DK148304B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af et lh-rh-analogt nonapeptidamidderivat eller salte eller metalkomplekser deraf - Google Patents
Analogifremgangsmaade til fremstilling af et lh-rh-analogt nonapeptidamidderivat eller salte eller metalkomplekser deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK148304B DK148304B DK393674AA DK393674A DK148304B DK 148304 B DK148304 B DK 148304B DK 393674A A DK393674A A DK 393674AA DK 393674 A DK393674 A DK 393674A DK 148304 B DK148304 B DK 148304B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- ala
- trp
- pro
- arg
- solution
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 39
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical class C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 title 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 134
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 129
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 117
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 98
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 87
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 81
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 61
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 59
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 42
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 37
- 239000000047 product Substances 0.000 description 37
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 31
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 29
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 25
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 24
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 24
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 23
- -1 t-Butoxycarbonyl Chemical group 0.000 description 23
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 20
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 19
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 17
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 15
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 14
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 14
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 14
- ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide Chemical compound C1=CC2CC1C1C2C(=O)N(O)C1=O ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 13
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 12
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 11
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 10
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 10
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 10
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 10
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 10
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 9
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 9
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 9
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 7
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 6
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 6
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical group CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 4
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical group CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 3
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QLNKFGTZOBVMCS-JBACZVJFSA-N Glu-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O QLNKFGTZOBVMCS-JBACZVJFSA-N 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachlorophenol Chemical compound OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- NMYWMOZOCYAHNC-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound CCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 NMYWMOZOCYAHNC-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- MCRMUCXATQAAMN-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MCRMUCXATQAAMN-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-[1-(4-methylphenyl)sulfonylimidazol-4-yl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N1C=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)N=C1 DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N (2s,3s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KTVPQHFLYINKPT-LVHVEONVSA-N (4s)-4-amino-5-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[(2-amino-2-oxoethyl)carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-o Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KTVPQHFLYINKPT-LVHVEONVSA-N 0.000 description 1
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichlorophenol Chemical compound OC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N Alanine Chemical compound CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000186140 Asperula odorata Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 235000008526 Galium odoratum Nutrition 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YXXKBPJEIYFGOD-MGHWNKPDSA-N His-Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N YXXKBPJEIYFGOD-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N His-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- DAKSMIWQZPHRIB-BZSNNMDCSA-N His-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DAKSMIWQZPHRIB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003290 L-leucino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N benzyl chloroformate Chemical compound ClC(=O)OCC1=CC=CC=C1 HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- IMQROYWCRPSOCD-ROUUACIJSA-N methyl (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[[(2s)-3-hydroxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoate Chemical compound C([C@@H](C(=O)OC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 IMQROYWCRPSOCD-ROUUACIJSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 125000006503 p-nitrobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1[N+]([O-])=O)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003012 phosphoric acid amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- GHBRKMLMVFKZKW-UHFFFAOYSA-N tert-butyl (2,3,4,5,6-pentachlorophenyl) carbonate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl GHBRKMLMVFKZKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 1
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
148304
Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt LH-RH-analogt nonapeptidamidderivat med kraftig ovulationsfremkaldende virkning og med den almene formel
(Pyr)Glu-R1-Trp-Ser-R2-(D)-Ala-R3-Arg-Pro-NH-R4 I
1 2 hvor R er His, Tyr, Trp eller p-NH„-Phe; R er Tyr eller 3 4^
Phe; R er Leu, Ile eller Nle og R er alkyl med 1-3 kulstofatomer som kan være substitueret med en hydroxylgruppe eller et salt eller et metalkompleks deraf.
I nærværende beskrivelse og i kravene er aminosyrer og peptider betegnet ved hjælp af forkortelser som er almindeligt anvendte indenfor fagområdet eller som er vedtaget af Committee on Biochemical Nomenclature of IUPAC-IUB. Aminosyrer er i L-konfiguration med mindre andet er angivet.
Fx anvendes følgende forkortelser:
Ala: Alanin
Arg: Arginin BOC: t-Butoxykarbonyl
Bzl: Benzyl DCC: N,N *-dicyklohexylkarbodiimid
His: Histidin HONB: N-hydroxy-5-norbonen-2,3-dikarboximid HOSu: N-hydroxysuccinimid IBOC: Isobomyloxykarbonyl
Ile: Isoleucin
Leu: Leucin
Nle: Norleucin OMe: Metylester OBzl: Benzylester ONB: N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboxyimid- ester OSu: N-hydroxysuccinimidester
Phe: Fenylalanin p.NHg-Phe: p-Aminofenylalanin
Pro: Prolin 148304 2 (Pyr)Glu: Pyroglutaminsyre
Ser: Serin
Tos: To syl
Trp: Tryptofan
Tyr: Tyrosin Z: Benzyloxykarbonyl
Den ovennævnte substituent R^ kan være en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-3 kulstofatomer, og den kan eventuelt være substitueret med en hydroxylgruppe og kan fx være metyl, ætyl, n-propyl, isopropyl, hydroxymetyl, 1-hydroxy-ætyl, 2-hydroxyætyl, 2-hydroxy-n-propyl eller 3-hydroxy-n-propyl.
Det har været kendt i mange år at hypotalamus indeholder faktorer som på et højere niveau kontrollerer sekretionen af tropiske hormoner fra hypofysen. For nylig er der efter isoleringen af et tyrotropi-stimulerende hormon (TRH) ekstraheret · et hormon (LH-RH) som fremmer sekretionen af luteinise-rende hormon i ren form fra svin og får, og det har vist sig at være et dekapeptid med strukturen: (Pyr) Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NI^ (A.V. Schally et al, Biochem. Biophys. Res. Commun., 43, 1334, 1971; R. Guillemin et al, Proc. Nat. Acad. Sci., U.S.A., 69 278, 1972). Denne opdagelse er blevet fulgt af syntesen af et tilsvarende antal peptider og der har også været udført biologiske prøver på disse analoge peptider. Imidlertid formindsker selv en lille modifikation i den ovenfor viste aminosyre-sammensætning i alvorlig grad den fysiologiske virkning af peptidet og den ovenfor viste kemiske struktur har været anset som essentiel til frembringelse af maksimal fysiologisk virkning. (A.V. Schally et al, Biochem, Biophys. Res. Commun., 4, 366, 1972.)
Fra Biochem. Biophys. Res. Commun., bind 49, nr 3, side 863-869 (1972) kendes LH-RH-analoge nonapeptidammidderi-vater med en ovulationsfremkaldende virkning på op til 5 gan- t 148304 3 ge virkningen af LH-RH.
Det har på denne baggrund imidlertid vist sig at nonapeptidamidderivaterne med formel I har en overraskende kraftigere ovulationsfremkaldende virkning både i sammenligning med det naturligt forekommende dekapeptid LH-RH og i sammenligning med de ovennævnte kendte nonapeptidamidde-rivater. Det har også vist sig at disse forbindelser virker på hypofysen ved at fremme sekretionen af såvel luteinise-rende hormon og follikelstimulerende hormon. Det har desuden vist sig at disse forbindelser ikke blot er nyttige som lægemidler til mennesker, fx midler til behandling af amenoré, men også som veterinært lægemiddel. Den foreliggende opfindelse bygger på disse uventede opdagelser.
Det er formålet med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe en analogifremgangsmåde til fremstilling af et LH-RH-analogt nonapeptidamidderivat med den almene formel I eller salte eller metalkomplekser deraf.
Dette opnås med en fremgangsmåde, der ifølge opfindelsen er ejendommelig ved at man kondenserer et reagens A - L-pyroglutaminsyre eller et peptidfragment som indeholder fra 1 til 9 aminosyrer af den ovennævnte aminosyrese-kvens, regnet fra den N-terminale ende, og som har en L-pyroglutaminsyreenhed (dvs. (Pyr)Glu-) i sin N-terminale ende - med et reagens B - en aminoforbindelse som svarer til den resterende del af det ovennævnte nonapeptidamidderivat -, hvilke reagenser A og B eventuelt er beskyttede, hvorefter man fjerner eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper og om ønsket omdanner det dannede produkt til et salt eller et metalkompleks deraf.
Således er reagens A L-pyroglutaminsyre eller et peptidfragment som har en L-pyroglutaminsyreenhed i sin N-terminale ende og som indeholder fra 1 til 9 aminosyrer af aminosyresekvensen med formel I, regnet fra den N-terminale ende, og reagenset B som kondenseres med reagenset A er en aminoforbindelse som svarer til den resterende del af nona-peptidamidderivatet I, reagenserne A og B er eventuelt beskyttede.
4 14 S 3 O 4
De grundliggende kombinationer af reagens A og reagens B er eksemplificeret i følgende tabel I.
Tabel 1.
VXSSX\i Reagens (A) (B)
Kombination \.
1 (Pyr)Glu-OH H-R1-Trp-Ser-R2-(D)-Ala- R3_Arg-Pro-NH-R4 2 (Pyr)Glu-R1-OH H-Trp-Ser-R2-(L)-Ala-R3-
Arg-Pro-NH-R4 3 (Pyr)Glu-R1-Trp-OH H-Ser-R2-(D)-Ala-R3-Arg-
Pro-NH-R4 4 (Pyr)Glu-R1-Trp-Ser-OH H-R2-(D)-Ala-R3-Arg-Pro- NH-R4 5 (Pyr)Glu-R1-Trp-Ser- H-(D)-Ala-R3-Arg-Pro-NH-R4
R2-0H
6 (Pyr)Glu-R1-Trp-Ser- H-R3-Arg-Pro-NH-R4
R2-(D)-Ala-OH
Ί 4
7 (Pyr)Glu-R -Trp-Ser- H-Arg-Pro-NH-R
R2-(D)-Ala-R3-0H
8 (Pyr)Glu-R1-Trp-Ser- H-Pro-NH-R4
R2-(D)-Ala-R3-Arg-OH
9 (Pyr)Glu-R1-Trp-Ser- NH2-R4
R2—(D)-Ala-R^-Arg-Prc OH
148304 5
Kondensationsreaktionen ifølge den foreliggende opfindelse kan gennemføres ved kendte kondenseringsmetoder for dannelse af peptidbindinger. Blandt sådanne kondensationsmetoder er azidprocessen, kloridprocessen, syreanhydridpro-cessen, blandet syreanhydridprocessen, DCC-processen, aktiv ester processen, Woodward reagens K processen, karbodiimidazol-processen, oxydations-reduktions-processen, DCC/HONB-processen og andre metoder (The Peptides, Vol. 1, 1966, SchrSder og Lubke, Academic Press, New York, USA og belgisk patentskrift nr. 796.399).
Før kondensationsreaktionen kan man beskyttede kar-boxyl- og aminogrupper der ikke skal involveres i den påtænkte reaktion eller man kan aktivere dekarboxyl- og/eller aminogrupper der skal tage del i reaktionen på i og for sig kendt måde. Karboxylgruppeme i udgangsmaterialet kan beskyttes i form af metalsaltet (fx natrium- og kaliumsaltet) eller estere (fx metyl-, ætyl,- benzyl-, p-nitrobenzyl-, t-butyl- eller t-amylestere).
Beskyttelsesgrupper for aminogrupper i udgangsmaterialerne kan være en hvilken som helst konventionel beskyttelsesgruppe for aminogrupper ved peptidsyntese, fx benzyloxy-karbonyl, t-butyloxykarbonyl eller isobomyloxykarbonyl. Hy-droxylgruppen i serin kan beskyttes med en konventionel beskyttelsesgruppe såsom benzyl, t-butyl eller andre æterdannende grupper. Hydroxylgruppen i tyrosin kan beskyttes med benzyl, t-butyl eller andre æterdannende grupper. Guanidin-gruppen i arginin kan beskyttes med sådanne grupper som nitro, tosyl, karbobenzoxy, isobomyloxykarbonyl eller adamantyloxy-karbonyl. Som eksempler på aktiverede karboxylgrupper i udgangsmaterialerne kan nævnes det tilsvarende syreanhydrid, azid, aktive estere (estere med alkoholer, fx pentaklorfenol, 2,4,5-triklorfenol, 2,4-dinitrofenol, cyanometylalkohol, p-nitrofenol, N-hydroxy-5-norbonen-2,3-dikarboximid, N-hydroxysuccinimid, N-hydroxyftalimid eller N-hydroxybenztriazol). De aktiverede aminogrupper i udgangsmaterialerne kan fx være tilsvarende fosforsyreamider .
Følgende tabel viser nogle eksempler på kombinationer af sådanne former af karboxyl- og aminogrupper i materialerne A og B.
Tabel 2.
148304 6
Kombina- Reagenser tionsek- sempler (A) (B) COOH nh2 cooh nh2 lx fri beskyttet beskyttet fri 2 aktiveret beskyttet fri fri 3 fri beskyttet beskyttet aktiveret NB: I tilfældet betegnet med x, er der fortrinsvis et dehydreringsmiddel til stede i reaktionssystemet (fx et karbodiimidreagens såsom dicyklohexyl-karbodiimid). En praktisk udførelsesform for denne opfindelse kan skrives på følgende måde 14S304
7 <D
Id) wti H tQ H 0)
(D i—I O S
-P ø P
•P P § 0 fig £-3 s| as
° ® — -H *J
0 -Η H 0
ø ο M P
Μ N *H
-0- ft ft 0 '-'ft ft cCv-^ -h in i <r P 0 ft ώ ø ø ft -Ρ ΡτΡ g m ft I <Η Ν ft ί>>
ι η ft^ ft cd S pH
ο ø 0 ρ S ω Pø Ρ g Ppq ι 0£ ω-ρ ft S Mg o to >, ra « i ø ra P HX <f Øft CM b0 ·Π> ø ft ft 0)0 ft ω o P ft ra ø ι Ρ P i H ·> .
g — <! OJ bO 83 ft ft 0 ft ft 4, i OP > >, S -PSK ft ιό g — p ,0 i -pø i ft I 83 1 O !>> I> P ft I tOi ø H P ω s cd s, ft __ \ ft iohih i H “ I ·Η O I ω P H p
<J Cd O CM bø rO i>>0 P
I H ΧΩ O P W ft ^ < ft S — < fl,® · i p i ^ ρ ι ω P P bo
s—- ^-n 0 ΙΌ >> O P
I P ØH ft ft g-P <i
N ^ O H I Cd cd I
•HØ 0 ·Η0 ΙΌ- •P H 0 f>i ft cd m < ra cmh i rag I Η H 0 0 ø o ^ ω o -P h øft P Sfld <! τ) i ^ P co ft i 40 I 0, I -C-
O O CM Oft Tf P
WP ft ft Øft ^
I I
P CM
0 ft
— CO I
øft ι P
ft S i pi v 0
ft O 0 I !>> -> ft -—-^ KJ
0 ft ft -PH I Eh I
P ft >>Øft I ft
bO O 0 ft -P ft H. P
m o P ra ø ft Eh ω P bo 0 ^4 Tf I 1
ra ra ft 0 ø H
Η X 0 Μ S H ft ø ch ra ø ch O i •P—H Ø'-' 0 'Τ' 2
ft 0 O P H
i>> ø ft 'Η ©Ή r*> P
ft o ft ø ftft ft ft 7s
ra η >1 ftft o ^ P
ø -P ft ø ø ø -P ft ft ø ra m P tf ø ft 1 ra 0 h bo 0 ra w cm ø ft 0 m P !>>
ft 0 1 ø 0 H
1 Tf cm P ra ft ø cm p ø ft øh ra -P ft 0 o 1 -o 0 -H 0 1
C0 ft p CH ft ft ft P
- 0 . 0 + -co -> co —' & b b EH eh eh
1 I I
Η Η H
ftft ft
I I I
øø ø
O O P
"p 'u "p ft ft ft ftft ft U8304 δ
Denne reaktion kan gennemføres i nærværelse af et opløsningsmiddel. Opløsningsmidlet kan vælges blandt dem der er kendt som nyttige til peptidkondensationsreaktioner. Således kan der som eksempel nævnes vandfrit eller vandigt dimetyl-formamid, dimetylsulfoxyd, pyridin, kloroform, dioxan, diklor-metan, tetrahydrofuran og passende blandinger af sådanne opløsningsmidler .
Reaktionstemperaturen vælges inden for det område der er kendt som anvendeligt for reaktioner der fører til dannelse af peptidbindinger, dvs. normalt inden for området ca.
-20 og ca. 30°C. Desuden kan prekursormaterialeme (beskyttede peptider) for forbindelserne med formlen I let fremstilles ved fastfasesynteser.
Efter at den ønskede kondensationsreaktion er tilendebragt kan beskyttelsesgrupper, dersom produktet bærer sådanne, fjernes ved kendte metoder. Blandt sådanne kendte metoder er katalytisk reduktion i nærværelse af en katalysator såsom palladiumsort, palladium-på-kulstof, platin eller lignende, hydrolyse ved hjælp af hydrogenfluorid, trifluoreddike-syre eller lignende, og reduktion med metallisk natrium i flydende ammoniak.
Det således fremstillede peptid med formel I kan udvindes fra reaktionsproduktblandingen ved kendte metoder til udvinding af peptider, fx ved ekstraktion, fordelingskromatografi eller søjlekromatografi.
Peptidet med formel I kan også udvindes i form af et salt eller en metalkompleksforbindelse.
Som syre der er i stand til at danne salte med peptider med formel I kan nævnes uorganiske syrer såsom saltsyre, brombrintesyre, perklorsyre, salpetersyre, tiocyansyre, svovlsyre og fosforsyre, og organiske syrer såsom myresyre, eddikesyre, propionsyre, glykolsyre, mælkesyre, pyrodruesyre, oxalsyre, malonsyre, ravsyre, æblesyre, fumarsyre, antranylsyre, kanelsyre, naftalensulfonsyre eller sulfanylsyre.
De metaller der er i stand til at danne metalkompleksforbindelser med peptidet med formel I indbefatter bl.a. zink, nikkel, kobolt, kobber og jern. Sådanne metalkompleksforbindelser kan fremstilles ved konventionelle metoder, fx ved at omsætte peptidet med formel I med hydroxydet eller oxydet af et metal af den ovennævnte art ved en pH-værdi på ca. 6-8.
148304 9
De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser med formel I har en LH-RH-(luteiniserende hormon-stimulerende hormon) -virkning og de er således i stand til at fremme sekretionen af LH(luteiniserende hormon) og FSH(follikelstimulerende hormon). Polypeptider med formel I er således nyttige som lægemidler til fremkaldelse af ovulationer hos kvinder og hundyr (fx rotter, får, svin, køer, hopper, vagtler eller høns). Peptiderne kan også anvendes til andre farmaceutiske formål hvortil der har været anvendt konventionelle præparater af LH-RH, LH og FSH.
Eftersom LH-RH-virkningen af polypeptideme med formel I er ca. 20 gange så stor som for naturligt forekommende LH-RH kan den anvendte dosis ved hver indgift bestemmes på grundlag af det nævnte forhold mens man også tager andre faktorer i betragtning (fx det under behandling værende individ og arten af sygdommen). Fx kan en passende dosis vælges inden for området ca. 2 ng til 2 μg per dag per kg legemsvægt.
Polypeptideme med formel I indgives først og fremmest ad ikke-oral vej (fx ved injektion eller ad rektal eller vaginal vej) selv om de indgives oralt i visse tilfælde.
De anvendelige dosisformer indbefatter fx injektionsblandinger, suppositorier, pessarer og pulvere. Injektionsblandingerne kan fremstilles ved at man opløser ca. 10 mikrogram til 100 mikrogram af polypeptid I i 1 ml fysiologisk saltopløsning. Polypeptideme med formel I kan også tilberedes i form af frysetørrede ampulprodukter med mannitol tilsat som excipiens således at man kan indgive dem i form af på stedet fremstillede in-j ektionsblandinger.
De peptidudgangsmaterialer der kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan fremstilles enten på kendt måde for peptidsyntese eller ved at anvende sådanne metoder som måtte være nødvendige.
Relativ ovulationsinducerende virkning hos peptid I
Den evulationsfremkaldende virkning bestemmes hos hunrotter af Sprague-Dawley stammen (med en cyklus på 4 dage) ved anvendelse af den metode, der er beskrevet i J. Med. Chem. 16, 1144-1147, (1973).
148304 10
Forsøgsdyrene fik en subkutan indsprøjtning af den under afprøvning værende forbindelse kl. 14,30 på den diøstrøse dag (dvs. dagen mellem to brunstperioder), og de ovulerede æg i æggelederens ampulla undersøgtes den følgende morgen. Resultaterne for ovulationsfremkaldelse (ED,, g) sammenlignedes med EDj-q for selve LH-RH (kontrol = 100%) og for en nært beslægtet, kendt LH-RH-analog. Prøvens resultater for de omhandlede forbindelser er som følger.
Kontro1 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH^ (naturligt LH-RH) 100% R1 R2 R3 R4
Peptid His Tyr Leu ætyl 6100% (i) His Tyr Leu n-propyl 4800%
His Tyr Leu 2-hydroxy- 4300% ætyl
His Tyr Leu isopropyl 3600%
His Phe Leu ætyl 5810%
His Phe Leu n-propyl 2900%
His Tyr Nle ætyl 4800%
His Phe Ile ætyl 3200%
Tyr1 Tyr Leu ætyl 2010% p-NHg-Phe Tyr Leu ætyl 2150%
Pyr(Glu)-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH31 500%
Kendt fra Biochem.Biophys.Res.Commun, bind 49, nr 3, side 863-869 (1972).
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres nærmere i det følgende ved hjælp af nogle eksempler.
I disse eksempler betegner følgende forkortelser Rf-værdien ved tyndlagskromatografi på silikagel med følgende opløsningsmiddelsystem.
148304 11
Rf1: ætylacetat : pyridin : eddikesyre : vand = 60:20:6:10 2
Rf : n-butanol : ætylacetat : eddikesyre : vand = 1:1:1:1 3
Rf : n-butanol : eddikesyre : vand = 4:1:1 4
Rf : kloroform : metanol : eddikesyre = 9:1:0,5 I eksemplerne nævnes følgende varemærker hvoraf "Amberlite" og "Sephadex" er indregistreret i Danmark mens "Celite" og "Biogel" ikke er indregistreret i Danmark.
"Celite": filterhjælpemiddel fremstillet af Johns-Manville, USA.
"Biogel P-2": materialer til gelfiltrering fremstillet af BIO.RAD, USA.
"Sephadex" LH-20: forestret dextrangel fremstillet af Pharmacia Fine Chemicals, Sverige.
"Amberlite" XAD-2: polystyrenharpiks.
"Amberlite" IRA-410: stærkt basisk anionbytter. "Amberlite" CG-410: stærkt basisk anionbytter. "Amberlite" CG-45: svagt basisk anionbytter
Eksempel 1 12 148304 (Pyr) Glu-Hi s-Trp-Ser-Tyr- (D) -Ala-Leu-Arg-Pro-NH-C^-CH^
a) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH
I 100 ml metanol opløses 8,0 g Z-Ser-Tyr-OMe og ved tilsætning af 500 mg palladiumsort udføres katalytisk reduktion ved atmosfærisk temperatur og tryk ved indføring af hydrogengas i opløsningen i 4 timer. Katalysatoren fjernes ved filtrering. Metanolen afdestilleres under nedsat tryk og lav temperatur og remanensen opløses i 30 ml dimetylformamid. Til opløsningen sættes 6,78 g krystaller af (Pyr)Glu-His-Trp-OH efterfulgt af afkøling med is. Derefter tilsættes 5,4 g HONB og 5,0 g DCC og hele blandingen omrøres på et isbad i 8 timer og ved stuetemperatur i 10 timer.
Det resulterende biprodukt, dicyklohexylurinstof fra-filtreres og filtratet koncentreres under nedsat tryk. Efter tilsætning af 100 ml æter udvindes det dannede bundfald ved filtrering og det vaskes med æter og tørres. Udbytte 12,2 g.
Dette produkt opløses i en blanding af ætylacetat/pyridin/ed-dikesyre/vand (60:20:6:10).
Opløsningen overføres til en silikagelkolonne med en diameter på 6,5 cm og en længde på 19 cm præpareret med samme opløsningsmiddelblanding og kolonnen elueres med den samme opløsningsmiddelblanding hvorved den ønskede forbindelse (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OMe viser sig i fraktionerne fra 1480 ml til 1800 ml. Dette eluat koncentreres til tørhed under nedsat tryk og vaskes grundigt med vand. Udbytte 8,3 g.
Ved tyndlagskromatografi på silikagel giver dette produkt en enkel Pauly og Ehrlich-positiv plet med henholdsvis Rf1 = 0,29,
Rf2 = 0,68 og Rf3 = 0,43- I 50 ml metanol opløses 7,2 g af dette produkt og under afkøling med is tilsættes langsomt 30 ml IN natrium-hydroxyd til fremkaldelse af hydrolyse. Opløsningen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Derefter følger tilsætning af 30 ml IN saltsyre og opløsningen afkøles hvorved der dannes et bundfald. Dette fjernes ved filtrering, vaskes med koldt 148304 13 vand. og tørres. Produktet opløses i 5%s vandigt ætanol og opløsningen føres gennem en kolonne (3 cm i diameter x 25 cm) af "Amberlite" XAD-2. Eluering gennemføres ved gradientmeto-den ned 800 ml 5%s ætanol og 800 ml 90%s ætanol. Fraktioner med den ønskede forbindelse forenes, koncentreres under nedsat tryk til fjernelse af ætanol og frysetørres. Udbytte 5,9 g.
Rf1 = 0,01, Rf2 = 0,62, Rf3 = 0,34.
Beregnet for C^H-^gNgOg, E^O: C 56,65, H 5,59, N 15,55 Fundet: C 56,39, H 5,70, N 15,52%
Aminosyreanalyse (hydrolyse med 5,7N saltsyre i nærværelse af tioglykolsyre): Glu 1,05; His 0,98; Trp 0,95;
Ser 0,98; Tyr 1,03.
b) Z- (D) -Ala-Leu-Arg(N02) -Pro-NH-CHg-CHj I en blanding af 30 ml dioxan og 10 ml dimetylform-amid opløses 1,14 g H-Leu-ArgtM^-Pro-NH-C^-CH^ og 447 mg Z-(D)-Ala-0H. Til denne opløsning sættes 400 mg HONB og blandingen afkøles hurtigt. Efter tilsætning af 460 mg DCC omrøres blandingen i 20 timer. Det resulterende biprodukt, dicyklohexylurin-stof, filtreres fra og filtratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen opløses i ætylacetat under opvarmning og opløsningen vaskes med en 4%s vandig opløsning af natriumbikarbonat og derpå med\and hvorefter der tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under nedsat tryk.
Remanensen opløses atter i en lille mængde ætylacetat under opvarmning og opløsningen filtreres til fjernelse af små mængder uopløselige bestanddele. Filtratet henstår hvorved der udskiller sig nåle. Disse krystaller fjernes ved filtrering, vaskes med ætylacetat og tørres. Udbytte 1,30 g, smp. 183-184°C, a^6 = -49,2° (c = 0,5 i metanol).
Beregnet for ¢30^47¾1¾5 C 54,45, H 7,16, N 19,05 Fundet: C 54,42, H 7,28, N 18,86
Rf1 = 0,78, Rf2 = 0,90, Rf4 = 0,65 148304 14 c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH^-CH^ I 20 ml eddikesyre opløses 155 mg krystaller af Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2“CH^ og efter tilsætning af 100 mg palladiumsort gennemføres katalytisk reduktion ved atmosfærisk temperatur og tryk i 5 timer. Katalysatoren filtreres fra og efter tilsætning af 0,45 ml IN saltsyre koncentreres filtratet til tørhed under nedsat tryk. Remanensen opløses i 10 ml vand og frysetørres. Det tilbageværende hvide fnuggede produkt og 141 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH opløses i 10 ml dimetylformamid hvorefter der tilsættes 60 mg Η0ΝΒ. Under afkøling med is tilsættes i den nævnte rækkefølge 0,25 ml af en 10%s opløsning af N-ætylmorfolin i dimetylformamid og 50 mg DCC. Blandingen omrøres under afkøling med is i 5 timer og derefter ved stuetemperatur i 10 timer. Dimetylformamidet afdestilleres imder nedsat tryk og der tilsættes 20 ml vand. De uopløselige bestanddele filtreres fra og føres gennem en kolonne (1 cm i diameter x 5 cm) af "Amberlite" IRA-410 (acetatform) som derpå vaskes med 50 ml vand. Effluenten og vaskevæskeme forenes og føres gennem en kolonne (1,5 cm i diamter x 25 cm) af karboxy-metylcellulose. Der gennemføres eluering ved gradientmetoden under anvendelse af 300 ml 0,005M ammoniumacetat og 300 ml 0,175M ammoniumacetat. Fraktionerne fra 170 ml til 240 ml forenes og frysetørres hvorved der vindes 208 mg af et hvidt fnugget pulver. Tyndlagskromatografi af dette produkt viser tegn på en urenhed med en stor R^-værdi. Derfor renses det yderligere ved hjælp af en kolonne (2 cm i diameter x 20 cm) af "Amberlite" XAD-2. Således føres en vandig opløsning af det ovennævnte fnuggede produkt gennem en kolonne af "Amberlite" XAD-2 præpareret med vand og der udføres eluering ved gradientmetoden under anvendelse af 250 ml vand og 280 ml 75%s ætanol. Fraktionerne fra 170 ml til 250 ml forenes og frysetørres efter fjernelse af ætanol ved destillation under nedsat tryk. Udbytte 129 mg.
Rf1 = 0,062, Rf2 = 0,358. = -47,0° (c = 0,5, 5%s vandig eddikesyreopløsning),, aminosyreanalyse (hydrolyse med HC1 i tioglykolsyre): Glu = 0,98; His = 1,05; Trp = 1,04; Ser = 0,97;
Tyr = 0,97; Ala = 1,00; Leu = 1,04; Arg = 1,03; Pro = 1,00; ætylamin =1,02 (86%s genvinding).
På tilsvarende måde vindes et polypeptidamid med formlen (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NHCH^ ved 148304 15 som det ene udgangsmateriale at anvende Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH^ i stedet for Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH^ i eksempel 1-b. Dette produkt har følgende fysiske og kemiske egenskaber.
α^ = -48,1° (c = 0,6, 5%s eddikesyre), Rf^ = 0,055, Rf^ - 0,335 Aminosyreanalyse (hydrolyse med HC1 i nærværelse af tioglykol-syre); Glu = 1,00; His = 1,02; Trp = 0,89; Ser = 0,90; Tyr = 0,98; Ala = 1,00; Leu = 1,00; Arg = 1,04; Pro = 1,02; metylamin = 0,97 (84,9%s genvinding)
Eksempel 2 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr- (D)-Ala-Leu-Arg-Pro.NH-CH2-CH2-CH3 a) Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-BH-CHg-CHg-CH^ I 2 ml af en 25%s opløsning af hydrogenbromid i is-eddikesyre opløses 220 mg Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH2-CH^. Opløsningen rystes i 40 minutter hvorefter der tilsættes 20 ml tør æter. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering og vaskes med tør æter. Det således vundne pulver tørres under nedsat tryk over natriumhydroxyd i en desikkator. Det tørre pulver opløses i 5 ml dimetylformamid og efter tilsætning af 230 mg Z-(D)-Ala-0H og 200 mg HONB afkøles opløsningen med is og der tilsættes 1,5 ml 10%s opløsning af triætylamin i dimetylformamid. Til denne opløsning sættes 230 mg DCC og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 10 timer. Størstedelen af dimetylformamidet afdestilleres under nedsat tryk og remanensen opløses ved tilsætning af 50 ml ætylacetat. De uopløselige bestandele filtreres fra og filtratet vaskes tre gange med en 4%s vandig opløsning af natriumbikarbonat og derpå to gange med vand. Opløsningen tørres over vandfrit natriumsulfat og ætylacetatet afdestilleres. Remanensen sættes til æter og det resulterende pulver opsamles ved filtrering.
Produktet opløses i ætylacetat under opvarmning og renses ved genudfældning med æter.
Den beskrevne procedure giver 723 mg af et pulver.
148304 16 oc^ = -48,0° (c = 1,0 i metanol)
Beregnet for C^H^gOgNg: C 55,18, H 7,17, N 18,68 Fundet: C 54,89, H 7,32, N 18,44
Rf4 = 0,62 b ) (Pyr) Glu-His-Trp-Ser-Tyr- (D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-C^-C^-CH^ I en blanding af 10 ml eddikesyre og 10 ml metanol reduceres den ifølge 2-a vundne forbindelse Z-(D)-Ala-Leu-Arg ~ Pro-NH-C^-CH^-CHg katalytisk under anvendelse af palladium på kulstof som katalysator i 4 timer. Katalysatoren filtreres fra og opløsningsmidlet afdestilleres fra filtratet under nedsat tryk. Remanensen opløses i 0,4 ml af en blanding af IN saltsyre og 10 ml vand og opløsningen frysetørres. Proceduren giver et hvidt fnugget pulver.
Dette produkt og 141 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH opløses i 10 ml dimetylformamid hvorefter der tilsættes 60 mg Η0ΝΒ og 0,25 ml af en 10%s opløsning af N-ætylmorfolin i dimetylformamid. Blandingen afkøles til -2°C og der tilsættes 65 mg DCC. Blandingen omrøres under afkøling med is i 5 timer og derpå ved stuetemperatur i 12 timer.
Efter at reaktionen er tilendebragt afdestilleres dimetylformamidet under nedsat tryk og remanensen opløses i 20 ml vand. Den lille mængde af uopløselige bestanddele (dicyklo-hexylurinstof) frafiltreres og filtratet føres gennem en kolonne (1 cm i diameter x 4 cm) af "Amberlite" IRA-410 (acetatform) som derpå vaskes med vand. Effluenten og vaskevæskeme forenes og føres gennem en kolonne (1,5 cm i diameter x 25 cm) af karboxymetylcellulose.
Efter vask med 0,005M ammoniumacetatpuffer gennemføres kontinuerligt eluering under anvendelse af 300 ml 0,005M ammoniumacetatpuffer (pH 6,8) og 300 ml 0,2M ammoniumacetatpuffer (pH 6,9). Fraktionerne fra 160 ml til 230 ml forenes, frysetørres, genkromatograferes under samme betingelser som ovenfor og frysetørres for anden gang. Produktet føres på en kolonne (3 cm i diameter x 50 cm) af "Biogel" P-2 (5%s eddikesyre som elueringsmiddel) og eluatet der indeholder det ønskede 17 148304 produkt frysetørres. Den beskrevne metode giver 201 mg hvidt fnugagtigt pulver.
a§5 = _46,8° (c = 0,5, 5% eddikesyre), Rf2 = 0,37, Rf1 = 0,08. Aminosyreanalyse (hydrolyse med 5,7N saltsyre i nærværelse af tioglykolsyre); His = 0,97; Arg = 0,97; Trp = 0,91;
Ser = 0,91; Glu = 1,00; Pro = 1,00; Ala = 0,98; Leu = 0,97;
Tyr =0,94 (86,4%s genvinding).
Eksempel 3
(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2CH2-0H
a) Z-(D)-Ala-Leu-Arg-(N02)-Pro-NH-CH2-CH2-0H
I 3 ml af en 20%s opløsning af hydrogenbromid i dioxan opløses 722 mg Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH2-0H. Opløsningen rystes i 60 minutter hvorefter der tilsættes 30 ri tør æter. Bundfaldet opsamles ved dekantering, vaskes med tørt æter og tørres grundigt over natriumhydroxyd i en desikkator under nedsat tryk.
Produktet opløses i 5 ml dimetylformamid hvorefter der tilsættes 230 mg Z-(D)-Ala-0H og 210 mg Η0ΝΒ. Efter afkøling med is tilsættes i den nævnte rækkefølge 0,16 ml triætylamin og 230 mg DCC. Blandingen omrøres under afkøling med is i en time og derpå ved stuetemperatur i 4 timer. Reaktionsblandingen filtreres og filtratet sættes til 100 ml kloroform. Opløsningen vaskes med en 4%s vandig opløsning af natriumbikarbonat og derpå med vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen opløses i en opløsningsmiddelblanding af kloroform, metanol og eddikesyre (9:1:0,5) og opløsningen føres gennem en kolonne (3 cm i diameter x 40 cm) af silikagel præpareret med den ovennævnte opløsningsmiddelblanding efterfulgt af fremkaldelse med samme opløsningsmiddelblanding. De fraktioner der giver en Rf^-værdi på 0,47 forenes, koncentreres til tørhed under nedsat tryk og vaskes med æter. Den beskrevne procedure giver 640 mg af et pulver, aj^ = -47,2° (c = 0,5 i metanol) 148304 18
Beregnet for C 53,16, Η 6,99, Ν 18,60 Fundet: C 52,84, Η 7,26, Ν 18,21 %
Rf4 = 0,47
b) (Pyr) Glu-His-Trp-Ser-Tyr- (D) -Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CE^-CI^-OH
I 10 ml eddikesyre reduceres 154 mg Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02) -Pro-NH-CH2-CH2-0H katalytisk under anvendelse af palladiumsort som katalysator i 5 timer. Katalysatoren frafiltreres og filtratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Efter tilsætning af 10 ml vand og 0,45 ml IN saltsyre frysetørres koncentratet. Det pulveragtige frysetørrede produkt og 140 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH opløses i 10 ml dimetylformamid efterfulgt af tilsætning af 60 mg Η0ΝΒ og 0,25 ml 10%s vandigt N-ætylmorfolin i dimetylformamid. Blandingen afkøles til -2°C og der tilsættes 60 mg DCC. Blandingen omrøres under afkøling med is i 6 timer og derpå ved stuetemperatur i 12 timer. Efter at reaktionen er tilendebragt afdestilleres dimetylformamidet under nedsat tryk og remanensen opløses i 10 ml vand. De uopløselige bestanddele filtreres fra og filtratet føres gennem en kolonne (1 cm i diameter x 4 cm) af "Amberlite" IRA-410 (acetatform) hvorved produktet omdannes til acetatet. Derefter renses saltet ved hjælp af en kolonne af karboxymetylcellulose og en kolonne af "Amberlite" XAD-2 på samme måde som beskrevet i eksempel 1. Efter frysetørring vindes et hvidt, fnugagtigt pulver i et udbytte på 146 mg. a!^ - _48,i° (c =0,5, 5%s eddikesyre)
Rf2 = 0,31, Rf1 = 0,025
Aminosyreanalyse (hydrolyse med 5,7N saltsyre i nærværelse af tioglykolsyre); His = 1,00; Arg = 0,98; Trp = 0,98;
Ser = 0,92; Glu = 1,00; Pro = 1,00; Ala = 0,99; Leu = 1,00;
Tyr =0,98 (87%s genvinding)
Eksempel 4 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH(CH^)2 19 148304 a) Z-(D)-Ala-Leu-Arg-(NO£)-Pro-NH-CH(CH3)2 720 mg Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH(CH^)2 behandles på samme måde som i eksempel 2-a og kondenseres derpå med Z-(D)-Ala-OH i en blanding af 5 ml dimetylformamid og 10 ml diklor-metan ved hjælp af DCC og HONB. Produktet ekstraheres med ætylacetat hvorved der vindes 690 mg af et pulver, ccjp = -48,3° (c = 1,0 i metanol)
Beregnet for C^H-pOoN · 31 48 8 9C 55,18, H 7,17, H 18,68
Fundet: C 54,78, H 7,09, N 18,22%
Rf4 = 0,61 b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH(CH^)2 På nøjagtig samme måde som beskrevet i eksempel 2-b fremstilles den ovennævnte forbindelse ud fra Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH(CH^)2 og (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH.
Udbytte 128 mg.
αξ> = -47,5° (c = 0,5, 5%s eddikesyre)
Rf2 = 0,375, Rf1 = 0,08
Aminosyreanalyse (hydrolyse med 5,7N saltsyre i nærværelse af tioglykolsyre); His = 0,99; Arg = 0,98; Trp = 0,89;
Ser = 0,94; Glu = 1,00; Pro = 1,00; Ala = 1,00; Leu = 1,02;
Tyr = 0,98; (86,5%s genvinding).
Eksempel 5 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH^
a) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH
loo ml metanol opløses 4,0 g Z-Ser-Phe-OMe. Opløsningen underkastes katalytisk reduktion med 500 mg palladiumsort ved atmosfærisk tryk i 1 1/2 time. Katalysatoren fjernes ved filtrering og metanolen afdampes øjeblikkeligt fra fil- 20 148304 tratet ved destillation under nedsat tryk og remanensen opløses i 25 ml dimetylformamid. Til opløsningen sættes 4,1 g (Pyr)Glu-His-Trp-OH efterfulgt af tilsætning af 3,8 g HONB og 3 g DCC ved -5°C. Blandingen omrøres ved -5°C i 2 timer, ved 0°C i 2 timer og ved stuetemperatur i 8 timer.
Det resulterende dicyklohexylurinstof fjernes ved filtrering og filtratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen tritureres med ætylacetat og det resulterende pulver opsamles ved filtrering. Udbytte 6,7 g. Pulveret opløses i 30 ml af en blanding af metanol og kloroform (15:85) og opløsningen føres gennem en kolonne (6 cm i diameter x 12 cm) af silikagel præpareret med en blanding af metanol og kloroform (15:85). Kolonnen elueres med 600 ml af en blanding af metanol og kloroform (15:85), en 1 af en blanding af metanol og kloroform (25:75) og en 1 af en blanding af metanol og kloroform (30:70). Fraktionerne der er elueret med fra 400 ml af blanding af metanol og kloroform i forholdet 25:75 og til 700 ml af blanding af metanol og kloroform i forholdet 30:70 forenes og koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen tritureres med ætylacetat og det resulterende pulver opsamles ved filtrering hvorved der vindes (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OMe i et udbytte på 4,2 g; Rf1 = 0,29.
I 20 ml metanol suspenderes 3»5 g af den ovennævnte forbindelse og suspensionen afkøles til 0°C efterfulgt af tilsætning af 8 ml N natriumhydroxydopløsning. Blandingen omrøres i en time og neutraliseres med 8 ml N saltsyre. Metanolen af-destilleres under nedsat tryk og der sættes koldt vand til remanensen. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med koldt vand og tørres hvorved man vinder den pågældende forbindelse. Rf2 = 0,61; = -3,3° (c = 0,55, iseddikesyre).
b) (Pyr )Glu-His-Trp-Ser-Phe- (D) -Ala-Leu-Arg(N02) -Pro-NH-CE^CEj 15 ml 25%s opløsning af hydrogenbromid i iseddike 2 syre opløses 1,6 g Z-(D)-Ala-Leu-ArgiNO^)-Pro-NH-CH^CH^ og op-løsningen omrøres ved stuetemperatur i 50 minutter. Til opløsningen sættes 150 ml tørt æter og det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, tørres og opløses i 30 ml vand. Opløsningen føres gennem en kolonne (2,5 cm i diamter x 15 cm) af 21 148304 "Amberlite" CG-410 (fri base) og kolonnen vaskes grundigt med en blanding af metanol og vand (30:70). Effluenten og vaskevæsken forenes og koncentreres til afdampning af metanolen. Remanensen frysetørres hvorved man vinder H-(D)-Ala-Leu-Arg(NOg)-Pro-NHCI^CH^ i et udbytte på 1,2 g ; Rf^ = 0,21, Rf2 = 0,64.
I 5 ml dimetylformamid opløses 225 mg af den ovenfor fremstillede forbindelse og 280 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH efterfulgt af tilsætning af 150 mg HONB. Blandingen afkøles til -10°C og der tilsættes 90 mg DCC. Blandingen omrøres ved -10°C i 2 timer, ved 0°C i 4 timer og ved stuetemperatur i 12 timer. Den resulterende blanding filtreres til fjernelse af dicyklohexylurinstof og der sættes ætylacetat til filtratet. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, tørres og opløses i en blanding af ætanol og vand (20:80) under opvarmning. Opløsningen henstår hvorved der vindes fine krystaller og kry-stalleme opsamles ved filtrering. Udbytte 389 mg. ’ = 43,6° (c = 0,11 i metanol) Rf1 = 0,22, Rf2 =0,74 c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2CH^ I 10 ml S0%s vandig opløsning af myresyre opløses 150 mg af den i eksempel 5-b vundne forbindelse, H-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH^ hvorefter der tilsættes 300 mg δηΟ^,ί^Ο. Blandingen opvarmes til 80-85°C i 2 1/2 time og koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen ekstraheres med 30 ml varmt vand ved 80°C og filtreres. Filtratet føres gennem en kolonne (3 cm i diameter x 15 cm) af "Amberlite" XAD-2 (ca. 200 mesh).
Kolonnen vaskes med vand og underkastes gradientelue-ring med 300 ml vand og 300 ml 100%s ætanol. Den ønskede forbindelse viser sig ved fraktionerne fra 130 ml til 220 ml som forenes og koncentreres under nedsat tryk til afdampning af ætanolen. Remanensen føres gennem en kolonne (2 cm i diameter x 30 cm) af karboxymetylcellulose). Kolonnen underkastes gradient-eluering med ammoniumacetat fra 0,05 til 0,2M (pH 6,8). Den omhandlede forbindelse viser sig i fraktionerne fra 350 til 500 ml, hvilke fraktioner forenes og frysetørres til et fnugget pulver i et udbytte på 112 mg = -44,3° (c = 0,53 i 5%s eddikesyre), Rf1 = 0,088, Rf2 = 0,73 148304 22
Aminosyreanalyse; His = 0,96; Arg = 1,04; Trp = 0,92;
Ser = 0,96; Glu = 0,99; Pro = 1,08; Ala = 1,00; Leu = 1,00;
Phe = 1,00; ætylamin 1,04 (85%s genvinding).
II) I en blanding af 1 ml iseddikesyre og 20 ml metanol opløses 100 g af den i eksempel 5-b vundne forbindelse hvorefter der tilsættes 100 mg palladiumsort. Blandingen underkastes katalytisk reduktion under atmosfærisk tryk i 2 dage hvorefter den filtreres til fjernelse af katalysatoren. Filtratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen opløses i 3 ml 0,005M vandig ammoniumacetatopløsning. Opløsningen føres gennem en kolonne (2 cm i diameter x 30 cm) af karboxymetylcellulose og kolonnen underkastes gradienteluering under samme betingelser som under procedure I. Fraktionerne fra 350 til 450 ml forenes og frysetørres hvorved man vinder den ønskede forbindelse hvis Rf-værdi og specifikke rotation er identisk med de tilsvarende værdier for den under procedure I vundne forbindelse.
III) I 5 ml vandfrit hydrogenfluorid indeholdende 0,2 ml anisol og 0,1 ml merkaptoætanol opløses dsii eksempel 5-b vundne forbindelse og blandingen omrøres ved 0°C i 40 minutter. Blandingen koncentreres til tørhed under nedsat tryk til afdampning af hydrogenfluorid. Remanensen opløses i 10 ml vand og de uopløselige bestanddele fjernes ved filtrering med "Celite". Filtratet føres gennem en kolonne (1 cm i diameter x 10 cm) af "Amberliten CG-410 (acetatform) og kolonnen vaskes med vand. Effluenten og vaskevæskeme forenes og føres gennem en kolonne (2 cm i diamter x 30 cm). Kolonnen underkastes gradienteluering under samme betingelser som under I. Fraktionerne fra 340 til 460 ml forenes og frysetørres hvorved man vinder den ønskede forbindelse i et udbytte på 42 mg.
Den vundne forbindelse er identisk med den under procedure I vundne forbindelse med hensyn til Rf-værdi, specifik rotation og ED^Q-værdi for ovulationsfremkaldende virkning.
148304 23
Eksempel 6 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Nle“Arg-Pro-NHCH2CH2 a) Z-Nle-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH3 I 4 ml af en 25#s opløsning af hydrogeribromid i iseddikesyre opløses 477,5 mg Z-Arg(N02)-Pro-NH-CHgCH^ og opløsningen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter efterfulgt af tilsætning af tør æter. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med æter og tørres over natriumhydroxyd under nedsat tryk.
Uafhængigt heraf opløses 265,3 mg Z-Nle-OH i en blanding af 2 ml ætylacetat og 2 ml dioxan. Mens opløsningen afkøles til 0°C tilsættes 187 mg HONB og 226 mg DCC og blandingen omrøres i 3 timer.
Den udskilte urinstofforbindelse fjernes ved filtrering. Filtratet sættes til en opløsning af det ovenfor fremstillede bundfald i 1 ml dimetylformamid hvorefter der dråbevis tilsættes 0,28 ml triætylamin. Blandingen omrøres i 12 timer og underkastes destillation til afdampning af opløsningsmidlet. Remanensen ekstraheres med 100 ml kloroform. Ekstrakten vaskes med 5%s vandig natriumbikarbonatopløsning, vand, 0,5N saltsyre og vand i den nævnte rækkefølge og tørres over vandfrit natriumsulfat. Kloroformen afdampes ved destillation. Remanensen tritureres med æter og genudfældes fra ætanol med æter hvorved den ønskede forbindelse vindes i et udbytte på 410 mg, smp. 109-111°C (sønderdeling), a^2 = -50,4° (c = o,5 i ætanol).
Beregnet for 02^Η^20γΝ8,1/2Η20: C 54,07, H 7,22, N 18,68 Fundet: C 53,79, H 7,09, N 18,24# b) Z-(D)-Ala-Nle-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH3 1 5 ml 25#s hydrogenbromidopløsning i iseddikesyre opløses 200 mg Z-Nle-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH3 og opløsningen om- 24 148304 røres ved stuetemperatur i 40 minutter hvorefter der tilsættes 50 ml tør æter. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med æter og tørres. Bundfaldet føres gennem en kolonne (1 cm i diameter x 5 cm) af "Amberlite" IRA-410 (fri form) med 40%s vandigt metanol som fremkalder til fjernelse af hydrogenbromid. Metanolen afdampes fra effluenten ved destillation og remanensen frysetørres hvorved der vindes 120 g pulver. I en blanding af 20 ml diklormetan og 5 ml dimetyl-formamid opløses det netop fremstillede pulver og 44,7 mg Z-(D)-Ala-0H. Mens opløsningen afkøles til 0°C tilsættes 40 mg Η0ΝΒ og 46 mg DCC. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 12 timer. Det udskilte dicyklohexylurinstof fjernes ved filtrering og filtratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen opløses i 120 ml ætylacetat. Opløsningen vaskes med 4%s vandig natriumbikarbonatopløsning og vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen opløses i en lille mængde ætanol og bundfældes med æter og således gentages bundfældning til opnåelse af den ønskede forbindelse i form af et pulver. Udbytte
nC
132 mg. = -48,° (c = 0,5 i metanol)
Beregnet for C30H47°8N9: C 54,45, H 7,16, N 19,05 Fundet: C 54,48, H 7,23, N 18,72%
Rf1 = 0,79, Rf2 3 4 = 0,92, Rf5 = 0,66 c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Nle-Arg-Pro-NHCE^CH-^ 2 5 ml 25%s hydrogenbromidopløsning i iseddikesyre 3 opløses 100 mg af Z- (D) -Ala-Nle-Arg(NO2) -Pro-NH-CH^CH-^ og op 4 løsningen omrøres ved stuetemperatur i 50 minutter hvorefter 5 der tilsættes 40 ml tør æter. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med æter og tørres over natrium-hydroxyd under nedsat tryk. Produktet føres gennem en kolonne af "Amberlite" CG-45 (fri form) med 40%s vandigt metanol til fjernelse af hydrogenbromidet. Metanolen fjernes fra effluenten ved destillation under nedsat tryk og remanensen frysetørres. Det frysetørrede produkt og 100 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-0H opløses i 4 ml dimetylformamid. Efter tilsætning af 45 mg HONB afkøles blandingen til -5 - -7°C hvorefter der 148304 25 tilsættes 40 mg DCC. Blandingen omrøres under afkøling med is i 5 timer og ved stuetemperatur i 10 timer. Dimetylformamidet fjernes ved afdampning og der sættes 30 ml ætylacetat til remanensen. Blandingen filtreres og filterkagen tørres. Produktet opløses i 2 ml vandfrit hydrogenfluorid indeholdende 0,05 ml anisol og 0,05 ml merkaptoætanol og opløsningen omrøres ved 0°C i 40 minutter. Hydrogenfluoridet fjernes ved destillation under nedsat tryk og remanensen opløses i 10 ml vand. De uopløselige bestanddele fjernes ved filtrering og filtratet føres gennem en kolonne (l cm i diameter x 5 cm) af "Amberlite" IRA-410 (acetatform) hvorved produktet omdannes til acetatet.
Effluenten føres gennem en kolonne (1,5 cm i diameter x 30 cm) af karboxymetylcellulose og kolonnen underkastes gradientelue-ring med 400 ml 0,005M ammoniumacetat og 400 ml 0,2M ammoniumacetat. Fraktionerne fra 290 ml til 320 ml som viser maksimal absorption i det ultraviolette absorptionspektrum forenes og frysetørres hvorved der vindes et fnugget pulver. Udbytte 105 mg, Rf1 = 0,063, Rf2 = 0,360, (¾1 2 3 4 = -46,0° (c = 0,5 i 5%s vandigt eddikesyre).
Aminosyreanalyse (hydrolyse med 5,7N saltsyre i nærvæ relse af tioglykolsyre);
Glu = 1,10; His = 1,02; Trp = 0,91; Ser = 0,98; Tyr - 1,00;
Ala = 1,00; Nle = 1,02; Arg = 0,98; Pro = 0,97; ætylamin 1,04 (84%s genvinding)
Eksempel 7 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Ile-Arg-Pro-NHCH^CH^ g BOC-Pro-harpiks (prolinindhold 0,314 mmol/g) sættes til en reaktor til et automatisk peptidsyntetiseringsapparat (" APS-8 0 0 "®f rems tillet af Shimidzu Seisakusho, Ltd.,
Japan) og kvældes med diklormetan i 12 timer og der indføres aminosyre i følgende cyklus.
2
Diklormetan (3 minutter x 3 gange)->50% trifluor- 3 eddikesyre/diklormetan (10 minutter og 30 minutter, 2 gange) — diklormetan (30 minutter x 3 gange)—=► ætanol (3 minutter x 4 3 gange)-> diklormetan (3 minutter x 3 gange)—=» 10% triætyl- amin/kloroform (10 minutter)—> kloroform (3 minutter x 3 gange) 148304 26 —5* diklormetan (3 minutter x 2 gange)—> BOC-aminosyre anhydrid (fremstillet på konventionel måde ud fra BOC-aminosyre og DCC) (30 minutter og 60 minutter, 2 gange)—> acety-lering (diklormetan, triætylamin og eddikesyreanhydrid) (en time) diklormetan ( 3 minutter x 3 gange) (der anvendes kun (Pyr)-Glu-OH da den. er uden BOC-gruppe og kondensations-reaktionen gennemføres i dimetylformamid med DCC).
Til sidst vaskes harpiksen i den nævnte rækkefølge med ætanol, kloroform, dimetylformamid og æter hvorpå den tørres. Udbytte 4,12 g. Der anvendes følgende BOC-aminosyrer.
BOC-Arg(Tos), BOC-Ile, B0C-(D)-Ala, BOC-Phe, BOC-Ser (Bzl), BOC-Trp, BOC-His(Tos).
3 g af den ovenfor fremstillede harpiks suspenderes 1 20 ml dimetylformamid og Opløsningen mættes med ætylamin ved 20°C. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 40 timer. Harpiksen fjernes ved filtrering og koncentratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen tritureres med æter hvorved der vindes et pulver af råt (Pyr)Glu-His(Tos)-Trp-Ser(Bzl)-Phe-(d)-Ala-Ile-Arg(Tos)-Pro-NH-CH2-CH3. Udbytte 720 mg. Pulveret opløses i en blanding af ætylacetat, pyridin, eddikesyre og vand (60:20:6:10) og opløsningen føres gennem en kolonne (3 cm i diameter x 20 cm) af silikagel som præpareres med den samme slags opløsningsmiddelblanding. Kolonnen elueres med den samme slags opløsningsmiddelblanding. De fraktioner der viser en Rf-værdi på 0,4 ved tyndlagskromatografi på silikagel med metanol/kloroform (15:85) forenes og koncentreres til tørhed under nedsat tryk. Remanensen tritureres med ætylacetat og det resulterende pulver opsamles ved filtrering. Udbytte 240 mg. Pulveret opløses i 5 ml hydrogenfluorid indeholdende 0,05 ml tioglykolsyre og 0,2 ml anisol og opløsningen omrøres ved 0°C i en time. Hydrogenfluoridet fjernes ved inddampning og remanensen opløses i 10 ml vand. Opløsningen føres gennem en kolonne (l cm i diameter x 10 cm) af "Amberlite" IRA-410 (acetatform). Effluenten renses ved at den føres gennem en kolonne (2 cm i diamter x 10 cm) af "Amberlite" XAD-2 2 gange, 2 gange gennem en kolonne (1,9 cm i diameter x 25 cm) af karboxymetylcellulose og en gang gennem en kolonne (1 cm i diameter x 60 cm) af "Sephadex" LH-20 og til sidst fryse-tørres det hvorved der vindes et fnugagtigt pulver.
Udbytte 42 mg, Rf1 = 0,071, Rf2 = 0,37.
148304 27
Aminosyreanalyse (hydrolyse med saltsyre i nærvæ-værelse af tioglykolsyre)
Glu = 1,01; His = 0,93; Trp = 0,92; Ser = 0,99; Phe =1,00;
Ala = 1,05; Ile = 0,98; Arg = 1,00; Pro = 1,08; ætylamin 1,04 (88%s genvinding).
Eksempel 8 (Pyr)Glu-Tyr-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NHCHgCH^ a) BOC-Tyr-(OBzl) - (D)-Ala-OBzl I loo ml acetonitril opløses 11,1 g BOC-Tyr-(OBzl)-OH og 10,9 g (D)-Ala-OBzl-p-toluensulfonat. Opløsningen afkøles til 0°C og der tilsættes 6,8 g DCC, 4,5 g HONB og 4,34 ml tri-ætylamin. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 10 timer hvorefter den udskilte urinstofforbindelse filtreres fra. Filtratet destilleres og remanensen ekstraheres med 200 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes i den nævnte rækkefølge med 5%s vandig natrium-hydro genkarbona topløsning, 0,1N saltsyre og vand og tørres over Na2S0^. Ætylacetatet afdestilleres og remanensen krystalliseres fra petroleumsæter og derefter omkrystalliseres det fra ætyl-acetat/petroleumsæter. Udbytte 13,5 g, smp. 113-114°C, cc^1 = +18,4° (c = 1 i metanol), Rf^ = 0,76
Beregnet for C^EjgOg^: C 69,90, H 6,81, N 5,26 Fundet: C 69,72, H 6,75, N 5,42% b) BOC-Ser-Tyr-(OBzl)-(D)-Ala-OBzl 100 ml trifluoreddikesyre opløses 11 g BOC-Tyr(OBzl)-(D)-Ala-OBzl. Opløsningen henstår ved stuetemperatur i 30 minutter hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk.
Remanensen tørres under natriumhydroxyd under nedsat tryk i en desikkator.
Uafhængigt heraf opløses 4,1 g BOC-Ser og 4,0 g 2,4-dinitrofenol i 50 ml tetrahydrofuran. Opløsningen afkøles til 148304 28 0°C og efter tilsætning af 4,5 g DCC omrøres ved 0°C i 2 timer.
Det udfældede dicyklohexylurinstof filtreres fra og den tidligere fremstillede aminf o rb inde1se, H-Tyr(OBzl)-(D)-Ala-OBzl, opløses i filtratet. Opløsningen afkøles til 0°C og der tilsættes dråbevis 4,2 ml triætylamin.. Opløsningen om-røres ved stuetemperatur i 5 timer hvorefter tetrahydrofuranen afdestilleres under nedsat tryk.
Remanensen opløses i 200 ml ætylacetat og opløsningen vaskes i den nævnte rækkefølge med en 5%s vandig natriumhydro-genkarbonatopløsning, 0,1N saltsyre og vand hvorefter der tørres over Na2S0^. Ætylacetatét afdestilleres og remanensen krystalliseres fra petroleumsæter hvorefter den omkrystalliseres fra ætylacetat/petroleumsæter. Udbytte 9,7 g.
Rf^ = 0,57; oj^· = -4,1° (c = 1 i metanol); smp. 124-125°C.
Beregnet for C34H41°8N3: C 65,89, H 6,67, N 6,78 Fundet: ... C 65,82, H 6,59, N 6,50% c) BOC-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCHgCH^ 1 loo ml metanol opløses 2,16 g BOC-Ser-Tyr(OBzl)-(D)-Ala-OBzl og i nærværelse af palladiumsort udføres katalytisk reduktion i 4 timer hvorefter katalysatoren filtreres fra. Metanolen afdestilleres og remanensen opløses i 10 ml dimetyl-formamid. I denne opløsning opløses 1,6 g H-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCH2CH^ og 690 mg Η0ΝΒ. Efter at opløsningen er afkølet til 0°C tilsættes 795 mg DCC under omrøring. Blandingen omrøres ved 0°C i 2 timer og derpå ved stuetemperatur i 5 timer. Den udskilte urinstofforbindelse filtreres fra og dimetylformamidet fjernes ved destillation under nedsat tryk. Remanensen ekstra-heres med 50 ml n-butanol og vaskes i den nævnte rækkefølge med en 5%s vandig natriumhydrogenkarbonatopløsning, 0,1N saltsyre og vand. n-Butanolen afdestilleres og remanensen gøres fast med æter og udfældes med ætanol/æter. Udbytte 2,25 g, Rf^ = 0,30, p»7 smp. 149-151°C (sønderdeling), a^' = -26,6° (c = 1 i metanol).
148304 29
Beregnet for C^Hg^O-^N-j^,3/21^0: C 51,75, H 7,35, N 17,02 Fundet: C 51,89, H 7,30, N 16,72% d) Z-Tyr(Z)-Trp-OBzl I en opløsningsmiddelblanding af 50 ml dioxan og 10 ml ætylacetat opløses 9,0 g Z-Tyr-(Z)-OH og 10,2 g Trp-OBzl-p-toluensulfonat. Opløsningen afkøles til 0°C og der tilsættes 3,93 g HONB, 4,53 g DCC og 3,0 ml triætylamin. Blandingen omrøres i 5 timer hvorefter den udskilte urinstofforbindelse filtreres fra. Opløsningsmidlet fjernes ved destillation under nedsat tryk og remanensen ekstraheres med 200 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes i den nævnte rækkefølge med 5%s vandig natriumhydrogenkarbonatopløsning, IN saltsyre og vand hvorefter den tørres over Na£S0^. Ætylacetatet destilleres af og remanensen krystalliseres fra petroleumsæter og omkrystalliseres fra ætylacetat/petroleumsæter. Udbytte 13 g, Rf^ = 0,88, smp. 103-104°C, ojp = -4,7° (c = 1 i metanol).
Beregnet for C^H^OgN^: C 71,16, H 5,42, N 5,79 Fundet: C 71,11, H 5,29, N 5,76% e) Z-(Pyr)Glu-Tyr-Trp 30 148304 i metanol).
Beregnet for C33H32°8N4’H21 C 62,85, H 5,43, N 8,89 Fundet: C 62,96, H 5,35, N 8,76% f) (Pyr)Glu-Tyr-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Årg-Pro-NHCH2CH^ I 20 ml metanol opløses 184 mg Z-(Pyr) Glu-Tyr-Trp og i nærværelse af palladiumsort gennemføres hydrogenering i 3 timer. Efter at katalysatoren er frafiltreret afdestilleres metanolen under nedsat tryk og remanensen opløses i 2 ml dime-tylformamid. Uafhængigt heraf behandles 316 mg BOC-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCH2CH^ med 10 ml trifluoreddikesyre i nærværelse af 0,36 ml IN saltsyre i 40 minutter. Trifluor-eddikesyren afdestilleres og remanensen tritureres med æter og tørres fuldstændigt over natriumhydroxyd i en desikkator.
Dette pulver og 81 mg Η0ΝΒ opløses i den tidligere fremstillede dimetylformamidopløsning hvorefter der afkøles til -2°C. Derefter tilsættes 93 mg DCC og 0,05 ml N-ætylmorfolin og den resulterende blanding omrøres ved 0°C i 2 timer og derpå ved stuetemperatur natten over. Den udfældede urinstofforbindelse filtreres fra og der sættes 50 ml æter til filtratet. Bundfaldet fjernes ved filtrering. Udbytte 350 mg. Dette produkt føres gennem 7 g silikagel under anvendelse af fremkalderopløsningsblandingen for Rf"K De fraktioner der er rige på den ønskede forbindelse forenes og opløsningsmidlet afdestilleres. Remanensen tritureres med ætylacetat. Udbytte 270 mg. En portion på 150 mg af dette produkt behandles med 4 ml vandfrit hydrogenfluorid i nærværelse af 0,1 ml anisol og 0,1 ml 2-merkaptoætanol ved 0°C i en time hvorefter hydrogenfluoridet afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen tørres over natriumhydroxyd i en desikkator. Remanensen ekstraheres med 50 ml vand og ekstrakten føres gennem en kolonne (1 cm i diameter x 5 cm) af "Amberlite” IRA-410 (acetatform). Effluenten og vandige vaskevæsker forenes og føres gennem en kolonne (1,5 cm i diameter x 19 cm) af karboxymetylcellulose. Eluering gennemføres ved gradientmetoden under anvendelse af 280 ml 5N ammoniumacetat til 280 ml 0,15 N ammoniumacetat. Fraktio nerne fra 110 ml til 210 ml forenes og frysetørres hvorved 31 148304 der vindes 95 mg af det ønskede produkt. Rf^ = 0,35, = -39,0° (c = 0,5, 5% eddikesyre); aminosyreanalyse (hydrolyse med 5,7N HC1 i nærværelse af 4% glykolsyre ved 110°C); Arg = 1,07; Trp = 1,03; Ser = 0,89; Glu = 1,00;
Pro = 1,00; Ala = 1,00; Leu = 1,00; Tyr = 2,00; ætylamin 1,05 (81%s genvinding).
Eksempel 9 (Pyr)Glu-p-NH2-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3
a) B0C-p-N02-Phe-0H
I en blanding af 40 ml IN vandig natriumhydroxydop-løsning og 150 ml dimetylformamid opløses 6,3 g p-N02-Phe-0H og 13,3 g t-butylpentaklorfenylkarbonat. Efter tilsætning af 5 ml triætylamin omsættes opløsningen ved stuetemperatur i 48 timer. Opløsningen afdestilleres og remanensen opløses i vand hvorefter der ekstraheres med æter. Det vandige lag indstilles til en pH-værdi på 3 med citronsyre og ekstraheres med ætylacetat. Det organiske lag tørres over vandfrit magniumsulfat og opløsningsmidlet afdestilleres. Remanensen triture-res med petroleumsæter og udvindes ved filtrering. Produktet renses ved søjlekromatografi på silikagel og de fraktioner der indeholder det ønskede produkt forenes og destilleres til fjernelse af opløsningsmidlet. Remanensen krystalliseres fra æter/petroleumsæter. Udbytte 3,8 g, smp. 103-104°C; = -32,0° (c = 0,75 i dimetylformamid), Rf^ = 0,61
Beregnet for C14H18°6N2: C 54,19, H 5,85, N 9,03 Fundet: C 54,21, H 5,86, N 9,21% b) B0C-p-NH£-Phe-OH 1 80 ml metanol opløses 2,0 g BOC-p-NO^-Phe-OH og under anvendelse af palladiumsort som katalysator gennemføres 32 148304 katalysereduktion ved stuetemperatur i 8 timer. Katalysatoren fjernes ved filtrering og opløsningsmidlet afdestilleres. Remanensen tritureres med petroleumsæter og udvindes ved filtrering. Produktet omkrystalliseres yderligere fra ætylacetat/pe-troleumsæter. Udbytte 1,5.g* smp. 12^.°C, = -2,2° (c = 1,0 i dimetylformamid), Rf^ = 0,40.
Beregnet for C14H20°4N2: C 59,98, H 7,19, N 9,99 Fundet: C 59,47, H 7,20, N 9,71% c) B0C-p-NH-Z-Phe I 20 ml IN vandig natriumhydrogenkarbonatopløsning opløses 1,5 g BOC-p-NH^-Phe-OH. Under kraftig omrøring og afkøling med is tilsættes 1,1 g benzyloxykarbonylklorid. I løbet af reaktionen tilsættes yderligere 50 ml vand og reaktionen gennemføres i 5 timer. Derefter sættes IN saltsyre til reaktionsblandingen til at indstille pH-værdien på 2 og det resulterende olieagtige bundfald ekstraheres med ætylacetat. Ætyl-acetatlaget opsamles, vaskes med vand og tørres over vandfrit magniumsulfat. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen tritureres med petroleumsæter hvorved man vinder et råprodukt. Produktet omkrystalliseres fra æter/petroleumsæter. Udbytte 1,84 g, smp. 156-157°C, = -3,34° (c = 0,7 i dimetylform- amid), Rf4 = 0,67
Beregnet for C22H26°6N2: C 63,75, H 6,32, N 6,76 Fundet: G 63,76, H 6,25, N 6,86% d) B0C-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH^ I 5 ml dimetylformamid opløses 466 mg H-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH^-CH^. Efter tilsætning af 370 mg B0C-Trp-0NB omsættes opløsningen ved stuetemperatur i 3 timer. Opløsningsmidlet afdestilleres og der sættes ætylacetat til remanensen. Det resulterende pulver opsamles ved filtrering og koges i ætylacetat hvorefter der afkøles og blandingen henstår. Bundfaldet opsamles ved filtrering. Udbytte 590 mg.
33 148304
Smp. 189-190°C (sønderdeling), cc^2 = -43»8° (c = 0,6 i dimetylformamid) , Rf^ = 0,32.
Beregnet for C3qH730^3N^3,2H20: C 54,58, H 7,06, N 16,55 Fundet: C 54,84, H 6,90, N 16,54% e) BOC-p-NH-Z-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-(N02)-Pro- nh-ch2-ch3 I nærværelse af merkaptoætanol behandles 560 mg BOC- Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3 med 5 ml trifluoreddikesyre ved stuetemperatur i 30 minutter hvorefter der tilsættes æter. Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering og tørres over natriumhydroxyd i en desikkator.
Produktet opløses i 5 ml dimetylformamid og opløsningen neutraliseres med 0,1 ml N-ætylmorfolin.
Til denne opløsning sættes en dimetylformamid-opløsning af BOC-p-NH-Z-Phe-ONB fremstillet ud fra 217 mg BOC-p-NH-Z-Phe og 145 mg HONB ved DCC-processen. Blandingen omsættes ved stuetemperatur i 12 timer hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres. Til remanensen sættes ætylacetat og det resulterende faste stof opsamles ved filtrering. Udbytte 518 mg, smp. 119-120°C (sønderdeling), ajp = -29,7° (c = 0,6 i dimetylformamid), Rf^ = 0,37·
Beregnet for CgyHggO^N^jZILjO: C 58,29, H 6,65, N 15,22 Fundet: C 58,18, H 6,69, N 14,81%.
f) (Pyr) Glu-p-NH2-Phe-Trp-Ser-Tyr- (D) -Ala-Leu-Arg (N02) Pro-NH-CH2-CH3 1 nærværelse af merkaptoætanol behandles 470 mg BOC-p-NH2-Z-Phe-Trp-Ser-Tyr(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3 ved stuetemperatur i 30 minutter hvorefter der tilsættes æter.
Det resulterende bundfald opsamles ved filtrering og tørres over natriumhydroxyd i en desikkator. Produktet opløses i 6 ml 34 148304
dime tylf ormamid og opløsningen neutraliseres med 0,045 ml N-ætylmorforlin* Efter tilsætning af 185 mg IBOC-(Pyr)-Glu-OSu omsættes opløsningen ved stuetemperatur i 48 timer. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen tritureres med ætylacetat. Det resulterende pulver udvindes ved filtrering. Den beskrevne procedure giver 425 mg af Z
IB0C-(Pyr)Glu-p-NH-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-Ci^-CH^, Rf^ = 0,28. En portion på 375 mg af dette produkt behandles med 5 ml vandfrit hydrogenfluorid i nærværelse af merkaptoætanol og anisol ved 0°C i en time. Efter fjernelse af hydrogenfluoridet ved destillation opløses remanensen i vand og ekstraheres med æter. Vandopløsningen føres gennem en kolonne (0,9 cm i diameter x 15 cm) af "Amberlite" IR-410 og effluenten og de vandige vaskevæsker forenes og frysetørres. Produktet opløses i 0,05M ammoniumacetatpuffer og føres gennem en kolonne (0,8 cm i diameter x 19 cm) af karboxymetylcellulose. Der gennemføres eluering ved den lineære gradientmetode under anvendelse af 300 ml 0,005M til 300 ml 0,2M ammoniumacetat-puffer og fraktionerne fra 90 ml til 140 ml forenes og fryse-tørres. Udbytte 170 mg, = -41,8° (c = 0,56, 5% eddikesyre),
Rf1 = 0,16
Beregnet for C5gH7g0i2Ni5»3CH^C00H,4H20: C 53,77, H 6,91, N 14,70 Fundet: C 54,09, H 6,58, N 14,84%
Aminosyreanalyse (hydrolyse ved 5,7N saltsyre i nærværelse af 4%s tioglycerolsyre ved 110°C i 24 timer):
Arg = 0,97; Trp = 0,84; p-NH2-Phe = 0,97; Ser = 1,00;
Glu =1,00; Pro = 0,99; Ala= 1,02; Leu = 1,02; Tyr = 1,08; ætylamin 1,00
Eksempel 10 (Pyr)Glu-Trp-Trp-Ser-Tyr- (D) -Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2CH3 a) Z-(Pyr)Glu-Trp-OBzl
Til en opløsning af 1,7 g Z-(Pyr)Glu-ONB og 2,lg 35 148304 H-Trp-OBzl-p-toluensulfonat i 50 ml acetonitril sættes 0,61 ml triætylamin og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 12 timer. Reaktionsblandingen inddampes til tørhed under vakuum. Remanensen opløses i 100 ml ætylacetat, vaskes med IN HC1 og 5%s vandigt NaHCO^, tørres over vandfrit Na2S0^ og inddampes til tørhed. Remanensen krystalliseres fra petroleumsæter og omkrystalliseres fra ætylacetat/petroleums-æter. Udbytte 1,7 g, smp. 129-130°C, ajip = +3,1° (c = 1,0 i dimetylformamid), Rf^ = 0,42
Beregnet for C31H29°6N3: C 69,00, H 5,42, N 7,79 Fundet: C 68,85, H 5,48, N 7,53% b) BOC-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH3 670 mg B0C-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(NO2)-Pro-NH-CH2-CH3 behandles med 10 ml trifluoreddikesyre ved stuetemperatur i 20 minutter og til denne opløsning sættes 50 ml tørt æter hvorved der vindes et fint fast stof som tørres over NaOH-piller under vakuum. Det resulterende pulver opløses i 5 ml dimetylformamid og til denne opløsning sættes 0,11 ml triætylamin sammen med BOC-Trp-ONB fremstillet ud fra 243 mg BOC-Trp-OH og 150 mg HONB ved DCC-metoden. Blandingen omrøres i 12 timer ved stuetemperatur og det resulterende produkt udfældes ved tilsætning af 50 ml ætylacetat. Bundfaldet opsamles ved filtrering og vaskes med vand. Det resulterende bundfald renses ved genudfældning fra dimetylformamid/ætylacetat. Udbytte 720 mg, smp. 190-193°C, oj|p= -42,4° (c = 0,5 i dimetylformamid), Rf4 = 0,27.
Beregnet for C50H73°13N13H2°5 C 55,49, H 6,98, N 16,82 Fundet: C 55,14, H 7,16, N 16,76%.
c) (Pyr)Glu-Trp-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2CH3 215 mg af det ovenfor vundne Z-(Pyr)Glu-Trp-OBzl opløses i 50 ml metanol og hydrogeneres derpå over palladiumsort som katalysator i 3 timer. Opløsningen filtreres til _ 148304 og fjernelse af katalysatoren og inddampes til tørhed. Remanensen vaskes med æter og opsamles ved filtrering hvorved der vindes den tilsvarende frie syre.
426 mg B0C-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-C^CH^j behandles med 5 ml trifluoreddikesyre i nærværelse af 0,1 ml 2-merkaptoætanol og 0,4 ml N saltsyre ved stuetemperatur i 30 minutter og til denne opløsning sættes tørt æter hvorved der vindes et fint hvidt fast stof som opsamles ved filtrering og tørres over NaOH-piller under vakuum hvorved man vinder den tilsvarende frie base.
Det vundne pulver opløses i 2ml dimetylformamid sammen med 0,06 ml N-ætylmorforlin og dertil sættes den ovenfor beskrevne frie syre og 102 mg Η0ΝΒ. Blandingen afkøles til 0°C og der tilsættes 10 mg DCC. Opløsningen omrøres i 2 timer ved 0°C og i yderligere 10 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen filtreres til fjernelse af det dannede dicyklohexylurinstof og filtratet fortyndes med ætylacetat hvorved der vindes et fint fast stof som opsamles ved filtrering til opnåelse af råproduktet. Det resulterende rå beskyttede nonapeptid-ætylamid renses på en søjle af silikagel (opløsningsmiddelsystem, ætylacetat:pyridin:eddikesyre:vand, 60:20:6:10). De fraktioner der indeholder det rene produkt (kontrolleres ved tyndlagskromatografi) forenes og inddampes til et fast stof. Det faste stof (250 mg) behandles med 5 ml hydrogenfluorid i nærværelse af 0,1 ml anisol og 0,1 ml 2-merkaptoætanol ved 0°C i 60 minutter og hydrogenfluoridet fjernes ved vakuum. Remanensen opløses i 20 ml vand og føres gennem en kolonne af ,,Amberlite,, CG-410 (acetatform, 1 x 10 cm) og kolonnen vaskes grundigt med vand. Eluatet og vaskevæskeme forenes og underkastes kromatografi på en karboxymetylcellulose-søjle (1,2 cm i diameter x 30 cm) med en gradientelueringsme-tode (pH 6,8, ammoniumacetatpuffer, 0,005 M/0,15 M = 300 ml/ 300 ml). Det rene peptid elueres i fraktioner fra 160-260 ml og forenes og frysetørres til konstant vægt: udbytte 100 mg, oc^p = -47,2° (c = 0,25 i 5% eddikesyre), Rf1 = 0,31, Rf2 = 0,76. Aminosyreanalyse; Arg = 1,01; Trp = 1,89; Glu = 0,92;
Ser = 0,96; Pro = 1,11; Ala = 1,00; Leu = 1,02; Tyr = 1,05 (86%s genvinding).
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8338973A JPS5035158A (da) | 1973-07-24 | 1973-07-24 | |
| JP8338973 | 1973-07-24 | ||
| JP49031734A JPS5749532B2 (da) | 1974-03-19 | 1974-03-19 | |
| JP3173474 | 1974-03-19 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK393674A DK393674A (da) | 1975-03-17 |
| DK148304B true DK148304B (da) | 1985-06-03 |
| DK148304C DK148304C (da) | 1985-11-04 |
Family
ID=26370246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK393674A DK148304C (da) | 1973-07-24 | 1974-07-22 | Analogifremgangsmaade til fremstilling af et lh-rh-analogt nonapeptidamidderivat eller salte eller metalkomplekser deraf |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4490291A (da) |
| AT (1) | AT347053B (da) |
| BE (1) | BE817989A (da) |
| CA (1) | CA1030525A (da) |
| CH (1) | CH611877A5 (da) |
| CS (1) | CS186785B2 (da) |
| DE (1) | DE2435027C2 (da) |
| DK (1) | DK148304C (da) |
| ES (1) | ES428530A1 (da) |
| FI (1) | FI60553C (da) |
| FR (1) | FR2238700B1 (da) |
| GB (1) | GB1423083A (da) |
| HU (1) | HU173662B (da) |
| NL (1) | NL184161B (da) |
| NO (1) | NO140854C (da) |
| SE (1) | SE401822B (da) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4675189A (en) * | 1980-11-18 | 1987-06-23 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Microencapsulation of water soluble active polypeptides |
| US4491541A (en) * | 1982-11-10 | 1985-01-01 | Farmitalia Carlo Erba | Peptides |
| GB2130590B (en) * | 1982-11-10 | 1986-01-08 | Erba Farmitalia | Peptides |
| IT1172391B (it) * | 1983-12-23 | 1987-06-18 | Polifarma Spa | Composti tirpeptidici contenenti acido piroglutaminico e triptofano,procedimentio di produzione ed applicazioni terapeutiche |
| DE3411224A1 (de) * | 1984-03-27 | 1985-10-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur racematarmen herstellung von peptidzwischenprodukten der gonadorelin- und gonadorelinanaloga-synthese und neue zwischenprodukte bei diesem verfahren |
| US4705778A (en) * | 1985-10-22 | 1987-11-10 | Sri International | Orally active LHRH analogs |
| US4897268A (en) * | 1987-08-03 | 1990-01-30 | Southern Research Institute | Drug delivery system and method of making the same |
| CA2029018A1 (en) * | 1989-11-01 | 1991-05-02 | Robert P. Millar | Analogues of gonadotropin releasing hormone |
| JP2653255B2 (ja) | 1990-02-13 | 1997-09-17 | 武田薬品工業株式会社 | 長期徐放型マイクロカプセル |
| CA2050425A1 (en) | 1990-09-03 | 1992-03-04 | Yoshiaki Uda | Pharmaceutical composition and its mucous use |
| NZ240214A (en) | 1990-10-16 | 1993-02-25 | Takeda Chemical Industries Ltd | Polymer compositions comprising a polylactic acid and a copolymer of glycolic acid and a hydroxycarboxylic acid; use as carrier for prolonged release pharmaceutical compositions of water soluble drugs |
| US5518730A (en) | 1992-06-03 | 1996-05-21 | Fuisz Technologies Ltd. | Biodegradable controlled release flash flow melt-spun delivery system |
| EP0582459B1 (en) | 1992-08-07 | 1998-01-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production of microcapsules of water-soluble drugs |
| DE69429603T2 (de) | 1993-09-22 | 2002-08-14 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Iontophoresematrix |
| US6117455A (en) | 1994-09-30 | 2000-09-12 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Sustained-release microcapsule of amorphous water-soluble pharmaceutical active agent |
| US5837281A (en) | 1995-03-17 | 1998-11-17 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Stabilized interface for iontophoresis |
| CA2192782C (en) | 1995-12-15 | 2008-10-14 | Nobuyuki Takechi | Production of microspheres |
| CA2192773C (en) | 1995-12-15 | 2008-09-23 | Hiroaki Okada | Production of sustained-release preparation for injection |
| US5908400A (en) * | 1996-06-20 | 1999-06-01 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Device structure for iontophoresis |
| US20040241842A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-02 | Monash University | Stimulation of thymus for vaccination development |
| US20050020524A1 (en) * | 1999-04-15 | 2005-01-27 | Monash University | Hematopoietic stem cell gene therapy |
| US20070274946A1 (en) * | 1999-04-15 | 2007-11-29 | Norwood Immunoloty, Ltd. | Tolerance to Graft Prior to Thymic Reactivation |
| AUPR074500A0 (en) * | 2000-10-13 | 2000-11-09 | Monash University | Treatment of t cell disorders |
| US20040259803A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Disease prevention by reactivation of the thymus |
| US20040265285A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-30 | Monash University | Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration |
| US20040258672A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Graft acceptance through manipulation of thymic regeneration |
| US20060088512A1 (en) * | 2001-10-15 | 2006-04-27 | Monash University | Treatment of T cell disorders |
| US20080279812A1 (en) * | 2003-12-05 | 2008-11-13 | Norwood Immunology, Ltd. | Disease Prevention and Vaccination Prior to Thymic Reactivation |
-
1974
- 1974-07-16 FR FR7424676A patent/FR2238700B1/fr not_active Expired
- 1974-07-20 DE DE2435027A patent/DE2435027C2/de not_active Expired
- 1974-07-22 CA CA205,315A patent/CA1030525A/en not_active Expired
- 1974-07-22 DK DK393674A patent/DK148304C/da not_active IP Right Cessation
- 1974-07-22 CS CS7400005210A patent/CS186785B2/cs unknown
- 1974-07-23 BE BE146850A patent/BE817989A/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 AT AT605674A patent/AT347053B/de not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 NO NO742690A patent/NO140854C/no unknown
- 1974-07-23 GB GB3247274A patent/GB1423083A/en not_active Expired
- 1974-07-23 SE SE7409574A patent/SE401822B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 HU HU74TA1316A patent/HU173662B/hu unknown
- 1974-07-23 CH CH1016274A patent/CH611877A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-23 ES ES428530A patent/ES428530A1/es not_active Expired
- 1974-07-24 FI FI2243/74A patent/FI60553C/fi active
- 1974-07-24 NL NLAANVRAGE7410026,A patent/NL184161B/xx not_active IP Right Cessation
-
1975
- 1975-07-17 US US05/596,810 patent/US4490291A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4490291A (en) | 1984-12-25 |
| BE817989A (fr) | 1975-01-23 |
| NL184161B (nl) | 1988-12-01 |
| ATA605674A (de) | 1978-04-15 |
| AU7124574A (en) | 1976-01-15 |
| NO140854C (no) | 1979-11-28 |
| SE7409574L (da) | 1975-01-27 |
| GB1423083A (en) | 1976-01-28 |
| DE2435027C2 (de) | 1981-11-26 |
| FI60553B (fi) | 1981-10-30 |
| SE401822B (sv) | 1978-05-29 |
| HU173662B (hu) | 1979-07-28 |
| FR2238700A1 (da) | 1975-02-21 |
| FR2238700B1 (da) | 1977-10-14 |
| AT347053B (de) | 1978-12-11 |
| FI224374A7 (da) | 1975-01-25 |
| DK148304C (da) | 1985-11-04 |
| ES428530A1 (es) | 1976-08-16 |
| CH611877A5 (da) | 1979-06-29 |
| DE2435027A1 (de) | 1975-02-06 |
| FI60553C (fi) | 1982-02-10 |
| CS186785B2 (en) | 1978-12-29 |
| CA1030525A (en) | 1978-05-02 |
| NL7410026A (nl) | 1975-01-28 |
| DK393674A (da) | 1975-03-17 |
| NO742690L (da) | 1975-03-17 |
| NO140854B (no) | 1979-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK148304B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af et lh-rh-analogt nonapeptidamidderivat eller salte eller metalkomplekser deraf | |
| DK148305B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af et lh-rh-analogt nonapeptidamidderivat eller et salt eller metalkompleks deraf | |
| US3972859A (en) | Novel decapeptide amide analogs of leuteinizing hormone-releasing hormone | |
| US4024248A (en) | Peptides having LH-RH/FSH-RH activity | |
| US3853837A (en) | Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor | |
| US3992365A (en) | Agonist analogues of luteinizing hormone releasing hormone | |
| FI71567B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av gonadoliberinderivat | |
| US4003884A (en) | Peptides having LH-RH/FSH-RH activity | |
| BG60740B2 (bg) | Полипептид | |
| DE2617646A1 (de) | Peptide mit gonadoliberin-wirkung und verfahren zu ihrer herstellung | |
| NO301015B1 (no) | Dekapeptid med antiovulatorisk aktivitet | |
| DK162649B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af pgrf eller pgrf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable additionssalte heraf samt mellemprodukt til brug ved fremgangsmaaden | |
| JPS61122297A (ja) | 新規ハロ低級アルキルグアニジノ置換アミノ酸化合物およびその製法 | |
| EP0106404A2 (en) | Peptides | |
| CA1057743A (en) | Lh-rh analogues | |
| US3472832A (en) | Peptides related to caerulein | |
| DE2528935A1 (de) | Aminosaeuren oder peptide mit geschuetzten guanidinogruppen und verfahren zu ihrer herstellung | |
| DK171823B1 (da) | Gonadoliberin-analoge peptider og farmaceutisk acceptable salte deraf, fremgangsmåde til deres fremstilling samt deres anvendelse som lægemidler | |
| US3749703A (en) | Asn15-bovine thyrocalcitonin | |
| DK164875B (da) | Gonadoliberinderivater og deres farmaceutisk acceptable syreadditionssalte eller metalcomplexer, en fremgangsmaade til fremstilling heraf samt et farmaceutisk praeparat indeholdende disse | |
| US4083967A (en) | Nona- and decapeptides | |
| JPH0631314B2 (ja) | 新規なゴナドリベリン誘導体 | |
| US4358440A (en) | Polypeptide and its production and use | |
| JP2672677B2 (ja) | Ｌｈｒｈ同族体 | |
| US4272432A (en) | Claudogenic-interceptive nonapeptide |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |