CN103954727A

CN103954727A - 金鸣片的质量控制检测方法

Info

Publication number: CN103954727A
Application number: CN201410204452.1A
Authority: CN
Inventors: 毕丽娟; 李海燕; 李樱; 李军红; 李秀凤; 张爱均
Original assignee: SHANDONG HONGJITANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SHANDONG HONGJITANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-05-15
Filing date: 2014-05-15
Publication date: 2014-07-30

Abstract

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种金鸣片质量控制检测方法，本发明在原检测标准基础上改进了金鸣片处方中薄荷脑薄层色谱鉴别方法，增加了金鸣片处方中丹参高效液相色谱法含量测定项。本发明设计的检查项目合理，精密度及重现性好，其方法考察验证中，丹酚酸B平均回收率为97.69％，n＝6，RSD＝2.87％；重现性考察中，丹酚酸B的RSD为1.205％；稳定性考察中丹酚酸B相对标准偏差RSD为1.91％，本发明用于金鸣片质量控制，能够提高产品质量的可控性。

Description

金鸣片的质量控制检测方法

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种金鸣片的质量控制检测方法。

背景技术

金鸣片功能主治：清热生津，开音利咽。用于慢性咽炎，慢性喉炎，咽喉肿痛，声哑失音，用声过度后的咽干、喉痒、发声费力、起声困难等症。

金鸣片原质量标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第七册。原标准中仅有药材牛黄、薄荷脑薄层色谱鉴别，此项为定性检测项目，不能保证对金鸣片进行更精确的质量控制与检测，例如金鸣片中的丹酚酸B的成分并没有相关的文献披露其测定方法。

原薄荷脑薄层色谱鉴别的展开剂为石油醚-醋酸乙酯-苯（18:2:4），其中苯是有毒试剂，职业活动中，苯主要以蒸气形态经呼吸道进入人体，短时间吸入高浓度苯蒸气和长期吸入低浓度苯蒸气均可引起作业人员身体损害。短时间大量吸入可造成急性轻度中毒，表现为头痛、头晕、咳嗽、胸闷、兴奋、步态蹒跚。此时如继续吸入则可发展为重度急性中毒，病人神志模糊、血压下降，肌肉震颤，呼吸浅快、脉搏快而弱。抢救及时经数小时或数天可恢复健康，但严重者也可因呼吸中枢麻痹死亡。长期低浓度接触可发生慢性中毒，症状逐渐出现，以血液系统和神经衰弱症候群为主，表现为血白细胞、血小板和红细胞减少、头晕、头痛、记忆力下降、失眠等。严重者可发生再生障碍性贫血，甚至白血病、死亡。

因此需要针对上述的方法进行改进，设计一种新的方法，在不影响检测结果的同时，降低操作人员的中毒风险。

丹酚酸B对多种心、脑血管疾病及肝肾功能损伤和肺纤维化等组织器官病变均有明显的保护作用，业已得到人们日益广泛的关注。丹酚酸B在中药中的含量定量检测的相关文献也鲜有披露。

而且由于对丹酚酸B的研究起步较晚，有关其含量测定的报道并不多见，曾有文献报道采用反相高效液相色谱法对鼠尾草属植物中所含的丹酚酸B进行定量测定，其样品预处理方法为：先用水浸泡过夜-水热提30分钟-盐酸酸化-乙酸乙酯萃取-浓缩-甲醇溶解并定容，其色谱分离采用双泵梯度法。但是目前的研究结果表明，作为一种强抗氧化剂的丹酚酸B其本身的化学结构并不稳定，在加温、光照、潮湿和暴露在空气的条件下，丹酚酸B会发生明显的降解而其中温度的影响尤为突出，在上述的文献方法中，样品需要经较长时间的高温，影响测定结果的可靠性，且其预处理的过程比较繁琐，可操作性较差。

CN1435688A披露了一种丹参中丹酚酸B的定量测定方法，该方法包括下述的步骤：采用超声波处理-水提取法对样品预处理，超声波处理温度为0-8℃；用C₁₆、C₁₈、C₈键合相硅胶为固定相，以甲醇-乙腈-水-甲酸（三氟乙酸）或乙腈-水-甲酸（三氟乙酸）为流动相；样品进行反相色谱分离，紫外检测。该发明的样品预处理方法具有一定的专一性和良好的回收率，（＞95%），与上述的液相色谱测定相配合，可简便、可靠地完成丹参生药和固体制剂、注射剂中丹酚酸B的定量测定，其各项方法学指标均可满足2000版中国药典的规定。上述文献方法中，样品需要在0-8℃超声波处理，可操作性较差，而采用本发明的方法，常温即可进行提取，利于检验。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种精密度高，重现性好，稳定性好的金鸣片的质量控制检测方法。

本发明的金鸣片的质量控制检测方法是通过下述的技术方案来解决以上的技术问题的：

金鸣片的质量控制检测方法包括下述的步骤：

（1）取金鸣片研细，加乙醇，水浴，取上清液，过滤，浓缩，得供试品溶液；

取胆酸对照品，配制成每1ml中含1mg胆酸的溶液，作为对照品溶液；

按薄层色谱法试验展开；

（2）取金鸣片研细，加乙醇，水浴，取上清液，过滤，浓缩，得供试品溶液；

取薄荷脑对照品，配制成每1ml中含1mg薄荷脑的溶液，作为对照品溶液；

按薄层色谱法试验展开；

（3）检查；

（4）高效液相色谱法测定含量。

具体的，金鸣片的质量控制检测方法包括下述的步骤：

（1）取规格为0.6g/片的金鸣片5片或0.3g/片的金鸣片10片，研细，置于25ml量瓶中，加乙醇至刻度，置水浴中振摇10分钟，放置4小时，取上清液，过滤，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；

另取胆酸对照品，加乙醇配制成每1ml中含1mg胆酸的溶液，作为对照品溶液；

按照中国药典2010版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙醚－冰乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在120℃烘8-12分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（2）取规格为0.6g/片的金鸣片5片或0.3g/片的金鸣片10片，研细，加无水乙醇6ml，振摇10分钟，过滤，滤液加无水乙醇至5ml，作为供试品溶液；

另取薄荷脑对照品加无水乙醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液；

照中国药典2010版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯为展开剂，展开，取出,晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（3）检查：应符合中国药典2010版一部附录I D片剂项下有关的各项规定；

（4）含量测定：丹参照中国药典2010版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算不低于3000；

对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml中含45μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取规格为0.6g/片的金鸣片30片或0.3g/片的金鸣片60片，除去包衣，精密称定，研细，取3.95-4.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞、称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

金鸣片的质量控制检测方法中，金鸣片中规格为0.6g/片的金鸣片中含丹参以丹酚酸B（C₃₆H₃₀O₁₆）计，不得少于0.26mg；规格为0.3g/片的金鸣片中含丹参以丹酚酸B（C₃₆H₃₀O₁₆）计，不得少于0.13mg。

上述的步骤（1）中，水浴温度为98-100℃。

上述的步骤（1）中，三氯甲烷、乙醚、冰乙酸的体积比为2:2:1。

上述的步骤（2）中，所述的环己烷、乙酸乙酯的体积比为17:3。

上述的步骤（4）中，超声处理的时间为10-20分钟，功率300W,频率40kHz。

上述的步骤（4）中甲醇、乙腈、甲酸、水的体积比为30:10:1:59。

本发明的有益效果在于，采用本发明的方法对金鸣片的质量控制，准确度高、重现性好，稳定性好，其方法考察验证中，丹酚酸B平均回收率为97.69％，n＝6，RSD＝2.87％；重现性考察中，丹酚酸B的RSD为1.205％；稳定性考察中丹酚酸B相对标准偏差RSD为1.91％。

附图说明

图1本发明的丹酚酸B对照品图谱；

图2为空白图谱；

图3为样品图谱；

图4为本发明的实施例1的线性回归图；

图5为人工牛黄薄层色谱，从左往右的顺序依次为对照品-样品1-样品2-样品3-空白对照；

图6为原来标准中的薄荷脑薄层色谱，从左往右顺序依次为：样品1-样品2-样品3-对照品；

图7为改进后的薄荷脑薄层色谱，从左往右顺序依次为：空白对照-对照品-样品1-样品2-样品3。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式来对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。

实施例1

将本发明的方法应用于检测金鸣片中丹酚酸B的含量的检测上，其具体的步骤如下：

（1）色谱条件：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水（甲醇、乙腈、甲酸、水的体积比为30:10:1:59）为流动相；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于3000；

（2）对照品溶液的制备：

取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml中含45μg的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备：

取规格为0.6g/片的本品30片，除去包衣，精密称定，研细，取约4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞、称定重量，超声处理（功率300W,频率40kHz）15分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定：

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明的方法应用于金鸣片中丹酚酸B的检测中方法学验证

1.准确度

采用加样回收试验，取已经测知含量的样品2g，精密称定，精密加入丹酚酸B对照品适量，按照供试品制备方法进行提取、测定，计算，结果丹酚酸B平均回收率为97.69％，n＝6，RSD＝2.87％。表明本法方法准确，结果见表1。

回收率＝（C－A）÷B×100％

A：样品所含被测成分含量 B:加入纯品量 C：实测值

表1 丹酚酸B回收率测定结果

2.精密度

重复性

取批号为1311008批样品，照含量测定方法制备6个供试品溶液进行测定，计算相对标准偏差，结果丹酚酸B的RSD为1.205％。表明该方法重复性良好，结果见表2。

表2 重复性试验结果

重现性

实验人员：中心化验室检验人员

实验地点：中心化验室

实验仪器：高效液相色谱仪：岛津LC-10AT型恒流泵，岛津SPD-10A紫外检测器；色谱柱：Kromasil C₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm）；

对同一供试品重复测定6次，计算相对标准偏差，结果丹酚酸B的RSD为1.93％。表明该方法重复性良好，结果见表3。

表3 重现性试验结果

3.稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8小时进样测定，结果样品在8小时内稳定，丹酚酸B相对标准偏差RSD为1.91％。表明该方法稳定性良好，结果见表4。

表4 稳定性试验结果

4.专属性

按照处方比例和本品制备工艺，制成不含丹参的空白样品，再按供试液的制备方法制成空白对照溶液，依法测定，结果表明，空白对样品测定无干扰（附图1丹酚酸B对照品图谱，附图2空白图谱，附图3样品图谱）。

5．线性

精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇分别制成每1ml含的对照品溶液，分别吸取10??l，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，丹酚酸B浓度为横坐标，绘制标准曲线，得一直线，回归方程Y＝6188.6x-12563，r＝0.9995，结果表明，丹酚酸B在12.2??g～195.2??g范围内具有良好的线性关系，见表5及附图4。

表5 线性试验结果

6.样品测定

五批样品含量测定

依法对5批样品进行了测定，结果见表6。依测定结果，暂定规格为0.6g/片的金鸣片中丹酚酸B含量为每片不低于0.26mg。限度制定依据：5批平均含量为0.55 mg/g，下浮20％，即0.44mg/g，金鸣片规格为0.6g/片，相当于0.26mg/片。

表6 5批样品的测定结果

实施例2

空白对照品溶液的制备：按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少人工牛黄的空白样品，取空白对照粉末3g，按照供试品溶液的制备方法同法制备人工牛黄空白对照品溶液。

按照中国药典2010版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与空白对照品溶液各10μl、对照品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙醚－冰乙酸为展开剂，展开，三氯甲烷、乙醚、冰乙酸的体积比为2:2:1，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在120℃烘8-12分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点；

空白对照品溶液制备：按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少薄荷脑的空白样品，取薄荷脑空白对照品3g，按照供试品溶液的制备方法同法制备薄荷脑空白对照品溶液。

照中国药典2010版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、空白对照品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯为展开剂，展开，环己烷－乙酸乙酯的体积比为17:3取出,晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白对照品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，甲醇-乙腈-甲酸-水的体积比为30:10:1:59；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算不低于3000；

供试品溶液的制备：取规格为0.6g/片的金鸣片30片或规格为0.3g/片的金鸣片60片，除去包衣，精密称定，研细，取3.95-4.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞、称定重量，超声处理，超声处理的时间为10-20分钟，功率300W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

实施例2中（1）人工牛黄药材胆酸成分薄层色谱鉴别结果见说明书附图5；

（2）薄荷脑成分原薄层色谱鉴别结果见说明书附图6；

改进后的薄层色谱鉴别结果见说明书附图7；

附图5-7中，样品1、样品2、样品3分别是指金鸣片不同的批次所做的平行实验；

附图5中，空白对照是指按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少人工牛黄的空白样品，取空白样品粉末3g，按照供试品溶液的制备方法同法制备人工牛黄空白对照品溶液，并与供试品、对照品同时进行鉴别，以便证明该方法的专属性；

附图7中，空白对照是指按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少薄荷脑的空白样品，取空白样品粉末3g，按照供试品溶液的制备方法同法制备薄荷脑空白对照品溶液，并与供试品、对照品同时进行鉴别，以便证明该方法的专属性。

薄荷脑薄层色谱鉴别原执行标准为：规格为0.6g/片的金鸣片5片或0.3g/片的金鸣片10片，研细，加无水乙醇6ml，振摇10分钟，滤过，滤液加无水乙醇至5ml，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品加无水乙醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯－苯(18:2:4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在80℃烘约10分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

由于原执行标准展开系统中含有有毒试剂苯，考虑保护员工人身安全，降低操作毒性，改进成本发明展开系统，经试验证明，该鉴别方法专属性强，色谱斑点分离效果好，在达到检验目的的同时，本发明方法比原执行标准使用的制剂毒性更低，具有可操作性。

实施例3

(1)以地黄为例，测定梓醇含量

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.03%磷酸溶液为流动相B；检测波长为210nm,按下表中规定的进行梯度洗脱，理论板数按梓醇峰计算应不低于3000。

表7

对照品溶液的制备取梓醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取规格为0.6g/片的本品30片，除去包衣，精密称定，研细，取约4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞、称定重量，超声处理（功率300W,频率40kHz）15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

结果：供试品在与对照品相应有极小峰，不足以积分，表明含量极少，不易宜做含量测定。

原因分析：地黄主要成分梓醇在加热过程中易受热转化为其他成分，不适于作为产品成分检测。

(2) 以地黄为例，测定毛蕊花糖苷含量

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.03%磷酸溶液为流动相B；检测波长为334nm,按下表中规定的进行梯度洗脱，理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于3000。

表8

对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含10μg的溶液，即得。

结果：供试品在与对照品相应位置上无明显的色谱峰，不宜做含量测定。

分析:毛蕊花糖苷在地黄中含量本身就低，另外金鸣片处方包含其他多味中药材，将金鸣片成品提纯到其检测浓度不易，因此不适于进行含量测定。

实施例4

(1)以玄参为例，测定哈巴苷与哈巴俄苷含量

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.03%磷酸溶液为流动相B；检测波长为210nm，按下表中规定的进行梯度洗脱，理论板数按哈巴苷峰计算应不低于3000。

表9

对照品溶液的制备取哈巴苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml中含50μg的溶液，即得哈巴苷对照品溶液。另取哈巴俄苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，即得哈巴俄苷对照品溶液。

供试品溶液的制备：取规格为0.6g/片的本品30片，除去包衣，精密称定，研细，取约4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞、称定重量，超声处理（功率300W,频率40kHz）15分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

结果：供试品在与哈巴苷相应位置有极小峰，没有形成积分或积分量少；供试品在与哈巴俄苷相应位置有未分离完全的吸收峰，需继续调整方法。

原因分析：哈巴苷成分不稳定，在提取过程中受热易转化，不能作为含量测定标准进行质量控制。

（2）以玄参为例，测定哈巴俄苷含量

由于考虑不再检测哈巴苷，波长可以不用接近末端吸收的210nm，哈巴俄苷在278nm有吸收峰，因此用波长278nm。梯度洗脱发现，在对照品相应位置有较密集的样品峰，难以确定相应的哈巴俄苷检测成分峰，改流动相为恒流，逐步测定适宜的比例。

色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为278nm；

对照品溶液的制备取哈巴俄苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，即得哈巴俄苷对照品溶液。

供试品溶液的制备取规格为0.6g/片的本品30片，除去包衣，精密称定，研细，取约4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞、称定重量，超声处理（功率300W,频率40kHz）15分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

流动相：乙腈-0.3%磷酸溶液（24：76）

结果：供试品与对照品相应位置有峰，并且有相连分离差的极小峰，经多次调整流动相，仍无法完全分离，考虑该检测方法存在空白干扰。

空白样品：按金鸣片制备工艺制备不含玄参的空白样品。

空白对照品溶液：取空白样品，按制备供试品溶液制备方法制备空白对照品溶液。

流动相：乙腈-0.3%磷酸溶液（24：76）

结果：空白对照品在与哈巴俄苷对照品相应位置有吸收峰，证明该检测方法专属性差，因此改做其他成分含量测定。

经过研究，最终确定选择金鸣片的丹参药材中丹酚酸B作为含量测定检测项目。

以上实施例3和实施例4说明金鸣片处方中虽然含有很多中药成分，例如地黄与玄参，但是由于中药制剂生产过程中药物相互作用或者中药成分本身进行转化，同时考虑检验方法的专属性等原因，并不是所有的药材中能检测的成分都能用来对金鸣片成品进行质量控制，因此证明本发明的检测方法对金鸣片成品而言，是更精确与可行的质量控制方法。

Claims

1.金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，该方法包括下述的步骤：

按薄层色谱法试验展开；

（3）检查；

（4）高效液相色谱法测定含量。

2.如权利要求1所述的金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，该方法包括下述的步骤：

3.如权利要求1所述的金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，所述的金鸣片中规格为0.6g/片的金鸣片中含丹参以丹酚酸B（C₃₆H₃₀O₁₆）计，不少于0.26mg；规格为0.3g/片的金鸣片中含丹参以丹酚酸B（C₃₆H₃₀O₁₆）计，不少于0.13mg。

4.如权利要求1所述的金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，所述的步骤（1）中，水浴温度为98-100℃。

5.如权利要求1所述的金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，所述的步骤（1）中，三氯甲烷、乙醚、冰乙酸的体积比为2:2:1。

6.如权利要求1所述的金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，所述的步骤（2）中，所述的环己烷、乙酸乙酯的体积比为17:3。

7.如权利要求1所述的金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，所述的步骤（4）中，超声处理的时间为10-20分钟，功率300W,频率40kHz。

8.如权利要求1所述的金鸣片的质量控制检测方法，其特征在于，所述的步骤（4）中甲醇、乙腈、甲酸、水的体积比为30:10:1:59。