CS199674B2 - Způsob výroby polypeptidů - Google Patents

Způsob výroby polypeptidů Download PDF

Info

Publication number
CS199674B2
CS199674B2 CS79207A CS20779A CS199674B2 CS 199674 B2 CS199674 B2 CS 199674B2 CS 79207 A CS79207 A CS 79207A CS 20779 A CS20779 A CS 20779A CS 199674 B2 CS199674 B2 CS 199674B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
group
ser
protected
protecting group
azgly
Prior art date
Application number
CS79207A
Other languages
English (en)
Inventor
Anand S Dutta
Barrington J Furr
Michael B Giles
Original Assignee
Ici Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB19327/76A external-priority patent/GB1524747A/en
Application filed by Ici Ltd filed Critical Ici Ltd
Priority to CS79207A priority Critical patent/CS199674B2/cs
Publication of CS199674B2 publication Critical patent/CS199674B2/cs

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

(LH) z hypofýzy. Nyní bylo zjištěno, že substituční zavedení azaglycinu do polohy 10 spojené se substitučním zavedením různých D-a-anrinokyselin do polohy 6-luliberinu nebo substituční zavedení azaglycinu nebo azalaninu do polohy 6 luliberinu spojené s náhradou terminálního glycinamidu v luliberinu ethylaminoskupinou vede ke sloučeninám, které jsou účinnější než luliberin z hlediska jejich schopnosti uvolňovat luteinizační hormon.
V souhlase s tím popisuje vynález způsob výroby polypeptidů obecného vzorce I
Ty r - A-8 -A rs ~Pr° ~E~F (l) a jejich farmaceuticky nebo veterinárně upotřebitelných adičních solí s kyselinami.
Ve shora uvedeném obecném vzorci I a v celém textu jsou zbytky aminokyselin označovány svými standardními zkratkami (viz Pure and Applied Ohemietry, 1974, 40, 317 až 331). Zbytkem a-aza-aminokyseliny je takový zbytek, v němž α-CH-skupina aminokyseliny je nahrazena dusíkem. Zkratka a-aza-aminofcyseliny se odvozuje od zkratky odpovídající aminokyseliny zařazením prefixu „Az“. Tak tedy Azgly představuje azaglycin a Azala znamená azalanin. V případech, kde není uvedena konfigurace příslušné aminokyseliny, má tato aminokyselina (s výjimkou a-aza-aminokyselin, které v sousedství karboxylové skupiny neobsahují žádné centrum asymetrie] přírodní α-konfiguraci. Rovněž zkratky Me a Bu1 jsou v daném oboru běžné a standardně používané apředstavují methylovou resp. terc.butylovou skupinu.
Zvlášť vhodnými skupinami sloučenin vyráběných způsobem podle vynálezu jsou:
látky shora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém
A znamená D-Tyr, D-Tyr (Me), D-Ser, D-Ser, (Bu1), D-Phe, D-Ala nebo D-Trp,
B představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a F představuje aminoskupinu;
látky shora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém
A znamená Azgly nebo Azala,
B představuje Leu,
E znamená přímou vazbu a
F představuje ethylaminoskupinu;
látky shora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém
A znamená D-Tyr (Me), D-Ser, D-ser (Bu1),
D-Phe, D-Ala nebo D-Trp,
B představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a
F představuje anninctekupinu.
Výhodnou skupinu sloučenin vyráběných způsobem podle vynálezu tvoří látky ishora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém
A znamená D-Tyr (Me), D-Ser (Bu1) nebo D-Phe,
B představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a
F představuje aminoskupinu.
Tři výhodné sloučeniny vyráběné způsobem podle vynálezu mají následující struktury:
^i^HiS-Trp-Ser-^r-D-SertBuí-Leu-Ars-Pro-Az^-NH^
ΓΊ _(~íu-His-rrp-Ser-Tyr-O-Tyr fMe )-Leu-Ar£-Pro-Azgly-NHz
Vhodnými farmaceuticky nebo veterinárně upotřebitelnými adičními solemi sloučenin vyráběných způsobem podle vynálezu s kyselinami jsou například hydrochloridy, fosfáty, citráty nebo acetáty.
Způsob podle vynálezu spočívá v odštěpení jedné nebo několika běžných chráničích skupin peptidů z příslušného chráněného polypéptidu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I.
Při práci způsobem podle vynálezu může výchozí materiál obsahovat tolik chránících skupin, kolik nese zbytků potřebujících chránění, jako například některé nebo všechny zbytky vyskytující se v produktu jako volné hydroxylové skupiny nebo bazické iminoskuplny.
Chránícími skupinami používanými při práci způsobem podle vynálezu mohou být příslušné skupiny popsané ve standardních učebnicích chemie peptidů, jako jsou například M. Bodansky a M. A. Ondetti, „Peptide Symthesis“, Interscience, New York, 1966, kapitola IV; F. M. Finn a K. Hofmann, „The Proteins“, sv. II, redaktoři H. Neurath a R. L. Hill, Academie Press lne,. New York, 1976, str. 106, „Amino-acids, Peptides and Proteins“ (Specialist Periodical Reports), The Chemical Society, London, sv. 1 až 8. Ve shora uvedených publikacích jsou rovněž popsány různé metody odštěpování chránících skupin.
Zvlášť vhodnou chránící skupinou iminoskupiny je benzyloxykarbonylová skupina a zvlášť vhodnou chránící skupinou hydroxylové skupiny je skupina benzylová. Obě tyto chránící skupiny je možno snadno odštěpit hydrogenolýzou, například v přítomnosti paládia na uhlí jako katalyzátoru.
Další vzlášť vhodnou chrániči skupinou iminoskupiny je terc.bytoxykarbonylová skupina a další zvlášť vhodnou chránící skupinou hydroxylové skupiny je skupina terc.butylová. Obě tyto skupiny je možno snadno odštěpit působením kyseliny, jako chlorovodíku nebo trifluoroctové kyseliny.
Další zvlášť vhodnou chránící skupinou
Iminoskupiny je benzyloxykarbonylová nebo· terc.butoxykárbonylová skupina a zvlášť vhodnou chrániči skupinou hydroxylové skupiny skupina terc.butylová. Tyto chrániči
S skupiny lze snadno odštěpit působením bromovodíku v kyselině octové.
Výchozí materiály pro práci způsobem podle vynálezu je možno připravit ze známých sloučenin standardními kondenzačními reakcemi z chemie peptidů, standardním zaváděním chránících skupin, známých z chemie peptidů a standardním odštěpováním chránících skupin, známých z chemie peptidů. Tyto reakce jsou popsány například v níže uvedených příkladech 1 a 2.
Jak již bylo uvedeno výše, vykazují sloučeniny, které Je možno vyrobit způsobem podle vynálezu vlastnosti agonistů luliberinu, tj. napodobují působení luliberinu. Luliberin je přírodní hormon vylučovaný hypothalamem, který působí na hypofýzu tak, že hypofýza uvolňuje luteinizační hormon (LHj a folikulostimulalční hormon (FSHj. Tyto dva hormony hypofýzy řídí reprodukční procesy, přičemž posledně jmenovaný, folikulostimulační hormon, působí na vaječníky v tom smyslu, že napomáhá zrání folikulů, a prvně zmíněný, luteinizační hormon, vyvolává ovulaci. Sloučeniny obecného vzorce I jsou neočekávatelně účinnější než luliberin pokud jde o schopnost uvolňovat luteinizační hormon, a jsou proto užitečné pro řízení a/ /nebo zlepšování reprodukce u živočichů. Zmíněné sloučeniny jsou zejména užitečné pro množení velkých domácích zvířat během anoestru a při všech typech umělé inseminace k přesnějšímu řízení doby ovulace. Sloučeniny podle vynálezu mohou být rovněž používány k zlepšení infertility u mužů a žen.
Agonistické vlastnosti popisovaných sloučenin vůči luliberinu je možno prokázat například jejich schopností vyvolat ovulaci u krys s konstantním esterem, sterilizovaných androgenem, nebo jejich schopností uvolňovat luteinizační hormon a folikulostimulační hormon, měřeno dvojitou radioimunologickou zkouškou na protilátky v krevní plasmě nedospělých krysích samců nebo v krevní plasmě anestrálních nebo diestrálních ovcí.
Shora zmíněný test na krysách sterilizovavaných androgenem se provádí následovně:
Androgeneta sterilizované krysí samice, připravené podáním 100 ,ug testosteron-propionátu krysám ve třetím, čtvrtém a pátém dnu věku, mají trvalý estrus, jak je možno prokázat vaginálními výtěry a přítomností četných preoivulačních folikulů ve vaječníeích. Aplikace luliberinu a jeho aktivních analogů způsobí uvolnění ovulační dávky luteinizačního hormonu a folikulostimulačního hormonu, což je možno prokázat přítomností vajíček ve vejcovodech a čerstvých žlutých tělísek ve Vaječníeích.
Všechny sloučeniny jmenované v tomto textu jsou účinnější než luliberin co do jejich schopnosti vyvolávat ovulaci u krys s konstantním esterem a mimoto nevykazují žádné známky toxicity při podání v dávce nejméně čtyřnásobně vyšší než je jejich minimální účinná dávka. Zejména pak výhodné sloučeniny podle vynálezu, což jsou látky uvedené v příkladech 6, 8 a 9, jsou zhruba stokrát účinnější než luliberin a nemají žádné toxické účinky při podání v dávce stonásobně vyšší než je jejich minimální účinná dávka. Sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu je možno používat ve formě farmaceutických nebo veterinárních prostředků obsahujících jako účinnou látku sloučeninu vyrobenou způsobem podle vynálezu, v kombinaci s farmaceuticky nebo veterinárně upotřebitelným ředidlem nebo nosičem.
Tento prostředek může být například ve formě vhodné k orální nebo· perlinguální aplikaci, například ve formě tablety, kapsle, roztoku či suspenze, k nasální aplikaci, například ve formě šňupacího prásku, nosního spreje nebo niosních kapek, k vaginální nebo rektální aplikaci, například ve formě čípků, nebo· k parenterální aplikaci, například ve formě sterilního injekčního roztoku nebo suspenze.
Obecně je možno shora uvedené prostředky připravovat obvyklým způsobem za použití běžných pomocných látek, v případě prostředků k orální aplikaci však může být výhodné opatřit prostředek povlakem chránícím· polypeptiidickou účinnou komponentu před účinkem enzymů v žaludku.
Popisované prostředky mohou kromě polypsptidu vyrobeného způsobem podle vynálezu obsahovat ještě jedno nebo několik známých léčiv vybraných ze skupiny zahrnující prostaglandinové deriváty, například prostaglandin Fža, clopirostenol nebo fluprostenol, a další léčiva, jako clomiphene nebo tamo<xifen.
Výhodným prostředkem je preparát k orálnímu podání v jednotkové dávkovači formě, například tableta, kapsle, kapky nebo bolus, obsahující v každé jednotkové dávce otd 2,5 do 500 mg, s výhodou od 10 do 100 mg, polypeptidu, nebo preparát vhodný k parenterálnímu podání, obsahující od 5 ,ug do 1 mg polypeptidu na 1 ml roztoku, s výhodou od 10 pg do 100 μg polypeptidu na 1 ml roztoku.
Prostředkem k parenterálnímu podání je s výhodou roztok v isotonickém solném nebo isctonickém dextrózovém roztoku, popřípadě pufrovaný na pH 5 až 9. Prostředek k parenterálnímu podání může být alternativně ve formě, z níž se účinná látka postupně pomalu uvolňuje, v kterémžto případě je množství polypeptidu na jednotkovou dávku obecně vyšší než při použití běžných injekčních preparátů. Výhodný prostředek k parenterálnímu podání s pomalým uvolňováním účinné látky obsahuje v jednotkové dávce od 100 /ug do 1,00 mg polypeptidu.
Popisované prostředky se normálně aplikují tak, aby při orálním podání činila denní dávka od 50 ,ug/kg do 20 mg/kg a denní dávka při parenterálním podání, například intravenózní, sutíkutánní či intramuskulární injekcí nebo infusí, se pohybovala od 0,2 ^g/kg do 100 jug/kg. U lidí odpovídá toto dávkování celkové denní dávce od 3,5 mg do 1,4 g při orálním podání a celkové denní dávce od 14 jug do 7 mg při podání parenterálním. Při aplikaci prostřednictvím sliznic se dávky pohybují mezi výše zmíněnými dávkami pro orální a parenterální podání.
Vynález ilustrují následující příklady provedení, jimiž se však rozsah vynálezu v žádném směru neomezuje.
V příkladech uváděné hodnoty R( se týkají vzestupné chromatografie na tenké vrstvě silikagelu. Rozpouštědlovými systémy používanými při této chromatografii jsou systémy i
1-butanol - kyselina octová - voda (4:1:5 objem/objem) (RfAj,
1- butanol - kyselina octová - voda - pyridin (15:3:12:10 objem/objem) (RfB),
2- butanol-3% (hmotnost/objem) vodný roztok hydroxidu amonného (3:1 objem/objem) (RfC), acetonitril - voda (3:1 objem/objem) (R(D), aceton - chloroform (1:1 objem/objem) (RfE), chloroform - ethanol (1:4 objem/objem) (RfF), cyklohexan - ethylacetát [1:1 objem/objem) (RfG), cyklohexan - ethylacetát - methanol (1:1:1 objem/objem) (R£H), chloroform - methanol - voda (11:8:2 objem/objem) (R[I<), chloroform - methanol (19:1 objem/objem) (RfP), a chloroform - methanol (9:1 objem/objem) (RfQ).
Ve všech případech se chromatografické desky zkoumají v ultrafialovém světle a detekují se fluorescaminem, ninhydrinem a chlor-škr ob-jodovým činidlem. Pokud není uvedeno jinak, znamená uvedení symbolu Rf, že při těchto postupech byla detekována pouze jediná skvrna.
Kyselé hydrolyzáty všech produktů v příkladech se získávají záhřevem peptiidu nebo chráněného peptidu s 6 N kyselinou chlorovodíkovou obsahující 1 % hmotnost/objem j fenolu v zatavené evakuované ampuli na teplotu 100 °C po dobu 16 hodin. Složení aminokyselin v každém hydrolyzátu se stanovuje ze pomoci analyzátoru aminokyselin (LoCarte) a ve všech případech je v souladu s očekávaným složením.
Výraz „zpracuje se obvyklým způsobem“, používaný v příkladech, znamená, že po reakci se všechny pevné podíly odfiltrují, filtrát se odpaří k suchu při teplotě pod 40 °C, zbytek se rozpustí v ethylacetátu, roztok se promyje 20% roztokem kyseliny citrónové, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a znovu vodou, vysuší se bezvodým síranem sodným a ethylacetát se odpaří ve vakuu, čímž se získá žádaná sloučenina.
Příklad 1 a 2
Syntéza L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-tryptoíyl-L-seryl-L-tyrosyl-A-B-L-arginyl-L-prolyl-azaglycinamidu
Obecný postup (oj schémata 1 a 2) mg chráněného dekapeptidického derivátu [obsahujícího SerfBu1) v poloze 6 nebo TyrfBu1) v poloze 5] se rozpustí v 5 ml 90% (objem/objem] vodné kyseliny trifluoroctové, přidají se 3 kapky (3-merkaptoethanolu a roztok se nechá 45 minut stát při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se lyofilizuje jednou z vody a dvakrát z terc.butanolu. Výtěžek činí 90 až 100 %.
Sloučeniny podle vynálezu, připravené tímto způsobem, jsou uvedeny v příkladech 1 a 2, shrnutých do následující tabulky:
199874
Tabulka
Příklad A číslo B E F Postup Výtě- žek (%) Papírová elektroforéza RfA Rf (vztaženo na luliberin) pH 2,1 pH 6,5
1 D-Ser Leu jargly NH2 0 95 0,94 0,96 0,25
2 D-Phe MeLeu jargly NH2 0 46 0,84 0,87 0,35
Výchozí látky pro použití ve shora uvede- Bzl = benzyl ném postupu je možno připravit podle násle- Z = benzyloxykarbonyl dujících schémat 1 a 2 [postup (o)]. Boc = terc.butoxykarbonyl
V těchto schématech se používají následu- DMF = dimethylformamid jící zkratky:
Čísla v kroužcích označují příslušné re OCP = 2,4,5-trichlorfenylester akční stupně popsané dále.
199B74
©
OJ o \ OJ o + ffi
o c 1 a s c j 1 ž 5 C tc fe £ ΪΤ Μ
J ffi o i © © © © ©
1 LO t> a £ H jy H -> i~d Bzl / i—1 N m · \ Bzl
t 0 [> q t> q t- Cs J Π m
1*
1 4 © 3 4
3 d
-Ser(Bu cr co
Dř
Cd C\J OJ Cd C\J
3 3 x 3 3
3 3 3 3 13
©
Cd O 3 + 3 \ 4· 3 \ + \
<n a s Ž O c a c > fe > c tt D 2 ! 1 3 cd > 5 2
o 3 S O © © © © ©
ISJ t 0 q *3 5 ca c -1 P 3 G 3 PQ \ P G ca \ P G ca \ P G ca \ P G ca \ P · G 3 l 1.
3 t 0 t a t> q ] f Cd j s -t m
24
©
4 · ? 5
Stupea
N-terc.butoxykarbonylderivát se rozpustí v ethylacetátu a nechá se 1 hodinu reagovat při teplotě místnosti s 3 N chlorovodíkem v ethylacetátu (4 ekvivalenty).
RfE=0,49, RfF = 0,66, RfH=Ů,69, RfQ = 0,70.
Pracuje stejně jako u postupu
Stupe a
5,4 mmol methylesteru L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-tryptofyl-L-serinu se rozpustí v 70 mililitrech dimethylformamidu a roztok se nechá 4 hodiny reagovat se 100 mmol hydrazinhydrátu. Dimethylformamid se odpaří ve vakuu, zbytek se trlturuje s ethanolem, produkt se shromáždí, promyje se ethanolem a etherem, a vysuší se . Získá se produkt o teplotě tání 184 až 189 °C. Výtěžek činí 88,2 procenta;
RfA=0,18, RfB = 0,55, RfC ='0,39, RfD = 0,27, RfK = 0,58.
Stupeň® D-Ti/rÍMe>]
Roztok 3,17 g (9,64 mmol) Z-D-Tyr(Me)-OH, 1,92 g (10,6 mmol] H-Leu-OHe.HCl, 2,6 gramu (19,2 mmol) l-hydroxybenzotriazolu a 1,6 ml (11 mmol) triethylaminu ve 30 ml dimethylformamidu se ochladí na 0 °C a přidá se k němu 2,29 g (11,1 N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě 4 QC, načež se obvyklým způsobem zpracuje. Po překrystalování z horkého cyklohexanu se získá chráněný dipeptidický derivát ve výtěžku 1,41 g (95,2 %);
RfD — 0,83, RfE = O,69, RfP= 0,72, RfQ —0,76.
3,54 g (5,0 mmol) hydrazidu ze stupně
se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu, roztok se za míchání ochladí na —20 stupňů Celsia a přidá se k němu nejprve 3,38 mililitrů (20 mmol) 5,9 M chlorovodíku v dioxanu a pak 0,6 ml ('5,25 mmol) terc.butylnitritu. Po 2 minutách se přidá předem ocihlazený roztok 2,04 g (5 mmol) H-Arg(N02)-Pro-Azgly-NH2.HC1 a 3,55 ml triethylaminu (25 mmol) v 10 ml dimethylformamidu a v míchání se pokračuje přes noc při teplotě 4 °C. Reakční směr se obvyklým způsobem zpracuje a surový produkt se vyčistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití chloroformu, 5% (objem/objem) methanolu v chloroformu a 10% (objem/objem) methanolu v chloroformu jako elučních činidel. Výtěžek produktu činí 3,72 g (70,9 procenta);
RfA—0,64, RfBí=fO,72, RfC = 0,55, RfD = 0,66, RfF='0,40, RfH = 0,52.
Sťupea^£) £ÁsD-Ser (Su jj
Pracuje se stejně jako ve stupni
Produkt se krystaluje z vodného methanolu. Výtěžek činí 90,4 %; teplota tání 107 až 108 stupňů Celsia,
RfD = 0,80, RfEi = 0,68, RfF = 0,73, RfH=O,72, RfP = 0,72, RfQ =0,74.
K roztoku 4,59 g (6,4 mmol) Z-Tyr(Bzl)-D-Tyr(Me)-Leu-OMe ve 25 ml dimethylformamidu a 50 ml methanolu se přidá 12,9 mmol hydrazinhydrátu a směs se nechá přes noc stát při teplotě místnosti. Methanol se odpaří ve vakuu, produkt se vysráží vodou, shromáždí se, promyje se vodou a vysuší se. Teplota tání činí 212 až 213 °C,
Síupeti © |^A=D-Ser
Pětihodinová katalytická redukce v přítomnosti 5% (hmotnost/himotnost) paládia na uhlí, ve směsi dimethylformamidu a vody (8:2).
Stupen® [/UD-Ser
Roztok 19,17 g (32,7 mmol) Z-Tyr(Bzl)-OCp a 32,7 mmol Η-Ser (BiúJ-Leu-OMe ve 100 ml dimethylformamidu se nechá 72 hodiny stát při teplotě místnosti. Obvyklým zpracováním se získá pevný produkt, který se shromáždí, promyje se etherem a vysuší se. Výtěžek činí 17,6 g (79 %); teplota tání 135 až 137 °C,
RfD = 0,80, RfH = 0,77, RfQ = 0,81.
Stupen ® ^ = D-Ser
Pracuje se stejně jako ve stupni (59)
Produkt se překrystaluje z vodného methanolu. Výtěžek činí 56,2 %; teplota tání 134 až 136 QC,
RfD = 0,66, RfH = 0,64, RtQ —0,64.
Stupně |a *DSer (fiiZlJ
Pracuje se stejně jako ve stupních
Produkt se vyčistí chromatografií na sloupci sillkagelu za použití chloroformu a 5% (objem/objem) methanolu v chloroformu jako elučních činidel. Výtěžek produktu ěiní
38,5 %; teplota tání 142 až 145 O,C,
RfA — 0,64, RfB = 0,71, RfO—0,55, RfD=0,65, RfF = 0,46, RfHl = 0,43, RfQ = 0,16.
(5ř)
Stupen
K roztoku 5,99 g (20 mmol) Z-Phe-OH a
2,2 ml (20 mmol) N-methylmorf olinu v 60 ml dimethylformamidu, ochlazenému na —15 °C, se přidá 1,8 ml (18 mmol) chlormravenčanu ethylnatého. Po 2 minutách se přidá roztok 4,8 g (20 mmol) H-MeLeu-OMe.HBr a
2,8 ml (20 mmol) triethylaminu ve 20 ml dimethylformámldu, předem ochlazený na —15 °C a reakční směs se míchá nejprve 30 minut při teplotě 0 °C a pak přes noc při teplotě místnosti, načež se zpracuje obvyklým způsobem. Výtěžek olejovitého produktu činí 7,54 g (90 %).
v (75)
StupenTříhodinová katalytická redukce v methanolu obsahující ekvivalent chlorovodíku, v přítomnosti 5% (hmotnost/hmotnost) paládia na uhlí.
Stuperx \&)
Stejným postupem jako ve stupni se kondenzuje 16,02 g (43,2 mmol) Z-Tyr(Bu1) — OH a 13,15 g (40,0 mmol) H-D-Phe-MeLeu-OMe.HCl. Produkt se vyčistí chromatografií na sloupci silikageiu za použití chloroformu a 5% (objem/objem) methanolu v chloroformu jako elučních činidel. Výtěžek olejovitého produktu činí 60 %;
RfG = 0,48,
RfP'=O,71, RtQ = 0,73.
t v (77)
Stupen.
Roztok 6,52 g (0,76 mmol) Z-TyrfBu^-D-Pihe-MeLeu-OMe a 97,6 mmol hydrazinhydrátu v 50 ml methanolu se nechá přes noc stát při teplotě místnosti, načež se methanol odpaří ve vakuu. Hydrazid se krystaluje ze směsi methanolu a etheru, promyje se směsí methanolu a vody (1:1 objem/objem) a etherem, a vysuší se. Výtěžek produktu činí 5,2 g (80%); teplota tání 135 °C,
RfD=0,75,
RfE' —0,69,
RfF = 0,66,
RfH = 0,79,
RfQ —0,73.
Pracuje se stejně jako ve stupních
Při zpracování se produkt vysráží ethylacetátem, odfiltruje se, promyje se ethylacetátem a etherem, a vysuší se. Výtěžek ní 58,5 %; teplota tání 145 až 148 °C,
RfD = 0,72,
RfF = 0,40,
R,H=!0,53,
RfQ = 0,18.
Příklady 3 až 12
Za použití obecného postupu popsaného* v příkladech 1 a 2 je možno připravit následující sloučeniny:
_LGlu-Hts -Trp-Séř-A~B-Ar&-Pro-£-F
Příklad číslo A B E F Papírová elektroforéza R{ (vztaženo na luliberin) RtA
pH 2 ,1 pH 6,5
3 Azgly Leu — NHC2H5 0,98 1,03 0,28
4 Azala Leu — NHC2H5 0,97 1,0 0,30
5 D-Ala Leu Azgly NH2 0,97 1,0 0,30
6 D-Phe Leu Azgly NH2 1,0 0,71 0,27
7 D-Trp Leu Azgly NH2 0,53 0,37 0,37
8 D-Tyr (Me) Leu Azgly NH2 0,92 0,87 0,25
9 D-Ser (Bu1) Leu Azgly NH2 0,94 0,96 0,25
10 D-Tyr (Me) MeLeu Azgly NH2 0,87 0,90 0,34
pRedmBt VYNALEZU

Claims (5)

1. Způsob výroby polypeptidů obecného vzorce I —Giu-/Vis-'í''-p-s®r’ryr ve kterém
A znamená D-Tyr, D-Tyr (Me), D-Ser,
D-Ser (Bu1), D-Phe, D-Ala nebo D-Trp,
B představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a
F představuje aminoskupinu, nebo
A znamená Azgly nebo Azala,
B představuje Leu,
E je přímá vazba a
F znamená ethylaminoskupinu, a jejich farmaceuticky a veterinárně upotřebitelných adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se odštěpí jedna nebo několik chránících skupin běžných v chemii peptidů z příslušného chráněného polypeptidů, za vzniku sloučeniny shora uvedeného obecného vzorce I, načež se popřípadě výsledný produkt v neprotonované formě reakcí s kyselinou poskytující farmaceuticky nebo veterinárně upotřebitelný anion převede na svoji sůl.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látka použije chráněný polypeptid, v němž chránící skupinou iminoskupiny je benzyloxykarbonylová sku-A-B~Ar&-Pro-£-F (I) pina a/nebo chránící skupinou hydroxylové funkce benzylová skupina.
3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látka použije chráněný polypeptid, v němž chránící skupinou iminoskupiny je terc.butoxykarbonylová skupina a/nebo chránící skupinou hydroxylové funkce terc.butylová skupina.
4. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látka použije chráněný polypeptid, v němž chránící skupinou iminoskupiny je benzyloxykarbonylová nebo terc.butoxykarbonylová skupina a/nebo chránící skupinou hydroxylové funkce terc.butylová skupina.
5. Způsob podle bodů 1, 2 nebo 3, vyznačující se tím, že se použije výchozí polypeptid, v němž
A znamená D-Ser (Bul),
B představuje Leu,
E znamená Azgly a
F představuje aminoskupinu, přičemž tento výchozí materiál rovněž obsahuje jednu nebo několik chránících skupin odštěpitelných ihydrogenolýzou nebo působením chlorovodíku nebo· kyseliny trifluoroctové.
CS79207A 1976-05-11 1979-01-09 Způsob výroby polypeptidů CS199674B2 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS79207A CS199674B2 (cs) 1976-05-11 1979-01-09 Způsob výroby polypeptidů

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB19327/76A GB1524747A (en) 1976-05-11 1976-05-11 Polypeptide
CS772980A CS199673B2 (en) 1976-05-11 1977-05-05 Method of producing polypeptides
CS79207A CS199674B2 (cs) 1976-05-11 1979-01-09 Způsob výroby polypeptidů

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS199674B2 true CS199674B2 (cs) 1980-07-31

Family

ID=25745724

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS79207A CS199674B2 (cs) 1976-05-11 1979-01-09 Způsob výroby polypeptidů

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS199674B2 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS199673B2 (en) Method of producing polypeptides
FI92211B (fi) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten nonapeptidi- ja dekapeptidianalogien valmistamiseksi, jotka ovat LHRH:n antagonisteja
JP4249806B2 (ja) ５位および６位で修飾されているＧｎＲＨ拮抗物質
US20190177392A1 (en) Synthesis of glp-1 peptides
US4024248A (en) Peptides having LH-RH/FSH-RH activity
FI60553B (fi) Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat
FI72732B (fi) Foerfarande foer framstaellning av nya, i 8-staellning aminosyraestergrupp innehaollande, angiotensin-ii-antagoniserande oktapeptidestrar.
US6046167A (en) Peptide YY analogs
JP4191259B2 (ja) ＧｎＲＨ拮抗物質
IE902740A1 (en) Lhrh analogs
JPS5962556A (ja) 非天然アミノ酸
HU200785B (en) Process for producing antagonist decapeptide derivatives of gonadotropin releasing hormone
PT100077B (pt) Antagonistas da hormona de libertacao da hormona luteinizante e seu processo de preparacao
HUT62015A (en) Process for producing cyclic gonadotropin releasing hormone antagonists
US4104371A (en) Psychopharmacologically active peptides and peptide-derivatives, and the use thereof
HU208159B (en) Process for producing 1h-rh analogs and pharmaceutical compositions comprising same
US4124703A (en) Luliberin analogs
CZ1021084A3 (en) Gonadoliberin derivatives and process for preparing thereof
US4636490A (en) Novel peptidic derivatives inhibiting gastric secretion, process for preparing them and drugs containing them
HU194913B (en) Process for producing novel gonadoliberin derivatives containing in the sixth position aromatic amino carboxylic acid and medical preparations containing these compounds
CS199674B2 (cs) Způsob výroby polypeptidů
JPH0730112B2 (ja) ブラジキニン拮抗作用をもつ新規の擬似ペプチド化合物
SE461042B (sv) Peptider med tillvaextbefraemjande aktivitet jaemte veterinaera kompositioner innehaallande naemnda peptider
SK3893A3 (en) Bombesine antagonists
KR0142195B1 (ko) 고나도리베린의 경쟁적 길항제