CN102590431B - 一种治疗咳嗽的中药药物组合物检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗咳嗽的中药药物组合物检测方法,处方板蓝根、贯众、金银花、黄芩、枇杷叶、百部、浙贝母、薄荷按一定重量比组成,制成颗粒剂;用薄层色谱法鉴别金银花、黄芩、百部;用高效液相法检测黄芩苷的含量。使该中药药物组合物在生产和使用中有效的保证产品质量,进而保证药品疗效。
Description
技术领域
本发明涉及药品检测方法,特别涉及一种治疗咳嗽的中药药物组合物检测方法,属医药技术领域。
背景技术
咳嗽是呼吸系统疾病的常见症状之一。中医的外感咳嗽,包括了现代医学的急性支气管炎,慢性支气管炎急性发作,上呼吸道感染,慢性咽喉炎等以咳嗽为主要症状的疾病。咳嗽是机体一种保护性反射动作,能将呼吸道内异物或分泌物排出体外。但是,咳嗽又是有害的,剧烈的咳嗽可致呼吸道出血和自发性气胸,长期的咳嗽是促进肺气肿的重要因素,频繁的咳嗽影响睡眠、消耗体力。
近年来由于环境污染的加剧,呼吸系统疾病的发病率不断上升,咳嗽存在一个庞大的患者人群,同时随着人民生活水平的不断提高,人民对药物的要求也越来越高。在化学药品大量充斥市场的时侯,人们又对它所带来的种种副作用产生种种疑问。因此,开发出高效低毒的止咳药非常必要。
一种治疗咳嗽的中药药物组合物,处方由下列重量分的原料组成:板蓝根6-12份、贯众6-12份、金银花12-24份、黄芩12-24份、枇杷叶(炙)6-12份、百部(炙)6-12份、浙贝母6-12份、薄荷6-12份。
上述的治疗咳嗽的中药药物组合物,具有清肺解毒,宣肺化痰,止咳利咽的功能。适用于治疗风热犯肺,肺失清肃引起的咳嗽、咯吐黄痰、或伴发热头痛、咽喉肿痛诸症。主要包括现代医学的急性上呼吸道感染,急性气管—支气管炎,慢性支气管炎急性发作等疾病,也可以用于肺炎的治疗。这种治疗咳嗽的中药药物组合物,现有技术还没有制剂的质量标准检测方法,无法在生产和使用中有效的保证产品质量,进而药品疗效得不到保证。。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种治疗咳嗽的中药药物组合物检测方法,使该中药药物组合物在生产和使用中有效的保证产品质量,进而保证药品疗效。
一种治疗咳嗽的中药药物组合物,处方由下列重量分的原料组成:板蓝根6-12份、贯众6-12份、金银花12-24份、黄芩12-24份、炙枇杷叶6-12份、炙百部6-12份、浙贝母6-12份、薄荷6-12份;以上八味,加水提取两次,第一次加12倍量水加入板蓝根等七味药加热到70℃后再加入黄芩,提取2小时,第二次加10倍量水提取1小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩至50℃下相对密度为1.08~1.12,加入乙醇使含醇量达70%,静置18小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至60℃下相对密度为1.15~1.20的清膏,加入糊精适量,制成颗粒,检测方法如下:
【性状】 本品为黄色至黄褐色颗粒,气微,味苦;
【鉴别】(1)取本品10g,研细,取细粉1g,加75%甲醇10mL,超声处理10分钟,滤过,滤液作为供试品溶液;另取黄芩苷对照品、绿原酸对照品适量,分别加甲醇制成每1mL含0.1mg的对照品溶液;照中国药典2010年版一部附录薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各1~2μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干;置波长为365 nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的斑点;
(2)取本品10g,研细,加浓氨水3mL和三氯甲烷30mL,摇匀,静置30分钟,超声处理30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液;另取百部对照药材2g,同法制成对照药材溶液;照中国药典2010年版一部附录薄层色谱法试验,吸取供试品溶液20μL,对照药材溶液10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:甲醇:浓氨水=17:2:1的液体为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
【检查】 应符合中国药典2010年版一部附录颗粒剂项下有关的各项规定。
【含量测定】照中国药典2010版附录高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇:水:磷酸=47:53:0.2的液体为流动相,检测波长为280nm,柱温35℃,理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取装量差异项下本品,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇50mL,称定重量,超声处理30分钟,放冷,精密称定,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪测定,每1g含黄芩以黄芩苷计,不得少于12mg。
本发明的中药药物组合物各组份是按重量份作为配比的,在生产时可按照相应的比例增大或减少,如大规模生产可以以千克或以吨为单位,重量可以增大或减少,但各组份之间的生药重量配比比例不变。若重量以克为单位,上述的配比是成人一天的用量。
为了进一步说明本发明一种治疗咳嗽的中药药物组合物质量标准检测方法的质量可控性,有关研究如下:
1、测试样品的来源、批号
样品的来源,自制。样品批号,20111201、20111202、20111203)
2、测试用对照品的来源、批号
黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110715-200514,含量测定用)
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,供鉴别用,编号为110753-200413)
3、质量研究
【性状】经观察三批样品均为黄色至黄褐色颗粒,气微,味苦;
【鉴别】(1)系黄芩、金银花的鉴别。
供试品溶液制备:取本品10g,研细,取细粉1g,加75%甲醇10mL,超声处理10分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。
对照品溶液制备:取黄芩苷对照品、绿原酸对照品适量,分别加甲醇制成每1mL含0.1mg的对照品溶液。
黄芩阴性对照溶液制备:取不含黄芩的阴性样品同法制成黄芩阴性对照溶液。
金银花阴性对照溶液制备:取不含金银花的阴性样品同法制成金银花阴性对照溶液。
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录)试验,吸取上述三种溶液各1~2μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干。置紫外光灯(365 nm)下检视,供试品色谱中,在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上,显相同的暗斑点;在与绿原酸对照品色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点。
黄芩、金银花阴性均没有干扰。
(2)系百部的鉴别。
供试品溶液制备:本品每10g颗粒约相当于百部药材1.6g,取样量定为取本品1.6g研细,加浓氨水3mL和三氯甲烷30mL,摇匀,静置30分钟,超声处理30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,
对照药材溶液制备:取百部对照药材2g,加浓氨水2mL和三氯甲烷20mL,同法制成对照药材溶液。
百部阴性对照溶液制备:取不含百部的阴性样品同法制成百部阴性对照溶液。
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录)试验,吸取供试品溶液20μL,对照药材溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(17:2:1)为展开剂,展开,展距17cm,取出,晾干,喷以稀碘化铋甲试液。供试品色谱中,在与百部对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。斑点清晰。阴性没有干扰。
【检查】按中国药典2010年版一部附录颗粒剂项下的规定,三批样品均符合规定。
【含量测定】
1、仪器与试药 高效液相色谱仪(SPD-10Avp检测器,LC-10ATvp溶剂输送泵,岛津仪器有限公司), ANASTAR色谱工作站;迪马公司Kromasil C18色谱柱,250×4.6mm,5μm; N-2000双通道色谱工作站; Diamonsil C18色谱柱,250×4.6mm,5μm。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110715-200514,含量测定用)。所用甲醇为色谱纯;其它试剂均为分析纯。娃哈哈纯净水。
2、方法学考察
2.1检测波长的选择:精密称取黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含10μg的对照品溶液。在200~400nm范围内进行光谱扫描,结果显示黄芩苷最大吸收波长为278nm,参考中国药典2005年版一部黄芩药材含量测定项下及有关文献,选用280nm作为检测波长。
2.2流动相条件与柱温箱温度的考察 参考中国药典2005年版一部黄芩药材含量测定方法,选用甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为本品流动相;分别在柱温箱温度为30℃和35℃时进样,结果在此流动相条件下,柱温为35℃时其峰形好、分离度合格、柱效高。
2.3色谱条件与系统适应性 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相;检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于2500。
2.4重复性试验 取黄芩苷对照品(批号:110715-200514)适量,加甲醇制成每mL含40ug的溶液作为对照品溶液,精密量取对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。结果见表1。
表1 重复性试验结果
序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均 | RSD(%) |
黄芩苷峰面积 | 2779526 | 2775006 | 2725229 | 2781186 | 2792528 | 2793623 | 2774516.5 | 0.91 |
结果表明,本方法重复性良好。
2.5线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品(批号:110715-200514)3.98mg,置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。精密量取对照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL,分别置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密量取对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程Y = 6E+06X-10048,r=0.9998。结果表明黄芩苷进样浓度在0.1592~0.7960μg范围内,其进样量与峰面积积分值程良好的线性关系。
2.6供试品处理方法的考察
(1)提取溶剂的选择 试验方法 取本品颗粒,研细,取约0.5g(相当0.17g黄芩),精密称定,置具塞锥形瓶中,分别加甲醇50mL、50%甲醇50mL、70%乙醇50mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。测定结果见表2。
表2 提取溶剂考察试验结果
溶剂量(mL) | 黄芩苷含量(mg/g) |
甲醇 | 15.13 |
50%甲醇 | 17.51 |
70%乙醇 | 16.92 |
由结果可看出,提取溶剂为50%甲醇时,提取效果较好,因此决定本品提取溶剂为50%甲醇。
(2)提取方法的选择 取本品颗粒,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别加50%甲醇50mL,称定重量,分别超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟和加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。测定结果见表3。
表3 提取方法考察试验结果
溶剂量(mL) | 黄芩苷含量(mg/g) |
超声处理 | 17.44 |
加热回流 | 16.77 |
由结果可看出,用超声处理的方法进行提取时,提取效果较好,因此决定本品提取方法为超声处理(功率250W,频率50kHz)。
(3)提取时间的考察 试验方法 取本品颗粒(批号:070702),研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇50mL,称定重量,分别超声处理(功率250W,频率50kHz)20分钟、30分钟、40分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。测定结果见表4。
表4 提取时间考察结果
提取时间(分钟) | 黄芩苷含量(mg/g) |
20 | 17.20 |
30 | 18.04 |
40 | 18.03 |
由结果可看出,提取时间对提取率的影响不大,提取时间为30分钟时,提取率较高,因此选用提取时间为30分钟。
(4)溶剂量的考察 试验方法 取本品颗粒,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别加50%甲醇40mL、50mL、60mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。测定结果见表5。
表5 溶剂量考察试验结果
由结果可看出,当溶剂量为50mL时,提取效果与溶剂量为60mL的相近,因此决定本品提取溶剂用量选用50mL。
因此,确定本品含量测定供试品溶液的制备方法为:
取装量差异项下本品颗粒,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.7阴性干扰试验
阴性对照溶液的制备 按处方比例称取不含黄芩的其他药材,按样品的制备工艺制得阴性样品,取该阴性样品按供试品溶液的制备方法,制得阴性对照溶液,依法测定。结果阴性基本无干扰。
2.8精密度试验 对照品溶液的制备 取对照品溶液(浓度:0.04776mg/mL)连续测定6次,RSD为1.03%,表明精密度良好。结果见表6。
供试品溶液的制备 取本品颗粒,研细,取约0.5g,精密称定,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,连续测定6次,RSD为1.59%,表明精密度良好。结果见表6。
表6 精密度试验结果
序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(%) |
对照品 | 2645877 | 2670399 | 2643231 | 2642269 | 2701407 | 2697783 | 1.03 |
供试品 | 1921230 | 1964473 | 1938126 | 1923741 | 1880292 | 1892589 | 1.59 |
2.9中间精密度试验
2.9.1分析之星工作站 取本品颗粒(批号:070702),研细,取约0.5g,精密称定,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,依法测定,并计算样品中黄芩苷的含量。结果见表7。
表7 中间精密度试验结果
序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均 | RSD(%) |
黄芩苷含量(mg/g) | 18.32 | 18.31 | 18.40 | 18.56 | 18.44 | 18.35 | 18.40 | 0.50 |
由表7结果可以看出,黄芩苷含量的平均值为18.40mg/g, RSD为0.50%。结果表明,本方法中间精密度良好。
2.9.2 N2000 工作站 取本品颗粒,研细,取约0.5g,精密称定,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,依法测定,并计算样品中黄芩苷的含量。结果见表8。
表8 中间精密度试验结果
序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均 | RSD(%) |
黄芩苷含量(mg/g) | 17.85 | 18.11 | 17.35 | 17.52 | 17.44 | 17.51 | 17.63 | 1.65 |
由表8结果可以看出,黄芩苷含量的平均值为17.63mg/g, RSD为1.65%。结果表明,本方法中间精密度良好。
2.10稳定性试验 取本品颗粒,研细,取约0.5g,精密称定,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,按下表所示时间,测定其峰面积积分值,结果表明在室温下12小时内,溶液基本稳定,结果见表9。
表9 稳定性试验结果
时间(h) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | RSD(%) |
供试品 | 1819818 | 1813670 | 1846799 | 1861541 | 1838251 | 1896706 | 1800423 | 1.77 |
2.11回收率试验 取本品颗粒,研细,取约0.25g,精密称定,平行6份,各精密加入黄芩苷对照品4.6605mg(精密称取黄芩苷对照品,批号:110715-200514,31.07mg,置100mL量瓶中,加50%甲醇使溶解并定容至刻度,摇匀,分别精密量取15mL),再精密加入50%甲醇35mL,按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,依法测定各样品中黄芩苷的含量,计算回收率,结果见表10。
表10 黄芩苷回收率试验结果
C-A
B
A 样品所含被测成分的量 B 加入纯品量 C 实测值
由表10结果可以看出,本品含量测定方法平均回收率为103.15%,RSD为1.72%,回收率合格,符合含量测定要求。
具体实施方式
以下通过具体实施例来进一步说明本发明。
实施例1 三批样品的含量测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(53:47:0.2)为流动相;检测波长为280nm;柱温箱温度为35℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备 精密量取黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.04mg的溶液即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下本品颗粒,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。
三批中试样品含量测定结果
实施例2 样品的制备和检验
1、制备样品。称取板蓝根170g、贯众70g、金银花340g、黄芩340g、枇杷叶(炙)170g、百部(炙)170g、浙贝母 170g、薄荷170g。 以上八味,加水提取两次,第一次加12倍量水加入板蓝根等七味药加热到70℃后再加入黄芩,提取2小时,第二次加10倍量水提取1小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.08~1.12(50℃),加入乙醇使含醇量为70%,搅匀,静置18小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.15~1.20(60℃)的清膏,加入糊精适量,制成颗粒剂。
2、检验。
一种治疗咳嗽的中药药物组合物颗粒剂检验报告书
结论:结果符合规定。
检验人:李诗标 复核人:张为胜
Claims (1)
1.一种治疗咳嗽的中药药物组合物的检测方法,处方由下列重量分的原料组成:板蓝根6-12份、贯众6-12份、金银花12-24份、黄芩12-24份、炙枇杷叶6-12份、炙百部6-12份、浙贝母6-12份、薄荷6-12份;以上八味,加水提取两次,第一次加12倍量水加入板蓝根等七味药加热到70℃后再加入黄芩,提取2小时,第二次加10倍量水提取1小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩至50℃下相对密度为1.08~1.12,加入乙醇使含醇量达70%,静置18小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至60℃下相对密度为1.15~1.20的清膏,加入糊精适量,制成颗粒,检测方法如下:
(1)取本品10g,研细,取细粉1g,加75%甲醇10mL,超声处理10分钟,滤过,滤液作为供试品溶液;另取黄芩苷对照品、绿原酸对照品适量,分别加甲醇制成每1mL含0.1mg的对照品溶液;照中国药典2010年版一部附录薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各1~2μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干;置波长为365 nm的紫外光灯下检视;
(2)取本品10g,研细,加浓氨水3mL和三氯甲烷30mL,摇匀,静置30分钟,超声处理30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液;另取百部对照药材2g,同法制成对照药材溶液;照中国药典2010年版一部附录薄层色谱法试验,吸取供试品溶液20μL,对照药材溶液10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:甲醇:浓氨水=17:2:1的液体为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液;
照中国药典2010版附录高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇:水:磷酸=47:53:0.2的液体为流动相,检测波长为280nm,柱温35℃,理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取装量差异项下本品,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇50mL,称定重量,超声处理30分钟,放冷,精密称定,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪测定。
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