FI60553B - Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat Download PDFInfo
- Publication number
- FI60553B FI60553B FI2243/74A FI224374A FI60553B FI 60553 B FI60553 B FI 60553B FI 2243/74 A FI2243/74 A FI 2243/74A FI 224374 A FI224374 A FI 224374A FI 60553 B FI60553 B FI 60553B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- trp
- solution
- ala
- pro
- arg
- Prior art date
Links
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 132
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 132
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 126
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 100
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 92
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 85
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 69
- 239000000047 product Substances 0.000 description 65
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 59
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 53
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 51
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 48
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 42
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 35
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 32
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 30
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 27
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 26
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 25
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 25
- -1 Nle norleucine OMe methyl ester Chemical class 0.000 description 24
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 19
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 18
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 18
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 17
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 16
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 15
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 15
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 15
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 14
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 14
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 14
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 12
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 11
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 11
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 10
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 10
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 10
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide Chemical compound C1=CC2CC1C1C2C(=O)N(O)C1=O ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 10
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 6
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 6
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 5
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 5
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 5
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 5
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 5
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 5
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 5
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 5
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 4
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MCRMUCXATQAAMN-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MCRMUCXATQAAMN-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 2
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102400000336 Thyrotropin-releasing hormone Human genes 0.000 description 2
- 101800004623 Thyrotropin-releasing hormone Proteins 0.000 description 2
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachlorophenol Chemical compound OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 2
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N thiocyanic acid Chemical compound SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940034199 thyrotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- NMYWMOZOCYAHNC-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound CCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 NMYWMOZOCYAHNC-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N (2s)-2-azanyl-5-[bis(azanyl)methylideneamino]pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N 0.000 description 1
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N (2s,3s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KTVPQHFLYINKPT-LVHVEONVSA-N (4s)-4-amino-5-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[(2-amino-2-oxoethyl)carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-o Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KTVPQHFLYINKPT-LVHVEONVSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichlorophenol Chemical compound OC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 244000186140 Asperula odorata Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 235000008526 Galium odoratum Nutrition 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- QLNKFGTZOBVMCS-JBACZVJFSA-N Glu-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O QLNKFGTZOBVMCS-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058359 Hypogonadism Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide Natural products NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N N,N‐diethylformamide Chemical compound CCN(CC)C=O SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000627 Thyrotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003975 animal breeding Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002102 aryl alkyloxo group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- TYQYRKDGHAPZRF-INIZCTEOSA-N benzyl (2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoate Chemical compound O=C([C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)OCC1=CC=CC=C1 TYQYRKDGHAPZRF-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N benzyl chloroformate Chemical compound ClC(=O)OCC1=CC=CC=C1 HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 150000001470 diamides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- IMQROYWCRPSOCD-ROUUACIJSA-N methyl (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[[(2s)-3-hydroxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoate Chemical compound C([C@@H](C(=O)OC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 IMQROYWCRPSOCD-ROUUACIJSA-N 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 230000000624 ovulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 125000006503 p-nitrobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1[N+]([O-])=O)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- GXDPEHGCHUDUFE-UHFFFAOYSA-N sulfanylmethanol Chemical compound OCS GXDPEHGCHUDUFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- GHBRKMLMVFKZKW-UHFFFAOYSA-N tert-butyl (2,3,4,5,6-pentachlorophenyl) carbonate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl GHBRKMLMVFKZKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
«Swl ΓβΙ M1v kuulutusjulkaisu /λγγ, ^ (11) UTLÄGGN INCSSKRIFT ° ^ ^ ?g51j C (45) ' ^ ^ v ^ (51) Kv.lk.3/lnt.CI.3 C 07 C 105/52 SUOM I—FI N LAN D (*) Patenttihakemus — PatentansBkninf 22b 3/lb
(22) Hakamiapllvl — AnaSknlngadag 2 U. 0T · 7 U
* ' (23) AlkupUvi—Gikifhatadag 2U.07-7^ (41) Tullut julkiseksi — Blivlt offentll( 25 .01.75
Patentti-)· rekisterihallitus ............ . , . ,,,., _ , , (44) Nlhtlvlkilpanoo ja kuuLjulkalsun pvm__
Patent- och registerstyrelsen ' 7 Anrtksn utlagd odi utl.skr(ften publkerad 30.10.8l (32)(33)(31) Pry<l««y etuoikeus—Begird prloritet 2U.07.73
19.03.7U Japani-Japan(JP) 83389/73, 3173U/7U
(71) Takeda Chemical Industries, Ltd., 27, Doshomachi 2-chome, Higashi-ku,
Osaka, Japani-Japan(JP) {72) Masahiko Fujino, Hyogo, Japani-Japan(JP) (7U) Oy Borenius & Co Ab (5U) Menetelmä ovulaatiota aikaansaavien nonapeptidi amidijohdannaisten valmistamiseksi - Förfar ahde för framställning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat
Keksinnön kohteena on menetelmä uusien nonapeptidiamidijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on voimakas ovulaatiota aiheuttava vaikutus, ja joiden kaava on: (Pyr)Glu-R1-Trp-Ser-R2-(D)-Ala-R3- Arg-Pro-NH-R^ (I) jossa R^ on His, Tyr, Trp tai p-NH^-Phe; R2 on Tyr tai Phe;
Rg on Leu, Ile tai Nle ja R^ on 1...3 hiiliatomia sisältävä alkyyli, joka voi olla substituoitu hydroksyyliryhmällä.
Tässä selityksessä ja patenttivaatimuksissa on aminohapot ja peptidit merkitty lyhenteillä, joita yleisesti käytetään tekniikan tällä erikoisalalla, ja jotka on hyväksynyt Comittee on Biochemical Nomenclature of IUPAOIUB. Aminohapolla on L-konfiguraatio, ellei muuta erikoisesti ole merkitty.
Seuraavassa luetellaan eräitä käytettyjä lyhenteitä:
Ala alaniini
Arg arginiini 2 60553 BOC t-butoksikarbonyyli
Bzl bentsyyli DCC N,N’-disykloheksyylikarbodi-imidi
His histidiini HONB N-hydroksi-5-norborneeni-2,3-dikarboksimidi HOSu N-hydroksisukkinimidi IBOC Isobornyylioksikarbonyyli
Ile isoleusiini
Leu leusiini
Nle norleusiini OMe metyyliesteri OBzl bentsyyliesteri ONB N-hydroksi-5-norborneeni-2,3-dikarboksi-mmidiesteri
Osu N-hydroksisukkinimidiesteri
Phe fenyylialaniini p.NH2-Phe p-aminofenyylialaniini
Pro proliini (Pyr)Glu pyroglutamiinihappo
Ser seriini
Tos tosyyli
Trp tryptofaani
Tyr tyrosiini Z bentsyylioksikarbonyyli
Edellä mainitun substituentin R^ esimerkkinä esitetään 1...3 hiili-atomia sisältävänä suorakotjuisena tai haarautuneena alkyyliryhmänä, joka voi dLla substituoitu hydroksyyliryhmällä, metyyli, etyyli, n-propyyli, i-propyyli, hydroksimetyyli, l-hydroksietyyli, 2-hydroksi-etyyli, 2-hydroksi-n-propyyliT 3-hydroksi-n-propyyli, 2,2-dihydroksi- i-propyyli tai muut senkaltaiset.
On jo useita vuosia tiedetty, että hypotalamus sisältää tekijöitä, jotka >korkeämmällä tasolla säätävät trooppisten hormoonien erittymistä aivolisäkkeestä. Viime aikoina on sen jälkeen, kun on eristetty tyrotropiinia vapauttava hormooni ((TRH), eristetty sioista ja lampaista puhtaana hormooni, joka edistää luteiinihormoonin erittymistä ja joka on todettu dekapeptidiksi, jonka rakenne on : H-(Pyr) Glu-His-Trp-Ser-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2. (A.V. Schally ja kumpp., Biochem, Biophys. Res. Commun., 43, 1334 (1971): R. Guillemin ja 3 60553 kumpp., Proc. Nat. Acad. Sei., U.S.A., 6_9, 278 (1972) ). Tämän havainnon jälkeen on synteettisesti valmistettu joukko samankaltaisia peptidejä, joilla myös on suoritettu biologisia kokeita. Edellä mainitun aminohapporakenteen pienehkökin muutos vähentää kuitenkin vakavasti peptidin fysiologista vaikutusta, ja edellä esitettyä kemiallista kaavaa on pidetty oleellisena maksimaalisen fysiologisen aktiviteetin kehittämiseksi (A.V. Schally ja kumpp., Biochem. Biophys. Res. Commun., 366 (1972) ).
Synteettisesti on myös valmistettu eräänlaisia nonapeptidiamidijohdannaisia, joiden aktiviteetin on ilmoitettu olevan korkeintaan noin 5 kertaa suurempi kuin luonnossa esiintyvien luteiinihormonia vapauttavien hormonien aktiviteetti (M. Fujino et ai. Biochem. Biophys. Res. Commun., Voi. 49 (3), pp. 863...869 (1972) ).
Näissä olosuhteissa keksijä on onnistunut synteettisesti valmistamaan kaavan (I) mukaisia nonapeptidiamidijohdannaisia. Yllätyksellisesti on todettu, että näillä yhdisteillä on voimakkaampi munasolun irtoamista aiheuttava vaikutus kuin luonnossa esiintyvällä dekapeptidillä. Keksijä on myös havainnut, että nämä yhdisteet vaikuttavat aivolisäkkeeseen ja edistävät sekä luteiinihormoonin että munarakkuloita kiihottavan hormoonin erittymistä. Keksijä on edelleen todennut, että näitä yhdisteitä voidaan käyttää sekä ihmislääkkeinä, esim. lääkkeinä aivolisäkkeen toiminnan toteamiseksi tai sukurauhasten vajaukseen, että kuukautisten puutteeseen vaikuttavana lääkkeenä, että myös eläinlääkinnässä, erikoisesti eläinten siitostoiminnassa. Tämän hakemuksen kohteena oleva keksintö perustuu näihin yllätyksellisiin havaintoihin.
Keksinnön eräänä pääkohteena on näin ollen menetelmä sellaisten uusien nonapeptidiamidijohdannaisten (I) valmistamiseksi, joilla on voimakas munasolun irtoamista aiheuttava vaikutus.
Nonapeptidiamidijohdannaista (I) valmistetaan tavalla, joka tunnetaan siitä, että reagenssi (A), jona on L-pyroglutamiinihappo tai peptidi-tähde, jonka N-puoleisessa päässä on L-pyroglutamiinihappoyksikkö (H-(Pyr)Glu-), ja joka samalla tästä alkaen sisältää edellä mainitun aminohapposarjan, kondensoidaan reagenssin (B) kanssa, jona on amiini-komponentti, joka vastaa nonapeptidiamidijohdannaisen (I) muuta osaa, 4 60553 jolloin nämä molemmat reagenssit (a) ja (B) valinnanvaraisesti suojataan yhdellä tai useammalla suojaryhmällä, joka tai jotka tämän jälkeen poistetaan.
Näin ollen reagenssina (A) on L-pyroglutamiinihappo tai peptidifrag-mentti, jonka N-puoleisessa päässä on L-pyroglutamiinihappoyksikkö, ja joka samalla tästä päästä alkaen sisältää kaavan (I) mukaisen aminohapposarjan, kun taas reagenssin (A) kansBa kondensoitävänä reagenssina (B) on amiinikomponentti, joka vastaa nonapeptfcdiamidi-johdannaisen (I) muuta osaa, jolloin reagenssit (A) ja (B) voidaan valinnanvaraisesti suojata.
Seuraavassa taulukossa 1 on esimerkkeinä esitetty reagenssin (A) ja reagenssin (B) perusyhdistelmiä.
Taulukko 1
Reagenssi
Yhdistelmä__ 1 (Pyr)Glu-OH H-Rj-Trp-Ser-Rp-iDj-Ala- _ H^-Arg-Pro-NH-R^
2 (Pyr)Glu-R1-OH H-Trp-Ser-Rp-(D)-Ala-R
__ Arg-Pro-NH-R4 0 3 (PyrjGlu-Rj-Trp-OH ~H-S er-R2- (D) -Ala-R ,-Arg- __ Pro-NH-R4 4 (PyrjGlu-R^Trp-Ser- H-Ro- (D) -Ala-R, - Arg-Pro - ___ NH-R4 j ** ^Ry-OH1U~Rl""TrP*"Ser~ H“D) -Ala-R 3~Arg-Pr o-NH-R4 6 ^Ry-(D)UÄla'*0HP”Sör” H-R 3 - Arg- Pro -N H-R4 7 ^Byr)£lU7?1”£rp-Ser"' H-Arg-pro-NH-R/ __Rq-(D)-Ala-R ^-QH________ 4 8 (?rr?Sw?1"Srp:Sep" ~H“Pro-NH-R4
Rp-(D)-Ala-R^-Arg-OH 4 9 (Pyr)Glu-Rx-Trp-S er- NHp-R,
Ro-(D)-Ala-R3-Arg-Pro- 4 -Lei-li!_l___ 5 60553
On myös ennestään tunnettua, että suojattu L-glutamyyliryhmä, jonka yleinen kaava (il) on rco-ch2ch2ch(nh2)co- (II) jossa kaavassa R on alkoksiryhmä (esim. metoksi-, etoksi-, n-propoksi-, i-propoksi, n-butoksi-ryhmä, jne.), aralkyylioksiryhmä (esim. bent-syylioksiryhmä, jne.), tai aminoryhmä, helposti muutetaan itse L-pyroglut amyy1i ry hmäks i
H
n N CO- xr saattamalla se kosketukseen emäksen (ammoniakin, jne) tai hapon (etikkahapon, jne) kanssa, ja että ryhmä (II) tässä suhteessa on sama kuin itse L-pyroglutamyyliryhmä. Keksinnön mukaista tapaa sovellettaessa on pidettävä mielessä, että reagenssin(A) L-pyroglutarayyli-ryhraä (esim. H-(Pyr)Glu-) sisältää itse L-pyroglutamyyliryhmän lisäksi myös kaavan (II) mukaisen suojatun L-glutamyyliryhmän. Siinä tapauksessa, että reagenssin (A) H-(Pyr)Glu- tarkoittaa ryhmää (lit), muutetaan tämä ryhmä (II) helposti itse L-pyroglutamyyliryhmäksi soveltamalla sinänsä tunnettuja menetelmiä.
Keksinnön mukainen kondensoimisreaktio voidaan suorittaa soveltamalla peptidisidosten muodostamisesta ennestään tunnettuja kondensoimis-keinoja. Näistä mainittakoon atsidiprosessi, kloridiprosessi, happo-anhydridiprosessd, seka-happoanhydridiprosessi, DCC-pposessi, aktiivi-esteri prosessi, Woodward-reagenssin K-prosessi, karbodi-imidatsoli-prosessi, hapetus-pelkistysprosessi, DCC/HONB-prosessi ja muut (The Peptides, Voi. 1 (1966), Schröder and Lubke, Academic Press, New York, U.S.A. ja Belgian patentti no 796,399)·
Ennen kondensoimisreaktiota voidaan suojata ne karboksyyli- ja aminoryhmät, joiden ei tule osallistua suunniteltuun reaktioon, tai voidaan aktivoida reaktioon osallistuvat karboksyyli- ja/tai aminoryhmät sinänsä tunnetuin keinoin. Lähtömateriaalin karboksyyli-ryhmät voidaan suojata metallisuoloina, (esim. natrium- tai kalium-suoloina), tai estereinä (esim. metyyli-, etyyli-, bentsyyli-, p-nitrobentsyyli-, t-butyyli- tai t-amyyliestereinä).
6 60553 Lähtömateriaalien aminorytornien suojarytominä voidaan käyttää mitä tahansa tavanomaisia aminoryhmien suojaryhmiä, jotka tunnetaan peptidien synteettisestä valmistuksessa, ja joista esimerkkeinä mainittakoon bentsyylioksikarbonyyli, t-butoksikarbonyyli, iso-bornyylioksikarbonyyli. Seriinin hydroksyyliryhmä voidaan suojata tavanomaisilla suojaryhmillä, joista esimerkkinä mainittakoon bentsyyli, t-butyyli ja muut eetterin muodostavat ryhmät. Tyrosii-nin hydroksyyliryhmä voidaan suojata bentsyylillä, t-butyylillä ja muilla eetterin muodostavilla ryhmillä. Arginiinin guanidinoryhmä voidaan suojata esim. nitro-, tosyyli-, karbobentsoksi-, isobornyyli-oksikarbonyyli- tai adaaantyylioksikarbonyyliryhmällä. Esimerkkeinä lähtömateriaalien aktivoiduista karboksyyliryhmistä mainittakoon vastaava toappoanhydridi, atsidi, aktiiviset esterit (esterit alkoholien kanssa, esim. pentakloorifenoli, 2,4,5-trikloorifenoli, 2,4-dinitrofenoli, syaanometyylialkoholi, p-nitrofenoli, N-hydroksi-5-norborneeni-2,3-dikarboksimidi, N-hydroksisukkinimidi, N-hydroksi-ftalimidi tai N-toydroksibentstriatsoli) jne. Lähtömateriaalien aktivoituna aminoryhraänä voi olla esim. vastaava fosforihappoamidi. Seuraavassa taulukossa 2 on esimerkkeinä esitetty reagenssimateriaa-lien (A) ja (B) tällaisten karboksyyli- ja aminoryhmien yhdistelmiä.
Taulukko 2 -------------——--
Yhdistelmä- _Reagenssi _ esimerkki _{k}__(B)_ COOH nh2 cooh nh2 1*__Vapaa__suojattu suojattu__vappa_ 2 __Aktivoitu suojattu vapaa__vapaa_ 3 __Vapaa__suojattu suojattu__aktivoitu
Huom! Tapauksessa, joka on merkitty tähdellä *, käytetään reaktio-järjestelmässä sopivasti jotain vedenpoistoainetta (esim. karbodi-imidireagenssia, kuten disykloheksyyli-karbodi-imidiä). Keksinnön eräs sovellutustapa voidaan kirjoittaa seuraavasti: 7 60553 (PyrjGlu-R^-Trp + Ser-Rg-Suojaryhmä N0 . * 2 kondensaatio (esim.
v DOC/HONB Z-(D)-Ala-R3-Arg-Pro-NH-R4 (PyrjGlu-R^-Trp-Ser-Rg-Suojaryhmä I Suojaryhmän
Suojaryhmän poistaminen poistaminen (esim. katalyyttinen (esim. Hbr:n pelkistäminen Pd-kata- Y läsnäollessa) lyytin läsnäollessa) Ψ · 2 (PyrjGlu-R^-Trp-Ser-Rg (Dj-Ala-R^-Arg-Pro-NH-R^
I _I
Kondensaatio (jolloin esim. läsnä on DCC-HQNB tai DCC/hydroksibents-triatsolia).
no9 t c (Pyr)Glu-R^-Trp-Ser-Rg-(D)-Ala-R^-Arg-Pro-NH-R^
Suojaryhmän poistaminen (jolloin läsnä on esim. SnClpSa muurahais-iaapon vesiliuoksessa, katalyyttinen pelkistäminen Pd-katalyytin ▼ avulla tai HP:n avulla).
(Py r) Glu-R-j^-Trp-Ser-Rg- (D) -Ala-R^-Arg-Pro-NH-R^ Tämä reaktio voidaan suorittaa liuottimen läsnäollessa. Liuotin voidaan valita peptidien kondensoimisreaktioista tunnettujen liuottimien joukosta. Esimerkkeinä mainittakoon vedetön tai vesipitoinen dimetyyliformamidi, dimetyylisulfoksidi, pyridiini, kloroformi, dioksaani, dikloorimetaani, tetrahydrofuraani tai näiden liuottimien sopivat seokset.
Reaktiolämpötila valitaan yleensä alueelta, joka on tunnettu peptidi-sidosten muodostumiseen johtavista reaktioista, ja joka toisin sanoen normaalisti on rajoissa noin -20 °C...noin 30 °C. Keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistukseen käytettyjä lähtömateriaaleja (suojattuja peptidejä) voidaan myös helposti valmistaa kiinteässä faasissa suoritettujen synteettisten prosessien avulla.
Haluttua kondensoimisreaktion tultua suoritetuksi voidaan tuotteen mahdollisesti sisältämät suojaryhmät .poistaa tunnettuja menetelmiä soveltamalla. Näistä menetelmistä mainittakoon katalyyttinen pelkistäminen jonkin katalyytin, kuten palladiummustan, palladioidun hiilen, 8 60553 platinan tai senkaltaisen läsnäollessa, edelleen hydrolysoimalla fluorivedyn, trifluorietikkahapon tai senkaltaisen avulla, ja pelkistäminen nestemäisessä ammoniakissa olevan metallisen natriumin avulla.
Täten valmistettu peptidi (I) voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta soveltamalla peptidien talteenottamisesta ennestään tunnettuja menetelmiä, esim. uuttamista, jakotislaamista, pylväässä kromatografoimis-ta, jne.
Peptidi (I) voidaan myös ottaa talteen suolana tai metallikompleksi-yhdisteenä.
Hapoista, jotka soveltuvat suolojen muodostamiseksi peptidin (I) kanssa, mainittakoon epäorgaaniset hapot, kuten kloorivetyhappo, bromivetyhappo, perkloorihappo, typpihappo, tiosyaanihappo, rikkihappo, fosforihappo, jne. Orgaanisista hapoista mainittakoon muurahaishappo, etikkahappo, propionihappo, glykolihappo, maitohappo, omenah&ppo, oksaalihappo, malonihappo, meripihkahappo, maleiini-happo, fumaarihappo, antranyylihappo, kanelihappo, naftaleenisulfoni-happo ja sulfonyylihappo.
Metalleista, jotka voivat muodostaa metallikompleksiyhdisteitä peptidin (I) kanssa, mainittakoon esimerkkinä sinkki, nikkeli, koboltti, kupari ja rauta. Tällainen metallikompleksiyhdiste voidaan valmistaa soveltamalla tavanomaisia menetelmiä, esim. saattamalla peptidi (i) reagoimaan jonkin edellä mainitun metallin hydroksidin tai oksidin kanssa pH-arvon ollessa alueella noin 6...noin 8.
Keksinnön mukaisilla polypeptideillä (i) on LH-RH (luteiini-hormoonia vapauttavan hormoonin) vaikutus, joten ne kykenevät edistämään LH eli luteiinihormoonin ja PSH eli munarakkulaa kiihoittavan hormoonin erittymistä. Täten voidaan polypeptidejä (I) käyttää lääkkeinä munasolun irtoamisen aiheuttamiseksi naisissa ja naaraseläimissä (esim. rotissa, lampaissa, sioissa, lehmissä, hevosissa, linnuissa, esim. kanoissa). Näitä peptidejä voidaan myös käyttää muihin lääke-tarkoituksiin, joita varten on käytetty tavanomaisia LH-RH, LH- ja PSH-valmisteitä.
Koska polypeptidien (I) LH-RH-vaikutus on noin 20.akertaa suurempi 9 60553 kuin luonnossa esiintyvien tunnettujen peptidien LH-RH-vaikutus, voidaan niiden annostus määrätä edellä mainitun tehokertoimen perusteella, jolloin myös otetaan huomioon muut tekijät, esim. taudin laatu tai lääkkeen käyttäjä. Esimerkkinä mainittakoon, että sopiva annostus voidaan valita alueelta noin 2 ng...2 yug/kg kehonpainoa vuorokaudessa.
Polypeptidejä (I) annetaan pääasiallisesti muulla tavoin kuin suun kautta (esim. ruiskeina tai peräaukon tai emättimen kautta) vaikka niitä voidaan eräissä tapauksissa antaa suunkin kautta.
Antomuodoista mainittakoon esimerkkeinä ruiskeet, peräpuikot, pessaarit tai jauheet. Ruiskeita voidaan valmistaa liuottamalla noin 10 V...100 V polypeptidiä (I) 1 mljaan fysiologista suolaliuosta. Polypeptidejä (I) voidaan myös valmistaa lyofiloituina ampullituottei-na, joihin laimennusaineena lisätään mannitolia siten, että niitä voidaan välittömästi käyttää ruiskeina.
Keksinnön mukaisen tavan soveltamisessa käytettäviä peptidi-lähtömateriaaleja voidaan valmistaa soveltamalla joko peptidien synteettisestä valmistuksesta ennestään tunnettuja prosesseja tai käyttämällä muita sopivia prosesseja.
Peptidin (I) suhteellinen munasolun irtoamista aiheuttava vaikutus: Munasolun irtoamista aiheuttavaa vaikutusta on tutkittu käyttämällä Sprague-Dawley-rottia (4 vuorokauden kiimajaksoisiä naaraita), joihin yhdistettä ruiskutettiin ihonalaisesti klo 14.30 kiimapäivänä ja seuraavan päivän aamuna tarkastettiin irtoutuneet munat munajohtimen suppilossa. Tulokset (ED^q) verrattiin itse LH-RH:n avulla saatuihin tuloksiin. Tutkittujen yhdisteiden koetulokset on esitetty seuraa-vassa: 10 6055 3
Vertaus (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 __(luonnollinen LH-RH)_iqq#_
R1__R2 R3 1 R4 I
Peptidi His Tyr Leu etyyli 6,100% (I) His Tyr leu n-propyyli 4,800%
His Tyr Leu 2-hydroksi- etyyli 4,300% jHis Tyr Leu iso-propyyli 3,600% ; His Phe Leu etyyli 5,810%
His Phe Leu n-propyyli 2,900%
His Tyr Nle etyyli 4,800% | His Phe Ile etyyli 3,200%
Tyr Tyr Leu etyyli 2,010% _[ p-NHg-Phe Tyr Leu etyyli 2,150%
Keksinnön kuvaamiseksi esitetään seuraavat esimerkit* joissa käytetään seuraavia lyhenteitä:
Rf-arvo tarkoittaa ohukerroskromatografointia piihappogeelin avulla seuraavia liuotinjärjestelmiä käytettäessä:
Rf : etyyliasetaatti: pyridiini: etikkahappo:vesi «= 60:20:6:10 2
Rf : n-butanoli:etyyliasetaatti:etikkahappo:vesi «1:1:1;1
Rf^ : n-butanoli:etikkahappo:vesi= 4:1:1 4
Rf : kloroformi:metanoli:etikkahappo= 9:1:0,5
Esimerkeissä käytettyjen rekisteröityjen tavaramerkkien selitykset ovat seuraavat:
Celite: suodatusta edistävä aine, jota valmistaa toiminimi
Johns-Manville, USA
Biogel P-2; geelin suodatukseen käytettävää materiaalia, jota valmistaa toiminimi BIO.RAD, USA
Cephadex LH-20: esteröity dekstraanigeeli, jota valmistaa toiminimi
Pharmacia Pine Chemicals, Ruotsi Amberlite XAD-2; polystyreenihartsia
Amberlite IRA-410: voimakkaasti emäksistä anioninvaihtohartsia Amberlite CG-#10: voimakkaasti emäksistä anioninvaihtohartsia Amberlite CG-45: heikosti emäksistä anioninvaihtohartsia
Kaikkia näitä hartseja valmistaa t:mi Rohm & Haas Co,Ltd,USA.
11 605 5 3
Esimerkki 1
Tuo 11 e en (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH^valm.
(a) tuotteen (Pyr)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH valmistus 100 ml:aan metanolia liuotetaan 8,0 g tuotetta Z-Ser-Tyr-OMe Ja suoritetaan katalyyttinen pelkistäminen ilmastollisessa lämpötilassa Ja paineessa Johtamalla 4 tunnit aikana vetykaasua liuokseen, Johon on lisätty 500 mg palladiummustaa. Katalyytti poistetaan suodattamalla. Metanoli poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa Ja alhaisessa lämpötilassa, ja jäännös liuotetaan 30 ml:aan dimetyyli-formamidia. Liuokseen lisätään 6,78 g tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-0H kiteitä, minkä jälkeen jäähdytetään jään avulla. Tämän jälkeen lisätään 5,4 g H0NB:a ja 5,0 g DCC:a, ja koko seosta sekoitetaan jääkylvyssä 8 tuntia ja huoneenlämmössä 10 tuntia.
Muodostunut sivutuote disykloheksyylikarbamidi poistetaan suodattamalla ja suodos konsentroidaan alennetussa paineessa. Lisätään 100 ml eetteriä, minkä jälkeen muodostunut sakka erotetaan suodattamalla, pestään eetterillä ja kuivataan. Saanto: 12,2 g. Tämä tuote liuotetaan etyyliasetaatin, pyridiinin, etikkahapon ja veden 60:20: 6:10-seokseen.
Liuos kaadetaan piihappogeeliä sisältävään pylvääseen (halkaisija 6,5 cm, pituus 19 cm), joka valmistetaan käyttämällä samaa liuotin-seosta, ja pylväs eluoidaan samalla liuotinseoksella, jolloin haluttu tuote (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OMe saadaan fraktioista 1480 ml...
1800 ml. Tämä eluaatti haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa ja pestään perusteellisesti vedellä. Saanto; 8,3 g· Ohutkerros-kromatografointia sovellettaessa piihappogeelin avulla tämä tuote antaa yhden ainoan Pauly ja Ehrlich-positiivisen täplän kohdissa 14^=0.29, Rf2=0.68 ja Rf3=0.43.
50 ml:aan metanolia liuotetaan 7,2 g tätä tuotetta ja jäähdytetään jään avulla, sekä lisätään hitaasti IN natriumhydroksidia tuotteen hydrolysoimiseksi. Liuosta sekoitetaan huoneenlämmössä 3 tuntia. Tämän jälkeen lisätään 3 ml IN kloorivetyhappoa, ja jäähdytetään liuos, jolloin muodostuu sakka. Tämä otetaan talteen suodattamalla, ja pestään kylmällä vedellä ja kuivataan. Tuote liuotetaan etanolin 12 60553 5-proaenttiseen vesiliuokseen, ja liuos kaadetaan pylvääseen (halkaisija 3 cm, pituus 25 cm), jossa on tuotetta "Amberlite XAD-2".
Sluointi suoritetaan gradienttimenetelmän avulla käyttämällä 800 ml etanolin 5-prosenttista liuosta ja 800 ml etanolin 90-prosenttista liuosta. Halutun tuotteen fraktiot kootaan, konsentroidaan alennetussa paineessa etanolin poistamiseksi ja lyofiloidaan.
Saanto; 5.9 g. Rf1^ 0.01, Rf2= 0.62, Rf3= 0.34.
Yhdisteen C^H^gNgOg.HgO alkuaineanalyysi:
Laskettu G, 56.65; H, 5.59; N, 15.55
Todettu C, 56.39; H, 5-70; N, 15.52
Aminohappoanalyysi suoritetaan hydrolysoimalla käyttäen 5,7 N kloorivetyhappoa tioglykolihapon läsnäollessa: Glu, 1.05; His, Q.98; Trp, 0.95; Ser, 0.98; Tyr, 1.03.
(b) Tuotteen Z-iDj-Ala-Leu-ArgilK^J-Pro-NH-C^-CH^ valmistus Seokseen, jossa on 30 ml dioksaania ja 10 ml dimetyyliformamidia, liuotetaan 1,14 g tuotetta H-Leu-ArgiNOgJ-Pro-NH-C^-CH^ ja 447 mg tuotetta Z-(D)-Ala-0H. Liuokseen lisätään 400 mg HONBsa ja seos jäähdytetään nopeaeti. Lisätään 460 mg DCC:a, minkä jälkeen seosta sekoitetaan 20 tuntia. Sivutuotteena muodostuva disykloheksyyli-karbamidi poistetaan suodattamalla ja suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan lämmittäen etyyliasetaattiin, ja liuosta pestään natriumbikarbonaatin 4-prosenttisella vesi-liuoksella ja sitten vedellä. Tämän jälkeen kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa.
Jäännös liuotetaan jälleen pieneen määrään etyyliasetaattia, jota lämmitetään, ja liuos suodatetaan liukenemattomien komponenttien pienen määrän poistamiseksi. Suodoksen annetaan seistä, jolloin erottuu neulamaisia kiteitä. Nämä kiteet otetaan talteen suodattamalla, pestään etyyliasetaatilla ja kuivataan.
Saanto: 1.30 g. Sulamispiste 183...184 °C; <*)26 « -49.2° (c= 0.5, metanoli)
Yhdisteen C^0H^yOgNg alkuaineanalyysi
Laskettu: C, 54,45; H, 7.16; N, 19.05
Todettu: C, 54,42; H, 7,28; N, 18.86 13 60553 (c) Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CI^-CH^ valmistus 20 ml:aan etikkahappoa liuotetaan 155 mg tuotteen Z-(D)-Ala-Leu-ArgfNOgJ-Pro-NH-CHg-CH-j kiteitä, minkä jälkeen lisätään 100 mg palladiummustaa ja suoritetaan katalyyttinen pelkistäminen ilmastollisessa lämpötilassa ja paineessa 5 tuntia. Katalyytti poistetaan suodattamalla ja lisätään 0.45 ml IN kloorivetyhappoa, minkä jälkeen suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 10 mitään vettä ja lyofiloidaan. Jäljelle jäänyt valkea, kuohkea tuote ja 141 mg tuotetta (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH liuotetaan 10 mljaan dimetyyliformamidia, minkä jälkeen lisätään 60 mg H0NB:a, Jäähdytetään jään avulla ja lisätään tässä mainitussa järjestyksessä 0,25 ml N-etyylimorfoliinin 10-prosenttista dimetyyliformaraidiliuos-ta ja 50 mg DCC:a. Seosta sekoitetaan jäähdyttäen jään avulla 5 tuntia ja tämän jälkeen huoneenlämmössä 10 tuntia. Dimetyyliformamidi poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, ja lisätään 20 ml vettä. Liukenemattomat komponentit erotetaan suodattamalla ja suodos kaadetaan tuotetta Amberlite IRA-410 (asetaattimuoto) sisältävään pylvääseen (halkaisija 1 cm, pituus 5 cm), joka sitten pestään 50 ml:11a vettä, Poisvaluva liuos ja pesunesteet kootaan ja kaadetaan karboksimetyyliselluloosaa sisältävään pylvääseen (halkaisija 1,5 cm, pituus 25 cm). Eluointi suoritetaan soveltamalla gradientti-menetelmää ja käyttämällä 300 ml 0,005 M ammoniumasetaattiliuosta ja 300 ml 0,175 M ammoniumasetaattiliuosta. Fraktiot 170 ml...240 ml kootaan ja lyofiloidaan, jolloin saadaan 208 mg valkoista kuohkeata jauhetta. Tätä tuotetta ohutkerroskromatografoitaessa todetaan esiintyvän epäpuhtautta, jolla on laaja Rf-arvo. Tästä syystä tuotetta puhdistetaan uudelleen Amberlite XAD-2 sisältävän pylvään avulla, jonka halkaisija on 2 cm ja pituus on 20 cm. Edellä mainitun kuohkean tuotteen vesiliuos kaadetaan tuotetta Amberlite XAD-2 sisältävään pylvääseen, jonka valmistuksessa on käytetty vettä, ja eluointi suoritetaan soveltamalla gradienttimenetelmää ja käyttämällä 250 ml vettä ja 280 ml etanolin 75-prosenttista vesiliuosta. Fraktiot 170 ml...250 ml kootaan, etanoli poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, minkä jälkeen lgofiloidaan.
Saanto 129 mg. Rf1=0.062i Bf2=0.358 Λ/* (<* )^ = -47.0° (c=0.5» etikkahapon 5-prosenttista vesiliuosta) 14 60553
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi tioglykolihapossa olevan HCl:n avulla): Glu, 0.9¾} His, 1.05; Trp, 1.04; Sar, 0,97; Tyr, 0.97; Ala, 1,00;
Leu, 1.04; Arg, 1.03} Pro, 1.00; etyyliamiini, 1,02 (saanto 86$).
Samalla tavoin saadaan kaavan (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala~Leu-Arg-Pro-NHCH^ mukaista polypeptidiamidia käyttämällä toisena lähtö-materiaalina tuotetta .Z,-(D)-Ala-Leu~Arg(N02)-Pro-NH-CH^ tuotteen Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH2 asemesta edellisessä kohdassa (b). Tämän tuotteen fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet ovat: ( )^= -48.1° (c=0.6, etikkahappo)
Rf1^ 0.055; Rf2 = 0.335
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi HCl:n avulla tioglykolihapon läsnäollessa): Glu, 1.00; His, 1.02; Trp, 0,89} Ser, 0.90; Tyr, Ο.98;
Ala, 1.00; Leu, 1.00; Arg, 1.04} Pro, 1.02; metyyliamiini, 0.97 (saanto 84.9$).
Esimerkki 2
Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D) -Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CHg-C^-CH-j valmistus (a) Tuotteen Z-tDj-Ala-Leu-ArgdiC^-Pro-NH-CHg-CHg-CH^ valmistus 2 ml:aan bromivedyn 25-prosenttista jääetikkahappoliuosta liuotetaan 720 mg tuotetta Z-Leu-Arg(N02)“Pro-NH-CH2”CH2-CH-j. Liuosta ravistetaan 40 minuuttia, minkä jälkeen lisätään 20 ml kuivaa eetteriä. Muodostunut sakka otetaan talteen suodattamalla ja pestään kuivalla eetterillä. Täten saatu jauhe kuivataan alennetussa paineessa natriumhydroksidin avulla kuivauskaapissa. Kuivattu jauhe liuotetaan 5 ml:aan dimetyyliformamidia, minkä jälkeen lisätään 230 mg tuotetta Z-(D)-Ala-0H ja 200 mg H0NB:a. Liuosta jäähdytetään jään avulla ja lisätään 1,5 ml trietyyliamiinin 10-prosenttista dimetyyli-formamidiliuosta. Tähän liuokseen lisätään 230 mg DCC:a, ja seosta sekoitetaan huoneenlämmössä 10 tuntia. Dimetyyliformamidin suurin osa poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännös liuotetaan lisäämällä 50 ml etyyliasetaattia. Liukenemattomat komponentit erotetaan suodattamalla ja suodos pestään kolmasti natriumbikarbonaatin 4-prosenttisella vesiliuoksella ja sitten kahdesti vedellä.
Liuos kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla ja etyyliasetaatti poistetaan tislaamalla. Jäännös lisätään eetteriin :ja muodostunut „ 60553
Jauhe otetaan talteen suodattamalla, liuotetaan etyyliasetaattiin,
Jota lämmitetään, Ja puhdistetaan kiteyttämällä uudelleen eetteristä. Tällä tavoin aadaan 723 mg Jauhetta.
(Oi =-48.0° (c= 1.0, netanoli)
Yhdisteen C^H^gOgNg alkuaineanalyysi
Laskettu C, 55.18; H, 7.17; N, 18.68
Todettu C, 54.89; H,7.32; N, 18.44
Rf4= 0.62 (b) Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH2-CH3 valmistus
Seoksessa, jossa on 10 ml etikkahappoa ja 10 nil metanolia, pelkistetään 150 mg edellä olevan kohdan (a) mukaan saatua tuotetta Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH2-CH2 käyttämällä katalyyttina palladi-oitua hiiltä 4 tuntia. Katalyytti poistetaan suodattamalla ja liuotin tislataan suodoksesta alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 0,4 raitaan seosta, jossa on IN kloorivetyhappoa ja 10 ml vettä, ja liuos lyofiloidaan. Täten saadaan valkoista kuohkeata jauhetta.
Tämä jauhe ja 141 mg tuotetta (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH liuotetaan 10 mitään dimetyyliformamidia, minkä jälkeen lisätään 60 mg HONBta ja 25 ml N-etyylimorfoliinin 10-prosenttista dimetyyliformamidiliuos-ta. Seos jäähdytetään -2° Cteen ja lisätään 55 mg DCCta. Seosta sekoitetaan ja jäähdytetään jään avulla 5 tuntia, minkä jälkeen sekoittamista jatketaan huoneenlämmössä 12 tuntia.
Reaktion päätyttyä dimetyyliformamidi poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotetaan 20 ml:aan vettä. Pieni määrä liukenematonta disykloheksyylikarbamidia poistetaan suodattamalla ja suodos kaadetaan pylvääseen, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus 4 cm, ja johon on täytettty tuotetta Amberlite IRA-410 (asetaattimuoto), joka sitten pestään vedellä. Poisvaluva neste ja pesunesteet kootaan ja kaadetaan karboksimetyyliselluloosapylvääseen, jonka halkaisija on 1,5 cm ja pituus on 25 cm.
Tämän jälkeen pestään 0,005 M ammoniumasetaattipuskurilla, ja suoritetaan jatkuva elupinti käyttämällä 300 ml 0,005 M ammoniumasetaatti-puskuria (pH = 6,8) ja 300 ml 0,2 M ammoniumasetaattipuskuria (pH 6,y).
16 60553
Fraktiot 160 ml...230 ml kootaan, lyfiloidaan, kromatografoidaan uudelleen samoissa olosuhteissa kuin edellä sekä lyofiloidaan toisen kerran. Tuote kaadetaan tuotetta Biogel P-2 sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 3 cm ja pituus 50 cm, ja käytetään eluoimisainee-na 5-prosenttista etikkahappoa. Haluttua tuotetta sisältävä eluaatti lyofiloidaan. Tässä selitetyllä tavalla saadaan 201 mg valkoista kuohkeata jauhetta.
(<* = -46.8° (c= 0.5$, 5# etikkahappo)
Rf2= 0.37; Rf1= 0.08
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi 5.7N kloorivetyhapon avulla, jolloin läsnä on tioglykolihappoa: His, 0.97; Arg, 0.97; Trp, 0.91; Ser, 0.91; Glu, 1.00; Pro, 1.00; Ala, 0.98; Leu, 0.97; Tyr, 0.94 (saanto 86.4$).
Esimerkki 3
Tuotteen (Pyr)Grlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH2-OH valmistus (a) Tuotteen Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH2-OH valmistus 3 ml:aan bromivedyn 20-prosenttista dioksaaniliuosta liuotetaan 722 mg tuotetta Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH2-0H. Liuosta ravistetaan 60 minuuttia, minkä jälkeen lisätään 30 ml kuivaa eetteriä.
Sakka otetaan talteen dekantoimalla, pestään kuivalla eetterillä ja kuivataan perusteellisesti natriumhydroksidin avulla kuivauskaapisea ja alennetussa paineessa.
Tuote liuotetaan 5 ml:aan dimetyyliformamidia, minkä jälkeen lisätään 230 mg tuotetta Z-(D)-Ala-0H, ja 210 mg HONBsa. Jäähdytetään jään avulla, minkä jälkeen lisätään 0,16 ml trietyyliamiinia ja 2j0 mg DCC:a tässä järjestyksessä. Seosta sekoitetaan jään avulla jäähdyttäen tunnin ajan ja tämän jälkeen huoneenlämmössä 4 tuntia. Reaktio-seos suodatetaan ja suodos lisätään 100 mlsaan kloroformia. Liuos pestään natriumbikarbonaatin 4-prosenttisella vesiliuoksella ja tämän jälkeen vedellä, kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotdtaan kloroformin, metanolin ja etikkahapon 9:li0.5 liuotinseokseen, ja liuos kaadetaan piidioksidigeeliä sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 3 cm ja pituus 40 cm, ja joka on valmistettu käyttämällä samaa liuotinta kuin edellä, minkä jälkeen kehitetään samalla liuottimelle.
17 60553
Fraktiot, joiden Rf4-arvo on 0,47, kootaan, haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa ja pestään eetterillä. Tällä tavoin saadaan 640 mg jauhetta.
(¾ = -47,2° (c=0.5, metanoli)
Yhdisteen G^0H^y0gNg alkuaineanalyysi
Laskettu C, 53.16; H, 6.99; N, 18.60
Todettu C, 52,84; H, 7.26; N, 18.21
Rf4= 40.47 (b) Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH2-OH valmistus 154 mg tuotetta Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH2-0H pelkistetään katalyyttisesti 10 ml:ssa etikkahappoa käyttämällä katalyyttina palladiummustaa 5 tuntia. Katalyytti erotetaan suodattamalla ja suodon haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Lisätään 10 ml vettä ja 0.45 ml IN kloorivetyhapon vesiliuosta, minkä jälkeen konsen-traatti lyofiloidaan. Jauhemainen lyofilisaatti ja 140 mg tuotetta (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH liuotetaan 10 mitään dimetyyliformamidia, minkä jälkeen lisätään 60 mg HONBta ja 0.25 ml N-ety,ylimorfoliinin 10-prosenttista dimetyyliformamidiliuosta. Seos jäähdytetään -2 °C: een ja lisätään 60 mg DOC:a. Seosta sekoitetaan ja jäähdytetään samalla jään avulla 6 tuntia,minkä jälkeen sekoitetaan huoneenlämmössä 12 tuntia. Reaktion sujuttua loppuun dimetyyliformamidi poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännös liuotetaan 10 ml: aan wettä. Liukenemattomat komponentit erotetaan suodattamalla ja suodon kaadetaan tuotetta Amberlite IRA-410 (asetaattirauoto) sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus 4 cm, jolloin tuote muuttuu asetaatiksi. Tämän jälkeen suola puhdistetaan karboksi-metyyliselluloosaa sisältävän pylvään ja tuotetta Amberlite KAD-2 sisältävän pylvään avulla samalla tavoin kuin esimerkissä 1. Lyofi-loimalla saadaan valkoista kuohkeata jauhetta.
Saanto 146 mg.
(o< = -48.1° (c=0.05» 5^ etikkahappo)
Rf2 = 0.31, Rf1 = 0.025
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi 5.7N kloorivetyhapon avulla, jolloin läsnä on tioglykolihappoa): His, 1.00; Arg, 0.98; Trp, 0.98; Ser, 0.92; Glu, 1.00; Pro, 1.00; Ala, 0.99; Leu, 1.00; Tyr, Ο.98 (saanto 87$)· 18 60553
Esimerkki 4
Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH(CH^)^ valmistus (a) Tuotteen Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH(CH3)2 valmistus 720 mg tuotetta Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH(CH3)2 käsitellään samalla tavoin kuin esimerkissä 2-(a) ja kondensoidaan tämän jälkeen tuotteen Z-(D)-Ala-0H kanssa DCC*n ja H0NB:n avulla seoksessa, jossa on 5 ml dimetyyliformamidia ja 10 ml dikloorimetaania. Tuote uutetaan etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 690 mg jauhetta.
(y )^ = -48,3° (c= 1.0, metanoli)
Yhdisteen C-j^H^gOgN^ alkuaineanalyysi
Laskettu C, 55.18; H, 7-17* N, 18.68
Todettu C, 54.78; H, 1.09; N, 18.22
Rf4= 0.61 (t>) Tuotteen (Pyr)Glu-Hi s-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH- GH(CHg)2 valmistus
Tarkasti samalla tavalla kuin esimerkissä 2-(b) on selitetty, valmistetaan edellä mainittua yhdistettä tuotteista Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH(CH ^)2 ja (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH. Saanto 128 mg.
(t* )jp= “47.5° (c=0.5, 5# etikkahappo)
Rf2= 0.375, Rf ^0.08
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi 5.7N kloorivetyhapon avulla, jolloin läsnä on tioglykolifcappoa): His, 0.99; Arg, Ο.98; Trp, 0.89; Ser, 0.94} Glu, 1.00; Pro, 1.00; Ala, 1.00; Leu, 1.02; Tyr, Ο.98 (86.5# saanto).
Esimerkki 5
Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH^ valmistus (a) Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH valmistus 100 ml:aan metanolia liuotetaan 4,0 g tuotetta Z-Ser-Phe-OMe. Liuos pelkistetään katalyyttisesti ilmastollisessa paineessa 1,5 tuntia 19 60553 käyttämällä katalyyttina 500 mg palladiummustaa. Katalyytti poistetaan suodattamalla ja välittömästi tämän jälkeen metanoli haihdutetaan suodoksesta tislaamalla alennetussa paineessa, minkä jälkeen jäännös liuotetaan 25 mljaan dimetyyliformamidia. Liuokseen lisätään 4.1 g tuotetta (Pyr)Glu-His-Trp-OH, minkä jälkeen lisätään 3,8 g HONBia ja 3 g DCCsa -5 °C:ssa. Seosta sekoitetaan 2 tuntia -5 °C:ssa, 2 tuntia 0 °C:ssa ja 8 tuntia huoneenlämmössä.
Muodostunut uisykloheksyylikarbamidi poistetaan suodattamalla ja suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös hierretään etyyliasetaatin avulla ja muodostunut jauhe kootaan suodattamalla. Saanti: 6,7 g. Jauhe liuotetaan 30 ml:aan metanolin ja kloroformin 15:85 seosta, ja liuos kaadetaan piihappogeeliä sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 6 cm ja pituus 12 cm, ja joka on liuotettu metanolin ja kloroformin 15:85 seoksella. Pylväs eluoi-daan 600 ml:lla metanolin ja kloroformin 15:85 seosta, 1 litralla metanolin ja kloroformin 25:75 seosta ja 1 litralla metanolin ja kloroformin 30:70 seosta. Fraktiot, jotka eluoidaan alkaen 400 ml: sta metanolin ja kloroformin 25:75 seosta 700 ml:aan metanolin ja kloroformin 30:70 seosta, kootaan ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös hierretään etyyliasetaatin avulla ja muodostunut jauhe .otetaan talteen suodattamalla, jolloin saadaan yhdistettä ( (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OMs). Saanto: 4.2 g. Rf^ 0.29.
20 ml:aan metanolia suspendoidaan 3,5 g edellä valmistettua yhdistettä, ja suspensio jäähdytetään 0 °C:een, minkä jälkeen lisätään 9 ml IN natriumhydroksidiliuosta. Seosta sekoitetaan tunnin ajan, minkä jälkeen se neutraloidaan 8 ml:11a kloorivetyhapon IN liuosta. Metanoli tislataan alennetussa paineessa ja jäännökseen lisätään kylmää vettä. Muodostunut sakka otetaan talteen suodattamalla, pestään kylmällä vedellä ja kuivataan, jolloin saadaan haluttua yhdistettä. Rf2= 0.61 (¾ -3.3° (c= 0.55, jääetikkahappo) (b) Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CHgCH-j valmistus 15 ml:aan bromiveflyii 25-prosenttista jääetikkahappoliuosta liuotetaan 1.6 g tuotetta Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH-j, ja liuosta 20 60553 sekoitetaan huoneenlämmössä 50 minuuttia. Liuokseen lisätään 150 ml kuivaa eetteriä, ja muodostuneet sakat kootaan suodattamalla, kuivataan ja liuotetaan 30 mljaan vettä. Liuos kaadetaan tuotetta Amber-lite CG-410 (vapaa emäs) sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 2,5 crn ja pituus 15 cm, ja pylväs pestään perusteellisesti meta-nolin ja veden 30:70 seoksella, loisyaluva neste ja pesuliuokset yhdistetään ja konsentroidaan metanolin haihduttamiseksi. Jäännös lyofiloidaan, jolloin saadaan H-iDj-Ala-Leu-ArgtNOgJ-Pro-NHCHgCH-j. Saanto 1.2 g. fif1= 0.21, Rf2= 0.64.
5 ml:aan dimetyyliformamidia liuotetaan 225 mg edellä valmistettua yhdistettä ja 280 mg tuotetta (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH, minkä jälkeen lisätään 150 mg H0NB:a. Seos jäähdytetään -10 °C:een ja lisätään 90 mg DGCsa. Seosta sekoitetaan 2 tuntia -10 °C:ssa, 4 tuntia 0 °C:ssa, ja 12 tuntia huoneenlämmössä. Muodostunut seos suodatetaan disykloheksyylikarbamidin poistamiseksi, ja suodokseen lisätään etyyliasetaattia. Muodostunut sakka kootaan suodattamalla, kuivataan ja liuotetaan etanolin ja veden 20:80 seokseen, jolloin samalla lämmitetään. Liuoksen annetaan seistä, jolloin muodostuu hienoja kiteitä, jotka erotetaan suodattamalla. Saanto 339 mg. (Cx)26,5= -43.6° (c=0.11, metanoli) Rf1* 0.22, Rf2= 0.74.
(c) Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CHgCH-j valmistus (I) 10 mljaan muurahaishapon 60-prosenttista vesiliuosta liuote taan 150 mg tuotetta (H-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH-j), joka valmistetaan edellä olevassa kohdassa (b) selitetyllä tavalla, minkä jälkeen lisätään 300 mg SnC^’^O. Seos lämmitetään 80...85 °G:een 2,5 tunniksi ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös uutetaan 30 ml:11a vettä, jonka lämpötila on 80 °C, minkä jälkeen suodatetaan. Suodos kaadetaan tuotetta Amberlite XAD-2 (noin 200 meshiä) sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 3 cm ja pituus on 15 cm.
Pylväs pestään vedellä ja gradienttieluoidaan 300 ml:11a vettä ja 300 ml:11a 100-prosenttista etanolia. Haluttu yhdiste saadaan fraktioista 130 ml...220 ml, jotka kootaan ja konsentroidaan alennetussa paineessa etanolin haihduttamiseksi. Jäännös kaadetaan karbok-simetyyliselluloosaa .sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 21 60553 2 cm ja pituus on 30 cm. Pylväs gradienttieluoidaan ammoniumasetaa-tilla 0,005...0,2 M (pH= 6,8). Haluttu tuote saadaan fraktioista 350 ml...500 ml, jotka kootaan ja lyofiloidaan, jolloin saadaan kuohkeata jauhetta. Saanto 1112 mg.
(* )24 = -44.3° (c= 0.53, 5# etikkahappo), Rf3^ 0.088, Rf2= 0.73.
Aminohappoanalyysi: His, 0.96; Arg, 1.04; Trp, 0.92; Ser, 0.96;
Glu 0.99; Pro, 1.08; Ala 1.00; Leu, 1.00; Phe, 1.00; etyyliamiini 1.04 (saanto 85#)· (il) Seokseen, jossa on 1 ml jääetikkahappoa ja 20 ml metanolia, liuotetaan 100 mg edellisessä vaiheessa (b) valmistettua yhdistettä, minkä jälkeen lisätään 100 mg palladiummustaa. Seos pelkistetään katalyyttisesti ilmastollisessa paineessa 2 vuorokautta, minkä jälkeen katalyytti poistetaan suodattamalla. Suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 3 ml:aan ammonium-asetaatin 0,005 M vesiliuosta, liuos kaadetaan karboksimetyylisellu-loosaa sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 2 cm ja pituus on 30 cm, ja pylväs gradienttieluoidaan samoissa olosuhteissa kuin kohdassa (I). Fraktiot 350 ml...460 ml kootaan ja lyofiloidaan, jolloin saadaan haluttu tuote, jonka Rf-arvo ja ominaiskierto ovat identtisesti samat kuin,edellisessä kohdassa (i) valmistetun yhdisteen arvot.
(III) 5 ml:aan vedetöntä fluorivetyä, jossa on 0,2 ml anisolia ja 0,1 ml merkaptoetanolia, liuotetaan edellisessä kohdassa (b) selitetyllä tavalla valmistettu yhdiste, ja seosta sekoitetaan 0 Crssa 40 minuuttia. Seos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa fluori-vedyn haihduttamiseksi. Jäännös liuotetaan 10 ml:aan vettä ja liukenemattomat komponentit erotetaan suodattamalla käyttämällä tuotetta Celite^®^ (toiminimen Johns-Manville, USA, rekisteröity tavaramerkki). Suodos kaadetaan tuotetta Amberlite CG-410 (asetaatti-muoto) sisältävän pylvään läpi, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus on 10 cm, ja pylväs pestään vedellä. Pylvään läpi valunut liuos ja pesunesteet yhdistetään ja kaadetaan pylvääseen, jonka halkaisija on 2 cm ja pituus on 30 cm. Pylväs gradienttieluoidaan samoissa olosuhteissa kuin edellisessä kohdassa (I) on selitetty. Fraktiot 340 ml...460 ml kootaan ja lyofiloidaan, jolloin saadaan haluttu yhdiste. Saanto: 42 mg.
22 6 0 5 5 3
Valmistetulla tuotteella on sama Rf-arvo, ominaiskierto ja munasolun irtoamiseen vaikuttavan vaikutuksen ED^^-arvo kuin sillä yhdisteellä, joka valmistettiin edellä esitetyn kohdan (I) mukaisella tavalla.
Esimerkki 6
Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Nle-Arg-Pro-NHCH2CHj valmistus (a) tuotteen Z-Nle-ArgiNOgJ-Pro-NH-Ci^CH^ valmistus 4 mljaan bromivedyn 25-prosenttista jääetikkahappoa liuotetaan 477»5 mg tuotetta Z-ArgiNOgJ-Pro-NH-CE^CH^, ja liuosta sekoitetaan huoneenlämmössä 30 minuuttia, minkä jälkeen lisätään kuivaa eetteriä. Muodostunut sakka kootaan suodattamalla, pestään eetterillä ja kuivataan natriumhydroksidin avulla alennetussa paineessa.
Toisaalta liuotetaan 265,3 mg tuotetta Z-Nle-OH seokseen, jossa on 2 ml etyyliasetaattia ja 2 ml dioksaania. Liuos jäähdytetään 0 °C: een, lisätään siihen 187 mg HONB:a ja 226 mg DCC:a, minkä jälkeen seosta sekoitetaan 3 tuntia.
Erottunut karbamidiyhdiste poistetaan suodattamalla. Suodos lisätään edellä valmistetun sakan liuokseen 1 mljssa dimetyyliformamidia, minkä jälkeen tiputtaen lisätään 0,28 ml trietyyliamiinia. Seosta sekoitetaan 12 tuntia, minkä jälkeen tislataan liuottimen haihduttamiseksi. Jäännös uutetaan 100 ml:lla kloroformia. Uutos pestään natriumbikarbonaatin 5-prosenttisella vesiliuoksella, kloorivety-hapon 0,5N liuoksella ja vedellä tässä järjestyksessä, ja kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla. Kloroformi haihdutetaan tislaamalla. Jäännöstä hierretään eetterin avulla, minkä jälkeen saoste-taan uudelleen etanolista eetterin avulla siten, että saadaan haluttu yhdiste. Saanto 410 mg. Sulaa 109·..Hl °C:ssa (hajoaa), (y )£2= -50,4° (c= 0,5, etanoli).
Yhdisteen C27H4207N8* 1/2H2^ alkuaineanalyysi
Laskettu C, 54.07; H, 7.22; N, 18.68
Todettu C, 53.79; H, 7.09; N, 18.24 23 60553 (b) Tuotteen. Z-(D)-Ala-Nle-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH^ valmistus 5 ml:aan bromivedyn 25-prosenttista jääetikkahappoliuosta liuotetaan 200 mg tuotetta Z-Nle-Arg(NO2)-Pro-NH-CHgCH^, ja liuosta sekoitetaan huoneenlämmössä 40 minuuttia, minkä jälkeen lisätään 50 ml kuivaa eetteriä. Muodostunut sakka otetaan talteen suodattamalla, pestään eetterillä ja kuivataan. Sakka kaadetaan tuotetta Amberlite IRA-410 (vapaa muoto) sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus on 5 cm, ja käytetään kehittimenä metanolin 40-prosenttista vesiliuosta bromivedyn poistamiseksi. Metanoii haihdutetaan pois-valuvasta nesteestä tislaamalla ja jäännös lyofiloidaan, jolloin saadaan 120 mg jauhetta. Seokseen, jossa on 20 ml dikloorimetaania ja 5 ml dimetyyliformamidia, liuotetaan edellä juuri valmistettu jauhe ja 44,7 mg tuotetta Z-(D)-Ala-OH. Liuos jäähdytetään 0 °C:een, ja lisätään siihen 40 mg H0NB:a ja 46 mg DCC:a. Seosta sekoitetaan huoneenlämmössä 12 tuntia. Erottunut disykloheksyylikarbamidi poistetaan suodattamalla ja suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 120 mljaan etyyliasetaattia. Liuos pestään natriumbikarbonaatin 4-prosenttisella vesiliuoksella ja vedellä, ja kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla, sekä haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan pieneen määrään etanolia ja saostetaan eetterin avulla, minkä jälkeen toistetaan tämä seostaminen, jolloin haluttu yhdiste saadaan jauheena.
Saanto 132 mg. (Oi = -48,5° (c= 0,5, metanoli)
Yhdisteen C^0H^yOgNg alkuaineanalyysi
Laskettu C, 54.45; H, 7.16; N, 19.05
Todettu C, 54.48; H, 7.23; N, 18.72
Rf1= 0.79, Rf2= 0.92, Rf4= 0.66.
(c) Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Nle-Arg-Pro-NHCH2CHg valmistus 5 ml:aan bromivedyn 25-prosenttista jääetikkahappoliuosta liuotetaan 100 mg tuotetta Z-(D)-Ala-Nle-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH3, ja liuosta sekoitetaan huoneenlämmössä 50 minuuttia, minkä jälkeen lisätään 40 ml kuivaa eetteriä. Muodostunut sakka erotetaan suodattamalla, pestään eetterillä ja kuivataan natriumhydroksidin avulla alennetussa paineessa. Tuote liuotetaan 40-prosenttiseen vesiliuokseen ja kaadetaan tuotetta Amberlite CG-45 (vapaa muoto) sisältävään pylvää- 24 60553 seen bromivedyn poistamiseksi. Metanoli poistetaan poisvaluvasta nesteestä tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännös lyofiloidaan. Lyofilisaatti ja 100 mg tuotetta (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH liuotetaan 4 ml:aan dimetyyliformamidia. lisätään 45 mg H0NB:a, jäähdytetään seos -5...-7 °C:een, ja lisätään 40 mg DCC:a. Seosta sekoitetaan 5 tuntia, jolloin samalla jäähdytetään jään avulla ja tämän jälkeen sekoitetaan sitä 10 tuntia huoneenlämmössä. Dimetyyliforma-raidi poistetaan haihduttamalla ja jäännökseen lisätään 30 ml etyyliasetaattia. Seos suodatetaan ja suodatuskakku kuivataan. Tuote liuotetaan 2 ml saan vedetöntä fluorivetyä, jossa on 0,05 ml anisolia ja 0,05 ml merkaptoetanolia, minkä jälkeen liuosta sekoitetaan 0 °C: ssa 40 minuuttia. Pluorivety poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännös liuotetaan 10 mlsaan vettä. Liukenemattomat komponentit poistetaan suodattamalla, ja suodos kaadetaan tuotetta Amberlite IRA-410 (asetaattimuoto) sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus on 5 cm, jolloin tuote muuttuu asetaa-tiksi. Poisvaluva neste kaadetaan karboksimetyyliselluloosaa sisältävän pylvään läpi, jonka halkaisija on 1.5 cm ja pituus on 30 cm, ja pylväs gradienttieluoidaan 400 mls 11a 0,005 M ammoniumasetaattia ja 400 ml:11a 0,2 M ammoniumasetaattia. Fraktiot 290 ml...320 ml, joilla on maksimiabsorptio ultravioletti-absorptiospketrissä, kootaan ja lyofiloidaan, jolloin saadaan kuohkea jauhe. Saanto 105 mg.
Rf1= 0.063, Rf2= 0.360 (Cx = -46.0° (c= 0.3, 5# etikkahapon vesiliuos)
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi 5.7N kloorivetyhapon avulla, jolloin läsnä on tioglykolihappoa):
Glu, 1.10; His, 1.02; Trp, 0.91; Ser, 0.98;
Tyr, 1.00; Ala, 1.00; Nle, 1.02; Arg, Ο.98; Pro, 0.97; etyyliamiini 1.04 (saanto 84#).
Esimerkki 7
Tuotteen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Ile-Arg-Pro-NHCI^CH-j valmistus 3 g BOC-Pro-hartsia (proliinipitoisuus 0,34 millimoolia/g) syötetään peptidin automaattiseen syntetisoimisreaktoriin (APS-ÖOO, valmistaja Shimidzu Seisakusho, Ltd., Japani), ja paisutetaan dikloorimetaanilla 12 tuntia, minkä jälkeen aminohappoja lisätään seuraavasti: 25 6 0 5 5 3
Dikloorimetaania (3 minuuttia x 3 kertaa) —> 50-prosenttista tri- fluorietikkahappo/dikloorimetaania (10 min ja 30 min., 2 kertaa)-> dikloorimetaania (3 min x 3 kertaa) —V etanolia (3 min x 3 kertaa)—* 10-prsenttista trietyyliamiini/kloroformia (10 min.) —)· kloroformia (3 min. x 3 kertaa) —} dikloorimetaania (3 min. x 2 kertaa) —) BOC-aminohappoa -^ anhydridia (valmistettu tavalliseen tapaan BOC-aminohaposta ja DCCssta) (30 min. ja 60 min., 2 kertaa) -» asetylointi (dikloorimetaania, trietyyliamiinia ja etikkahappoanhydri- diä) (1 tunti) -> dikloorimetaania (3 min. x 3 kertaa). (Käytetään ainoastaan tuotetta (Pyr)Crlu-OH, koska siinä ei ole BOC-ryhmää, ja kondensaatiorpaktio suoritetaan dimetyyliformamidissa DCC:n avulla).
Lopuksi hartsi pestään etanolilla, kloroformilla, dimetyyliformami-dilla ja eetterillä tässä mainitussa järjestyksessä sekä kuivataan. Saanto 4,12 g. Käytetään seuraavia BOC-aminohappoja: BOC-Arg(Tos), BOC-Ile, B0C-(D)-Ala, BOC-Phe, BOC-Ser (Bzl), BOC-Trp, BOC-Iiis (Tos).
3 g edellä selitetyllä tavalla valmistettua hartsia suspendoidaan 20 ml:aan dimetyyliformamidia, ja liuos kyllästetään etyyliamiinilla 20 °C:ssa. Seosta sekoitetaan 40 tuntia huoneenlämmössä. Hartsi erotetaan suodattamalla ja suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös hierretään eetterin avulla, jolloin saadaan jauheena raakaa tuotetta (Pyr)Glu-His(Tos)-Trp-Ser(Bzl)-Phe-(D)-Ala-Ile-Arg(Tos)-Pro-NH-CH2CH^. Saanto 720 mg. Tämä jauhe liuotetaan etyyliasetaatin, pyridiinin, etikkahapon ja veden 60:20:6:10 seokseen, ja liuos kaadetaan piihappogeeliä sisältävään pylvääseen, jonka Halkaisija on 3 cm ja pituus on 20 cm, ja joka on liuotettu samalla liuotinseoksella. Pylväs eluoidaan samalla liuotinseoksella. Fraktiot, joiden Rf-arvo on 0,4, kun suoritetaan ohutkerroskromato-grafointi piihappogeelin avulla metanolin ja kloroformin 15:85 seosta käyttäen, kootaan ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös hierretään etyyliasetaatin avulla ja saatu jauhe otetaan talteen suodattamalla. Saanto; 240 mg. Jauhe liuotetaan 5 ml:aan fluorivetyä, jossa on 0,05 ml tioglykolihappoa ja 0,2 ml anisolia, ja liuosta sekoitetaan 0 °C:ssa tunnin ajan. Fluorivety poistetaan (laihduttamalla ja jäännös liuotetaan 10 ml:aan vettä. Liuos kaadetaan tuotetta Amberlite IRA-410 (asetaattimuoto) sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus on 10 cm. Poisvaluvu liuos 26 60553 puhdistetaan saattamalla se menemään kahdesti tuotetta Ainberlite XAD-2 sisältävän pylvään läpi, jonka halkaisija on 2 cm ja pituus on 10 cm, kahdesti karboksimetyyliselluloosaa sisältävän pylvään läpi, jonka halkaisija on 1,9 cm ja pituus on 10 cm, ja kerran tuotetta Sephadex LH-20 sisältävän pylvään läpi, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus on 60 cm, minkä jälkeen lopuksi lyofiloidaan ja saadaan kuohkeata jauhetta.
Saanto 42 mg. Rf1= 0.071, Rf2= 0.37
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi kloorivetyhapon avulla, jolloin läsnä on tioglykolihappoa).
Glu, 1.01; His, 0.93; Trp, 0.92; Ser, 0.99; Phe, 1.00;
Ala, 1.03; Ile, 0.98; Arg, 1.00; Fro, 1.08; etyyliamiini 1.04 (saanto 88$)
Esimerkki 8
Tuotte en (Pyr)Glu-Tyr-Trp-S er-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NHCHgCH^ valmistus (a) Tuotteen B0C-Tyr-(0Bzl)-(D)-Ala-0Bzl valmistus 100 ml:aan asetonitriiliä liuotetaan 11.1 g tuotetta BOC-Tyr-(OBzl)-OH ja 10,9 g tuotetta (D)-Ala-0Bzl-p-tolueenisu2fonaatti. Liuos jäähdytetään 0 °C;een, ja lisätään siihen 6.8 g DCC:a, 4,5 g H0NB:a ja 4,34 ml trietyyliamiinia. Seosta sekoitetaan huoneenlämmössä 10 tuntia, minkä jälkeen saostunut karbamidiyhdiste poistetaan suodattamalla. Suodos tislataan ja jäännös uutetaan 200 ml:11a etyyliasetaattia. Uutos pestään natriumbikarbonaatin 5-prosenttisella vesi-liuoksella, kloorivetyhapon 0,1N vesiliuoksella sekä vedellä tässä mainitussa järjestyksessä, ja kuivataan natriumsulfaatin avulla. Etyyliasetaatti poistetaan tislaamalla ja jäännös kiteytetään petrolieetteristä ja kiteytetään tämän jälkeen uudelleen etyyliasetaatin ja petrolieetterin seoksesta. Saanto 13.6 g· Sulamispiste: 113...114 °C; (¾ )^1 = + 18,4° (c=, metanoli), Rf=0.76. Yhdisteen a^ua in e analyysi
Laskettu C, 69.90; H, 6.81; N, 5.26#
Todettu C, 69.72; H, 6.75; N, 5.42# 27 6 0 5 5 3 (b) Tuotteen BOC-Ser-Tyr-(OBzl)-(D)-Ala-OBzl valmistus 100 mitään trifluorietikkahappoa liuotetaan 11 g tuotetta BOC-Tyr (0Bzl)-(D)-Ala-0Bzl. Liuoksen annetaan seistä huoneenlämmössä 30 minuuttia, minkä jälkeen liuotin poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa.
Jäännös kuivataan natriumhydroksidin avulla alennetussa paineessa kuivauskaapissa.
Toisaalta liuotetaan 4,1 g tuotetta BOC-Ser ja 4,0 g 2,4-di-nitro-fenolia 50 mitään tetrahydrofuraania. Tämä liuos jäähdytetään 0 °C; een, minkä jälkeen siihen lisätään 4,5 g DCCta ja sekoitetaan 0 °Ct ssa 2 tuntia.
Saostunut disykloheksyylikarbamidi poistetaan suodattamalla ja aikaisemmin valmistettu amiinikomponentti (H-Tyr-(0Bzl)-(D)-Ala-0BZ1) liuotetaan suodokseen. Liuos jäähdytetään 0 °Cteen ja lisätään siihen tiputtaen 4,2 ml triatyyliamiinia. Liuosta sekoitetaan huoneenlämmössä 5 tuntia, minkä jälkeen tetrahydrofuraani poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa.
Jäännös liutetaan 200 mitään etyyliasetaattia, ja liuos pestään natriumbikarbonaatin 5-prosenttisella vesiliuoksella, kloorivety-hapon 0,IN vesiliuoksella ja vedellä tässä mainitussa järjestyksessä, minkä jälkeen kuivataan natriumsulfaatin avulla. Etyyliasetaatti poistetaan tislaamalla, ja jäännös kiteytetään petrolieetteristä sekä kiteytetään tämän jälkeen uudelleen etyyliasetaatin ja petroli-eetterin seoksesta. Saanto 9.7 g.
Rf^= 0.5 T f (C* )p^"= -4.1° (c=l, metanoli); sulamispiste: 124...125 °c.
Alkuaineanalyysi, yhdiste C-^H^OgN^
Laskettu C, 65.89; H, 6.67; N, 6.78$
Todettu C, 65.82; H, 6.59; N, 6.50$ (c) Tuotteen BOC-Ser-Tyr-iDj-Ala-Leu-ArgiNO^J-Pro-NHCH^CH^ valmistus 100 ml:aan metanolia liuotetaan 2,16 g tuotetta BOC-Ser-Tyr(OBzl)^D).
28 60553
Ala-OBzl, minkä jälkeen pelkistetään katalyyttisesti 4 tuntia palladiummustan avulla. Tämän jälkeen katalyytti poistetaan suodattamalla. Metanoli poistetaan tislaamalla ja jäännös liuotetaan 10 ml: aan dimetyyliformamidia. Tähän liuokseen liuotetaan 1,6 g tuotetta H-Leu-ArgiNOpJrPro-NHCHoCH-j ja 690 mg H0NB:a. Liuos jäähdytetään O ^ 0 C:een, minkä jälkeen siihen lisätään 795 mg DCC:a, jolloin samalla sekoitetaan. Seosta sekoitetaan 2 tuntia 0 °C:ssa ja tämän jälkeen 5 tuntia huoneenlämmössä. Saostunut karbamidiyhdiste poistetaan suodattamalla ja dimetyyliformamidi poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös uutetaan 50 ml:11a n-butanolia ja pestään natriumbikarbonaatin 5-prosenttisella vesiliuoksella, 0.1N kloori-vetyhapolla ja vedellä tässä mainitussa järjestyksessä, n-butanoli poistetaan tislaamalla ja jäännös muutetaan kiinteään muotoon eetterin avulla ja saostetaan etanolin ja eetterin seoksesta. Saanto 2.25 g. Rf^=0.30; sulamispiste: 149. ».151 °C (hajoaa); (0< )^= -2o.6° (c=l, metanoli)
Yhdisteen C^gH^O^^n* 3/2^0 alkuaineanalyysi
Laskettu C, 51.75; H, 7.35; N, 17.02#
Todettu C, 51.89; H, 7.30; N, 16.72# (d) Tuotteen Z-Tyr(Z)-Trp-0Bzl valmistus
Dioksaanin ja etyyliasetaatin seokseen (50 ml ja 10 ml) liuotetaan 9.0 g tuotetta Z-Tyr-(Z)-0H ja 10,2 g tuotetta Trp-OBzl-p-tolueeni-sulfonaatti. Liuos jäähdytetään 0 °C:een ja lisätään siihen 3.93 g H0NB:a, 4,33 g DCC:a ja 3,0 ml trietyyliamiinia. Seosta sekoitetaan 5 tuntia, minkä jälkeen saostunut karbamidiyhdiste poistetaan suodattamalla. Liuotin poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännös uutetaan 200 mltlla etyyliasetaattia. Uutos pestään natriumbikarbonaatin 5-prosenttisella vesiliuoksella, IN kloorivetyhapolla ja vedellä tässä mainitussa järjestyksessä, minkä jälkeen kuivataan natriumsulfaatin avulla. Etyyliasetaatti poistetaan tislaamalla, ja jäännös kiteytetään petrolieetteristä sekä kiteytetään uudelleen etyyliasetaatin ja petrolieeetterin seoksesta. Saanto 13 g.
Rf^= 0.88; sulamispiste: 103°·.·104 °C; (Ot )j^ = -4*7° (c=l, metanoli)
Yhdisteen ^3^39^8^3 alkuaineanalyysi
Laskettu C, 71.16; H, 5.42; N, 5.79#
Todettu C, 71.11; H, 5.29; N, 5.76# 60553 29 (e) Tuotteen Ζ-(Pyr)Glu-Tyr-Trp valmistus 100 ml:aan metanolia liuotetaan 5*8 g tuotetta Z-Tyr(Z)Trp-OBzl ja pelkistetään katalyyttisesti 5 tuntia pailadiummustan läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistetaan suodattamalla, ja metanoli poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 20 ml: aan dimetyyliformamidia, ja lisätään 3,i9 g tuotetta Z-(I:yr)Glu-ONB ja 1,12 ml trietyyliamiinia. Seosta sekoitetaan 12 tuntia huoneenlämmössä, minkä jälkeen dimetyyliformamidi poistetaan tislaamalla. Jäännökseen lisätään 100 ml etyyliasetaattia ja 100 ml vettä. Vesi-kerros tehdään happameksi IN kloorivetyhapon avulla ja uutetaan 100 ml: 11a n-butanolia. Uutos pestään vedellä ja n-butanoli poistetaan tislaamalla. Jäännös hierretään eetterin avulla jauheen saamiseksi. Tämä saostetaan uudelleen etanolin ja eetterin seoksesta. Saanto 4.5 g. Rf^=0.63; sulamispiste 165°. ..169 °C (hajoaa); (oc)p1= -4.8° (c=0.5, metanoli)
Yhuisteen C^HjgOgN^'I^O alkueaineanalyysi
Laskettu C, 62.85; H, 5.43; N, 8.89#
Todettu C, 62.96; H, 5-35; N, Ö.76?6 (f) Tuotteen (Pyr)Glu-Tyr-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NHCH2CHj valmistus 20 mlsaan metanolia liuotetaan 184 mg tuotetta Z4Pyr)-Glu-Tyr-Trp ja hydrogenoidaan 3 tuntia palladiummustan läsnäollessa. Katalyytti erotetaan suodattamalla, minkä jälkeen metanoli poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotetaan 2 ml:aan dimetyyliformamidia. Toisaalta käsitellään 316 mg tuotetta BOC-Ser-Tyr-(L»)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCH2CH-j 10 ml:lla trifluorietikkahappoa 40 minuuttia, jolloin läsnä on 0.36 ml IN kloorivetyhappoa. Trifluorietikka-happo poistetaan tislaamalla ja jäännös hierretään eetterin avulla ja kuivataan perusteellisesti natriumbydroksidin avulla kuivaus-kaapissa. Tämä jauhe ja 81 mg H0NB:a liuotetaan edellä valmistettuun dimetyyliformamidiliuokseen, minkä jälkeen jäähdytetään -2 °C: een. Tämän jälkeen lisätään 93 mg DCC:a ja 0,05 ml N-etyylimorfo-liinia, ja saatua seosta sekoitetaan 2 tuntia 0 °C:ssa ja sitten yli yön nuoneenlämmössä. Muodostunut karbamidiyhdiste poistetaan suodattamalla, ja suodokseen lisätään 50 ml eetteriä. Sakka otetaan talteen suodattamalla. Saanto· 350 mg. Tämä tuote sijoitetaan 7 g:aan 30 60553 piihappogeeliä, ja käytetään kehittimenä Rf^:n raukaista liuotin-seosta. Runsaasti haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot kootaan ja liuotin poistetaan tislaamalla. JäännöBtä hierretään etyyliasetaatin avulla. Saanti: 270 mg. 150 mg suuruista osaa tätä tuotetta käsitellään 4 ml:11a vedetöntä fluorivetyä, jossa on 0.1 ml anisolia ja 0.1 ml 2-merkaptoetanolia, tunnin ajan ö °C:ssa, minkä jälkeen fluorivety poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös kuivataan natriumhydroksidin avulla kuivauskaapissa. Jäännös uutetaan 50 ml:11a vettä ja uutos kaadetaan tuotetta Amberlite IRA-410 (asetaattimuoto) sisältävän pylvään läpi, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus on 5 cm. Pylväästä valuva neste ja pesuvedet kootaan ja kaadetaan karboksymetyyliselluloosaa sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 1,5 cm ja pituus on 19 cm. Eluointi suoritetaan soveltamalla suoraviivaista gradienttimenetelmää, jossa käytetään 2Ö0 ml 0,005N ammoniumasetaattia...280 ml 0.15N ammoniumasetaattia. Fraktiot 110 ml·...210 ml kootaan ja lyofiloidaan, jolloin saadaan 95 mg haluttua tuotetta. Rf^=0.35; (¾ = -39.O0 (c=0.5, 5% etikkahappo); aminohappoanalyysi (hydro- lyysi 5·7Ν suolahapon avulla, kun läsnä on 4% tioglykolihappoa 110 °C: ssa); Arg, 1.07; Trp, 1.03; Ser, 0.89; Glu, 1.00; Pro, 1.00;
Ala, 1.00; Leu, 1.00; Tyr, 2.00; etyyliamiini, 1.05 (saanto 81%)
Esimerkki 9
Tuotteen (Pyr)Glu-p-NH2“Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-C^-CH^ valmistus (a) Tuotteen BOC-p-IK^-Phe-OH valmistus
Seokseen, jossa on 40 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta ja 150 ml dimetyyliformamidia, liuotetaan 6,3 g tuotetta p-N02~Pde-0H ja 13.3 g t-butyylipentakloorifenyylikarbonaattia. Lisätään 5 ml txäetyyli-amiinia, minkä jälkeen liuoksen annetaan reagoida huoneenlämmössä 48 tuntia. Liuotin poistetaan tislaamalla ja jäännös liuotetaan veteen, minkä jälkeen uutetaan eetterillä. Vesikerroksen pH säädetään arvoon 3 sitruunahapon avulla, minkä jälkeen uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistetaan tislaamalla. Jäännös hierretään petrolieetterin avulla ja otetaan talteen suodattamalla. Tuote puhdistetaan piihappogeeliä sisältävän pylväskromatografoinnin 60553 31 avulla, ja haluttua tuotetta sisältävät fraktiot kootaan ja tislataan liuottimen poistamiseksi. Jäännös kiteytetään eetterin ja petroli-eetterin seoksesta. Saanto: 3.8 g. Sulamispiste 103...104 °C.
(cv -32.0° (c= 0.75, dimetyyliformamidi); Rf4= O.bl.
Yhdisteen alkuaineanalyysi
Laskettu C, 54.19; H, 5.85; K, 9.03$
Todettu C, 54,21; H, 5.8b; N, 9.21$ (b) Tuotteen BOC-p-NI^-Phe-OH valmistus 80 mliaan me anolia liuotetaan 2,0 g tuotetta BOC-p-rK^-Pbe-OH ja pelkistetään katalyyttisesti huoneenlämmössä 8 tuntia käyttämällä katalyyttina palladiummustaa. Katalyytti poistetaan suodattamalla ja liuotin poistetaan haihduttamalla. Jäännös hierretään petroli-eetterin avulla ja otetaan talteen suodattamalla. Saatu tuote kiteytetään uudelleen etyyliasetaatin ja petrolieetterin seoksesta.
Saanto? 1,5 g, sulamispiste: 121 °C; (e* )^= - 2.2.° (c=1.0, dimetyyliformamidi); Rf4=0.40 Yhdisteen alkuaineanalyysi
Laskettu C, 59.98; H, 7.19; N, 9.59$
Todettu C, 59.47; H, 7-20; N, 9,71$ (c) Tuotteen BOC-p-NH-Z-Phe valmistus 120 ml:aan natriumbikarbonaatin IN vesiliuosta liuotetaan 1.5 g tuotetta BOC-pNHg-Phe-OH. Jäähdytetään jään avulla, sekoitetaan voimakkaasti ja lisätään 1.1 g bentsyylioksikarbonyylikloridia.
Reaktion kuluessa lisätään vielä 30 ml vettä, ja reaktion annetaan jatkua 3 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseokseen lisätään IN kloori-vetyhappoa pH:n säätämiseksi arvoon 2, ja muodostunut öljymäinen sakka uutetaan etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kootaan, pestään vedellä ja kuivataan vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistetaan tislaamalla ja jäännös hierretään petrolieetterin avulla, jolloin saadaan raaka tuote. Tämä tuote kiteytetään uudelleen eetterin ja petrolieetterin seoksesta. Saanto: 1.Ö4 g. Sulamispiste: 156...157 °C; ((y )^= “3.34° (c= 0.7, dimetyyliformamidi);
Rf4= 0.67.
Yhdisteen ^22^26®6®2 alkuaineanalyysi 32 60553
Laskettu C, 63.75; H, 6.32; N, 6.7o$
Todettu C, 03.76; H, 6.25; N, b.db$ (d) Tuotteen BOC-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3 valmistus 5 ml jaan dimetyyliformamidia liuotetaan 466 mg tuotetta H-Ser-Tyr- (D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3, minkä jälkeen lisätään 370 mg tuotetta BOC-Trp-ONB. Liuoksen annetaan reagoida, huoneenlämmössä 3 tuntia. Liuotin poistetaan tislaamalla ja jäännökseen lisätään etyyliasetaattia. Muodostunut jauhe otetaan talteen suodattamalla ja keitetään etyyliasetaatissa, minkä jälkeen jäähdytetään ja annetaan reaktioseoksen seistä. Sakka otetaan talteen suodattamalla. Saanto: 590 mg. Sulamispiste l89...1yO °C (hajoaa); (oi = -43.6° (c=0.6, dimetyyliformamidi); Rf^=0.32 Yhdisteen ^5οΗ73^13Ν13*alkuaineanalyysi
Laskettu C, 54,53; H, 7.06; N,Ib.55$
Todettu C, 54.34; H, 6.90; N, 16.54$ (e) Tuotteen BOC-p-NH-Z-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-(N02)-Fro-NH-CH2-CH3 valmistus
Merkaptoetanolin läsnäollessa käsitellään 560 mg tuotetta BOC-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3 5 ml:11a trifluori-etikkahappoa huoneenlämmössä 30 minuuttia, minkä jälkeen lisätään eetteriä. Muodostunut sakka otetaan talteen suodattamalla ja kuivataan natriumhydroksidin avulla kuivauskaapissa.
Tuote liuotetaan 5 ml:aan dimetyyliformamidia, ja liuos neutraloidaan 0.1 ml:lla N-etyylimorfoliinia.
Tähän liuokseen lisätään tuotteen BOC-p-NH-Z-Phe-ONB dimetyyliforma-midiliuosta, jota tuotetta on valmistettu käyttämällä 217 mg tuotetta BOC-p-NH-Z-lPhe ja 145 mg H0NB:a sekä soveltamalla DCC-prosessia. Seoksen annetaan reagoida huoneenlämmössä 12 tuntia, minkä jälkeen liuotin poistetaan tislaamalla. Jäännökseen lisätään etyyliasetaattia ja muodostunut kiinteä aine otetaan talteen suodattamalla. Saanto: 513 mg. Sulamispiste: 115. ..120 °c (hajoaa); ((X = -29.7° (c=0.b, dimetyyliformamidi); Rf4_ 0.37 33 60553
Yhdisteen · 2H20 alkuaineanalyysi
Laskettu C, 58.29; H, b.65; K, 15.22#
Todettu C, 5Ö.1Ö;H6.69; n, 14.81# (f) Tuotteen (Pyr)Glu-p-NH2-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-rro-NH-CH2*-CH^ valmistus
Merkaptoetanolin läsnollessa käsitellään 47 mg tuotetta B0C-p-NH2~ Z-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH:j huoneenlämmössä 30 minuuttia, minkä jälkeen lisätään eetteriä. Muodostunut sakka otetaan talteen suodattamalla ja kuivataan natriumhydroksidin avulla kuivauskaapissa. Tuote liuotetaan 6 ml:aan diraetyyliformami-dia, ja liuos neutraloidaan 0.045 ml:11a N-etyylimorfoliinia. Lisätään 185 mg tuotetta IB0Ci:(Pyr)-Glu-0Su, minkä jälkeen liuoksen annetaan reagoida huoneenlämmössä 48 tuntia. Liuotin poistetaan tislaamalla ja jäännös hierretään etyyliasetaatin avulla. Muodostunut jauhe otetaan talteen suodattamalla. Tällä tavalla saadaan 425 mg tuotetta: IBOC-(Pyr)Glu-p-NH-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH^; Rf^=0.28. 375 mg suuruinen osa tätä tuotet ta saatetaan reagoimaan vedettömän fluorivedyn kanssa (5 ml), jolloin läsnä on merkaptometanolia ja anisolia, 0 °C:ssa tunnin ajan. Fluori-vety poistetaan tislaamalla, minkä jälkeen jäännös liuotetaan veteen ja uutetaan eetterillä. Vesiliuos kaadetaan tuotetta Amberlite IRA-410 (asetaattimuoto) sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 0.9 cm ja pituus on 15 cm, ja pylväästä valuva neste ja pesuvedet kootaan ja lyofiloidaan. Tuote liuotetaan 0.005M ammoiniumasetaatti-puskuria ja kaadetaan karboksimetyyliselluloosaa sisältävään pylvääseen, jonka halkaisija on 1.8 cm ja pituus on 19 cm. Bluointi suoritetaan soveltamalla suoraviivaista gradienttimenetelmää ja käyttämällä 300 ml 0.005M ammoiniumasetaattipuskuria ja 300 ml 0.2 M ammoniumasetaattipuskuria. Fraktiot 90 ml...140 ml kootaan ja lyofiloidaan. Saanto· 170 mg. (0()^= -41.8° (c=0.56, 5# etikkahappo);
Rf 0J6
Yhdisteen CggHygOj^N·^.3CH^C00H.4H20 alkuaineanalyysi Laskettu C, 53.77; H, 6.91; N, 14.70#
Todettu C, 54,09; H, 6,58; N, 14,84#
Aminohappoanalyysi (hydrolyysi 5.7N kloorivetyhapon avulla, jossa on 4# tioglykolihappoa 110 °C:ssa 24 tuntia):
Arg, 0.97; Trp, 0.84; p-NH2-Phe, 0.97; Ser, l.oOjGlu, 1.00; 34 60553
Pro, 0.99; Ala, 1.02; Leu, 1,02; Tyr, 1,00; etyyliamiini 1.00 Esimerkki 10
Tuotteen (Pyr)Glu-Trp-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CHgCH^ valmistus (a) Tuotteen Z-(Pyr)Glu-Trp-QBzl valmistus
Liuokseen, jossa on 1.7 g tuotetta Z-(Pyr)Glu-0NB ja 2.1 g tuotetta H-trp-OBzl-p-tolueenisulfonaatti 50 ral:ssa asetonitriiliä, lisätään 0.61 ml trietyyliamiinia, ja seosta sekoitetaan 12 tuntia huoneenlämmössä. Seaktioseos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 100 ml:aan etyyliasetaattia, pestään IN kloori-vetyhapolla ja natriumbikarbonaatin 5-prosenttisella vesiliuoksella, kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös kiteytetään petrolieetteristä ja kiteytetään uudelleen etyyliasetaatin ja petrolieetterin seoksesta. Saanto 1.7 g; sulamispiste 129...130 °C; (Oi )^= +3.1° (c=l,0, dimetyyliformamidi);
Rf4=0.42
Yhdisteen alkuaineanalyysi
Laskettu G, 69.00; H, 5.42; N, 7.79$
Todettu C, 6o,ö5; H, 5.48; N, 7.53$ (b) Tuotteen B0C-Trp-Ser-Tyr~(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH^CH^ valmistus 670 mg tuotetta BOC-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH^ käsitellään 10 ml:lla trifluorietikkahappoa huoneenlämmössä 20 minuuttia, ja saatuun liuokseen lisätään 50 ml kuivaa eetteriä, jolloin saauaan hienoa kiinteätä ainetta, joka kuivataan natriumhydroksidihelmien avulla alipaineessa. Saatu jauhe liuotetaan 5 ml:aan dimetyyli-formamidia, ja tähän liuokseen lisätään 0.11 ml trietyyliamiinia sekä tuotetta BOC-Trp-ONB, joka valmistetaan DCC-menetelmän avulla käyttämällä 343 mg tuotetta BOC-Trp-OH ja 150 mg HONB:a. Seosta sekoitetaan 12 tuntia huoneenlämmössä, ja muodostunut tuote saoste-taan lisäämällä 50 ml etyyliasetaattia. Sakka otetaan taiteen suodattamalla ja pestään vedellä, sekä puhdistetaan kiteyttämällä uudelleen dietyyliformamidin ja etyyliasetaatin seoksesta. Saanto: 72o mg; 35 605 5 3 sulamispiste 190...193 °C; (W = -42.4° (c= 0.5, dimetyylii'orma-rnidi); Rf4=0.27,
Yhdisteen γβΟρ^Ν^^Η20 alkuaineanalyysi
Laskettu G, 55.49; H, 6.98; N, 16.32$
Todettu C, 55.14; H, 7.16; N, 16.76$ (c) Tuotteen (Pyr)Glu-Trp-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CI^CH^ valmistus 215 mg edellä valmistettua tuotetta Z-(Pyr)Glu-Trp-OBzl liuotetaan 50 ml:aan metanolia, minkä jälkeen hydrogenoidaan 3 tuntia käyttämällä katalyyttina palladiummustaa. Liuos suodatetaan katalyytin poistamiseksi ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös pestään eetterillä ja kootaan suodattamalla, jolloin saadaan vastaava vapaa happo.
426 mg tuotetta BOC-Trp-Ser-Tyr-^-Ala-Leu-ArgiNOgi-fro-NH-CH^CHj käsitellään 5 ml:lla trifluorietikkahappoa, jossa on 0.1 ml 2-mer-kaptoetanolia ja 0.4 ml N kloorivetyhappoa, 30 minuuttia huoneenlämmössä, ja tähän liuokseen lisätään kuivaa eetteriä, jolloin saadaan hieno valkoinen jauhe, joka otetaan talteen suodattamalla ja kuivataan natriumhydroksidihelmien avulla alipaineessa vastaavan vapaan emäksen saamiseksi.
Saatu jauhe liuotetaan 2 ml:aan dimetyyliformamidia, jossa on O.06 ml N-etyylimorfoliinia, ja tähän liuokseen lisätään edellä selitetty vapaa happo ja 102 mg H0NB:a. Seos jäähdytetään 0 °C:een, ja lisätään siihen 110 mg DCC:a. Liuosta sekoitetaan 2 tuntia 0 °C:ssa ja vielä 10 tuntia huoneenlämmössä. Reaktioseos suodatetaan muodostuneen disykloheksyylikarbamidin poistamiseksi, ja suodos laimennetaan etyyliasetaatilla siten, että muodostuu hieno kiinteä aine, joka kootaan suodattamalla ja saadaan täten raaka tuote.
Saatu raaka suojattu nonapeptidiamidi puhdistetaan piihappogeexiä sisältävän pylvään avulla käyttämällä liuotinjärjestelmänä etyyliasetaatin, pyridiinin, etikkahapon ja veden seosta 60:20:6:10.
Puhdasta tuotetaa sisältävät fraktiot (tarkastetaan ohutkerroakromato-grafoimalla) yhdistetään ja haihdutetaan kiinteää aineen saamiseksi. Tätä kiinteätä ainetta (250 mg) käsitellään 5 ml:11a fluorivetyä, jossa on 0.1 ml anisolia ja 0.1 ml 2-merkaptoetanolia, bO minuuttia ,, 60553
Jo 0 °C:s8a, minkä jälkeen fluorivety poistetaan alipaineessa. Jäännös liuotetaan 20 ml:aan vettä ja kaadetaan tuotetta Aniberlite CG-410 (asetaattimuoto) sisältävän pylvään läpi, jonka halkaisija on 1 cm ja pituus on 10 cm. Pylväs pestään perusteellisesti vedellä. Eluaat- ti ja pesunesteet yhdistetään ja kromatografoidaan karboksimetyyli- selluloosaa sisältävässä pylväässä, jonka halkaisija on 1,2 cm ja pituus 30 cm, käyttämällä gradienttieluointia (ammoniumasetaatti- puskuria, pH = 6,8, v,005 M/0,15 M = 300 ml/3000 ml). Puhdas peptidi eluoituu fraktioihin 160...260 ml, jotka yhdistetään ja lyofiloidaan vakiopainoon. Saanto 100 mg; (oi )^= - 47.2° (c*0.25, 5$ etikkahappo) 1 2
Rf = 0.31, Rf = 0.76. Aminohappoanalyysi: His, 0.96; Arg, l,ul;
Trp, 1,89; Glu, 0.92; Ser, 0.96; Pro, 1.11; Ala, 1.00; Leu, 1.02; Tyr, 1.05 (saanto 85$).
t
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP8338973A JPS5035158A (fi) | 1973-07-24 | 1973-07-24 | |
JP8338973 | 1973-07-24 | ||
JP49031734A JPS5749532B2 (fi) | 1974-03-19 | 1974-03-19 | |
JP3173474 | 1974-03-19 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI224374A FI224374A (fi) | 1975-01-25 |
FI60553B true FI60553B (fi) | 1981-10-30 |
FI60553C FI60553C (fi) | 1982-02-10 |
Family
ID=26370246
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI2243/74A FI60553C (fi) | 1973-07-24 | 1974-07-24 | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4490291A (fi) |
AT (1) | AT347053B (fi) |
BE (1) | BE817989A (fi) |
CA (1) | CA1030525A (fi) |
CH (1) | CH611877A5 (fi) |
CS (1) | CS186785B2 (fi) |
DE (1) | DE2435027C2 (fi) |
DK (1) | DK148304C (fi) |
ES (1) | ES428530A1 (fi) |
FI (1) | FI60553C (fi) |
FR (1) | FR2238700B1 (fi) |
GB (1) | GB1423083A (fi) |
HU (1) | HU173662B (fi) |
NL (1) | NL184161B (fi) |
NO (1) | NO140854C (fi) |
SE (1) | SE401822B (fi) |
Families Citing this family (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4675189A (en) * | 1980-11-18 | 1987-06-23 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Microencapsulation of water soluble active polypeptides |
GB2130590B (en) * | 1982-11-10 | 1986-01-08 | Erba Farmitalia | Peptides |
US4491541A (en) * | 1982-11-10 | 1985-01-01 | Farmitalia Carlo Erba | Peptides |
IT1172391B (it) * | 1983-12-23 | 1987-06-18 | Polifarma Spa | Composti tirpeptidici contenenti acido piroglutaminico e triptofano,procedimentio di produzione ed applicazioni terapeutiche |
DE3411224A1 (de) * | 1984-03-27 | 1985-10-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur racematarmen herstellung von peptidzwischenprodukten der gonadorelin- und gonadorelinanaloga-synthese und neue zwischenprodukte bei diesem verfahren |
US4705778A (en) * | 1985-10-22 | 1987-11-10 | Sri International | Orally active LHRH analogs |
US4897268A (en) * | 1987-08-03 | 1990-01-30 | Southern Research Institute | Drug delivery system and method of making the same |
CA2029018A1 (en) * | 1989-11-01 | 1991-05-02 | Robert P. Millar | Analogues of gonadotropin releasing hormone |
JP2653255B2 (ja) | 1990-02-13 | 1997-09-17 | 武田薬品工業株式会社 | 長期徐放型マイクロカプセル |
CA2050425A1 (en) | 1990-09-03 | 1992-03-04 | Yoshiaki Uda | Pharmaceutical composition and its mucous use |
ZA918168B (en) | 1990-10-16 | 1993-04-14 | Takeda Chemical Industries Ltd | Prolonged release preparation and polymers thereof. |
US5518730A (en) | 1992-06-03 | 1996-05-21 | Fuisz Technologies Ltd. | Biodegradable controlled release flash flow melt-spun delivery system |
ATE161716T1 (de) | 1992-08-07 | 1998-01-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Herstellung von mikrokapseln, die wasserlösliche arzneimittel enthalten |
ATE211655T1 (de) | 1993-09-22 | 2002-01-15 | Hisamitsu Pharmaceutical Co | Iontophoresematrix |
US6117455A (en) | 1994-09-30 | 2000-09-12 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Sustained-release microcapsule of amorphous water-soluble pharmaceutical active agent |
US5837281A (en) | 1995-03-17 | 1998-11-17 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Stabilized interface for iontophoresis |
CA2192782C (en) | 1995-12-15 | 2008-10-14 | Nobuyuki Takechi | Production of microspheres |
CA2192773C (en) | 1995-12-15 | 2008-09-23 | Hiroaki Okada | Production of sustained-release preparation for injection |
CA2208336A1 (en) * | 1996-06-20 | 1997-12-20 | Hisamitsu Pharmaceuticals Co., Inc. | A device structure for iontophoresis |
US20040258672A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Graft acceptance through manipulation of thymic regeneration |
AUPR074500A0 (en) * | 2000-10-13 | 2000-11-09 | Monash University | Treatment of t cell disorders |
US20040241842A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-02 | Monash University | Stimulation of thymus for vaccination development |
US20070274946A1 (en) * | 1999-04-15 | 2007-11-29 | Norwood Immunoloty, Ltd. | Tolerance to Graft Prior to Thymic Reactivation |
US20040259803A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Disease prevention by reactivation of the thymus |
US20040265285A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-30 | Monash University | Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration |
US20050020524A1 (en) * | 1999-04-15 | 2005-01-27 | Monash University | Hematopoietic stem cell gene therapy |
US20060088512A1 (en) * | 2001-10-15 | 2006-04-27 | Monash University | Treatment of T cell disorders |
US20080279812A1 (en) * | 2003-12-05 | 2008-11-13 | Norwood Immunology, Ltd. | Disease Prevention and Vaccination Prior to Thymic Reactivation |
-
1974
- 1974-07-16 FR FR7424676A patent/FR2238700B1/fr not_active Expired
- 1974-07-20 DE DE2435027A patent/DE2435027C2/de not_active Expired
- 1974-07-22 CA CA205,315A patent/CA1030525A/en not_active Expired
- 1974-07-22 CS CS7400005210A patent/CS186785B2/cs unknown
- 1974-07-22 DK DK393674A patent/DK148304C/da not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 CH CH1016274A patent/CH611877A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 ES ES428530A patent/ES428530A1/es not_active Expired
- 1974-07-23 BE BE146850A patent/BE817989A/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 NO NO742690A patent/NO140854C/no unknown
- 1974-07-23 AT AT605674A patent/AT347053B/de not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 HU HU74TA1316A patent/HU173662B/hu unknown
- 1974-07-23 GB GB3247274A patent/GB1423083A/en not_active Expired
- 1974-07-23 SE SE7409574A patent/SE401822B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-24 NL NLAANVRAGE7410026,A patent/NL184161B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-24 FI FI2243/74A patent/FI60553C/fi active
-
1975
- 1975-07-17 US US05/596,810 patent/US4490291A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NL184161B (nl) | 1988-12-01 |
AU7124574A (en) | 1976-01-15 |
ES428530A1 (es) | 1976-08-16 |
HU173662B (hu) | 1979-07-28 |
NL7410026A (nl) | 1975-01-28 |
FI60553C (fi) | 1982-02-10 |
SE401822B (sv) | 1978-05-29 |
DK393674A (fi) | 1975-03-17 |
NO140854B (no) | 1979-08-20 |
DK148304C (da) | 1985-11-04 |
CS186785B2 (en) | 1978-12-29 |
US4490291A (en) | 1984-12-25 |
FR2238700A1 (fi) | 1975-02-21 |
CA1030525A (en) | 1978-05-02 |
DE2435027C2 (de) | 1981-11-26 |
NO742690L (fi) | 1975-03-17 |
ATA605674A (de) | 1978-04-15 |
DE2435027A1 (de) | 1975-02-06 |
DK148304B (da) | 1985-06-03 |
CH611877A5 (fi) | 1979-06-29 |
FR2238700B1 (fi) | 1977-10-14 |
NO140854C (no) | 1979-11-28 |
SE7409574L (fi) | 1975-01-27 |
GB1423083A (en) | 1976-01-28 |
BE817989A (fr) | 1975-01-23 |
FI224374A (fi) | 1975-01-25 |
AT347053B (de) | 1978-12-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI60553B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat | |
US4008209A (en) | Nonapeptide amide analogs of luteinizing releasing hormone | |
FI56676C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya amidderivat av nonapeptid som befraemjar loesgoerandet av aeggceller | |
US4024248A (en) | Peptides having LH-RH/FSH-RH activity | |
US3972859A (en) | Novel decapeptide amide analogs of leuteinizing hormone-releasing hormone | |
US4935491A (en) | Effective antagonists of the luteinizing hormone releasing hormone which release negligible histamine | |
JP4249806B2 (ja) | 5位および6位で修飾されているGnRH拮抗物質 | |
FI71567B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av gonadoliberinderivat | |
US3992365A (en) | Agonist analogues of luteinizing hormone releasing hormone | |
KR910002550B1 (ko) | Lhrh의 노나펩타이드 및 데카펩타이드 동족체 및 이의 제조방법 | |
JP2542362B2 (ja) | 新規ハロ低級アルキルグアニジノ置換アミノ酸化合物およびその製法 | |
DE2617646A1 (de) | Peptide mit gonadoliberin-wirkung und verfahren zu ihrer herstellung | |
BG60740B2 (bg) | Полипептид | |
US4490364A (en) | CCK Agonists II | |
EP0000252B1 (en) | Peptides, pharmaceutical compositions containing the peptides and a process for the preparation of the peptides | |
US4083967A (en) | Nona- and decapeptides | |
JPH0631314B2 (ja) | 新規なゴナドリベリン誘導体 | |
US4001199A (en) | Novel polypeptides useful for treating diabetes and hypercholesteremia | |
US4358440A (en) | Polypeptide and its production and use | |
JP2672677B2 (ja) | Lhrh同族体 | |
Burov et al. | Synthesis of biologically active analogs of luliberin with shortened amino acid sequences | |
Burov et al. | Synthesis and investigation of the biological activity of shortened analogues of luliberin | |
DE2010759B2 (de) | Eckige Klammer auf beta-Ala hoch 1- eckige Klammer zu -ACTH (1-18>NH tief 2, seine Salze mit Säuren und Komplexe mit Schwermetallen und Polyaminosäuren, sowie diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
JPS5824428B2 (ja) | ポリペプチドの製造法 | |
DK149755B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af lhrh-analoge nonapeptidamidderivater eller fysiologisk acceptable salte eller metalkomplekser deraf |