiske data er vist som tabell 4. Tegnet på ovenfor nevnte tabell inneholder urtepreparatet omfattende DSP 0,401 %-0,712 %, gjennomsnittelig 0,550 % sanchinosid RI og 2,069 %-4,044 %, gjennomsnittelig 2,847 % ginsenosid Rgi.

Karakteristikkene av DSP fremstilt på denne måten er som følger:

(a) DSP inneholder b-3,4-dihydroksyfenyleddiksyre, natriumdanshensu, saponin og borneol,

(b) bakterienegativ: inneholder mindre enn 1000 bakterier,

(c) soppnegativ: inneholder mindre enn 100 sopp,

(d) negativ for tungmetall: inneholder mindre enn sikkerhetsmengden definert av den kinesiske regjering,

(e) halveringstiden til DSP er fire år ved romtemperatur.

Kliniske studier av DSP

Angina pectoris er vurdert gjennom historien av angina, serumlipidnivå, elektrokardiografi (ECG), aktivitets-ECG, scintiografisk vurdering av iskemi, koronar angiografi osv. Ved vurdering av terapeutisk virkning ved anvendelse av disse endepunktene har DSP blitt vist å være effektiv for behandling av angina pectoris.

DSP er effektiv for angina pectoris.

157 pasienter med koronar hjertesykdom ble behandlet med 10 DSP'er pr. t.i.d., oralt administrert i fire uker. Vurdering av frekvens, intensitet og varigheten av angina, beklemt følelse i brystet og hjertebank ble symptomene borte eller redusert i 95,3 % av pasientene.

DSP er mer effektivt enn Dan Shen- tabletter i lindring av angina.

Dan Shen-tabletter er et annet kinesisk medikament for behandling av angina pectoris som for tiden anvendes i Kina. Virkningen av DSP og Dan Shen-tabletten ble sammenlignet. Pasienter med koronar hjertesykdom ble randomisert fordelt på to grupper. 107 pasienter ble behandlet med DSP og 50 pasienter ble behandlet med Dan Shen-tablett. Ved å sammenligne frekvensen av anginaangrep og forbruket og nitrater var DSP mer effektivt enn Dan Shen-tabletter ved behandling av angina pectoris. Se tabell 5 nedenfor.

Ved å ha bevist at DSP er mer virkningsfullt enn Dan Shen-tabletter ble virkningen av DSP sammenlignet med ulike medikamenter som for tiden anvendes for behandling av kronisk stabil angina pectoris i USA.

Sammenligning av DSP og nitroglyserin

Nitroglyserin er det hyppigst anvendte anginalindrende middel. Virkningen av DSP og nitroglyserin i lindringen av angina ble sammenlignet. Ved begynnelsen av angina ble pasienter behandlet med enten DSP eller nitroglyserin og tiden som kreves for å lindre angina ble sammenlignet. Både DSP og nitroglyserin lindret angina i alle pasientene innen 15 min. Virkningen av DSP var noe lavere enn nitroglyserin. Se tabell 6 nedenfor.

DSP endrer ikke hjerterytmen

Dataene viste at DSP effektivt lindret angina. Det ble undersøkt hvorvidt DSP lindrer angina gjennom økt hjerterytme. Hjerterytmen etter DSP-behandling var lik rytmen før behandling, hvilket indikerer at DSP lindrer angina uten å påvirke hjerterytmen (tabell 7).

Sammenligning av virkningen av DSP med nitratet isosorbiddinitrat Ved å ha bevist at DSP lindrer angina like effektivt som nitroglyserin ble det undersøkt hvorvidt DSP kan forebygge angina. Virkningen av DSP og nitratisosorbiddinitrat ble sammenlignet. Isosorbiddinitrat er et langtidsvirkende nitrat som ofte anvendes for å forebygge kronisk stabil angina pectoris i USA. Pasientene ble behandlet med enten DSP tre ganger pr. dag oralt, 10 piller pr. behandling eller isosorbiddinitrat tre ganger pr. dag oralt 10 mg/behandling. Hjertefunksjon og elektrokardiogram ble undersøkt.

Hjertefunksjon

Virkningen av DSP og nitrater på hjertefunksjon ble vurdert gjennom måling av hjerteutstrøm pr. slag (CO), slagvolum pr. minutt (SV), utstøtt blodfraksjon (EF), fraksjon av kortere hastighet i venstre korte ventrikkelakse (FS). DSP forbedrer hjertefunksjon mer effektivt enn nitrater. Se tabell 8 nedenfor.

DSP forbedrer ECG

ST-T-effekthastigheten ble evaluert gjennom registrering av frekvensen av endringer i ST-T-segmentet. Både DSP og isosorbiddinitrater senker frekvensen av endringer i ST-T signifikant. DSP var imidlertid mer effektivt. Se tabell 9 nedenfor.

Sammenligning av DSP og aspirin i redusering av blodstasis

Blødning ved aterosklerotiske lesjoner inkluderer platelettaktivering, koronar trombose og blodstasis som resulterer i svekket blodgjennomstrømning. For å forbedre blodgjennomstrømningen anbefales følgelig kronisk administrering av platelettaktiveringsinhibitoren aspirin for pasienter med angina. Virkningen av DSP og aspirin som forbedrer blodgjennomstrømningen ble sammenlignet gjennom evaluering [Hb, Lb, P og luftgjennomstrømming]. DSP forbedrer blodgjennomstrømning like effektivt som aspirin. Se tabell 10 nedenfor.

DSP reduserer blodstasis gjennom inhibering av platelettaktivering

Tromboksan B2 aktiverer platelett. Aktiverte plateletter frigjør ulike forbindelser inkludert (3-platelettmikroglobulin som forårsaker blodstasis og på denne måten svekker blodgjennomstrømningen. DSP's virkning for inhibering av platelettaktivering ble undersøkt. DSP senker tromboksan B2-konsentrasjon og hemmer platelettaggregering effektivt. Isosorbiddinitrat som er kjent for ikke å være i stand til å inhibere platelettaktivering ble på denne måten anvendt som kontroll og reduserte ikke tromboksan B2 eller hemmet platelettaktivering. Se tabell 11 nedenfor.

DSP senker plasmakolesterolnivå

Økt plasmakolesterol har blitt sett i sammenheng med initieringen av aterosklerose. For å forebygge dannelsen av nye aterosklerotiske lesjoner ble reduksjon av plasmakolesterol enten gjennom modifiserte dietter eller medikamenter anbefalt. Det ble undersøkt hvorvidt DSP senker plasmakolesterol. DSP senker kolesterolnivået med 0,3 mmol/1 som er statistisk signifikant ved P-verdien 0,05. Se tabell 12 nedenfor.

Cardiotonpillens effekt på LPO og SOD i blodserum til pasienter som lider av koronar hjertesykdom

Fremgangsmåten: 1 behandlingsgruppen administreres 24 pasienter i henhold til den kinesiske referansediagnosestandarden for koronar hjertesykdom endret i 1979 med Cardiotonpille, 10 piller/time og 3 ganger/dag. I den normale gruppen mottok ikke 20 friske mennesker noen form for medisinsk behandling.

Resultater: LPO-nivået i pasientene som lider av koronar hjertesykdom er klart høyere enn det i friske mennesker mens innholdet av SOD er klart lavere (p<0,01). Etter at pasientene var behandlet med Cardiotonpille var deres LPO tydelig redusert (p<0,01) og deres SOD tydelig økt (p<0,01). Se tabell 13 nedenfor.

Konklusjon: Kronisk iskemi i hjertemuskelen til pasienter som lider av koronar hjertesykdom og oksygenmangel i vev medfører reduksjon av SOD-aktiviteten, spesielt ekstracellulær SOD og økningen av frie oksygenradikaler som forårsaker økningen av LPO og ytterligere forbruk av SOD. Etter at pasientene er behandlet med Cardiotonpille sank LPO-nivået tydelig mens innholdet av SOD økte merkbart. Dette beviser at Cardiotonpille har en sterk «clearance»-virkning på frie oksygenradikaler som også er én av mekanismene for å behandle koronar hjertesykdom.

Virkningen av Cardioton pille på LPO-aktivitetene og antioksidaser i behandlingen av pulmonær hjertesykdom

Fremgangsmåten: Individene: 48 pasienter som lider av pulmonær hjertesykdom fordeles randomisert på tre grupper. I normalgruppen behandles 16 pasienter med et kompleks av terapier, slik som anti-inflammatorisk terapi, anti-astma, oksygeninhalering osv. I Cardiotonpillegruppen behandles 14 pasienter med Cardiotonpille, 10 piller/tid og 3 ganger/dag. I Gantangzhi-gruppen behandles 18 pasienter med det intravenøse drypp—200 mg Gantangzhi løst i 250 ml 5 % glukoseinjeksjon, én gang/dag og 10 dager/periode.

Resultatene: Etter behandling med Cardiotonpille gikk GSH-Px-verdien opp, verdien av LPO går ned og derfor går GSH-Px/LPO opp. Sammenlignet med den normale behandlingsgruppen er det ingen signifikant forskjell. Se tabell 14 nedenfor.

Konklusjonen: Cardiotonpille har antioksideringfunksjonen og kan lette lipidperoksideringsreaksjonen og heve antioksideringsevnen til det menneskelige legemet.

Behandling med cardiotonpille for vesentlig hypertensjon

Fremgangsmåten: (1) Pasientvalget: Velg de pasienter som lider av fase I eller II vesentlig hypertensjon men uten sekundærhypertensjon eller hjerte-, lever- og nyresvikt. (2) Administrering: Pasientene stoppes i å ta noen vestlige og tradisjonelle kinesiske medisiner (bortsett fra hypotensorer) i to uker og deretter i den tredje uken ble blodtrykkene og blodets reologiske indeks målt og deres kliniske mannifestasjoner tatt. Dobbeltblindmetoden ble anvendt. I cardiotonpillegruppen tok individene cardiotonpille oralt, 10 piller/tid og 3 ganger/dag. I Danshenforbindelsetablett-gruppen tkr individene Danshenforbindelsestablett oralt 5 tabletter/tid og 3 ganger/dag. Individene i kontrollgruppen tok placebos og behandlingstiden var seks uker.

Resultatene: (1) virkningen på viskositeten til helblod. Etter behandling sank viskositetene til helblod i pasientene i både cardiotonpillegruppen og i Danshen forbindelsestablettgruppen merkbart mens viskositetskurvene av helblod i cardiotonpillegruppen enhver skjæringshastighet gikk raskere ned enn de i Danshen forbindelsestablettgruppen. Se tabell 15.

(2) Virkningen på deformering og aggregering av elektrocytter. Etter behandling er deformeringen av erytrocytter i cardiotonpillegruppen markert større enn den før behandling og arealet og aggregeringsindeksen er merkbart mindre enn før behandling. Ved sammenligning med Danshenforbindelsestablettgruppen synker cardiotonpillegruppen mye raskere (p<0,01). Se tabell 16. (3) Virkning på blodtrykk. Etter behandling sank det systoliske trykket og diastoliske trykket i pasientene i både cardiotonpillegruppen og Danshenforbindelsestablettgruppen markert (p<0,01), og det er ingen tydelig forskjell mellom de to gruppene. Se tabell 17. (4) Virkningen på symptomer av hypertensjon. Pasientene i både cardiotonpillegruppen og Danshenforbindelsesgruppen forbedret en masse med hensyn til slike symptomer som hodepine, svimmelhet og numne ekstremiteter (p<0,01) men forbedret ikke insomnia. Se tabell 18.

Konklusjonen: De reologiske egenskapene til erytrocyttene til pasienter som lider av vesentlig hypertensjon er klart unormal. Deformeringen av erytrocytter nedverdiges klart mens aggregeringen tydelig øker. Eksperimentet viser at cardiotonpille har funksjonene av markert å redusere viskositeten til helblod og indeksen og aggregeringsarealet til erytrocytter, og i stor grad øke erytrocyttenes evne til deformering. Cardiotonpille kan også senke blodtrykket og forbedre kliniske symptomer til pasientene. Og på denne måten er cardiotonpille en stor fordel for å forebygge eller forsinke inntreden av vesentlig hypertensjon og kardioserebral syndrom.

Toksisitet

DSP er sikker og ikke-toksisk. 1 Kina har over 5 millioner pasienter blitt behandlet med DSP uten alvorlige bivirkninger. Milde bivirkninger, hodepine eller svimmelhet har blitt rapportert i en mindre andel av pasienter.

Sammendrag av kliniske studier

DSP er en ny generasjon kinesisk medisin for behandling av koronar hjertesykdom. Kliniske studier viser at DSP lindrer såvel som forebygger angina gjennom forbedret hjertefunksjon, redusering av myokardiskemi, inhibering av platelettaktivering og på den måten reduserer blodstasis og senker plasmakolesterol. Den terapeutiske virkningen av DSP var overlegen i forhold til en annen kinesisk medikamentform av Danshentabletter. DSP er like effektiv som medikamenter anvendt i USA. DSP lindrer angina like effektivt som nitroglyserin, forebygger angina like effektivt som det langtidsvirkende nitratet isosorbiddinitrat og inhiberer platelettaggregering like effektivt som aspirin. DSP er ikke toksisk: over 5 millioner mennesker har blitt behandlet uten bemerkelsesverdige bivirkninger i de fleste tilfeller.

Prekliniske studier

Prekliniske studier avslører mekanismen gjennom hvordan DSP forebygger såvel som lindrer angina.

DSP lindrer angina gjennom økt blodgjennomstrømning

Wistar-rotter, tilnærmingsvis 260 g, ble bedøvet med uretan, brystet ble åpnet, hjertet skjært ut, perfusert på Langendoff-metoden ved 37°C. Konstant koronar perfusjonslrykk på 65 cm H2O.

Etter stabilisering av hjerterytmen ble ulike mengder DSP eller Danshentablett påført hver time gjennom sidegrenen til aorta cannula. Deretter ble koronargjennomstrømningen og hjerterytmen målt. DSP økte koronargjennomstrømning i en rekke doseringer. Danshentabletten på den annen side økte koronargjennomstrømningen ved en smalere dosering. Se tabell 19 nedenfor.

Virkningen av DSP og Danshen-tabletter på hjerterytmen ble undersøkt. Hverken DSP eller Danshentabletten endret hjerterytmen. Se tabell 20 nedenfor.

DSP øker koronargjennomstrømning gjennom relaksering av vaskulær glatt muskulatur for på den måten å dillatere årer

Virkningen av DSP på kalium-indusert vasokontraksjon i aortarense fra kanin ble undersøkt. DSP relakserte glatt muskel og følgelig dillaterte årer signifikanl. Lignende virkninger ble observert i eksperimentene som anvendte koronare arterieringer fra gris.

DSP hemmer platelettaggregering

Virkningen av DSP på platelettaggregering ble undersøkt. Kaninplateletter ble behandlet med DSP og aggregering ble undersøkt. DSP hemmet platelettaggregering signifikant. Se tabell 21 nedenfor.

Tabell 22 viser mikronukleushastigheter i mus ved forskjellig tid etter behandling med urtepreparatet ifølge denne oppfinnelsen (8400 mg/kg).

Tabell 23 viser mikronukleushastigheter i mus 24 timer etter DSP- og CP-administrering.

Tabell 24 viser vurderingskriteriet for graderte effektiviteter av testede medikamenter.

DSP forbedrer mikrosirkulasjon

Virkningen av DSP på mikrosirkulasjon i kinesiske hamstere ble undersøkt. DSP forbedrer mikrosirkulasjon i 23 min. innen 111 min. ved bukal administrering i alle dyr. Se tabell 25 nedenfor.

Tabell 26 viser beskyttelsesvirkningen av DSP på myokard indusert gjennom pituitrin i rotter (andre periode).

Tabell 27 viser den inhibitoriske virkningen av DSP på myokardiskemi indusert gjennom pituitrin i rotte.

Tabell 28 viser beskyttelsesvirkningen av DSP på myokardiskemi indusert ved pituitrin i rotter (første periode).

Cardiotonpilles virkning på «Clearance» av frie oksygenradikaler

Studien av cardiotonpilles virkning på «clearance» av frie oksygenradikaler utføres ved anvendelse av elektronparamagnetisk resonans (EPR) og rotasjonsutstyr med superoksidanioner og hydroksyradikaler fremstilt ved anvendelse av henholdsvis xantin-xantinoksidasesystemet og H202-Fe<2+->systemet.

Fremgangsmåten: (1) fremstilling av hydroksyradikaler. En testmodell ble satt opp i henhold til Fenton-prinsippet. H2O2, jernsulfat og DMPO (5,5-dimetylpyrrolin-l-oksid) ble blandet og deretter ble EPR-testingen utført. De resulterende signalene tjente som kontrollen. Cardiotonpille ble tilsatt i behandlingsgruppen. (2) Fremstilling av superoksidanioner. En testmodell basert på xantin-xantinoksidasereaksjon ble satt opp. Xantin, dietrylentriaminpentaeddiksyre, DMPO og xantinoksidase ble blandet og deretter ble EPR-testingen utført. De resulterende signalene tjente som kontroll. Cardiotonpille ble tilsatt i behandlingsgruppen.

Ti prøver for hver av de fire gruppene ble testet og resultatene er uttrykt i form av gjennomsnittet. T-test er anvendt i den statistiske analysen.

Resultatene: (1) cardiotonpilles virkning ved «clearance» av hydroksyradikaler fremstilt ved hjelp av H202-Fe<2+->systemet. DMPO-OH vil dannes når et hydroksyradikal fanges gjennom DMPO. Toppverdien til adduktene i kontrollgruppen er 11,8 + 0,6 relative enheter mens det i cardiotonpillegruppen er 4,1 + 0,5 relative enheter. Det er en signifikant forskjell mellom disse (p<0,01) og «clearance»-hastigheten til cardiotonpillen er over 65 %. (2) Cardiotonpillens virkning på «clearance» av superoksidanioner fremstilt ved hjelp av xantin-xantinoksidasesystemet. DMPO-OOH vil dannes når et superoksidanion fanges gjennom et DMPO. Toppverdien til adduktene i kontrollgruppen er 10,6 + 0,67 relative enheter, mens spektralsignalene i cardiotonpillegruppen fullstendig forsvinner. Til sammenligning med kontrollgruppen er det en signifikant forskjell (p<0,01) og «clearance»-hastigheten til cardiotonpillen er 100 %.

De ovenfor nevnte eksperimenter viser at kardiotonpillen har en effektiv virkning for «clearance» av superoksidanioner fremstilt ved hjelp av xantin-xantinoksidasesystemet og hydroksyradikaler fremstilt ved hjelp av H202-Fe<2+->systemet.

Cardiotonpillens virkning på frie radikaler ved cerebral iskemi Reinfusjonsskadet vev i rotter

Fremgangsmåten: 30 SD-rotter ble tatt og fordelt randomisert i tre grupper som er den forestilte operasjonsgruppen (en operasjon utføres men blodårene og nervene ligeres ikke), den cerebrale iskemi infusjonsmodellgruppen og cardiotonpillegruppen (4 g/kg). Etter den tredje dagen med kontinuerlig intraperetonal (lp) administrering og to timer etter administreringen på den tredje dagen ble rottene bedøvet med 20 % etyluretan og deres oppgitte arterier på begge sider av nakken og vagusnerver ble separert og ligert. Etter en 30 min. reinfusjon ble hodene kuttet av og hjernene oppnådd. Omtrent 500 mg kortikalvev fra deres venstre hjerner og hypokampusvev på begge sider ble tatt og puttet i flytende nitrogen for homogenisering. Etter homogenisering med frysende fysiologisk saltoppløsning ble homogenatet sentrifugert. Supernatanten ble tatt og aktivitetene av CAT og SOD og innholdet av MAD og GSH bestemt.

Resultatene: Se tabell 29. (1) Cardiotonpillens virkning på CAT-aktiviteten og innholdet av GSH i hjernevev. Aktivitetene av CAT i hjernekorteks og hippokampusvev og innholdet av GSH i hjernekorteks i den cerebrale iskemirefusjonsmodellgruppen er mye lavere enn den forestilte operasjonsgruppen. Både aktiviteten av CAT i hippokampusvev og innholdet av GSH i hjernekorteks i cardiotonpillegurppen er signifikant større enn i modellgruppen. (2) Cardiotonpillens virkning på SOD-aktiviteten og innholdet av MD A i hjernevev. Aktiviteten av SOD i hjernevev i modellgruppen er signifikant lavere enn den i den forestilte operasjonsgruppen mens innholdet av MDA er signifikant høyere. Aktiviteten av SOD i hjernekorteks og hippokampusvev i cardiotonpillegruppen øker signifikant mens innholdet av MDA senkes signifikant.

Konklusjonen: Etter cerebral iskemireinfusjon er innholdet av MDA i hjernevev økt, mens innholdet av GSH synker. Aktiviteten av CAT og SOD, to viktige enzymer for frie oksygenradikaler i vevet synker signifikant, hvilket viser at gjennom serebral iskemireinfusjonsforløpet forekommer en stor mengde oksygenfrie radikaler som følge av funksjonssvikten i det frie radikal-«clearance»-systemet. Dette medfører lipidperoksideringen og deretter medfører hjerneskade. Cardiotonpillen kan øke innholdet av MDA i hjernekorteks og hippokampusvev i reinfuserte rotter og øke innholdet av GSH og aktiviteten av CAT og SOD i stor grad hvilket viser at cardiotonpillen har funksjonene for markert å motstå reaksjonene av frie oksygenradikaler, kontrollere lipidperoksideringen og beskytte skadede hjerneceller for å forårsake iskemireinfusjon.

Antioksideringen av cardiotonpillen i kronisk leverskade

Fremgangsmåten: CCL4-mye-fett-lavt-protein-indusert mild kronisk leverskademodell i Wistar-rotter ble brukt. I cardiotonpillegruppen ble cardiotonpillen perfuseret i rottenes mage ved dosen 4 g/kg mens i den normale gruppen og modellgruppen ble perfuseret med samme mengden fysiologisk saltoppløsning. SOD-aktiviteten ble bestemt ved anvendelse av xantin-oksidasemetoden mens innholdet av MDA ble bestemt ved anvendelse av den forbedrede tiobarbitursyremetoden.

Resultatene: Se tabell 30. Sammenligning av modellgruppen med den normale gruppen degraderes SOD-aktiviteten mens MDA øker. I cardiotonpillegruppen øker imidlertid SOD-aktiviteten mens MDA degraderes, hvilket gjør at Cardiotonpillegruppen går tilbake til det normale.

Konklusjonen: MDA er det viktigste degraderingsproduktet av lipidperoksideringen. MDA kan skade stygt strukturene til cellemembranen og deretter leverceller. SOD er en fanger av superoksidanionfrie radikaler og kan døyve lipidperoksideringen forårsaket av frie radikaler. Cardiotonpillen kan signifikant øke virkningen av SOD og senke innholdet av MDA som vil degradere lipidperoksideringsnivået og lette leverskaden.

DSP er ikke mutagent

Det ble undersøkt hvorvidt DSP er mutagent i Ames-analysen. DSP var ikke mutagent. Se tabell 31 nedenfor.

Produksjon av råmedikamenter

1. Dan shen

(1) Kvalitetskontroll

Dan Shen råmedikament ble samlet fra produksjonsområdene gjennom Kina. Kjemisk analyse ble utført på de prøver fra ulike baser for deres hovedkomponenter. Resultatene viste at kvaliteten av Dan Shen fra et område kalt Shangluo var det beste av alle og det viste at klimaet i Shangluo er mest egnet for dyrking av Dan Shen. De aktive ingrediensene i Dan Shen slik som tanshinon og salviansyre A ble godkjent som best i kvalitet.

(2) Topografi

Shangluo er geografisk lokalisert ved østlig breddegradp 108°34'20"~111°1'25" og nordlig breddegrad 33°2'30"~34°24'40" med gjennomsnittelig høyde over havet på 900 meter. Regionen er et område med lave til middels høye fjell og er fri for forurensninger. De ikke-forurensede rene luftforholdene gjør det ideelt for vekst av medisinske planter.

(3) Klima

Det er varmt og delvis fuktig i klima, typisk for fjellområdene i overgangssonen fra subtropisk til temperert. Påvirket av den sørøstlige monsun har den tydelig inndeling i årstider og en stor mengde regn. Regnnedbøren pr. år i dette området er beregnet til 733,9-899 mm. Solskinnsperiodene er omkring 1874,1-2185 timer i året med en årlig solutstråling på 119,57-124,36 kilokalorier/cm<2>. Temperaturen varierer fra 18°C til 40,8°C. En frostfri periode varer i 198-218 dager i året.

(4) Jordsmonn

80 % av jordsmonnet i Shangluo er sandholdig, det meste av det dyrkbare landet omfatter nøytral og lett alkalisk jordsmonn med en pH-verdi på 6,5-8. Innen 0-20 cm av kultiveringslaget omfatter jordsmonnsnæringsstoffene av de følgende: 1,76 % organisk materiale; 0,085 % nitrogen; 18 ppm raskt-effektivt fosfor; 136 ppm raskt-effektivt kalium; og 60 ppm alkalisk hydrolysert nitrogen. Tungmetaller og andre toksiske materialer inneholdt i jordsmonnet overskrider ikke jordbruksstandardene satt av landet. Regionen er rik på planter og dyr. Lokale bønder anvendes organisk gjødsel.

(5) Tungmetaller:

De åtte metallene, inkludert bly, kadmium, kvikksølv, arsenikk osv., pestisidrestene, luft og vann tilfredsstiller alle landets miljøstandarder.

(6) Standardisering

Plantingen og pløyingen av Dan Shen følger standarden for Good Agriculture Practice (GAP). Teknologisk «know-how» som er relevant for dyrkingen av Dan Shen er kompillert i en brosjyre og distribuert blant Dan Shen-dyrkere i basen. Gjennom plantesesongen sendes teknikkere til området for å gi dyrkere trening på stedet og tilby teknisk støtte for så å standardisere plantingen av Dan Shen i en større plantasjelignende skala. (7) Shangluo-produksjonsbasen har dyrket og kultivert 20 forskjellige Dan Shen-sorter. Forskjellige Dan Shen ble observert og sammenlignet i deres vekstsituasjon, utbytte, utseende og kjemiske komponenter i tre år. De beste kvalitetssortene ble valgt for storskala plantasje. (8) Vevskultivering og kloneteknologi tilpasses i Dan Shen-kultiveringen for å akselerere prosedyren og korte ned vekstsirkelen. (9) Etter en 30-dagers periode med testrørplanting tas en første reproduksjonsprosedyre. I det minste i 40 dager før rotperioden. Rotperioden vil ta ytterligere 10 dager for at plantene skal danne og berike sine røtter. Rotdannelseshastigheten når vanligvis 90 % eller mer. Planten kan deretter overføres til planteskolen hvor avansert sprøytevanningsutstyr og betingelser er kontrollert ved hjelp av computerteknologi. Plantene kan transplanteres til områder på utsiden etter 1 måneds dyrking i planteskolen. (10) I henhold til ekspertene er den kultiverte Dan Shen fra produktbasen ikke bare høy i kvalitet men også produktiv for rotproduksjonen (50 % mer i rotvekt enn de fra andre områder) og høy kjemisk sammensetning (70 % høyere i aktive medikamentingredienser enn prøver fra andre steder).

2. Naturlig Borneol

(1) Vekstbetingelser

Vekstområdene for naturlig borneol er Xinhuang landet i Hunan provinsen, Kina, en region med middels høye fjell ved 300-600 meter over havet. 60 % av arealet er dekket av skog. Landet består av gul og rød sandjordsmonn med pH 5-6. Det finnes ingen luft- eller vannforurensning i regionen.

(2) Biologisk karakterisering av treet

Ekstremt sterke vekstevner vokser det i buskasområdet, 300-400 trær pr. mu (tilsvarer 666,7 m<2>); deler ovenfor bladforgreninger samles; netto utbytte er 1000 kg/mu.

(3) Reproduksjon og transplantering

Anvend «grafting»- og kutt-teknologi for reproduksjon. Planten dyrkes i planteskolehagen i løpet av det første året og transplanteres til feltet om våren det andre året. Området trenger ikke å være gjødslet og jordløsnet periodisk. (4) Planten kan vokse opptil 30 cm i høyde og 80-100 cm for den største diameteren. Den inneholder naturlig kamfer i forskjellige deler av planten: blader, forgreninger, stamme og røtter. Blant alle inneholder bladene det meste av kamferinnholdene. (5) Borneol-type kamfer fra Xinghuan er én av de naturlige variantene av Cirnamonium glandulferm (vegg) Noes. Kamfertreet varierer i innhold av kamfer og borneol. Noen har lite borneol, mye kamfer mens andre har mye borneol og lite kamfer. Gjennom en analyse med større mengder av prøver og mange HPLC-analyser valgte vi endelig en type kamfertre som inneholdt over 80 % borneol med mindre urenheter.

3. Radix Notoginseng

a. Frø av planten

(1) Bestemmelse av Radix Notoginseng

Med PCR-reaksjonen for molekylmassemarkering observeres farget, Radix Notoginseng har sin karakteristiske DNA-fingeravtrykk-

(2) Form og egenskaper

Radix Notoginseng frø har en rund sirkulær kropp. For frø fra forskjellige vekstperioder har Radix Notoginseng 2-år eller 3-år frø. 2-år frøet er 0,45-0,55 cm i diameter og 95-103 g i vekt for tørket korn. 3-års frø er 0,54-0,65 cm i diameter og 98-109 g i vekt for dets tørket korn.

(3) Egnet temperatur for frøspiring

Den passende temperaturen for spiring av frø er 10-30°C, den ideelle temperaruren er15-20°C.

(4) Vanninnhold

Mengden vanninnhold bør være 60-70 % dersom vanninnholdet er under 20 % i et lengre tidsrom vil frøene tape levedyktighet.

(5) Dvale

Frøene har en tendens til å gå i dvale i 45-60 dager etter innsamling.

(6) Levetid

Frøene har en levetid på 15 dager i naturlig tilstand etter at de er samlet.

(7) Krav for lagring av frø

Frø for lagring bør samles fra plantene som vokser mer enn to år og treet bør dyrkes stivt i velstand for deler over jorden og sykdomsfrie. Det anbefales at frøene samles fra 3-års planter.

(8) Styring av frøreservatområdet

Frøreservatsområdet bør styres bedre enn de regulære produksjonsfeltene, kontaminerte planter bør alltid fjernes, skadedyr bør ikke komme i kontakt med knoppene under enhver omstendighet. I løpet av spiring av knoppene og blader bør 3000 ppm YunDa-120 og 400 ganger løsningen av Yang Kang biologisk gjødsel sprayes på to ganger. I løpet av fluorescens- og fruktperioden sprayes fytokinin.

(9) Høsteperiode for frøet

Høsteperioden av Radix Notoginsengfrø er fra slutten av oktober til begynnelsen av desember.

(10) Fremgangsmåte for frøinnsamling

Samlingen av frø velges avhengig av frøenes modningsnivå. Frøene fra treet som vokser sterkere vil samles og lagres separat. Basen forhindrer sterkt samling av umodne planter.

(11) Bearbeiding

Planter vaskes umiddelbart etter innsamling mens fruktkjøtt og blekede frø plukkes ut. Tørk plantene i solen etter vasking.

(12) Lagring

Anvend 300 ganger løsning av 58 % metalaksylmanganholdig sink flytende løst for å behandle Radix Notoginseng frø i 30 min. La overflaten av frøene tørke og lagre frøene med våt sand inneholdende 20 % vann. Dette er et kritisk trinn i prosessen.

(13) Pakking

Endelige produkter pakkes i ukontaminerte beholdere. Det bør være tegn som indikerer datoen for innsamling, bearbeiding og produktets prøvenummer.

(14) Transport

Rene, vannsikre og ventilerte transportbærerinstrumenter bør anvendes for transport for å forhindre at produktet kontamineres med giftige materialer. Det tar mer enn 8 timer for overføring frøproduktet bør være med den våte sanden.

(15) Levedyktighetstest av frøene

Anvendelse av TTC-fremgangsmåtene: vei nøyaktig 1 g tetrasolumpulver og løs dette i 1000 ml destillert vann for å lage 0,1 % TTC-løsningen. Neddykk prøven i løsningen og oppbevar den i 24 timer, ta den ut og del den i to og plasser en halvdel i en dyrkningsskål. Anvend den fremstilte 0,1 %-TTC for å farge prøven i 30 min. Frøenes levedyktighet kan bestemmes av fargen på frøene.

(16) Inspeksjon av skadedyr

i. Observer frøet med det menneskelige øyet mens man plasserer 500-1000 prøvepelletter på et hvitt papirark eller glass. Dersom uvanlige prikker eller skadedyr synes på overflaten av prøven kan kontamineringen bestemmes. Kontaminerte prøver bør tas til side og identifiseres for kontamineringsnivå. ii. Kutting og inspeksjon: anvend en skalpell for å kutte og åpne to prøvesett hver inneholdende 1000 prøver. Beregn antallet kontaminerte prøver for å bestemme kontamineringsnivået. iii. Lukt for å inspisere prøver: plasser dem i hånden og undersøk dem med nesen for enhver muldlukt. Eller simpelthen etterlatt prøve i en kopp inneholdende varmt vann (60-70°C) og dekket i 2-3 min., hell ut vannet og lukt på frøene. Frøene bør sende fra seg en delikat duft, om ikke er det sannsynligvis kontaminert.

(17) Fargeinspeksjon

Et ikke-kontaminert frø bør ha en lys gul eller hvit farge.

(18) Mikroskopinspeksjon

Ta ut 5 testprøvesett tilfeldig (hver prøve inneholder ikke mindre enn 50 frø), plasser prøvene i en dyrkningsskål i 24 timer. Observer dem under et mikroskop for å påvise enhver patogen bakterie, i så fall beregn kontamineringsnivået.

b. Kimplanting av planten

(1) Temperatur for spiring

Temperaturen for spiring av Radix Notoginseng er 1-20°C, den ideelle temperaturen er15°C.

(2) Vanninnhold

Vanninnholdet i jordsmonnet som anvendes for spiring av planten er 20-25 %.

(3) Lagring

Utviklingen av Radix Notoginseng fra hvilende knopper til spiring krever 90 dager dvaleperiode. 100 ppm gibberellin kan forkorte Radix Notoginsengs dvaleperiode.

(4) Foredling

Radix Notoginsengs foredlingsperiode er fra begynnelsen av desember til slutten av januar. Under foredling bør røttene håndteres forsiktig. Plant umiddelbart etter foredling.

(5) Transportering

Radix Notoginseng kan ikke transporteres over en lengre distanse uten å bli skadet. Om dette er uunngåelig bør Radix Notoginseng plasseres i en ventilert beholder med jord uten direkte eksponering for sollys.

(6) Kvalitetsinspeksjon

i. For vekt av hver enhet velg 300-500 kimplanter som prøver, putt hver 100 kimplanter i en gruppe, vei dem på balansen og beregn enhetsvekten. ii. For pestisidinspeksjon: sett opp fire grupper prøver hver inneholdende 100 kimplanter. Plasser prøver på en glasskål og observer prøvene med det menneskelige øyet eller 5-10 gangers forstørret linse for å sjekke pestisidet deres. iii. Sett opp fire grupper prøver hver inneholdende 100 planter, del prøvene for en observasjon under mikroskop.

c. Dyrking av kimplanten

(1) Feltbetingelse

Radix Notoginseng kimplanter dyrkes i best kondisjonert areal. Basen anvender sentrert kultur og storskala dyrkningsmetode.

(2) Miljø

Arealet er totalt fritt for forurensninger. Luftkvaliteten er over nivå 2 i GB 3059-96-standarden.

(3) Vannkilder

Vannkildene består av regnvann, grunnvann og naturlig rennende vann. Vannkvaliteten i området er monitorert med GB 5084-92-standarden.

(4) Jordsmonn

Radix Notoginseng kan ikke plantes i mudret jordsmonn, mengden av tungmetaller i jordsmonnet som velges for Radix Notoginseng må være innenfor relevant standard i landet.

(5) Ideelt jordsmonn

For et forventet godt resultat valgte vi surt jordsmonn (pH 5,5-7,0) med en stigning på mer enn 15°. Et nivå på ikke mer enn 1600 meter over havet nivå mer enn 1600 meter over havet bør være 10-20 % solskinn.

(6) Temperatur

I løpet av spiringsperioden bør den atmosfæriske temperaturen være 20-25°C og jordtemperaturen 10-15°C. I løpet av støtteperioden er den beste atmosfæriske temperaturen 20-25°C og den beste jordsmonnstemperaturen 15-20°C.

(7) Vanninnhold

Vanninnhold i jordsmonnet bør være ved 25-30 %.

(8) Jordsmonnsklargjøring

Jordsmonnsplotting bør repeteres tre ganger før planting og jordsmonnet bør eksponeres for sollys for å hjelpe til med utryddingen av bakteriell substans i jordsmonnet.

(9) Håndtering med jordsmonn

For å forebygge rotskade anvendes 75-100 g lime/m<2>før transplantering.

(10) Konstruksjon og skyggehåndtering

Skyggen er 1,8 m over bakken med en 2 m dyp grøft under bakken. Sollyspenetrering er best ved 8-10 % dersom det er i et areal som er mer enn 1600 meter over havet eller 10-15 % dersom det er mer enn 1600 meter. Bakken bør være flat; dyplag av jorden bør være løs; mens overflatenivået på jorden bør være fast. Plantesesongen er best ved slutten av desember til slutten av januar. Før planting bør frøene neddykkes i 58 % metalloksylsink (500-800 x) eller 1,5 % antimycin (200 ppm) i 30-50 min. og tippes ut for å tørke. Dette er for å beskytte planten for sykdommer (dekkede frø trenger ikke å gjennomgå den ovenfor nevnte fremgangsmåte). Plantetettheten skal være 4 x 5 cm eller 5 x 5 cm med 100-200 tusen frø pr. mu land. Anvend spesialverktøy for å danne en grunn renne og anvend maskin eller hånd for å så og plante. Frø dekkes fullstendig med fin jord.

Etter alt dette utføres gjødsling, vanning og lukeoppgaver. Ugress bør elimineres hele tiden. Dersom skyggen ødelegges bør den repareres umiddelbart for å forsikre korrekt penetrering av sollys. Naturlig gjødsel inkluderer fjærfeavfall, ovnsstøv og benstøv (humant avfall bør ikke anvendes).

d. Radix Notoginseng-kultivering

(1) Topologi

Grunnen er best med en moderat helning under 15° og en god solskinnseksponering.

(2) Jordsmonnsstruktur

Det er best om grunnen er dypt anbragt med løs og sandjordsmonn.

(3) Jordsmonns pH bør være ved 5,5-7.

(4) På forhånd plantet avling

Korn, hvete og bønner er plantet på forhånd i nye områder for å unngå j ordsmonnsdestruksj on.

(5) Høyde over havet

1400-1800 meter over havnivået nær en høyde på 23,5° er den mest egnede lokaliseringen av Radix Notoginseng-området for kultivering.

(6) Solskinn

Radix Notoginseng er en plantetype som krever kun 8-20 % sollys. Mengden sollys bør varieres med hensyn til dens ulike vekstperioder. For mye sollyseksponering vil imidlertid resultere i stillestående planter.

(7) Vanninnhold

Vanninnholdet i jordsmonnet bør være 25-30 %.

(8) Gjødsel

Organisk gjødsel anvendes sammen med gjødselforbindelser, mikronæringsgjødsel eller sporelementgjødsel.

(9) Temperatur

Gjennomsnittstemperaturen er beregnet ved 15-18°C i løpet av året i Radix Notoginseng-området. I løpet av spiringsperioden bør atmosfærisk temperatur være, mest egnet, ved 20-25°C og jordsmonnstemperaturen 15°C. I løpet av næringsutvikling og blomstringsperiode bør temperauren holdes ved 25°C. Dersom temperaturen er under 15°C påvirkes blomstringstiden.

(10) Feltdeling

Før kultivering bør feltet pløyes og løsnes tre ganger inntil strukturen blir pulverisert.

(11) Jordsmonnshåndtering

Før såing og transplantering påføres 75-100 g hurtig lime til jordsmonnet for steriliseringsformål.

(12) Plantebeddstandarder

Flat bakkejordsmonnsbedd på 20-25 cm i høyde ved høyingsarealet bør være 15-20 cm. Vidden på beddet er mellom 120 og 140 cm i teglsteinsform. Jordsmonnet ved bunnen av basen bør være løst og på toppen bør den være fast for bedre penetrering.

(13) Frøbløtlegging

I løpet av transplanteringen bløtlegg frø i 30-50 min. i 58 % metalaksyl (500-800 x) og tørk deretter, dette vil forebygge planten for sykdommer og eliminere skadedyr.

(14) Plantetetthet

Hold en distanse på 10 x 12,5 cm - 10 x 15 cm i plantetetthet. Det er 26-32 tusen planter pr. mu.

(15) Fremgangsmåter for transplantering

Spirene plantes i den samme retning for håndteringsformål. I tilfelle av hellende grunn plantes spirene fra den lave enden til den høye bakken. Den første spiringsraden vender oppover mens den andre raden vender nedover. Knopper vendes også oppover og bunnen vendes innover.

(16) Jordsmonnsdekking

Anvend pulverisert, løs og fuktig jordsmonn for å dekke spirene fullstendig uten å eksponere røttene eller knoppene.

(17) Gjødsling

Anvend fjærfeavfall, ovnsaske, benaske, kalsiummagnesiumfosfat osv. som spesialisert gjødsel.

REFERANSER

1. US Pat. No. 5288485 «vasodilating agent»

2. US Pat. No. 5433957 «vasodilating agent»

3. US Pat. No. 5776463 «Method of reducing stress and circulatory heart disease with freeze-dried borage petal extracts» 4. Yang GY et al., «Clinical studies on the treatment of coronary heart disease with Valeriana officinalis varlatifolia» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(9): 540-2, 1994 5. Wu Y «Clinical study on Kintongkang capsule in treating angina pectoris of coronary heart disease» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(7): 395-8, 1990. 6. Liu KY et al., «Clinical observation on treatment of 45 angina pectoris patients of coronary heart disease with taponin» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 15(11): 649-51, 1995. 7. Hu JX et al., «Clinical and experimental study of shenshao tongguan pian in treating angina pectoris of coronary heart disease» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(10): 596-9, 1990. 8. Li Y et al., «Effects of Kuo-guan granule on plasma zinc, copper and erythrocyte GSH-Px (glutathione peroxidase) in patients with angina pectoris» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(6): 348-50, 1990. 9. Wang B et al., «406 cases of angina pectoris in coronary heart disease treated with saponin of Tribulus terrestris» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(2): 85-7, 1990. 10. Jin C et al., «Effect of Astragalus membranaceus on erythrocyte sodium content and sodium transport in the coronary heart disease» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih,ll(ll): 651-3, 1991. 10. Jiang HW et al., «Clinical study in treating qi-deficiency and blood-stasis syndrome of angina pectoris with qi xue granule» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 12(11): 663-5, 1992 11. Wang XF et al., «Clinical observation of wenxin decoction in treating 82 patients with spontaneous angina pectoris» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(4): 201-3, 1996. 12. Lei ZY et al., «Action of Astragalus membranaceus on left ventricular function of angina pectoris» Chung Kuo Chung Hsi 1 Chieh Ho Tsa Chih, 14(4): 199-202, 1994. 13. He W et al., «Effects of Kuo guan powder on immunologic functions in patients with ben-xu biao-shi syndrome in iskemic heart disease» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(4): 213-5, 1989. 14. Chen K et al., «Clinical study on the effect of shuxuening tablet in treatment of coronary heart disease» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(1): 24-6, 1996. 15. Zhang H et al., «Clinical study on effects of buyang huanwu decoction on coronary heart disease» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 15(4): 213-5, 1995. 16. Zhang XL et al., «Preliminary study of rose shu-xin oral liquid in the treatment of angina pectoris in coronary heart disease» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 12(7): 414-6, 1992. 17. Hu JX et al., «Clinical and experimental study of shenshao tongguan pian in treating angina pectoris of coronary heart disease» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih 18. Zhu W et al., «Protective effect of danshen during myocardial iskemia and reperfusion: an isolated rat heart study» American Journal of Clinical Medicine, 18(1-2): 19-24, 1990. 19. Li YY, «Clinical and experimental study on the effect of xue mai tong on coronary heart disease» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(2): 79-81, 1989. 20. Cai PY et al., «A clinical study of hehuantang in treating coronary heart disease» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(4): 204-6, 1996. 21. 22 LinQC, «A clinical study of guan mai le in the treatment of coronary heart disease» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(5): 280-2, 1989. 22. Li SQ et al., «Clinical observation on the treatment of iskemic heart disease with Astragalus menbranaceus» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 15(2): 77-80, 1995. 23. Lu BJ et al., «Effect of sheng mai san on lipid peroxidation in acute myocardial infarction patients» Chung Kuo Chung Hsi I Shieh Ho Tsa Chih, 14(12): 712-4, 1994 24. Wang S et al., «Effects of Codonopsis pilosulae on the synthesis of thromboxane A2 and prostacyclin» Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(7): 391-4, 1990. 25. Guan M et al., «Observation on the treatment of coronary heart disease by kuo guan qu yu ling» Journal of Traditional Chinese Medicine 10(1): 49-53, 1990. 26. «Fufang Danshen Pian» Pharmacopoeia of the People's Republic of China. English Edition 1997. Volume 1, 280. 27. Zhu HG, «Clinical study on xinkening in treating asymptomatic myocardial iskemia in coronary heart disease» Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(4): 213-5, 1995. 28. Chiang WT et al., «Effects of «Danshensu» and other two water-soluble components of salvia miltiorrhiza on dog iskemic myocardium and isolated pig coronary artery» Acta Acad Med Prim Shanghai 1982; 9: 13-19. 29. Sun Xi-ming et al., «Studies on a new pharmacological action of anextract of Danshen (Salvia miltiorrhiza)» Chin Med Herb 1991; 22:20-23. 30. Chen ZH et al., «Studies on effects of «Danshensu» on experimental microcirculatory disturbances and plasm lactic acid concentrations» Acta Acad Med Prim Shanghai 1987; 14: 25-29. 31. Huang C et al., «Effects of Panax Notoginseng Saponins on myocardial iskemia and reperfusion injury in conscious rabbit» Chin Bull Pharmacol 1991; 7: 190-3. 32. Shi L et al., «Effects of total saponins of Panax Notofinseng on increasing PGI2 in carotid artery and decreasing TXA2 in blood platelets» Acta Pharmacol Sin 1990; 11: 29-32. 33. Xu W et al., «Effects of menthol and borneol on the distribution of sulfadiazine sodium and Evan's blue in the rat and mouse brain» Pharmacol Chin Med Clin 1995; (6): 31-33. 34. Chen TF et al., «Enhancement of absorption of tetramethylpyrazine by synthetic borneol» Acta Pharmacol Sin 1990; 11:42-44. 35. Li X et al., «Protective effects of Panax notoginseng saponins on experimental myocardial injury induced by iskemia and reperfusion in rat» Acta Pharmacol Sin 1990; 11:26-29. 36. Pan JG et al., «Chemical Studies on Essential oils from six Artemisia Species» Chin J Chin Mater Med 1992; 17: 741-6. 37. Wu YZ et al., «An assessment of Radix Silviae Miltiorrhizae in promoting blood circulation by removing blood stasis» Acta Nanjing Univ Trad Chin Mater Med 1995; 11:35-6. 38. Wang NS et al., «Experimental studies of «Benifits of Borneol as an Assistant or a guide», J Trad Chin Med 1994; 35:46-7. 39. Li CZ et al., «Anti-coagulation effect of Radix Silviae Miltiorrhizae» Chin J Integr Med 1983; 3: 297-9. 40. Li CZ et al., «An experimental study on thrombotic inhibition effect of Radix Silviae Miltiorrhizae» Acta Acad Med Prim Shanghai 1979; 6:145-9. 41. Mo QX et al., «Dynamics of 3H-Borneol» Propriet Trad Chin Med Res 1982; 8:5-7. 42. Zheng RX et al., «Preservation effect of Radix Silviae Miltiorrhizae on myocardial iskemia induced by coronary ligation in mice» Chin J Integr Med 1992; 12:424-6.

Claims (4)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av et preparat som er i stand til å behandle kronisk stabil angina pectoris, karakterisert vedat fremgangsmåten omfatter trinnene: (a) ekstrahere Radix Saliviae Milthorrhizae og Panax Notoginseng separat ved refluks i varm vann og separat filtrering; (b) konsentrere filtratene separat; (c) raffinere konsentratene separat ved anvendelse av harpikskolonner og konsentrere, og oppnå raffinert vannløselig ekstrakt av Radix Saliviae Milthorrhizae og raffinert vannløselig ekstrakt av Panax Notoginseng; (d) blande de raffinerte, vannløselige ekstraktene fra trinn (c) med passende mengde Borneol.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert vedat

(1) ekstrahering av vannløselige komponenter fra Panax Notoginseng omfatter følgende trinn: (a) fortynne urter i 5-7 timer i vann; (b) ekstrahere vannløselige komponenter fra Panax Notoginseng ved koking i en tank ved et lufttrykk på mellom 0,04-0,06 mPa i 2 timer (c) repetere ekstraksjonen under tilsvarende betingelser i 1,5 time; (d) filtrere ekstraktet med et nett med maskevidde på 100 mesh (e) raffinere filtratet ved å anvende makropore-adsorbsjonsharpiks og eluere med etanol; (f) konsentrere de eluerte ekstraktene under dekomprimerte betingelser med lufttrykktilførsel på 0,04 - 0,06 mPa og vakuum på -0,076 -0,088 mPa inntil tettheten er 1,33-1,35;

(2) ekstrahering av vannløselige komponenter fra Radix Saliviae Miltorrhizae omfatter de følgende trinn: (a) fortynne urter i 5-7 timer i vann; (b) ekstrahere vannløselige komponenter fra Radix Saliviae Miltorrhizae ved koking i en tank med lufttrykk mellom 0,04-0,06 mPa i 2 timer; (c) repetere ekstraksjonen under samme betingelser i 1,5 limer; (d) filtrere ekstraktet med et nett med maskevidde på 100 mesh (e) konsentrere filtratet under dekomprimerte betingelser med lufttilførsel på 0,04 - 0,06 mPa inntil 1 kg opprinnelig mengde urter blir til en liter; (f) presipitere konsentratet med etanol; (g) filtrere den etanolpresipiterte løsningen med et nett med maskevidde på 100 mesh; (h) konsentrere filtratet under dekomprimerte betingelser med lufttrykktilførsel på 0,04- 0,06 mPa og vakuum på -0,076 -0,088 mPa inntil tettheten er 1,33-1,35; (i) raffinere konsentratet ved polyamidkromatografi og eluere med etanol; (j) konsentrere de raffinerte ekstraktene til tettheten på 1,33-1,35;

(3) og som ytterligere omfatter å produsere pillen som består av de følgende trinn: (a) blande ekstrakter fra Panax Notoginseng, ekstrakter av Radix Salviae Miltorrhizae, syntetisk borneol og polyetylenglykol 6000 ved et forhold på 4,0:20,6:1,9:79,5; (b) smelte blandingen; (c) fremstille piller av den smeltede blandingen ved å anvende en dryppmaskin med følgende karakteristika: temperaturen i dryppannen er konstant 89-93 °C, avkjølingsløsningen er flytende parafin med en temperatur lavere enn 8 °C, den indre diameter på drypphodet er 1,8 mm, den ytre diameter på drypphodet er 2,4 mm, avstanden mellom drypphodet og overflaten av avkjølingsløsningen er 15 cm, (d) sentrifugere pillene ved 800-1100 rpm i 15 minutter for å fjerne oljer.

3. Fremgangsmåte for fremstilling av preparat ifølge krav 1 eller 2, som er aktivt for behandling og forebygging av kardiovaskulær sykdom,karakterisert vedat nevnte fremgangsmåte ytterligere omfatter trinnene: (e) fraksjonere blandingen ved hjelp av høyeffekt flytende kromatografi (HPLC), (f) sammenligne retensjonstiden for fraksjonene av blanding med retensjonstiden for saponin RI, saponin Rgi og saponin Re, og (g) bestemme de aktive fraksjonene av blandingen ved å undersøke hvorvidt retensjonstiden er ekvivalent med tilbakeholdstiden for saponin RI, saponin Rgi og saponin Re.

4. Fremgangsmåte for fremstilling av preparat ifølge krav 1 eller 2, som er aktivt for behandling og forebygging av kardiovaskulær sykdom,karakterisert vedat fremgangsmåten ytterligere omfatter trinnene: (e) fraksjonere blandingen ved hjelp av tynnsjiktkromatografi (TLC), (f) sammenligne posisjonen og fargen til fraksjonene i blandingen med posisjonen og fargen til 3,4-dihydroksyfenylmelkesyre og protokatechuinaldehyd, og (g) bestemme om blandingen inneholder fraksjonene for hvilke posisjon og farge er ekvivalent med posisjonen og fargen på 3,4-dihydroksyfenylmelkesyren og protokatechuinaldehydet.