BG60740B2 - Полипептид - Google Patents

Полипептид Download PDF

Info

Publication number
BG60740B2
BG60740B2 BG98123A BG9812393A BG60740B2 BG 60740 B2 BG60740 B2 BG 60740B2 BG 98123 A BG98123 A BG 98123A BG 9812393 A BG9812393 A BG 9812393A BG 60740 B2 BG60740 B2 BG 60740B2
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
tyr
ser
trp
mmol
pro
Prior art date
Application number
BG98123A
Other languages
English (en)
Inventor
Anand Dutta
Barrington Furr
Michael Giles
Original Assignee
Zeneca Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zeneca Limited filed Critical Zeneca Limited
Publication of BG60740B2 publication Critical patent/BG60740B2/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/06095—Arg-amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до полипептид с формула glu-нis-тrр-sеr-тyr-а-в-аrg-рrо-е-f, в която а означава d-тyr, d-тyr(ме), d-sеr, d-sеr(вuт), d-рне, d-аlа или d-тrр, в е lеu или меlеu, е аzgly и f амино, или а означава аzgly или аzаlа, в е lеu, е директна връзка и f етиламино, и неговите фармацевтично и ветеринарно приемливи присъединителни с киселини соли. Полипептидите проявяват ефекта на лулиберина.

Description

Настоящото изобретение се отнася до полипептид, имащ свойства на лулиберинов агонист, като лулиберин е международно-при- $ етото тривиално наименование на лутеинизиращ хормон LH-RF (фактор) (J. Biol. Chem., 1975, 250, 3215).
Известно е (Dutta, Furr, Giles and Morley, Clinical Endocrinology, 1976, 5, Supplement, p. |θ 219s-298s), че заместването на α-аза-аминокиселините в позиции 6 или 10 на лулиберина води до получаване на съединения, които са по-слаби в способността си да отделят лутеинизиращ хормон (LH) от хипофизната жлеза. Установено е, че заместването на азаглицина в позиция 10, комбинирано със заместване на различни D-α -аминокиселини в позиция 6 на лулиберина, или заместването на азаглицина или азаланина в позиция 6, комбинирано с из- 2θ местване на краен глицинамид от етиламинов радикал в лулиберина, води до получаване на съединения, които са по-активни от лулиберина при освобождаването на лутеинизиращия хормон. 25
Настоящото изобретение се отнася до полипептид с формула ^Glu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F 1 в която А е D-Tyr, D-Tyr(Me), D-Ser, DSer(Bu'), D-Phe, D-Ala или D-Trp, Be Leu или MeLeu, Е e Azgly и F е амино, или A e Azgly или Azala, В e Leu, Е е директна връзка и F е етиламино; и негови фармацевтично приемливи и ветеринарно приемливи присъединителни с киселина соли.
В горната формула I и в настоящото описание аминокиселинните остатъци са означени с техните стандартни съкращения (Pure and Applied Chemistry, 1974, 40, 317-331). а-азааминокиселинният остатък е такъв, в който а -СН на аминокиселината е заместен с азот. Съкращението за -аза-аминокиселината се получава от съответната аминокиселина с представка Az. Така Azgly представлява азаглицин и Azala представлява азаланин. Когато конфигурацията на отделна аминокиселина не е означена, тази аминокиселина (особено ота -азааминокиселини, не съдържащи асиметричен център, съседен на карбоксилна група) има обикновено L-конфигурация.
Отделни групи съединения съгласно настоящото изобретение са следните.
Такива, в които А е D-Туг, D-Tyr(Me), D-Ser, D-Ser (Bu‘), D-Phe, D-Ala или D-Тгр, B e Leu или MeLeu, Е e Azgly и F е амино.
Такива, в които А е Azgly или Azala, В е Leu, Е е директна връзка и F е етиламино.
Такива, в които А е D-Tyr(Me), D-Ser, D-Ser(Bu*), D-Phe, D-Ala или D-Trp, В е Leu или MeLeu, Е е Azgly и F е амино.
Предпочитана група съединения съгласно изобретението е тази, в която А е DTyr(Me), D-Ser(Bu') или D-Phe, В е Leu или MeLeu, Е е Azgly и F е аминорадикал.
Трите предпочитани съединения съгласно настоящото изобретение имат следните структури.
Csiu -His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Leu-ArgPro-Az^ly-NH2
L Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Tyr (Me)-LeuArg- Pro-Azgly- N H2
C&lu-His-Trp-Ser-Tyr-D-SeriBu*)-LeuArg-Pro-Azgly-NH2
Отделна фармацевтично или ветеринарно приемлива присъединителна с киселина сол съгласно настоящото изобретение е например хидрохлорид, фосфат, цитрат или ацетат.
Полипептидът съгласно изобретението може да бъде получен по известни на специалистите методи за получаване на аналогични химични съединения. Следващите етапи, в които и А, В, Е и F имат посочените значения са друг обект на настоящото изобретение:
(а) отстраняване на една или повече за щитни групи от защитен полипептид с аминокиселинна последователност с формула 1 до получаване на съединение сформула I;
(б) взаимодействие Hai-Glu-OH.lGlu-HisОН. >Glu-His-Trp-OH, ^lu-Hi^-Trp-Ser-OH, l-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH, Elu-His-Trp-SerTyr-A-OH,rSlu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-OHFGluHis-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-OH или
4Slu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-OH, или техен азид или естер със H-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-SerTyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
H-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-A-B-ArgPro-E-F, H-B-Arg-Pro-E-F,
H-Arg-Pro-E-F, H-Pro-E-F, или
H-Azgly-NH2, съответно, (в) взаимодействие на карбоксилна ки селина с формула iGlu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-OH II или неин естер или анхидрид с амоняк или етиламин.
При етап а в изходния продукт има толкова защитни групи, колкото са радикалите, които могат да осигурят защитата, например някои или всички радикали, които съществуват в продукта като ОН-радикали или базични NHj-радикали.
При етап а защитната група или групи могат да бъдат тези, описани в стандартен учебник по пептидна химия, например М. Bodansky и M.A.Ondetti, “Peptide Synthesis”, Interscience, New York, 1966, Chapter IV; F.M.Finn и K.Hofmann, “The Proteins”, Vol. II, под редакцията на H. Neurath и R.L.Hill, Academic Press Inc., New York, 1976, p. 106; “Amino acids, Peptides and Proteins” (Specialist Periodical Reports), The Chemical Society, London, volumes 1-8. В тези книги са описани също и различни методи за отстраняване на защитните групи.
При етап (а) особено полезна NH2-3aщитна група е бензилоксикарбонилов радикал и особено полезна ОН-защитна група е бензилов радикал. И двете групи могат лесно да бъдат отстранени при хидрогениране, например, в присъствие на катализатор паладий върху въглен.
По-нататък, при етап (а) особено полезна NHj-защитна група е t-бутоксикарбонилов радикал и особено полезна ОН защитна група е t-бутилов радикал. И двете групи могат лесно да бъдат отстранени при взаимодействие с киселина като хлороводород или трифлуорооцетна киселина.
По-нататък, при етап а особено полезна NHj-защитна група е бензилоксикарбонилов или t-бутоксикарбонилов радикал и особено полезна ОН-защитна група е t-бутилов радикал. И двете защитни групи могат лесно да бъдат отстранени при взаимодействие с НВг в оцетна киселина.
При етап б може да бъде използван който и да е стандартен метод за пептидно свързване, например тези, описани в стандартен учебник по пептидна химия, посочени вече Bodansky и Ondetti, Chapter V и томове 1 до 8 на Specialist Periodical Reports на Chemical Society.
При етап б особено реакцията на свързване е азидното свързване, свързване на активен естер или свързване, включващо Ν,Ν’-дициклохексилкарбодиимид и 1-хидроксибензотриазол. Предпочитаното свързване е азидното свързване и в частност такова свързване, при което се образува His-Trp или Ser-Tyr пептидна връзка.
При етап (в), когато се използва естер или анхидрид, реакцията може да протече, когато естерът или анхидридът взаимодействат с амоняк или етиламин в присъствие на разредител или разтворител. В тези случаи, когато изходният продукт е свободна киселина с формула II, взаимодействието с амоняк или етиламин е най-удобно да се извърши стандартно със свързващо средство като Ν,Ν’-дициклохексилкарбодиимид.
Изходните продукти, използвани при методите съгласно настоящото изобретение, могат да бъдат получени от известни съединения, по стандартни начини на пептидно свързване, стандартни начини на пептидна защита и такива за отстраняване на пептидната защита, известни на специалистите и описани в примери 1 до 10.
Съединението съгласно настоящото изобретение има свойства на лулиберинов агонист, което означава, че действието му наподобява напълно това на лулиберина, а природният хормон, отделян от хипоталамуса, който действа на хипофизната жлеза и причинява освобождаването на лутеинизиращ хормон (LH) и хормон, стимулиращ образуването на фоликули (FSH). Тези два хипофизни хормона се включват в контролиращите процеси на размножаване, като последният, FSH, действа върху яйчниците за узряване на фоликулите, а първият, LH, индуцира овулацията. Съединението с формула 1 има неочаквано по-силно действие от лулиберина, по отношение на способността за отделяне на LH, и следователно е полезно при контролирането и/или повишаването на възпроизвеждането при животните. То е особено полезно при размножаването на големите домашни животни през време на периода между два анеструса, в случаи на изкуствено осеменяване, за по-прецизен контрол на времето за овулация. То също може да бъде полезно при лекуването на безплодие у мъжете и жените.
Ефектът на лулиберинов агонист, който се постига при използване на съединението съгласно настоящото изобретение, може да бъде показан например по отношение на способността му да предизвиква овулация при андрогенстерилни с постоянен еструс плъхове, или по отношение на способността му да освобождава LH или FSH, измерен с помощта на радиоактивни антитела, в кръвната плазма на недоразвити мъжки плъхове или в кръвната плазма на овце в периода между два или три анеструса.
Тестът при андрогенстерилни плъхове се провежда по следния начин:
Андрогенстерилни женски плъхове, на които на третия, четвъртия и петия ден след раждането са поставяни по ЮО/zg тестостерон пропионат, имат постоянен вагинален секрет в периода на еструс и много на брой предварително овулирали фоликули в яйчниците. Прилагането на лулиберин и активни негови аналози причинява освобождаването на LH и FSH при операция, което може да се потвърди с наличие на яйце в маточните тръби и отделяне на corpora lutea от яйчниците.
Всички съединения, описани в примерите съгласно изобретението, са по-активни от лулиберина по отношение на предизвикване на овулация при плъхове с постоянен еструс и в допълнение, не показват никакви токсични ефекти, когато се поставят в дози поне четири пъти по-големи от тяхната минимално активна доза. Предпочитаните съединения съгласно изобретението, описани в примери 4, 6 и 7, са приблизително сто пъти по-активни от лулиберина и не показват никакви токсични ефекти, когато се поставят в дози, сто пъти по-големи от тяхната минимално активна доза.
Съгласно друг аспект изобретението се отнася до фармацевтичен или ветеринарен състав, включващ съединението съгласно изобретението заедно с фармацевтично или ветеринарно приемлив разредител или носител.
Съставът съгласно изобретението може да бъде, например, под формата на подходящ за орално прилагане или за прилагане в устната кухина като например таблети, капсули, разтвори или суспензии; за назално прилагане например емфие, спрей или капки за нос; за вагинално или ректално прилагане например, свещички; или за парентерално прилагане например като стерилен инжекционен разтвор или суспензия.
Най-общо, описаните състави могат да бъдат приготвени по конвенционален начин, при използване на конвенционални ексципиенти. Обаче, когато съставът е предназначен за орално прилагане, той може да включва полипептиден активен ингредиент за предпазване от действието на ензимите в стомаха.
Съединението съгласно изобретението може също да съдържа, в допълнение към полипептида съгласно изобретението, едно или повече известни лекарства, подбрани между производните на простагландин като простагландин F2a , клопростенол или флупростенол или друго лекарство като кломифен или тамоксифен.
Предпочитан състав съгласно настоящото изобретение е този, който е подходящ за орално прилагане в единична доза под формата, например, на таблети, капсули, голяма доза или болуси, съдържащи от 2,5 до 500 mg, за предпочитане от 10 до 100 mg, полипептид във всяка единична доза, или този, който е подходящ за парентерално прилагане, съдържащ от 5 /zg до 1 mg полипептид за ml и за предпочитане 10 /zg до 100 μ% полипептид в ml разтвор.
Парентералният състав е за предпочитане разтвор в изотоничен физиологичен разтвор или изотонична декстроза, ако е необходимо, буфериран до pH от 5 до 9. Възможно е, парентералният състав да бъде предназначен за бавно освобождаване, като в този случай количеството на полипептида в единичната доза е най-общо по-голямо от необходимото, когато се използва конвенционален инжекционен състав.
Съставът съгласно настоящото изобретение обикновено се прилага като дневна орална доза, която е от 50 /zg/kg до 20 mg/kg, а дневната парентерална доза, предназначена например за венозна, подкожна или мускулна инжекция или инфузия е от 0,2 /zg/kg до 100 /zg/kg. При хората тези дози са еквивалентни на общата дневна доза от 3,5 mg до 1,4 g, прилагани орално или на общата дневна доза от 14 /zg до 7 mg, прилагани парентерално. Когато се прилага през лигавиците, дозата е в границите между оралните и парентералните дози, дадени по-горе.
Следващите примери илюстрират, но не ограничават настоящото изобретение.
В примерите Rf се отнася до възходяща тънкослойна хроматография (t.I.c.) върху плочки със силикагел (Kieselgel G). Използваните в тази хроматография системи разтворители са бутан-1-ол/оцетна киселина/вода (4:1:5 об./ об./об.) (RfA), бутан-1-ол/оцетна киселина/ вода/пиридин (15:3:12:10 об./об./об./об.) (RfB), бутан-2-ол/3% тегл./об. воден амониев хидроокис (3:1 об./об.) (RfC), ацетонитрил/ вода (3:1 об./об.) (R(D), ацетон/хлороформ (1:1 об./об.) (RfE), хлороформ/етанол (1:4 об./ об.) (RfF), циклохексан/етилацетат (1:1 об./ об.) (RfG), циклохексан/етилацетат/метанол (1:1:1 об./об./об.) (RfH), хлороформ/метанол/ вода (11:8:2 об./об./об.) (RfK), хлороформ/ метанол (19:1 об./об.) (RfP) и хлороформ/метанол (9:1 об./об.) (RfO). При всички случаи, плочките се подлагат на ултравиолетова светлина и се обработват с флуоресцамин, нинхидрин и хлор-нишесте-йодид. Ако не е казано друго за Rf, при този метод се проявява единично петно.
Киселите хидролизати на всички описани продукти съгласно изобретението се получават при нагряване на пептида или защитения пептид с 6N солна киселина, съдържаща 1 % тегл./об. фенол в херметически затворена чиста епруветка в продължение на 16 ч при 100°С. Аминокиселинният състав на всеки хидролизат се определя с LoCarte Amino acid Analiser и винаги е в съгласие с очаквания състав. Използваният в примерите израз “обработван по обичаен начин” означава, че след взаимодействието при филтриране не се отделя никакъв твърд остатък, филтратът се изпарява до сухо под 40°С, утайката се разтваря в етилацетат и се промива с 20% тегл./об. разтвор на лимонена киселина, вода, наситен разтвор на натриев бикарбонат и вода, суши се над безводен натриев сулфат и етилацетатът се изпарява под вакуум.
Примери 1 до 10. Синтез на L-пироглутамил-Е-хистидил-Е-триптофил-Е-серил-Е-тирозил-А-Е-левцил-Е-аргинил-Ь-пропил-Е-Р. Общ метод (т) (Схеми 1 и 2).
Към охладена (0°С) суспензия на L-пироглутамил-Е-хистидин хидразид (0,2 mmol) в диметилформамид (0,9 ml) и диметилсулфоксид (0,7 ml) се прибавят при разбъркване 5,7 N хлороводород в диоксан (0,8 mmol). След енергично разбъркване в продължение на 5 min се получава бистър разтвор. Разтворът се охлажда до -20°С, прибавя се трет.-бутилнитрит (0,22 mmol) и разбъркването продължава още 25 min. След това температурата се сваля до 30°С и разтворът се неутрализира чрез прибавяне на триетиламин (0,8 mmol). Преохладената (-20°С) смес от L-триптофил-Е-серилЕ-тирозил-А-Е-левцил-Е-аргинил-Е-пропил-ЕF-дихидрохлорид (0,1 mmol, получен при хидриране на N-бензилоксикарбонилното производно в 80% об./об. воден метанол, съдържащ два еквивалента хлороводород върху 5% тегл./ тегл. паладий върху въглен в продължение на 16 h) и се прибавя триетиламин (0,1 mmol) в диметилформамид (1 ml) и реакционната смес се разбърква в продължение на 24 h при 4°С. Диметилформамидът се изпарява под вакуум и остатъкът се хроматографира върху Sephadex LH-20 (Sephadex е запазена марка) при използване на диметилформамид като елуент. Пептидхидрохлоридът се пречиства чрез разпределителна хроматография върху Sephadex G-25 при използване на система разтворители n-бутанол/оцетна киселина/вода/пиридин (5:1:5:1 об./об./об./об.).
Синтез на L-пироглутамил-Е-хистидилЕ-триптофил-Е-серил-Е-тирозил-А-В-Е-аргинил-Е-пропил-азаглицинамид. Общ метод (п) (Схеми 3, 4 и 5).
Синтез на L-пироглутамил-Е-хистидилЕ-триптофил-Е-серил-Е-тирозил-А-В-Е-аргинил-Е-пропил-азаглицинамид. Общ метод (п) (Схеми 3, 4 и 5).
L-пироглутамил-Е-хистидил-Е-триптофил-Е-серин хидразид (0,2 mmol) се разтваря в диметилформамид (4 ml) и се превръща в азид, както е описано в етап (ш). Той се купелува, както е описано в етап (т) с L-тирозил-А-В-Е-аргинил-Е-пропил-азаглицинамид (0,15 mmol), получен при каталитична редукция на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Етирозил-А-Е-левцил- (N -нитро) -Е-аргинил-Lаза-глицинамид в 80% об./об. воден метанол в продължение на 20 h върху 5% тегл./тегл. паладий върху въглен, и крайният продукт, под формата на хидрохлорид се пречиства както е описано по-горе.
Синтез на L-пироглутамил-Е-хистидилЕ-триптофил-Е-серил-Е-тирозил-А-В-Е-аргинил-Е-пропил-азаглицинамид. Общ метод (о) (Схеми 4 и 6).
Разтвор на защитено производно на декапептид (имащ Ser (Ви*) в позиция 6 или Tyr(Bu') в позиция 5) (50 mg) се разтваря в
90% об./об. водна трифлуороцетна киселина (5 ml). Прибавят се три капки /?-меркаптоетанол и разтворът се оставя при стайна температура в продължение на 45 min. Разтворителят се отстранява под вакуум и остатъкът се изсушава чрез замръзване един път из вода и два пъти из t-бутанол. Добив 90-100%.
Съединенията съгласно изобретението, получени в резултат на един от трите описани общи метода, са показани в примери 1 до 5 10 в следващата таблица.
Таблица lu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F ТАБЛИЦА
Прииер No. А B E F Метод R Добив,* Cno отношение на лулиберинд! .
pH 2.1 pH 6.5 Π^Λ
1 Axgly Leu - NICjHj R 25 0.98 1.05 0.28
2 Azala Leu - KHC^ R 42 0.97 1.0 0.50
5 D-Ala Leu Azgly NH2 n I- 52 0.97 ι.σ 0.30
4 D-Phe Leu Azgly nh2 n 40 1.0 0.71 0.27
5 D-Тгр Leu 'Azgly nh2 n 15 0.55 0.57 0.57
6 з-Туг(Ме) Leu Azgly nh2 n 15 0.92 0.87 0.25
7 □-Ser(Bu^) Leu Azgly NHj n 51 0.94 0.96 0.25
8 D-Ser ' Leu *»81» NH2 0 . 95 ' 0.9* 0.96 Oj25
9 D-Phe Ke Leu Azgly nh2 0 46 0.84 0.87 0.55
10 l-Tyr(Me) MeLfeu Azgly nh2 n 26 0.87 • 0.90 0.3*
Изходните продукти, използвани при описаните методи могат да бъдат получени, както е показано в следващите схеми 1 и 2 (метод (т)), схеми 3, 4 и 5 (метод (п)) и схеми 4 и 6 (метод (о)).
При следващите схеми се използват следните съкращения: ОСр = 2, 4, 5-трихлорфенилестер; Bzl = бензил; Z = бензилокси карбонил; Вос = t-бутоксикарбонил; DMF = диметилформамид.
Номерата, оградени в кръг, се отнасят до съответните етапи.
t
Схема 2
Схема а
As D-Pbe, D-ΊΤρ,
Схема 4
Схема 5
Схема 6
D-Phe
MeLeu
Arg
Pro
Azgly
Н-4-ОНе
Z-NHNH
Етап 1. N-бензилоксикарбонил-Б-пролин (19,94 g, 80 mmol) и N-метилморфолин (8,8 ml, 80 mmol) се разтварят в сух тетрахидрофуран (200 ml) и разтворът се охлажда до 20°С. На капки се прибавя етилхлорформиат (7,15 ml, 76 mmol) и след разбъркване в продължение на 2 min се прибавя предварително охладен (-20°С) 70% тегл./об. воден разтвор на етиламин (20 ml, 300 mmol) и разбъркването продължава 18 h при 4°С. Реакционната смес се обработва по обичаен начин и остатъкът се кристализира из етилацетат/петролев етер (т.к. 60-80°С). Добив 12,97 g (58,7%), т.т. 107-108°С, [α]θ5-43,88° (с, 1 в метанол), RfD 0,69, RfE 0,53, RfF 0,67, RfH 0,62, RfP 0,57, R,Q 0,66.
Етап 2. Каталитична редукция върху 5% тегл./тегл. Pd/C във воден етанол, съдържащ един еквивалент хлороводород в продължение на 5 h при стайна температура.
Етап 3. Разтвор на № -t-бутоксикарбонил-N“ -нитро-Б-аргинин (13,5 g, 42,3 mmol), Б-пролин етиламид хидрохлорид (7,15 g, 47 mmol), 1-хидроксибензотриазол (11,5 g, 85 mmol) и триетиламин (6,58 ml, 47 mmol) в диметилформа45 мид се охлажда до 0°С и се прибавя дициклохексилкарбодиимид (9,13 g, 44,4 mmol). Реакционната смес се разбърква в продължение на една нощ при 4°С, филтрира се до отделяне на твърдия продукт и филтратът се изпарява под вакуум до сухо. Остатъкът се разпределя между етилацетат и вода чрез непрекъснато противотоково разделяне (4-кратно прехвърляне). Водните фази се обединяват, изпаряват се до сухо и остатъкът се разпределя между n-бутанол и 5% об./об. водна оцетна киселина чрез непрекъснато противотоково разделяне (12-кратно прехвърляне). Суровият пептид, получен чрез изпаряване на обединените n-бутанолови фази, се пречиства чрез колонна хроматография върху силикагел, при използване на 5% об./об. метанол в хлороформ и 10% об./об, метанол в хлороформ като елуиращи разтворители. Фракциите, съдържащи продукта се обединяват, изпаряват се до сухо и водният разтвор на остатъка се пропуска през колона с анионобменна смола (AG 1-Х2), за да се отстрани №-1-бутоксикарбонил-№ -нитро-аргининът. След това колоната се промива с вода и обединените водни фази и промивни9 те води се сушат чрез замразяване до получаване на азапептидно производно, добив 16,67 g (89%), т.т. 109-111°С (разл.), [а]25-39,0° (с, 1 в метанол), RfA 0,62, RfB 0,74, RfCP0,59, RfD 0,70, RfE 0,20, RfF 0,60, RfH 0,61, R(K 0,85, RfQ 0,13.
Етап 4. N-t-бутоксикарбониловото производно се разтваря в етилацетат и се обработва с 3N НС1 в етилацетатен разтвор (4 еквивалента) в продължение на 1 час при стайна температура.
Етап 5. (RH). Разтвор на t-бутоксикарбонилхидразид (2,90 g, 22 mmol) и 2,4,5-трихлорфенилов естер на N-бензилоксикарбонил0-бензил-Е-тирозин (11,71 g, 20 mmol) в диметилформамид (40 ml) се държи при стайна температура в продължение на една нощ. Обработва се по обичаен начин и след това остатъкът се прекристализира из диетилов етер/петролеев етер (т.к. 60-80°С) до получаване на защитен хидразид под формата на бял прах, 3,46 g, (67%), т.т. 126-127°С, [ ]«-13,2° (с, 1 в метанол), RfD 0,82, R(E 0,65, RfF 0,63, RfH 0,70.
Етап 6. (R=H). l-N-бензилоксикарбонил0-бензил-Е-тирозил-2-(-бутоксикарбонилхидразид (5,19 g, 10 mmol) се разтваря в етилацетат (50 ml) и се обработва с 5N хлороводород в етилацетат (8 ml, 40 mmol) в продължение на един час при стайна температура. Етилацетатът се отстранява под вакуум и хидрохлоридът се промива с диетилов етер и се суши:
Етап 7. (R=H). Полученият хидрохлорид се разбърква с тетрахидрофуран (75 ml) и се прибавя триетиламин (1,15 g, 8 mmol), a след това метилов естер на Ц-карбонил-Ь-левцин (1,36 g, 8 mmol). След престой в продължение на 16 h при стайна температура, реакционната смес се обработва по обичаен начин и остатъкът се прекристализира из етилацетат/петролеев етер (т.к. 60-80°С) до получаване на азатрипептидно производно 4,57 g (77,7%), т.т. 156-157°С, [а]24-10,3° (с, 1 в метанол), RfD 0,81, RfE 0,45, RfP 0,26, RfQ 0,47.
Етап 8. Към разтвор на метилов естер Ц-бензилоксикарбонил-О-бензил-Ь-тирозилазаглицил-Е-левцин (2,95 g 5 mmol) в метанол (50 ml) се прибавя хидразинхидрат (5 ml, 100 mmol). След престой 2 h при стайна температура хидразидът се утаява с вода и се прекристализира из метанол/диетилов етер, добив 2,74 g (92,8%), т.т. 169-170°С, [а]24 -9,05° (с, в диметилформамид), RfA 0,76, RfB 0,75, RfC 0,73, RfD 0,63, RfF 0,60, R,H 0,55.
Етапи 9 и 10 (R=H). Хидразид на Nбензилоксикарбонил-О-бензил-Е-тирозилазаглицил-Е-левцин (1,18 g, 2,0 mmol) се разтваря в диметилформамид (10 ml) и след охлаждане на разтвора до -20°С се прибавя 5,49М разтвор на хлороводород в диоксан (1,46 ml, 8 mmol) и след това t-бутилнитрит (0,25 ml, 2,2 mmol). След 5 min разтворът се охлажда до -30°С и се прибавя предварително охладена смес на ЬС-питро-Е-аргинил-Е-пролин етиламид хидрохлорид (0,836 g, 2,2 mmol) и триетиламин (1,43 ml, 10,2 mmol) в диметилформамид (10 ml). Реакционната смес се разбърква при -10°С в продължение на 1 h и при 4°С в продължение на 48 h. Обработва се по обичайния начин и пентапептидното производно се пречиства върху колонна хроматография със силикагел, като се използват хлороформ и 3% об./об. метанол в хлороформ като елуиращи разтворители, добив 0,695 (38,5%), RjA 0,71, RfB 0,72, RfC 0,84.
Етап 11. (R=H). Каталитична редукция с 5% тегл./тегл. паладий върху въглен об./ об. водна оцетна киселина, съдържаща два еквивалента хлороводород.
Етап 12. Към изстуден (-20°С) разтвор на N-бензилоксикарбонил-Е-триптофан (33,84 g, 100 mmol) и N-метилморфолин (11,0 ml, 100 mmol) в тетрахидрофуран (200 ml) при енергично разбъркване се прибавя етилхлорформиат (9,0 ml, 95 mmol). След 2 min се прибавя предварително изстуден (-20’0 разтвор на метилов естер на L-серин хидрохлорид (17,10 g, 110 mmol) и N-метилморфолин (12,1 ml, 110 mmol) в диметилформамид (150 ml) и разбъркването продължава при -20°С 30 min и 3 h при стайна температура. Обикновено се получава масло. Двукратна кристализация из етилацетат/петролеев етер (т.к. 60-80°С) води до получаване на дипептидно производно (30,53 g, 69,5%), т.т. 140,5-141°С, [а] “-22,13° (с, 1,4 в диметилформамид).
Етап 13. Горният естер (30,53 g, 69,5 mmol) се разтваря в метанол (1 1) и се прибавя 62% тегл./об. разтвор на хидразинхидрат (15 ml). След 16 h хидразидът се събира, промива се с метанол и диетилов етер и се оставя да кристализира из етанол (23,18 g, 75,8%), т.т. 178-179°С, [а]“-25,27° (с, 1 в диметилформамид), RjD 0,65, RjE 0,20, RfF 0,43, RjH 0,50.
Етапи 14 и 15. 6,02N хлороводород в диоксан (0,77 ml, 4,64 mmol) се прибавя при разбъркване към изстуден (-20°С) разтвор на хидразид на N-бензилоксикарбонил-Е-триптофил-L-cepnH (0,502 g, 1,16 mmol) в диметилформамид (5 ml) и след това t-бутилнитрит (0,14 ml, 1,22 mmol). След 30 min разтворът се охлажда до -30°С и се неутрализира чрез прибавяне на триетиламин (0,65 ml, 4,65 mmol). Прибавя се предварително охладена (-20°С) смес на Е-тирозилазаглицил-Е-левцил-Е-аргинил-Ь-пролинетиламид дихидрохторид (0,547 g, 0,77 mmol) и триетиламин (0,108 ml, 0,77 mmol) в диметилформамид (5 ml) и разбъркването продължава 1 h при -20°С и 48 h при 4°С. Реакционната смес се филтрира и филтратът се изпарява под вакуум до сухо. Суровият пептид се пречиства чрез колонна хроматография със силикагел, като се използват хлороформ, 10% об./об. метанол в хлороформ и смес на хлороформ-метанол-вода (11:8:2 об./об./об.) като елуиращи разтворители, добив 0,424 g (52,9%), [а] “-16,84° (с, 1 в метанол), RfA 0,61, R(C 0,36, RfD 0,67, RfK 0,90.
Етапи 16 и 17 са известни от литературата взаимодействия.
Етап 18 (R=Me). Както етап 5, добив 66%, т.т. 102-104°С, [cr]24-15,5° (с, 1 в метанол), RfD 0,76, RfE 0,68, RfF 0,76, RfH 0,74.
Етап 19. (R=Me). Както етап 6.
Етап 20. (R=Me). Както етап 7, добив 93%, т.т. 145-146°С, [а]“+8,7° (с, 1,2 в метанол), RfA 0,88, RfB 0,88° RfC 0,83, RfD 0,80, RfE 0,59, RfF 0,78, R(H 0,73.
Етап 21. IN натриев хидроксид (12 ml, 12 mmol) се прибавя при разбъркване към разтвор на метилов естер на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Е-тирозилазаглицил-Ь-левцин (2,41 g, 4 mmol) в метанол (36 ml) и стайна температура и разбъркването продължава 3 h. Метанолът се отстранява под вакуум и водният разтвор (40 ml) на остатъка се подкислява с лимонена киселина (pH 3) и се екстрахира с етилацетат. След промиване на етилацетатния екстракт с вода и сушене (Na2SO4) разтворителят се изпарява и остатъкът в смес с диметилформамид-вода (3:2 об./об. 200 ml) се пропуска през колона с AG 1х-2 смола (100 ml). Колоната се промива с посочения разтворител (50 ml) и трипептидът се елуира с 0,2М оцетна киселина в диметилформамид-вода (3:2 об./об.). Фракциите на трипептида се събират, изпаря ват се под вакуум и остатъкът се разпрашава с диетилов етер и се събира, 1,22 g (51,7%), т.т. 195°С (разл.), [а]^-25,4° (с, 1 в диметилформамид) .
Етап 22. (R=Me). Както етап 10, добив 43%, [а] “-25,9° (с, 1 в метанол), RfA 0,72, RfB 0,76, RfC 0,85.
Етап 23. (R=Me). Както етап 11.
Етап 24. (R=Me). Също като етап 15, освен, че крайният продукт може да се пречисти също чрез гел-филтруване върху Sephadex LH-20 в диметилформамид след колонна хроматография над силикагел, добив 63%, [«]“-24,76“ (с, 1 в метанол), RfA 0,58, RfC 0,42, RfD 0,65, RfK 0,95.
Етап 25. Към охладена (0°С) суспензия на N-бензилоксикарбонил-Е-пролин (24,9 g, 100 mmol), семикарбазид хидрохлорид (11,2 g, 100 mmol) и триетиламин (14,5 ml, 100 mmol) в диметилформамид (200 ml) се прибавя при разбъркване дициклохексилкарбодиимид (20,6 g, 100 mmol) и разбъркването продължава 16 h при 4°С. Дициклохексилкарбамидът се отстранява чрез филтриране и филтратът се изпарява до малък обем. Прибавя се вода (200 ml) и разтворът се екстрахира с етилацетат (3x50 ml). Продуктът се утаява из воден разтвор в продължение на около час. Прекристализацията из воден метанол води до получаване на дипептидамид (16,5 g, 53,9%), т.т. 189-190°С, [а]24-43,6° (с, 1,4 в диметилформамид), RfD 0,54, RfF 0,52, RfH 0,38, RfK 0,78.
Етап 26. Каталитична редукция над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен в 80% об./об. воден диметилформамид в продължение на 6 h при стайна температура в присъствие на два еквивалента хлороводород.
Етап 27. Към разтвор на N-бензилоксикарбонил-Е-левцин (8,24 g, 31 mmol) и триетиламин (4,55 ml, 32,5 mmol) в тетрахидрофуран (100 ml) при -10 до -15°С се прибавя етилхлорформиат (2,83 ml, 29,5 mmol). Реакционната смес се разбърква в продължение на 3 min при тази температура и след това, при енергично разбъркване, се излива в разтвор на N -нитро-Е-аргинин (5,79 g, 31 mmol) в 2N натриев хидроксид (15,5 ml, 31 mmol) и диметилформамид (50 ml) при -10°С. Разбъркването продължава 30 min при -10°С и след това при стайна температура 1 h. Разтворителите се отстраняват под вакуум и остатъкът се разпределя между етилацетат (50 ml) и вода (50 ml). Водната фаза се отделя и екстрахира със следващи две порции етилацетат. Обединените органични фази се промиват веднъж с вода и се изхвърлят. Обединените водни фази се подкисляват с наситен разтвор на лимонена киселина и се екстрахират с етилацетат (3x100 ml). Етилацетатните екстракти се обединяват, промиват се с вода, сушат се (Na2SO4) и се изпаряват до сухо. Прекристализацията на остатъка из етилацетат/петролев етер (т.к. 60-80°С) води до получаване на дипептид (8,98 g, 62%), т.т. 150-165°С (разл.).
Етап 28. Разтвор на N-бензилоксикарбонил-Е-левцил-(№’-нитро)-Ь-аргинин (9,2 g, 20 mmol), L-пропилазаглицинамид хидрохлорид (4,2 g, 20 mmol), 1-хидроксибензотриазол (5,4 g, 40 mmol) и триетиламин (3 ml, 20 mmol) в диметилформамид (200 ml) се охлажда до 0°С и се прибавя дициклохексилкарбодиимид (8,2 g, 40 mmol). Реакционната смес се разбърква в продължение на една нощ при стайна температура. Дициклохексилкарбамидът се отстранява чрез филтриране и филтратът се изпарява до сухо. Прекристализацията на остатъка из метанол-диетилов етер води до получаване на тетрапептидно производно (12,2 g, 98,3%), т.т. 88-90°С, [а]24-30,2° <с, 1,6 в диметилформамид), RfD 0,57, RfF 0,40, RfH 0,26, RfK 0,63.
Етап 29. Хидрогениране над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен във воден етанол в продължение на 16 h в присъствие на два еквивалента хлороводород.
Етап 30. 2,4,5-трихлорфенилов естер на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Е-тирозин (6,484 g, 11,0 mmol) и метилов естер на Dаланин хидрохлорид (1,396 g, 10 mmol) се разтварят в диметилформамид (50 ml) и към разтвора, който е разбъркван в продължение на една нощ при стайна температура, се прибавя триетиламин (1,4 ml, 10,0 mmol). Реакционната смес се обработва по обичайния начин и остатъкът кристализира из горещ етилацетат до получаване на 3,782 g, добив 77% метилов естер на защитен дипептид, т.т. 163°С, [а]248-30,2° (с, 1,1 в диметилформамид).
Етап 31. Метилов естер на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Ь-тирозил-О-аланин (3,435 g, 7,0 mmol) се разтваря в топъл метанол (400 ml) и разтворът се обработва с 62% тегл./об. хидразинхидрат (10 ml, 120 mmol) и сместа се оставя при 25°С в продължение на една нощ. Хидразидът се филтрира, промива се с метанол и диетилов етер и се оставя да кристализира два пъти из кипящ метанол, добив 3,068 g, 89,2%, т.т. 217°С, [ ]24-20,44° (с, 1,1 в диметилформамид), RfA 0,73, RfB 0,75, RfC 0,67, RfD 0,70, RfE 0,50, RfF 0,54, RfH 0,67, R,K 0,85, RfQ 0,25.
Етапи 32 и 33. Към изстуден (-20°С) разтвор на хидразид на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Ь-тирозил-О-аланин (1,18 g, 2,4 mmol) се прибавя при разбъркване 6,02М разтвор на хлороводород в диоксан (1,6 ml, 9,6 mmol), последвано от прибавяне на t-бутилнитрит (0,29 ml, 2,52 mmol). След 15 min се прибавя предварително охладен (-20°С) разтвор на Ь-левцин-Ь-аргинил-Е-пролилазаглицинамид дихидрохлорид (1,03 g, 2,0 mmol) и триетиламин (1,62 ml, 11,6 mmol) в диметилформамид (15 ml). Разбъркването продължава 24 h при 4°С. Триетиламинхидрохлоридът се отстранява чрез филтриране и филтратът се изпарява до сухо под вакуум. Остатъкът се пропуска през колона със силикагел и колоната се елуира с 5% об./об. метанол в хлороформ, 10% об./об. метанол в хлороформ и смес на хлороформ/метанол/вода (11:8:2 об./об./об.). Фракциите, съдържащи продукта се обединяват и се изпаряват и пептидът се хроматографира отново през колона със силикагел при използване на ацетонитрил/вода (3:1 об./об.) като елуиращ разтворител, добив 890 mg (46,4%), ί ]23-45,7° (с, 1,1 в метанол), RfA 0,54, RfB 0,69, RfC 0,41.
Етап 34. Както етап 11.
Етап 35. Както етап 15, добив 43%, [ 1^-41,4° (с, 1,3 в метанол), RjA 0,80, RfC0,47, RfD 0,65, R,K 0,95.
Етап 38. Както етап 3, добив 69%, т.т. 135°С, RfA 0,49, R,B 0,65, RfC 0,46, RfD 0,64, RfF 0,35, RfH 0,19, RfK 0,86.
Етап 39. Както етап 4.
Етап 40. (A=D-Phe). Разтвор на N-бензилоксикарбонил-О-фенилаланин (7,41 g, 24,8 mmol) и метилов естер на L-левцин (3,62 g, 25 mmol) в етилацетат (100 ml) се охлажда до 0°С и се прибавя дициклохексилкарбодиимид (5,15 g, 25 mmol). Реакционната смес се разбърква в продължение на една нощ при 4°С. Обичайната обработка, последвана от прекристализация на остатъка из етилацетат/петролев етер (т.к. 60-80°С), води до получаване на дипептид (9,1 g, 86%), т.т. 123-124°С, [a]2D6-18,7° (с, 2,1 в метанол), R(D 0,76, RfE 0,65, RfF 0,74, RfH 0,73.
Етап 41. (A=D-Phe). Каталитична редукция над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен.
Етап 42. (A=D-Phe). Към разтвор на 2,4,5-трихлорфенилов естер на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Ь-тирозин (4,89 g, 8,36 mmol) и метилов естер на О-фенилаланил-Ьлевцин хидрохлорид (2,5 g, 7,6 mmol) в диметилформамид се прибавя при разбъркване триетиламин (1,1 ml, 7,6 mmol) и разбъркването продължава една нощ при стайна температура. Триетиламинхидрохлоридът се филтрира и филтратът се изпарява до сухо. Прекристализацията на остатъка из воден метанол води до получаване на трипептидно производно, 3,6 g (69,7%), т.т. 183-184°С, RfD 0,82, RfE 0,69, RfH 0,78, RfP 0,71, RfQ 0,82.
Етап 43. (A=D-Phe). Разтвор на получения вече метилов естер (3,42 g, 5,04 mmol) и хидразинхидрат (60 mmol) в диметилформамид (30 ml) се разбърква при стайна температура в продължение на 4 h, концентрира се до малък обем и хидразидът се утаява чрез прибавяне на вода (500 ml). Събира се, промива се с вода, метанол/диетилов етер (1:4 об./об.) и диетилов етер и се суши. Добив 2,94 g (85,9%), т.т. 179-180°С, RfA 0,81, RfB 0,79, RfC 0,88, RfD 0,69, RfE 0,49, R,F 0,65, R,H 0,67, R,P 0,25, RfQ 0,57.
Етапи 44 и 45. (A=D-Phe). Разтвор на 6,02 M хлороводород в диоксан (1,83 ml, 11 mmol) се прибавя към разтвор на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Ь-тирозил-О-фенилаланил-Ьлевцинхидразид (1,86 g, 2,75 mmol) в диметилформамид (5 ml) при -20°С, последвано от прибавяне на t-бутилнитрит (0,33 ml, 2,89 mmol). След 2 min се прибавя предварително охладен (-20^0 разтвор на триетиламин (1,89 ml, 13,5 mmol) и Νω -нитро-Е-аргинил-Е-пролилазаглицинамид хидрохлорид (1,02 g, 2,5 mmol) в диметилформамид (10 ml) и реакционната смес се разбърква в продължение на една нощ при 4°С. Обичайната обработка води до получаване на хексапептидно производно, което по-нататък се пречиства чрез колонна хроматография със силикагел (120 g) при използване на 5% об./об. метанол в хлороформ, 10% об./об. метанол в хлороформ и смес на хлороформ/метанол/вода (11:8:2 об./об./об.) като елуиращи разтворители, добив0,74g (29,3%), т.т. 137-139°С, RfA 0,68, RfB 0,72, RfC 0,58, RfD 0,62, RfH 0,39, RfK 0,95.
Етапи 46, 47 и 48. L-пироглутамил-Ехистидинхидразид (10 mmol) се превръща в азид, както е описано в основния метод (а) и се свързва с метилов естер на L-триптофил-Есерин (11 mmol, получен при хидриране на Nбензилоксикарбонилово производно над 5% тегл./ тегл. паладий върху въглен в диметилформамид) при -10°С в продължение на 30 min и при 4°С в продължение на 24 h. Триетиламинхидрохлоридът се отстранява чрез филтриране и филтратът се изпарява до сухо. Суровият пептид се пречиства чрез колонна хроматография над силикагел при използване на 10% об./об. метанол в хлороформ, 20% об./об. метанол в хлороформ и смес на хлороформ/метанол/вода (11:8:2 об./об./об.) като елуиращи разтворители, добив 70%, т.т. 142145°С, (разл.) R/l 0,39, RfB 0,72, RfC 0,45, RfD 0,48, RfK 0,61.
Етап 49. Метилов естер на L-пироглутамил- L-хистидил- L-триптофил - L-серин (5,4 mmol) се разтваря в диметилформамид (70 ml) и се обработва с хидразинхидрат (100 mmol) в продължение на 4 h. Диметилформамидът се отстранява под вакуум и остатъкът се разтваря в етанол, събира се, измива се с етанол и диетилов етер и се суши (88,2%), т.т. 184189°С, RfA 0,18, RfB 0,55, RfC 0,39, R,D 0,27, RfK 0,58.
Етап 50. (A=D-Trp). Дициклохексилкарбодиимид (4,87 g, 23,6 mmol) се прибавя към разтвор на М-бензилоксикарбонил-О-триптофан (7,27 g, 21,5 mmol), левцинметилов естер (13,12 g, 21,5 mmol) и 1-хидроксибензотриазол (5,8 g, 43 mmol) в диметилформамид (50 ml) при 0°С. Реакционната смес се разбърква при стайна температура в продължение на една нощ и се обработва по обичайния начин. Прекристализацията из етилацетат/петролеев етер (т.к. 60-80°С) води до получаване на дипептидно производно (9,55 g), което показва следи от онечиствания при тънкослойна хроматография (t.l.c.). Пречиства се чрез колонна хроматография над силикагел (300 g) при използване на хлороформ и 5% об./об. метанол в хлороформ като елуиращи разтворители. Добив 9,18 g (91,7%), т.т. 151-153°С, RfA 0,84, RfB 0,80, R(C 0,86, RfD 0,78, RfE 0,61, RfF 0,68, RfH 0,73, R,P 0,55, R(Q 0,73.
Етап 51. (A=D-Trp). Каталитична редукция в 80% об./об. воден димстилформамид над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен в продължение на 5 h.
Етап 52. (A=D-Trp). Разтвор на 2,4,5трихлорфенилов естер на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Ь-тирозин (11,69 g, 20 mmol) и метилов естер на О-триптофил-Ь-левцин (6,28 g, 19 mmol) в диметилформамид (100 ml) се разбърква при стайна температура в продължение 60 h. Реакционната смес се обработва по обичайния начин и остатъкът кристализира из етилацетат/петролев етер (т.к. 60-80°С) до получаване на трипептидно производно, 8,52 g (62,5%), т.т. 165-166°С, RfA 0,78, RfB 0,73, RfC 0,84, RfD 0,80, RfE 0,62, RfF 0,70, RfH 0,76, R(P 0,58, RfQ 0,68.
Етап 53. (A=D-Trp). Разтвор на метилов естер на N-бензилоксикарбонил-О-бензилЬ-тирозил-О-триптофил-Е-левцин (7,26 g, 10,1 mmol) в смес на метанол (200 ml) и диметилформамид (50 ml) се обработва с хидразинхидрат (100 mmol) при стайна температура. След 24 h разтворът се концентрира (^30 ml) и се прибавя вода (500 ml). Трипептидхидразидът се събира, измива се с вода, метанол/диетилов етер (1:4 об./об.) и диетилов етер и се суши, 6,86 g (94,6%), т.т. 200-202°С, ИД 0,90, RfB 0,95, RfC 0,90, RfD 0,74, RfQ 0,59.
Етапи 54 и 55. (A=D-Trp). Изстуден (20°С) разтвор на N-бензилоксикарбонил-О-бензил-Е-тирозил-О-триптофил-Е-левцин хидразид (1,97 g, 2,75 mmol) в диметилформамид (10 ml) се обработва при разбъркване с 6,02 М разтвор на хлороводород в диоксан (1,83 ml, 11 mmol), последвано от t-бутилнитрит (0,33 ml, 2,89 mmol). След 2 min се прибавя предварително охладен (-20°С) разтвор на N*-HHTpo-Lаргинил-Е-пролилазаглицинамид хидрохлорид (1,02 g, 2,5 mmol) и триетиламин (1,89 ml, 13,5 mmol) в диметилформамид (10 ml) и реакционната смес се разбърква в продължение на една нощ при 4°С. Обработва се по обичайния начин и остатъкът (1,27 g) се пропуска през колона над силикагел (230 g) и колоната се елуира с хлороформ и 5% об./об. метанол в хлороформ. Добив 0,91 g (34,4%), т.т. 139140°С, RfA 0,67, RfB 0,72, RfC 0,58, RfD 0,62, RfH 0,34, RfK 0,95.
Етап 56. (A=D-Tyr(Me)). Разтвор на ZD-Tyr(Me)-OH (3,17 g, 9,64 mmol), H-LeuOMe.HCl (1,92 g, 10,6 mmol), 1-хидроксибен зотриазол (2,6 g, 19,2 mmol) и триетиламин (1,6 ml, 11 mmol) в диметилформамид (30 ml) се охлажда до 0°С и към него се прибавя Ν,Ν’дициклохексилкарбодиимид (2,29 g, 11,1 mmol). Реакционната смес се разбърква в продължение на една нощ при 4°С и след това се обработва по обичайния начин. Прекристализацията из горещ циклохексан води до получаване на защитено дипептидно производно. Добив 1,41 g (95,2%), RfD 0,83, RfE 0,69, RfP 0,72, RfQ 0,76.
Етап 57. (A=D-Tyr(Me)). Каталитична редукция над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен в метанол/диметилформамид/вода (8:1:1 об./об./об.), съдържащ 1,2 еквивалента хлороводород в продължение на 3 h.
Етап 58. (A=D-Tyr(Me)). Разтвор на ZD-Tyr(Bzl)-OCp (8,2mmol), H-D-Tyr(Me)-LeuОМЗ.НС1 (8,2 mmol) и триетиламин (8,2 mmol) в диметилформамид (60 ml) се разбърква в продължение на една нощ при стайна температура и след това реакционната смес се обработва по обичайния начин. Продуктът се промива с диетилов етер и се суши. Добив 81,2%, т.т. 191-192°С, RfD 0,85, RfE 0,73, R(F 0,72, R,Q 0,78.
Етап 59. (A=D-Tyr(Me)). Хидразинхидрат (12,9 mmol) се прибавя към разтвор на Z-Tyr(Bzl)-D-Tyr(Me)-Leu-OMe (4,59 g, 6,4 mmol) в диметилформамид (25 ml) и метанол (50 ml) и реакционната смес се оставя цяла нощ при стайна температура. Метанолът се отстранява под вакуум и продуктът се утаява с вода, събира се, промива се с вода и се суши, т.т. 212-213°С, RfE 0,49, RfF 0,66, R,H 0,69, R,Q 0,70.
Етап 60 и 61. (A=D-Tyr(Me)). Хидразидът от етап 59 (3,54, 5,0 mmol) се разтваря в DMF (10 ml) и при разбъркване разтворът се охлажда до -20°С. Прибавя се 5,92М НС1 в диоксан (3,38 ml, 20 mmol), последвано от tбутилнитрит (0,6 ml, 5,25 mmol). След 2 min се прибавя предварително охладен разтвор на H-Arg(NO2)-Pro-Azgly-NH2.HCl (2,04 g, 5 mmol) и триетиламин (3,55 ml, 25 mmol) в DMF (10 ml) и се разбърква в продължение на една нощ при 4°С. Реакционната смес се обработва по обичайния начин и суровият продукт се пречиства чрез колонна хроматография със силикагел при използване на хлороформ, 5% об./об. метанол в хлороформ, 10% об./об. метанол в хлороформ като елуиращи разтворители. Добив 3,72 g (70,9%), RfA 0,64, RfB 0,72, RfC
0,55, RfD 0,66, RfF 0,40, RfH 0,52.
Етап 62. (A=D-Ser(Bu’)). Протича както етап 56. Продуктът се оставя да кристализира от воден метанол. Добив 90,4%, т.т. 107108°С, RfD 0,80, RfE 0,68, RfF 0,73, RfH 0,72, RfP 0,72, RfQ 0,74.
Етап 63. (A=D-Ser(Bu')). Каталитична редукция над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен в DMF-вода (8:2 об./об.) в продължение на 5 h.
Етап 64. (A=D-Ser(Bu')). Разтвор на ZD-Tyr(Bzl)-OCp (19,17 g, 32,7 mmol) и НSer(Bu*)-Leu-OMe (32,7 mmol) в DMF (100 ml) се оставя при стайна температура в продължение на 72 h. След обичайната обработка се получава твърдо вещество, което се събира, промива с диетилов етер и суши. Добив 17,6 g (79,4%), т.т. 135-137°С, RfD 0,80, RfH 0,77, RfQ 0,81.
Етап 65. (A=D-Ser(Bu')). Протича както етап 59. Рекристализация из воден метанол. Добив (56,2%), т.т. 134-136°С, RfD 0,66, RfH 0,64, RfQ 0,64.
Етапи 66 и 67. (A=D-Ser(Bu')). Протича както етапи 60 и 61. Продуктът се пречиства чрез колонна хроматография над силикагел при използване на хлороформ, 5% об./об. метанол в хлороформ като елуиращи разтворители. Добив 38,5%, т.т. 142-145°С, RfA 0,64, RfB 0,71, RfC 0,55, RfD 0,65, RfF 0,46, RfH 0,43, RfQ 0,16.
Етап 68. (A=D-Tyr(Me)). Дициклохексилкарбодиимид (5,13 g, 24,9 mmol) се прибавя при разбъркване към охладен (0°С) разтвор на Z-D-Tyr(Me)-OH (22,6 mmol), НMeLeu-OMe.HBr (5,98 g, 24,9 mmol), триетиламин (3,5 ml, 24,9 mmol) и 1-хидроксибензотриазол (6,12 g, 45,2 mmol) в DMF (50 ml) и се разбърква в продължение на една нощ при 4°С. Реакционната смес се обработва по обичайния начин и продуктът се пречиства чрез колонна хроматография над силикагел при използване на хлороформ като разтворител. Добив 55,2%, масло, RfD 0,83, RfE 0,78, RfH 0,79, RfP 0,80, RfQ 0,79.
Етап 69. (A=D-Tyr(Me)). Каталитична редукция над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен в метанол/вода (8:2 об./об.), съдържащ 1 еквивалент хлороформ в продължение на 6 h.
Етап 70. (A=D-Tyr(Me)). Протича както етап 58. Продуктът се пречиства чрез колонна хроматография над силикагел при из ползване на диетилов етер като разтворител.
Етап 71. (A=D-Tyr(Me)). Разтвор на ZTyr(Bzl)-D-Tyr(Me)-MeLeu-OMe (4,85 g, 6,69 mmol) и хидразинхидрат (120,7 mmol) в метанол (150 ml) се оставя една нощ при стайна температура. Хидразидът се пречиства чрез прибавяне на вода, събира се и се оставя да кристализира из метанол/вода. Добив 91,1%, т.т. 129-131°С, RfD 0,79, RfE 0,60, R(F 0,68, RfH 0,73, RfQ 0,77.
Етапи 72 и 73. (A=D-Tyr(Me)). Протичат както етапи 60 и 61. Прекристализация из метанол/диетилов етер, добив 23,8%, т.т. 152154°С, RfA 0,67, RfB 0,68, RfC 0,58, RfD 0,59, RfH 0,50, RfK 0,94, RfQ 0,35.
Етап 74. Етилхлорформиат (1,8 ml, 18 mmol) се прибавя при разбъркване към охладен (-15°С) разтвор на Z-Pre-OH (5,99 g, 20 mmol) и N-метилпиролидон (2,2 ml, 20 mmol) в DMF (60 ml). След 2 min се прибавя предварително охладен (-15°С) разтвор на H-MeLeuOMe.HBr (4,8 g, 20 mmol) и триетиламин (2,8 ml, 20 mmol) в DMF (20 ml) и реакционната смес се разбърква при 0°С в продължение на 30 min и една нощ при стайна температура. Обработва се по обичайния начин. Добив 7,54 (90%), масло.
Етап 75. Каталитична редукция над 5% тегл./тегл. паладий върху въглен в метанол, съдържащ 1 еквивалент хлороформ в продължение на 3 h.
Етап 76. Куплиране на Z-Tyr(Bu’)-OH (16,02 g, 43,2 mmol) и H-D-Phe-MeLeuOMe.HCl (13,15 g, 40,0 mmol) както в етап 74. Продуктът се пречиства чрез колонна хроматография над силикагел при използване на хлороформ, 5% об./об. метанол в хлороформ като разтворител. Добив 60%, масло, R(G 0,48, R.P 0,71, R.Q 0,73.
Етап 77. Разтвор на Z-Tyr(Bu')-D-PheMeLeu-OMe (6,52 g, 9,76 mmol) и хидразинхидрат (97,6 mmol) в метанол (50 ml) се оставят една нощ при стайна температура. Метанолът се отстранява под вакуум и хидразидът кристализира из метанол/диетилов етер, измива се с метанол/вода (1:1 об./об.) и диетилов етер и се суши. Добив 5,2 g (80%), т.т. 135°С, R(D 0,75, RfE 0,69, RfF 0,66, RfH 0,79, RfQ 0,73.
Етапи 78 и 79. Протичат както етапи 60 и 61. През време на обработката продуктът се утаява из етилацетат. Филтрира се, промива се с етилацетат и диетилов етер и се суши.
Добив 58,5%, т.т. 145-148°С, RfD 0,72, RfF0,40, R(H 0,53, RfQ 0,18.

Claims (14)

  1. Патентни претенции
    I—I 1. Полипептид c формула
    IGlu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F I в която A e D-Tyr, D-Tyr(Me), D-Ser, D-Ser(Bu'), D-Phe, D-Ala или D-Trp, В e Leu 10 или MeLeu, Е e Azgly и F е амино, или A e Azgly или Azala, В e Leu, Е е директна връзка и F е етиламино; и негови фармацевтично приемливи и ветеринарно приемливи присъединителни с киселина соли. 15
  2. 2. Полипептид съгласно претенция 1, ха- рактеризиращ се с това, че А е D-Tyr, DTyr(Me), D-Ser, D-Ser(Bu'), D-Phe, D-Ala или D-Trp, В e Leu или MeLeu, Е е Azgly и F е амино. 20
  3. 3. Полипептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А е Azgly или Azala, В е Leu, Е е директна връзка и F е етиламино.
  4. 4. Полипептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А е D-Tyr(Me), D- 25 Ser, D-Ser(Bu'), D-Phe, D-Ala или D-Trp, В e Leu или MeLeu, Е e Azgly и F е амино.
  5. 5. Полипептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А е D-Tyr(Me), DSer(Bu') или D-Phe, В е Leu или MeLeu, Е е 30 Azgly и F е амино.
  6. 6. Полипептид съгласно претенция 1 с формула
    Blu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Leu-Arg-ProAzgly-NH 35
  7. 7. Полипептид съгласно претенция 1 с формула ^Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Tyr(Me)-LeuArg- Pro- Azglv-NH2
  8. 8. Полипептид съгласно претенция 1 с 40 формула
    LGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser- (Bu‘)-LeuArg- Pro- Azgly- N H2
  9. 9. Метод за получаване на полипептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че (а) отстраняват се една или повече защитни групи от защитен полипептид с аминокиселинна последователност с формула I до получаване на съединение с формула I;
    Cl (б) взаимодействай1и-ОН,1С1и-Н15-ОН, -Glu-His-Trp-OH, ^Olu-His-Trp-Ser-OH,I-Glu-His-Trp-SerТуг-ОН,
    LGlu-His-Trp-Ser-Tyr-A-OH, Blu-HisTrp-Ser-Tyr-A-B-OH,
    Klu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-OH или tGlu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-OH, или техен азид или естер със H-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-SerTyr-А-В-Arg- Pro- E-F,
    H-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-A-B-ArgPro-E-F, H-B-Arg-Pro-E-F,
    H-Arg-Pro-E-F, H-Pro-E-F, или
    H-Azgly-NH2, съответно, и (в) взаимодейства карбоксилна киселина с формула iGlu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-OH II или неин естер или анхидрид с амоняк или етиламин.
  10. 10. Фармацевтичен, в даден случай ветеринарен състав, съдържащ полипептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че е в комбинация с фармацевтично приемлив, в даден случай ветеринарно приемлив разтворител или носител.
  11. 11. Състав съгласно претенция 10, характеризиращ се с това, че е предназначен за орално прилагане.
  12. 12. Състав съгласно претенция 10, характеризиращ се с това, че е предназначен за парентерално прилагане.
  13. 13. Полипептид съгласно претенция 1, както е описан в кой да е от примери 1 до 5.
  14. 14. Полипептид съгласно претенция 1, както е описан в кой да е от примери 6 до 10.
BG98123A 1976-05-11 1993-09-24 Полипептид BG60740B2 (bg)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB19327/76A GB1524747A (en) 1976-05-11 1976-05-11 Polypeptide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG60740B2 true BG60740B2 (bg) 1996-01-31

Family

ID=10127509

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG98123A BG60740B2 (bg) 1976-05-11 1993-09-24 Полипептид

Country Status (27)

Country Link
US (1) US4100274A (bg)
JP (1) JPS52136172A (bg)
AT (2) AT379400B (bg)
AU (1) AU508025B2 (bg)
BE (1) BE854467A (bg)
BG (1) BG60740B2 (bg)
CA (1) CA1101844A (bg)
CH (2) CH627151A5 (bg)
CS (1) CS199673B2 (bg)
DD (1) DD136738A5 (bg)
DE (1) DE2720245C2 (bg)
DK (1) DK149596C (bg)
ES (1) ES458691A1 (bg)
FI (1) FI64139C (bg)
FR (1) FR2351092A1 (bg)
GB (1) GB1524747A (bg)
HU (1) HU179990B (bg)
IE (1) IE44426B1 (bg)
IL (1) IL52014A (bg)
NL (2) NL191793C (bg)
NO (2) NO147304C (bg)
NZ (1) NZ183931A (bg)
PL (2) PL104362B1 (bg)
SE (2) SE437837B (bg)
SU (1) SU910116A3 (bg)
YU (1) YU40672B (bg)
ZA (1) ZA772433B (bg)

Families Citing this family (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4234571A (en) * 1979-06-11 1980-11-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide derivatives of luteinizing hormone releasing hormone
DE3411224A1 (de) * 1984-03-27 1985-10-10 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Verfahren zur racematarmen herstellung von peptidzwischenprodukten der gonadorelin- und gonadorelinanaloga-synthese und neue zwischenprodukte bei diesem verfahren
US4666885A (en) * 1985-02-08 1987-05-19 Fernand Labrie Combination therapy for treatment of female breast cancer
US4760053A (en) * 1984-08-02 1988-07-26 Fernand Labrie Combination therapy for selected sex steroid dependent cancers
US4705778A (en) * 1985-10-22 1987-11-10 Sri International Orally active LHRH analogs
JPH0284272U (bg) * 1988-12-20 1990-06-29
JP2672677B2 (ja) * 1989-02-09 1997-11-05 タツプ・フアーマシユーテイカルズ・インコーポレイテツド Ｌｈｒｈ同族体
US5372996A (en) * 1989-03-10 1994-12-13 Endorecherche, Inc. Method of treatment of androgen-related diseases
EP0462189B1 (en) * 1989-03-10 1995-09-27 Endorecherche Inc. Combination therapy for treatment of estrogen sensitive diseases
EP0485392B1 (en) * 1989-07-07 1998-09-09 Endorecherche Inc. Androgen derivatives for use in the inhibition of sex steroid activity
WO1991000733A1 (en) * 1989-07-07 1991-01-24 Endorecherche Inc. Method of treatment of androgen-related diseases
GB9112859D0 (en) * 1991-06-14 1991-07-31 Ici Plc Peptide process
WO1993023053A1 (en) * 1992-05-21 1993-11-25 Endorecherche Inc. INHIBITORS OF TESTOSTERONE 5α-REDUCTASE ACTIVITY
US7833543B2 (en) * 1995-06-07 2010-11-16 Durect Corporation High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device
US6413536B1 (en) 1995-06-07 2002-07-02 Southern Biosystems, Inc. High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device
CA2192782C (en) 1995-12-15 2008-10-14 Nobuyuki Takechi Production of microspheres
CA2192773C (en) 1995-12-15 2008-09-23 Hiroaki Okada Production of sustained-release preparation for injection
WO1999007874A1 (fr) * 1996-06-13 1999-02-18 Itoham Foods Inc. Procede de production de derives de lh-rh
US20060025328A1 (en) * 1997-05-28 2006-02-02 Burns Patrick J Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs
US6051558A (en) * 1997-05-28 2000-04-18 Southern Biosystems, Inc. Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs
US6242421B1 (en) 1997-11-06 2001-06-05 Richard Lloyd Bowen Methods for preventing and treating Alzheimer's disease
US6833373B1 (en) 1998-12-23 2004-12-21 G.D. Searle & Co. Method of using an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
US6858598B1 (en) 1998-12-23 2005-02-22 G. D. Searle & Co. Method of using a matrix metalloproteinase inhibitor and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
US20050020524A1 (en) * 1999-04-15 2005-01-27 Monash University Hematopoietic stem cell gene therapy
US20040258672A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-23 Monash University Graft acceptance through manipulation of thymic regeneration
US20040265285A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-30 Monash University Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration
US20040259803A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-23 Monash University Disease prevention by reactivation of the thymus
US20040241842A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-02 Monash University Stimulation of thymus for vaccination development
US20070274946A1 (en) * 1999-04-15 2007-11-29 Norwood Immunoloty, Ltd. Tolerance to Graft Prior to Thymic Reactivation
AUPR074500A0 (en) * 2000-10-13 2000-11-09 Monash University Treatment of t cell disorders
ES2154590B1 (es) 1999-05-20 2001-11-01 Lipotec Sa Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida
AR023940A1 (es) 2000-05-03 2002-09-04 Eriochem Sa Procedimiento para la produccion de microcapsulas de liberacion prolongada de peptidos solubles en agua
DE10032256C2 (de) * 2000-07-03 2003-06-05 Infineon Technologies Ag Chip-ID-Register-Anordnung
US20060088512A1 (en) * 2001-10-15 2006-04-27 Monash University Treatment of T cell disorders
PT2762140T (pt) 2001-02-19 2017-07-04 Novartis Ag Resumo
MXPA03010401A (es) 2001-05-16 2004-03-09 Novartis Ag Combinacion que comprende n-[5-[4- (4-metil- piperazino-metil) -benzoilamido] -2-metilfenil] -4-(3-piridil)-2 -pirimidin-amina, y un agente quimioterapeutico.
US20060287282A1 (en) * 2001-06-25 2006-12-21 Steiner Mitchell S Compositions comprising a SARM ad GnRH agonist or a GnRH antagonist, and methods of use thereof
US7812044B2 (en) 2001-11-13 2010-10-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Anticancer agents
GB0128510D0 (en) * 2001-11-28 2002-01-23 Novartis Ag Organic compounds
US20030144203A1 (en) * 2001-12-19 2003-07-31 Voyager Pharmaceutical Corporation Methods for slowing senescence and treating and preventing diseases associated with senescence
GB0206215D0 (en) 2002-03-15 2002-05-01 Novartis Ag Organic compounds
DE60324416D1 (de) 2002-05-16 2008-12-11 Novartis Ag Verwendung von edg rezeptor bindenden wirkstoffen für die krebstherapie
US20040001889A1 (en) 2002-06-25 2004-01-01 Guohua Chen Short duration depot formulations
SI2218448T1 (sl) * 2002-12-13 2016-01-29 Durect Corporation Sistem za oralno dajanje zdravila, ki obsega tekoči nosilec materialov z visoko viskoznostjo
KR101204247B1 (ko) 2003-07-22 2012-11-22 아스텍스 테라퓨틱스 리미티드 3,4-이치환된 1ｈ-피라졸 화합물 및 그의 시클린 의존성키나제 (ｃｄｋ) 및 글리코겐 합성효소 키나제-3(ｇｓｋ-3) 조정제로서 용도
GB0320806D0 (en) * 2003-09-05 2003-10-08 Astrazeneca Ab Therapeutic treatment
US20080279812A1 (en) * 2003-12-05 2008-11-13 Norwood Immunology, Ltd. Disease Prevention and Vaccination Prior to Thymic Reactivation
EP2253614B1 (en) 2004-04-07 2012-09-19 Novartis AG Inhibitors of IAP
GB0512324D0 (en) 2005-06-16 2005-07-27 Novartis Ag Organic compounds
NZ552029A (en) * 2004-06-25 2009-01-31 Takeda Pharmaceutical Metastin derivatives and use thereof
ES2378671T3 (es) * 2004-09-17 2012-04-16 Durect Corporation Composición anestésica local prolongada que contiene SAIB
GB0425854D0 (en) * 2004-11-25 2004-12-29 Astrazeneca Ab Therapeutic treatment
JP5475235B2 (ja) 2005-01-21 2014-04-16 アステックス・セラピューティクス・リミテッド 医薬化合物
US8404718B2 (en) 2005-01-21 2013-03-26 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
ES2336826T3 (es) * 2005-05-03 2010-04-16 Novetide, Ltd. Procedimientos para la produccion de un peptido que presenta una amida c-terminal.
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
US20070027105A1 (en) 2005-07-26 2007-02-01 Alza Corporation Peroxide removal from drug delivery vehicle
EP1996550A2 (en) 2005-09-27 2008-12-03 Novartis AG Carboxyamine compounds and their use in the treatment of hdac dependent diseases
GB0605120D0 (en) 2006-03-14 2006-04-26 Novartis Ag Organic Compounds
AU2007247112B2 (en) 2006-05-09 2010-08-26 Novartis Ag Combination comprising an iron chelator and an anti-neoplastic agent and use thereof
ATE502943T1 (de) 2006-09-29 2011-04-15 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine als pi3k-lipidkinasehemmer
WO2008044045A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2073803B1 (en) 2006-10-12 2018-09-19 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2117521B1 (en) 2006-11-03 2012-06-27 Durect Corporation Transdermal delivery systems comprising bupivacaine
MX2009008584A (es) 2007-02-15 2009-08-18 Novartis Ag Combinacion de lbh589 con otros agentes terapeuticos para el tratamiento de cancer.
CA2706931C (en) * 2007-12-06 2015-05-12 Durect Corporation Oral pharmaceutical dosage forms
US8222424B2 (en) 2008-03-24 2012-07-17 Novartis Ag Arylsulfonamide-based matrix metalloprotease inhibitors
EP2628726A1 (en) 2008-03-26 2013-08-21 Novartis AG Hydroxamate-based inhibitors of deacetylases b
US20100260844A1 (en) 2008-11-03 2010-10-14 Scicinski Jan J Oral pharmaceutical dosage forms
RU2519673C2 (ru) * 2008-11-28 2014-06-20 Новартис Аг Комбинации ингибитора hsp90
WO2010083617A1 (en) 2009-01-21 2010-07-29 Oncalis Ag Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors
JP2012516345A (ja) 2009-01-29 2012-07-19 ノバルティス アーゲー 星細胞腫治療用置換ベンゾイミダゾール
UA105794C2 (uk) 2009-06-26 2014-06-25 Новартіс Аг 1,3-ДИЗАМІЩЕНІ ПОХІДНІ ІМІДАЗОЛІДИН-2-ОНУ ЯК ІНГІБІТОРИ Cyp17
US8389526B2 (en) 2009-08-07 2013-03-05 Novartis Ag 3-heteroarylmethyl-imidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl derivatives
AU2010283806A1 (en) 2009-08-12 2012-03-01 Novartis Ag Heterocyclic hydrazone compounds and their uses to treat cancer and inflammation
AU2010284972A1 (en) 2009-08-20 2012-03-08 Novartis Ag Heterocyclic oxime compounds
EA201200321A1 (ru) 2009-08-26 2012-09-28 Новартис Аг Тетразамещенные гетероарильные соединения и их применение в качестве модуляторов mdm2 и/или mdm4
IN2012DN02139A (bg) 2009-09-10 2015-08-07 Novartis Ag
MX2012005293A (es) 2009-11-04 2012-06-19 Novartis Ag Derivados de sulfonamida heterociclicos utiles como inhibidores de mek.
WO2011064211A1 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Novartis Ag Benzene-fused 6-membered oxygen-containing heterocyclic derivatives of bicyclic heteroaryls
JP5456908B2 (ja) 2009-12-08 2014-04-02 ノバルティス アーゲー ヘテロ環式スルホンアミド誘導体
CU24130B1 (es) 2009-12-22 2015-09-29 Novartis Ag Isoquinolinonas y quinazolinonas sustituidas
US8440693B2 (en) 2009-12-22 2013-05-14 Novartis Ag Substituted isoquinolinones and quinazolinones
BR112012032189B1 (pt) 2010-06-16 2020-11-03 Endorecherche, Inc usos de um agonista ou antagonista de lhrh em associação com um modulador de receptor de estrogênio seletivo e com um precursor de esteróide sexual para a preparação de uma medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças relacionadas com estrogênio e kits
CN102947274A (zh) 2010-06-17 2013-02-27 诺瓦提斯公司 联苯基取代的1,3-二氢-苯并咪唑-2-亚基胺衍生物
WO2011157793A1 (en) 2010-06-17 2011-12-22 Novartis Ag Piperidinyl substituted 1,3-dihydro-benzoimidazol-2-ylideneamine derivatives
UA112517C2 (uk) 2010-07-06 2016-09-26 Новартіс Аг Тетрагідропіридопіримідинові похідні
JP2013537210A (ja) 2010-09-16 2013-09-30 ノバルティス アーゲー １７α−ヒドロキシラーゼ／Ｃ１７，２０−リアーゼ阻害剤
EP2673277A1 (en) 2011-02-10 2013-12-18 Novartis AG [1, 2, 4]triazolo [4, 3 -b]pyridazine compounds as inhibitors of the c-met tyrosine kinase
CN103492390A (zh) 2011-03-08 2014-01-01 诺瓦提斯公司 氟苯基双环杂芳基化合物
JP6002210B2 (ja) 2011-04-28 2016-10-05 ノバルティス アーゲー １７α−ヒドロキシラーゼ／Ｃ１７，２０−リアーゼ阻害剤
BR112013029482A2 (pt) 2011-05-16 2016-08-09 Genzyme Corp utilização de antagonistas cxr4
CA2838029A1 (en) 2011-06-09 2012-12-13 Novartis Ag Heterocyclic sulfonamide derivatives
US8859535B2 (en) 2011-06-20 2014-10-14 Novartis Ag Hydroxy substituted isoquinolinone derivatives
WO2012175487A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 Novartis Ag Cyclohexyl isoquinolinone compounds
KR20140025530A (ko) 2011-06-27 2014-03-04 노파르티스 아게 테트라히드로-피리도-피리미딘 유도체의 고체 형태 및 염
BR112014006223A8 (pt) 2011-09-15 2018-01-09 Novartis Ag 3-(quinolin-6-iltio)-[1,2,4-triazol[4,3-a] piradinas 6-substituídas, seus usos, composições farmacêuticas, e combinação
EP2785717B1 (en) 2011-11-29 2016-01-13 Novartis AG Pyrazolopyrrolidine compounds
PE20141598A1 (es) 2011-12-22 2014-11-14 Novartis Ag Derivados de dihidro-benzo-oxazina y dihidro-pirido-oxazina
WO2013093850A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 Novartis Ag Quinoline derivatives
MX2014007729A (es) 2011-12-23 2015-01-12 Novartis Ag Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace.
KR20140107578A (ko) 2011-12-23 2014-09-04 노파르티스 아게 Bcl2와 결합 파트너의 상호작용을 억제하기 위한 화합물
MX2014007730A (es) 2011-12-23 2015-01-12 Novartis Ag Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace.
WO2013096060A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Novartis Ag Compounds for inhibiting the interaction of bcl2 with binding partners
CN104136429A (zh) 2011-12-23 2014-11-05 诺华股份有限公司 用于抑制bcl2与结合配偶体相互作用的化合物
US8815926B2 (en) 2012-01-26 2014-08-26 Novartis Ag Substituted pyrrolo[3,4-D]imidazoles for the treatment of MDM2/4 mediated diseases
US20130310387A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Novartis Ag Monocyclic Heteroaryl Cycloalkyldiamine Derivatives
EP2855483B1 (en) 2012-05-24 2017-10-25 Novartis AG Pyrrolopyrrolidinone compounds
JP6427097B2 (ja) 2012-06-15 2018-11-21 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッドＴｈｅ Ｂｒｉｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｉｎｃ． 癌を処置するための組成物および該組成物を製造するための方法
JP6236083B2 (ja) 2012-08-13 2017-11-22 ノバルティス ティーアゲズントハイト アーゲー 脾臓チロシンキナーゼ（ｓｙｋ）の阻害剤としての二環式ヘテロアリールシクロアルキルジアミン誘導体
MD20150043A2 (ro) 2012-10-02 2015-08-31 Epitherapeutics Aps Inhibitori ai histon-demetilazelor
TW201422625A (zh) 2012-11-26 2014-06-16 Novartis Ag 二氫－吡啶并－□衍生物之固體形式
EP2948453B1 (en) 2013-01-22 2017-08-02 Novartis AG Pyrazolo[3,4-d]pyrimidinone compounds as inhibitors of the p53/mdm2 interaction
WO2014115077A1 (en) 2013-01-22 2014-07-31 Novartis Ag Substituted purinone compounds
WO2014128612A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Novartis Ag Quinazolin-4-one derivatives
PL2961736T3 (pl) 2013-02-27 2018-08-31 Gilead Sciences, Inc. Inhibitory demetylaz histonowych
AU2014233453A1 (en) 2013-03-15 2015-10-01 Durect Corporation Compositions with a rheological modifier to reduce dissolution variability
US20150018376A1 (en) 2013-05-17 2015-01-15 Novartis Ag Pyrimidin-4-yl)oxy)-1h-indole-1-carboxamide derivatives and use thereof
UY35675A (es) 2013-07-24 2015-02-27 Novartis Ag Derivados sustituidos de quinazolin-4-ona
WO2015022664A1 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Novartis Ag Compounds and compositions as inhibitors of mek
WO2015022663A1 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Novartis Ag Compounds and compositions as inhibitors of mek
US9227969B2 (en) 2013-08-14 2016-01-05 Novartis Ag Compounds and compositions as inhibitors of MEK
CA2920059A1 (en) 2013-09-22 2015-03-26 Calitor Sciences, Llc Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use
BR112016012141A2 (pt) 2014-01-15 2017-08-08 Novartis Ag "combinações farmacêuticas, uso das mesmas, e embalagem comercial"
EP3327006B1 (en) 2014-03-28 2020-05-20 Calitor Sciences, LLC Substituted heteroaryl compounds and methods of use
CA2943824A1 (en) 2014-03-31 2015-10-08 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of histone demethylases
JP2017513931A (ja) 2014-04-03 2017-06-01 インビクタス オンコロジー ピーヴィティー．リミテッド 超分子コンビナトリアル治療薬
SG11201701182VA (en) 2014-08-27 2017-03-30 Gilead Sciences Inc Compounds and methods for inhibiting histone demethylases
WO2017044434A1 (en) 2015-09-11 2017-03-16 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Substituted heteroaryl compounds and methods of use
JP7254076B2 (ja) 2017-11-19 2023-04-07 サンシャイン・レイク・ファーマ・カンパニー・リミテッド 置換ヘテロアリール化合物及び使用方法
JP7021356B2 (ja) 2017-12-21 2022-02-16 ヘフェイ インスティテューツ オブ フィジカル サイエンス， チャイニーズ アカデミー オブ サイエンシーズ ピリミジン誘導体系キナーゼ阻害剤類
AU2019209960B2 (en) 2018-01-20 2023-11-23 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use
WO2021059266A1 (en) * 2019-09-26 2021-04-01 S.I.S. Shulov Innovative Science Ltd. Anti-aging compositions and methods of use thereof
US20220395553A1 (en) 2019-11-14 2022-12-15 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
CA3167217A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Durect Corporation Sustained release drug delivery systems with reduced impurities and related methods

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3914412A (en) * 1973-10-11 1975-10-21 Abbott Lab {8 Des{13 Gly{9 {0 10 -Gn{13 RH nonapeptide amide analogs in position 6 having ovulation-inducing activity
US4005063A (en) * 1973-10-11 1977-01-25 Abbott Laboratories [Des-gly]10 -GnRH nonapeptide anide analogs in position 6 having ovulation-inducing activity
US3901872A (en) * 1974-03-13 1975-08-26 American Home Prod P-glu-his-trp-ser-tyr-d-pgl-leu-arg-pro-gly-nh' 2 'and intermediates
JPS50142563A (bg) * 1974-04-26 1975-11-17
US3896104A (en) * 1974-05-22 1975-07-22 American Home Prod P-glu-his-trp-ser-tyr-d-lys-leu-arg-pro-gly-nh' 2 'and intermediates
DE2438350C3 (de) * 1974-08-09 1979-06-13 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Peptide mit starker LH-RH/FSH-RH-Wirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
US3971737A (en) * 1975-03-24 1976-07-27 American Home Products Corporation [2-Methyl-Ala6 ]LRH
US4010125A (en) * 1975-06-12 1977-03-01 Schally Andrew Victor [D-Trp6 ]-LH-RH and intermediates therefor
US4018726A (en) * 1975-06-12 1977-04-19 Andrew Victor Schally [D-Phe6 ]-LH-RH and intermediates therefor
US4024121A (en) * 1976-01-27 1977-05-17 Schally Andrew Victor (Pyro)-Glu-His-Trp-D-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHR and intermediates
US3992530A (en) * 1975-12-08 1976-11-16 American Home Products Corporation [D-2-(1,4-Cyclohexadienyl)gly]6 -des-gly10 -lrh nonapeptide amides

Also Published As

Publication number Publication date
NL191793B (nl) 1996-04-01
US4100274A (en) 1978-07-11
YU40672B (en) 1986-04-30
NO147304C (no) 1983-03-16
NO147304B (no) 1982-12-06
NL191793C (nl) 1996-08-02
NO822984L (no) 1977-11-14
CH629475A5 (de) 1982-04-30
ES458691A1 (es) 1978-08-16
FI64139C (fi) 1983-10-10
SE437993B (sv) 1985-03-25
DK149596C (da) 1987-01-05
DK207977A (da) 1977-11-12
NO771644L (no) 1977-11-14
CA1101844A (en) 1981-05-26
ATA217979A (de) 1981-06-15
SE8007763L (sv) 1980-11-05
PL108860B1 (en) 1980-05-31
DD136738A5 (de) 1979-07-25
GB1524747A (en) 1978-09-13
AT365562B (de) 1982-01-25
AU2468177A (en) 1978-11-02
FI771480A (bg) 1977-11-12
JPS6113480B2 (bg) 1986-04-14
HU179990B (en) 1983-01-28
NL7705130A (nl) 1977-11-15
AU508025B2 (en) 1980-03-06
YU117277A (en) 1983-02-28
FR2351092B1 (bg) 1980-02-22
ZA772433B (en) 1978-03-29
SE7705432L (sv) 1977-11-12
AT379400B (de) 1985-12-27
IE44426B1 (en) 1981-11-18
CS199673B2 (en) 1980-07-31
JPS52136172A (en) 1977-11-14
NL970002I2 (nl) 1997-05-01
SU910116A3 (ru) 1982-02-28
FR2351092A1 (fr) 1977-12-09
NO149586C (no) 1984-05-16
DE2720245A1 (de) 1977-11-24
DK149596B (da) 1986-08-04
DE2720245C2 (de) 1986-09-25
CH627151A5 (bg) 1981-12-31
IE44426L (en) 1977-11-11
NO149586B (no) 1984-02-06
SE437837B (sv) 1985-03-18
ATA335877A (de) 1985-05-15
NZ183931A (en) 1979-03-16
FI64139B (fi) 1983-06-30
IL52014A0 (en) 1977-07-31
PL104362B1 (pl) 1979-08-31
NL970002I1 (nl) 1997-03-03
PL197889A1 (pl) 1978-02-13
BE854467A (fr) 1977-11-10
IL52014A (en) 1979-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG60740B2 (bg) Полипептид
FI60553C (fi) Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat
US3992365A (en) Agonist analogues of luteinizing hormone releasing hormone
FI71567B (fi) Foerfarande foer framstaellning av gonadoliberinderivat
DK148305B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af et lh-rh-analogt nonapeptidamidderivat eller et salt eller metalkompleks deraf
US3842064A (en) Psychopharmacologically active tetra-,penta-,hexa-,and hepta-peptides
US4075191A (en) Biologically active amides
JPS6317839B2 (bg)
US4124703A (en) Luliberin analogs
US3888838A (en) Decapeptide having luteinizing hormone (lh)-and follicle stimulating hormone (fsh)-releasing activity, salts and compositions thereof, a process for preparing same, and intermediates therefor
US3862927A (en) Process for preparation of vasoactive intestinal peptide
US4083967A (en) Nona- and decapeptides
DK164875B (da) Gonadoliberinderivater og deres farmaceutisk acceptable syreadditionssalte eller metalcomplexer, en fremgangsmaade til fremstilling heraf samt et farmaceutisk praeparat indeholdende disse
SE461042B (sv) Peptider med tillvaextbefraemjande aktivitet jaemte veterinaera kompositioner innehaallande naemnda peptider
HU194913B (en) Process for producing novel gonadoliberin derivatives containing in the sixth position aromatic amino carboxylic acid and medical preparations containing these compounds
Meldal et al. Synthesis of a proposed antigenic hexapeptide from Escherichia coli K88 protein fimbriae
HU187503B (en) Process for preparing gonadoliberine derivatives containing beta-aspartyl group
FI75579C (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbar polypeptid.
KITAGAWA et al. Alternative Synthesis of Substance P
DK149272B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af lhrh-analoge nona- eller decapeptider eller farmaceutisk anvendelige syreadditionssalte deraf
DK149755B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af lhrh-analoge nonapeptidamidderivater eller fysiologisk acceptable salte eller metalkomplekser deraf
北川幸己 et al. Alternative synthesis of substance P.
CS199674B2 (cs) Způsob výroby polypeptidů
HU190207B (en) Process for production of new gonadoliberine derivatives
JPS5824428B2 (ja) ポリペプチドの製造法