DE2528935A1

DE2528935A1 - Aminosaeuren oder peptide mit geschuetzten guanidinogruppen und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE2528935A1
Application number: DE19752528935
Authority: DE
Inventors: Osamu Nishimura
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1974-07-04
Filing date: 1975-06-28
Publication date: 1976-01-22
Also published as: FR2277078A1; DE2528935C2; US3997516A; FR2277078B1; NL7507980A; NL183651C; CH611878A5; CA1045116A; NL183651B; GB1509928A

Description

DR.-ING. VON KREISLER DR.-ING. SCHuWV₁TALD DR.-ING. TH. MEYER DR. FUES DIPL-CHEM. ALüK-VON KREfSLER DIPL-CHEM. CAROLA KELLER Ή»3Β^βα3ε$&&7 DiPL-ING. SELTlNG

5 KÖLN 1, DEICHMANNHAUS

Köln, den 27. Juni 1975 AvK/IM

Takeda Chemical Industries, Ltd., Osaka /Japan

Aminosäuren oder Peptide mit geschützten Guanidinogruppen und Verfahren zu ihrer Herstellung

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum Schutz-der Guanidinogruppe der Formel:

H₂N

C-NH-

HiK

und zur Rückbildung derselben. Insbesondere bezieht sich

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die Erfindung auf neuartige und nützliche Aminosäuren und Peptide mit Guanidinogruppen, die durch eine spezifische Schutzgruppe", d.h. eine Niederalkoxybenzolsulfonylgruppe oder eine Triniederalkylbenzolsulfonylgruppe, geschützt sind.

Als Schutzgruppe für Guanidinogruppen wurden z.B. häufig Tosylgruppen verwendet, insbesondere bei der Peptidsynthese. Jedoch sind nicht nur die Ausbeute bei der Einführung der Tosylgruppe in die Guanidinogruppe, sondern auch die Rückbildung der Guanidinogruppe nicht immer befriedigend.

Mit dem Zwecke von Verbesserungen in diesen Hinsichten wurden umfangreiche Untersuchungen ausgeführt, wobei gefunden Würde, dass Niederalkoxybenzolsulfonylgruppen und Triniederalkylbenzolsulfonylgruppen befriedigende Schutzgruppeh für-die Guanidinogruppe sind.

Hauptziel der vorliegenden Erfindung ist es, Aminosäuren und Peptide zur Verfügung zu stellen, deren Guanidinogruppen mit einer spezifischen Schutzgruppe, d.h. einer Niederalkoxytjenzolsulfonylgruppe oder einer Triniederalkylbenzolsulfony!gruppe,-geschützt sind.

Ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung ist ein neues Verfahren zum Schützen der Guanidinogruppe in einer Aminosäure oder einem Peptid mit den genannten spezifischen Schutzgruppen.

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— "5 —

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Ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, ein Verfahren zur Rückbildung der Guanidinogruppe '/AiV Verfügung zu stellen.

Andere Ziele werden im Verlauf der folgenden Offenbarung deutlich werden.

Der Schutz der Guanidinogruppe kann erfindungsgemäss verwirklicht werden durch Einführung einer Niederalkoxybenzolsulfonylgruppe oder einer Triniederalkylbenzolsulfonylgruppe in die Guanidinogruppe der Aminosäure oder des Peptides. ,

Die Niederalkoxygruppe der in die Guanidinogruppe einzuführenden Niederalkoxybenzolsulfonylgruppe enthält vorzugsweise 1. bis 3 Kohlenstoffatojne und kann z.B. Methoxy, Aethoxy, Propoxy oder Isopropoxy sein. Diese Gruppen können an jede beliebige Stellung des Benzolringes gebunden sein, vorzugsweise aber an die 4-Stellung bezüglich der Sulfonylgruppe. Spezifischere Beispiele solcher Gruppen sind p-Methoxybenzolsulfonyl (das im folgenden als "MBS" abgekürzt werden kann), p-Aethoxybenzolsulfonyl, p-Propoxybenzolsulfonyl und p-Isopropoxybenzolsulfonyl.

Die Niederalkylgruppen der in die Guanidinogruppe einzuführenden Triniederalkylbenzolsulfonylgruppen, die gleich oder verschieden sein können, enthalten vorzugsweise 1 bis 5 Kohlenstoffatome und können z.B. Methyl, Aethyl, Propyl, Isopropyl, η-Butyl, tert.-Butyl, n-Amyl und tert,-

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_ 2j ~

Amyl sein. Diese Gruppen können an beliebige Stellungen des Benzolringes gebunden sein, vorzugsweise in den Stellungen 2, 4 und 6 bezüglich der Sulfonylgruppe. Spezifischere Beispiele von Triniederalkylbenzolsulfonylgruppen sind 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonyl, 2,4,6-Triäthylbenzolsulfonyl, 2,4,6-T.ripropylbenzolsulfonyl, 2,4 ,6-Triisopropyl~ benzolsulfonyl und 2,4,6-Tri-tert.-butylbenzolsulfonyl.

; Der Schutz von. Guanidinogruppen mit diesen Schutzgruppen kann nach beliebigen zweckmässigen Verfahren zur Einführung von substituierten Benzolsulfonylgruppen in die Guanidinogruppe ausgeführt werden. Ein typisches Beispiel eines solchen Verfahrens ist die Umsetzung eines herkömmlichen reaktionsfähigen Derivates, z.B. eines Halogenides, .wie eines Chlorides, Fluorides, Bromides oder Jodides, der Benzolsulfonsäure mit dem Guanidinogruppen enthaltenden Ausgangsmaterial. Die Reaktion dieses beispielhaften Verfahrens wird vorzugsweise in Gegenwart einer Base ausgeführt . Die Base kann z.B. Natriumhydroxyd, Kaliumhydroxyd oder Lithiumhydroxyd sein und wird gewöhnlich in einer Menge von ca. 1 bis 10 Aequivalenten, vorzugsweise ca. 1 bis 5 Aequivalenten, pro Aequivalent des Guanidinogruppen enthaltenden Ausgangsmaterials verwendet. Die Reaktion wird vorzugsweise in einem geeigneten Lösungsmittel, z.B. Aceton, Dioxan, Dimethylformamid .oder Tetrahydrofuran, ausgeführt. Die Reaktionstemperatur liegt im allgemeinen im Bereich "^.

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von ca. -10 biß 25 ⁰C, vorzugsweise von ca. -5 bis 10 ⁰C.

Die Schutzgruppe kann in die Guanidinogruppe eingeführt werden.

Die Guanidinogruppen enthaltende Aminosäure oder* das Guanidinogruppen enthaltende Peptid mit auf diese Weise geschlitzter Guanidinogruppe können einigen herkömmlichen chemischen Modifizierungen, z.B. Synthesereaktionen zur Herstellung anderer Aminosäuren oder Peptide, unterworfen v/erden. Danach kann die Schutzgruppe erforderlichenfalls leicht entfernt werden, um die Guanidinogruppe zurückzubilden. Die Entfernung der Schutzgruppen kann leicht mit weniger Nebenreaktionen nach an sich bekannten Verfahren erfolgen, z.B. unter Verwendung von Lewissäuren, z.B. Bortristrifluoracetat (das als "BTFA" abgekürzt werden kann), und-Mineralsäure)!, z.B. wasserfreiem Fluorwasserstoff. In diesem Zusammenhang wurde gefunden, dass die Ver-

Trifluormethansulfonsäure

wendung von Niederalkylsulfonsäuren, z". B. Methansulfonsäure,/ oder Aethansulfonsäure, oder von Halogensulfonsäuren, z.B. Fluorsulfonsäure, für die Entfernung der Schutzgruppen vorteilhafter ist. Diese Säuren können auch als Lösungsmittel für die Entfernungsreaktion dienen. Die Entfernungsreaktion kann in einem Lösungsmittel, z.B. Trifluoressigsäure, Essigsäure, Chloroform oder Methylenchlorid, ausgeführt werden. Die Reaktionstemperatur liegt im allgemeinen im Bereich von -5 bis 50 ⁰C.

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Das vorliegende Verfahren zum Schutz und zur . Rückbildung von Guanidinogruppen lässt sich in wirksamer Weise auf beliebige chemische Reaktionen unter Verwendung von Aminosäuren und Peptiden anwenden, sofern diese eine oder mehrere Guanidinogruppen enthalten, wobei die Reaktion ohne Rücksicht auf die Konfiguration der Aminosäure oder des Peptides entweder in flüssiger oder fester Phase ausgeführt werden kann.

. Das vorliegende Verfahren hat die folgenden tech nischen Vorteile: ,

(1) Die vorliegenden Schutzgruppeh werden in die Guanidinogruppe in einer guten Ausbeute von mehr als ca. 70 % eingeführt, verglichen mit einer Ausbeute von ca. kO ;im Falle der als Schutzgruppe bekannten Tosylgruppe.

(2-) Die Rückbildung der Guanidinogruppe kann vollständig zu Ende verlaufen, verglichen mit einem Umsatz von ca. 20 % bei der Tosylgruppe.

(3) Die Abspaltung der vorliegenden Schutzgruppen verläuft schneller als die Abspaltung der Tosylgruppe.

In der vorliegenden Beschreibung und den Ansprüchen werden Abkürzungen zur Bezeichnung von Aminosäuren, Peptiden und deren aktivierenden oder Schutzgruppen sowie von AktivierUngs- und Schutzmitteln für Aminosäuren oder Peptide verwendet, wie sie von der IUPAC-IUB Commission on Biological Nomenclature festgelegt wurden oder auf die-

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Bom speziellen Fachgebiet gewöhnlich verwendet werden.

Beispiele solcher Abkürzungen sind die folgenden AIa: Alanin Arg: Arginin Asn: Asparagin Asp: Asparaginsäure GIy: Glycin GIu: Glutaminsäure His: Histidin Leu: Leucin , Heu: Isoleucin Lys: Lysin Met: Methionin

Met: Methioninoxyd Phe: Phenylalanin Pro: Prolin p.Glu: Pyroglutaminsäure (Pyr)Glu: Pyroglutaminsäure Ser: Seriin Thr: Threonin Trp: Tryptophan Tyr: Tyrosin VaI: Valin BzI: Benzyläther

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BOC: tert.-Butyloxycarbonyl BTPA: Bortristrifluoracetat DCC: N₃N'-Dicyclohexylcarbodiimxd DC-urea: Dicyclohexylharnstoff DCHA: Dicyclohexylamin HONB: ii-Hydroxy-5~norbornen-2j3~dicarboximid NH₂Et: Aethylamin

OBzI: Benzylester ODNP: 2,4-Dinitrophenylester OEt: Aethylester OMe: Methylester ONBzI: p-Nitrobenzylester ONB: HONBester

0 Bu: tert.-Butylester

.Tos: Tosyl '

Z: Benzyloxycarbonyl OTcp: 2,4,5-Trichlorphenylester Gin: Glutamin

In der vorliegenden Beschreibung und

den Ansprüchen sind Aminosäuren in der L-Konfiguration gemeint, wenn sie nicht speziell"anders bezeichnet werden.

Beispiel 1 O₉I mMol Tosy!arginin und 0,1 mMol p-Methoxyben-

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zolsulfonylarginin werden jeweils in 0,5 nil Tr if luor essigsäure gelöst. Während die einzelnen Lösungen auf O⁰C abgekühlt werden, werden Lösungen von 6, 8 oder 10 Aequivalenten BTPA in Trifluoressigsäure zugegeben. Jedes der Gemische wird 1 Stunde lang bei 0 ⁰C gerührt und mit 50 ml V/asser verdünnt. Die Gemische werden gefriergetrocknet, worauf der dabei erhaltene Rückstand der Aminosäureanalyse unterworfen wird..Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle wiedergegeben:

Tabelle I
Rückgewinnung von Arginin

Ausgangs material	6 Aequivalente BTPA	8 Aequivalente BTPA	10 Aequivalente BTPA
Tos H-Ärg-OH	1,3 %	3,2 %	11,2 %
MBS H-Ärg-OH	70,0 %	82,0 %	100 %

Beispiel 2

Je 0,5 ml Methansulfonsäure, die 5 % Anisol enthalten, werden zu 100 uMol H-Arg(MBS)-OH bzw. zu 100 uMOl H-Arg(Tos)-0H gegeben, worauf die Gemische ^O Minuten lang

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bei 22 ⁰C behandelt werden. Die resultierenden OeIe werden gut mit Aether gewaschen und dann der Aminosäureanalyse unterworfen. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle wiedergegeben. .

. Tabelle II

Ausgangsmaterial	Rückgewinnung von Arginin
H-Arg(Tos)-0H	23,1 %
H-Arg(MBS)-OH	100 %

Beispiel 3

(1) Herstellung von Z-Arg(MSS)-OH, wobei "MSS" eine Abkürzung für "Mesitylensulfonyl" ist

3,08 g (0,01 Mol)" Z-Arg-OH werden in einem Gemisch aus 10 ml 4-normaler wässriger Natronlauge und 80 ml Aceton gelöst, worauf die Lösung mit Eis gekühlt wird. Eine Lösung von 4,38 g (0,02 Mol) Mesitylensulfonylchlorid in 10 ml Aceton wird in 10 Minuten zu der Lösung zugetropft. Das Gemisch wird 2 Stunden lang gerührt und mit Zitronensäure versetzt, um die Lösung anzusäuern. Das Aceton wird im Vakuum verdampft und der Ölige Rückstand in Aethylacetat gelöst. Die Aethylacetatschicht wird zweimal mit Wasser gewaschen und mit 5 5?-igem wässrigem Natriumbicarbonat ex-

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träniert. Der wässrige Extrakt wird mit Zitronensäure angesäuert. Die sich ausscheidende ölige Substanz wird mit Aethylacetat extrahiert. Die Aethylacetatschicht wird zweimal mit Wasser gewaschen und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der ölige Rückstand wird mit Petroläther verrieben, wobei ein Pulver gebildet wird. Ausbeute 4,0 g (81,8 %), Smp. 110 bis 112 ⁰C (Zersetzung), [Ct]^p-0,4l° (c = O,97, Methanol) .

Elementaranalyse für C₂,Hpg0gN^S
Berechnet: C 56,54; H 5,78; N 11,47; S 6,56 Gefunden : C 56,28; H 6,10; N 10,96; S 6,39

(2) Herstellung von H-Arg(MSS)-OH

2,0 g Z-Arg(MSS)-OH werden in Methanol gelöst und über Palladiumschwarz hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Piltrat zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird mit Aethylacetat versetzt und das resultierende Pulver durch Filtration isoliert. Ausbeute 1,3 g (89,2 Jf), Smp. 144 bis 146 ⁰C (Zersetzung), [a]p³-3,37° (c=0,89, Methanol).
Elementaranalyse für C₁₁-H₂IiOkNL-S
Berechnet: C 50,54; H 6,79; N 15,27; S 9,00 Gefunden : C 50,39; H 6,78; N 14,89; S 8,79

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Entfernung der MSS-Gr-uppe , . (a) Entfernung mijb Methansulfonsäui'e

■ 0,5 pil H'et'hansulfonsäure, die 5 % Anisol enthal-

ten, werden zu

35j6 mg (100 ^MoI) Η-Arg (KSS)-OH gegeben.

worauf aas Gemisch MQ Minuten! lang bei 22 ⁰C behandelt viird. Das ReaktIonsgemisch wird mit Aether versetzt. Die resultierende ölige Substanz wird gut. mit Aether gewaschen und in 10 jn 1^: Wasser gelöst. Ein Teil der Lösung wird einer Aminosäu-peÄnalyse unterworfen, wobei sich ein Arginingehalt von 78 % ergibt. ·

(b) Entfernung mit BTFA

"' 3.'e 35>6 rag (100 uMol) H-Arg(MSS)-OH werden in drei Kplfeen gegeben und in je 0,5 ml Trifluoressigsäure gelöst. |jptep Kühlen auf 0 ⁰C werden Lösungen von 6, 8 bzw« 10 Aequivalenten BTFA in Trifluoressigsäure zu den Lösungen gegeben^ $£>räuf eiie Gemische 1 Stunde lang bei 0 ⁰C gerührt werden. Bi# Lösungen werden mit dem lOfachen Volumen Wasser verdünn^ lijid gefriergetrocknet· Die dabei erhaltenen Rückstände WfFöen in ^e 10 ml Wasser gelöst, worauf ein Teil jeder L0ewing de-r Äainosäureanalyse unterworfen wird; man erhält die in T&belle III angegebenen Resultate.

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Rückgewinnung
von Arginin

TabcHe III

Aequivalente BTFA

71,0 %

Aequivalente ISTFA

8O₅O %

10

Aequivalente BTFA

• Beispiel 4

(1) Herstellung von Z-Arg(TPS)-OH ("TPS" ist eine Abkürzung für "2, h ,6-TriisopropyIben^olsul_fonyl" )

Unter Verwendung von 2,4,6-Triisopropylbenaolsulfonylchlorid wird die gewünschte Verbindung nach einem ähnlichen Verfahren wie demjenigen von 'Beispiel 3-(D hergestellt. Ausbeute 78,0 %_t Smp. 130-135 ⁰C, [a]Jp-O₃54° (c=l,ll, Methanol).
Elementaranalyse für C₂QlI₁I₂OgN₁S
Berechnet: C 60,60; H 7,37; N 9,72; S 5,58 Gefunden : C 6l,20; H 7,¹U; N 8,68; S 5,70

(2) Herstellung von Η-Arg(TPS)-OH

Die gewünschte Verbindung wird nach einem ähnlichen Verfahren wie demjenigen von Beispiel 3-(2) hergestellt Ausbeute 82,0 %, Smp. 225-226 ⁰C (Zersetzung), [a]p²-3,8° (c=l,02, Methanol).

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Elemontaranalyse für _216i(1(2

Berechnet: C 56,10; II 8,0?; N 12,'16; S 7,13

Gefunden : C 56,12; H 8,24; N 12,04; S 7,21

(3) Ent

(a) Entfernung mit Methansulfonsäure

0,5 rnl Methansulf onsäure, die 5 % Anisol enthalten, werden zu 44,0 mg (100 uMol) Η-Arg(TPS)-OH gegeben, worauf das Gemisch 40 Minuten lang bei 22 ⁰C behandelt wird. Das Reaktionsgemisch wird mit Aether versetzt und die resul-

tierende ölige Substanz gut mit Aether gewaschen. Die ölige Substanz wird in 10 ml Wasser gelöst und ein Teil der Lösung einer Aminosäureanalyse unte-rworfen, wobei sich ein Arginingehalt von 89,6 % ergibt.

(b) Entfernung mit RTFA . .

Je 44,0 mg (100 jiMol) H-Arg(TPS)-OH werden in drei Kolben gegeben und in Trifluoressgisäure gelöst. Unter Kühlung werden die Lösungen mit Lösungen von 6 bzw. 8 bzw. 10 Aequivalenten BTPA in Trifluoressigsäure versetzt. Die Mischungen werden 1 Stunde lang bei 0 ⁰C gerührt und mit der lOfachen Volumenmenge Wasser verdünnt. Die Lösungen werden gefriergetrocknet und die dabei erhaltenen Rückstände in je 10 ml Wasser gelöst. Teile der Lösungen werden einer Aminosäureanalyse unterworfen, wobei die in der folgen-

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don Tabelle wi.edergo-gebenen Resultate erhalten werden:

Rückgewinnung
von Arginin

Tabelle IV

Aequivalente

69,0 %

Aequiva]ente BTFA

10

Aequivalente BTFA

90,0 %

Beispiel 5 Herstellung von BOC-Arg(MBS)-OH

2,76 g (8 mMol) H-Arg(MBS)-OH werden in einem Gemisch aus 4,4 ml.Wasser und 1,68 ml (12 mMol) Triäthylamin gelöst. Diese Lösung wird mit einer Lösung von 2,1 g (8,8 mMol) S-4,6-Dimethylpyrimidin-2~ylthiokohlensäuretert.-butylester in 4,4 ml Dioxan versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und dann unter vermindertem Druck eingedampft> um das Dioxan zu entfernen. Die zurückbleibende Lösung wird mit Wasser verdünnt, mit Aethylacetat gewaschen und dann mit 5-normaler Salzsäure auf pH = 2 gebracht. Der resultierende ölige Rückstand wird mit Aethylacetat extrahiert. Die Aethylacetat schicht wird mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird

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durch Eindampfen im Vakuum zur Trockene entfernt. Der ölige Rückstand wird mit Petroläther verrieben und dann durch Umfällung aus einem Gemisch aus Aethylacetat und Petroläther gereinigt. Ausbeute 3,25 g (91,3 %), Smp. 85,0 bis 92,0 ⁰C
(Zersetzung), [al^ +1,19 (c=l,l, Methanol).
Elementaranalyse, für C₁₈H₂₈O N_i(S· 1/2CH COOC₂H₅
Berechnet: C 49,17; H 6,60; N 11,47; S 6,56
Gefunden : C 49,17; H 6,53; N 12,04; S 6,89

Beispiel 6

Herstellung von Bradykinin
(.1) Herstellung von Z-Arg(MBS)-OH-DCHA·CH₃ CN

55,5 g (0,18 Mol) Z-Arg-OH werden in einem Gemisch aus 180 ml 4—normaler Natronlauge und 1,3 Liter Aceton gelöst, worauf die Lösung mit Eis gekühlt wird. Eine
Lösung von 74,4 g- (0,36 Mol) p-Methoxybenzo/lsulfonylchlorid in 300 ml Aceton wird in 30 Minuten zugetropft, worauf das Gemisch 2 Stunden lang gerührt wird. Das Gemisch wird
mit Zitronensäure angesäuert und unter vermindertem Druck
destilliert, um das Aceton zu verdampfen. Der ölige Rückstand wird in Aethylacetat gelöst. Die Aethylacetatschicht wird zweimal mit Wasser gewaschen und mit 5 %-igem wässrigem Natriumbicarbonat extrahiert. Der wässrige Extrakt
wird mit Zitronensäure angesäuert und die resultierende
ölige Substanz mit Aethylacetat extrahiert. Die Aethylace-

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tatschicht wird zweimal mit V/asser gewaschen und unter vermindertem Druck destilliert, um das Lösungsmittel zu verdampfen. Der ölige Rückstand (86,0 g) wird in 600 ml Aethyl^ acetat gelöst und mit 36,0 ml (0,18 Mol) Dicyclohexylamin versetzt. Man lässt das Gemisch in einem Kühlschrank stehen, damit es kristallisiert. Die Kristalle werden durch Filtration isoliert und zweimal aus Acetonitril umkristallisiert. Ausbeute 77,0 g (61,1 %), Smp. 110,0 bis 112,0 ⁰C (Zersetzung), [cx]jp+5,l° (c=l,35, Methanol). Elementaranalyse für C^H^O^N S-CH,CN Berechnet: C 59,98; H 7,48; N 11,99; S 4,58 Gefunden : C 59,97; H 7,74; N 11,72: S 4,59

(2) Herstellung von H-Ar₆(MBS)-OH

2 g öliges Z-Arg(MBS)-OH werden in Methanol gelöst und über Palladiumschwarz hydriert. Das Methanol wird verdampft und der ölige Rückstand aus heissem V/asser umkristallisiert. Ausbeute 900 mg (63,0 %), Smp. 144,0 bis 146,0 ⁰C (Zersetzung), [cc]jp-6,l^O (c=0,71, Methanol). Elementaranalyse für C₁₃H₂₀O₅N^S*1/2HpO Berechnet: C 44,18; H 5,99; N 15,85; S 9,07 Gefunden : C 44,05; H 5,80; N 15,75; S 8,99

(3) Herstellung von Z-Arg(MBS)-ONBzI

7,0 g (0,01 Mol) Z-Arg(MBS)-OH'DCHA-CH₃CN werden

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in Aethylacetat suspendiert und durch Behandeln mit 60. ml 0,2-normaler Schwefelsäure in Z-Arg(MBS)-0H übergeführt. Das Aethylacetat wird verdampft und der ölige Rückstand in 30 ml Dimethylformamid gelöst. Unter Eiskühlung werden 1,68 ml (0,012 Mol) Triäthylamin und 2,59 g (0,012 Mol) p-Nitrobenzylbromid zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden lang bei 80 ⁰C gerührt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Gemisch wird in Wasser gegossen und das wässrige Gemisch mit Aethylacetat extrahiert. Die Aethylacetatschicht wird mit 1-normaler Salzsäure und 5 %-igem Natriumbicarbonat gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und destilliert, um das Lösungsmittel zu verdampfen. Der ölige Rückstand wird mit Petroläther verrieben und liefert ein Pulver. Ausbeute 6,2 g (100 %), Smp. 90,0 bis 110,0 ⁰C (Zersetzung), [a]^¹-?,!]⁰ (c=O,59, Dimethylformamid).
Elementaranalyse für C₂r^H3]°q^N5^S
Berechnet: C 5*1,80; H 5,09; N 11,41; S 5,23 Gefunden : C 55,^9; H 5,15.; N 11,15;· S 4,36 Rf¹ = 0,91 (Chloroform/Methanol/Essigsäure = 9:1:0,5). Das gleiche Lösungsmittelsystem wird-im folgenden zur Be-" Stimmung von Rf -Werten verwendet.

(4) Herstellung von Z-Phe-Arg(MBS)-ONBzI

6,1 g (0,01 Mol) Z-Arg(MBS)-ONBzI werden bei Raum-

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temperatur 40 Minuten lang mit einer 25 $-igen Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure behandelt. Das resultierende Pulver wird durch !Filtration isoliert, über Nacht in einem Exsikkator über Natriumhydroxyd getrocknet und in 30 ml Dimethylformamid gelöst. Diese Lösung wird unter Eiskühlung mit 2,8 ml (0,02 .Mol) Triäthylamin versetzt und das gebildete Salz abfiltriert. Das Filtrat wird mit Ί,6 g (0,01 Mol) Z-Phe*-ONB versetzt und das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit Wasser verdünnt und mit Aethylacetat extrahiei^t. Die Aethylacetatschicht wird mit !-normaler Salzsäure und 5 #~igem Natriumbicarbonat gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und destilliert, um das Lößungsmittel zu verdampfen. Der ölige Rückstand wird mit Petroläther verrieben und ergibt Kristalle. Die Kristalle werden aus Aethanol umkristallisiert. Ausbeute 4,5 g'(59,2 %), Smp. 130,0 bis 132,0 ⁰C₅ [αΐ^-β,δ⁰ (c=0,66, Dimethylformamid). Elementaranalyse für C^yH^^O-, -, N^S
Berechnet: C 58,MIj H 5,30; N 11,05; S 4,22 Gefunden : C 58,52; H 5,19; N 10,98; S 4,36 Rf¹ = 0,82.

(5) Herstellung von BOC-Ser-Pro-Phe-Arg(MBS)-ONBzl

3,8 g (0,005 Mol) Z-Phe-Arg(MBS)-ONBzI werden bei Raumtemperatur 40 Minuten lang mit 20 ml einer 25 %-

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igen Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure behandelt. Aether wird zugesetzt und das resultierende Pulver isoliert, Das Pulver wird über Nacht in einem Exsikkator über Natriumhydroxyd getrocknet und in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Diese Lösung wird unter Eiskühlung mit 1,¹J ml (0,01 Mol) Triäthylamin versetzt und das gebildete Salz abfiltriert. In dem Filtrat werden 1,5 g (0,005 Mol) B0C~Ser-Pro-0H [SmP-¹I¹ITjO bis 148,0 ⁰C (Zersetzung)] und 900 mg (0,005 Mol) HONB gelöst, worauf man N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid zugibt. Das Gemisch wird 2 Tage lang bei H ⁰C und dann einen Tag lang bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Verdampfen des Dimethylformamids wird der Rückstand in Aethylacetat gelöst. Die Aethylacetatlösung wird mit 0,2-riormaler Salzsäure und 5 #-igom Natriumbicarbonat gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Aethylacetat wird verdampft und der Rückstand mit Petroläther versetzt. Die resultierenden Kristalle werden aus einem Gemisch aus Aethylacetat und Petroläther umkristallisiert. Ausbeute 3,8 g (83Λ %), Smp. 155,0 bis 160,0 ⁰C₃ [0^-26,O⁰ (c=O,52, Dimethylformamid).

Elementaranalyse für ^ci}2^H5i|°i3^NR^S' ^1/2H ₂° Berechnet: C 5^,83; H 6,02; N 12,18; S 3,^9 Gefunden : C 5*1,81; H 6,00; N 11,87; S 3,53

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(6) Herstellung von BOC-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(MBS)-ONBaI

3,64 g (0,004 Mol) BOC-Ser-Pro-Phe-Arg(MBS)~ONBzl werden bei Raumtemperatur 30 Minuten lang mit 30 rnl Trifluoressigsäure behandelt. Nach dem Verdampfen der Trifluoressigsäure unter vermindertem Druck wird der Rückstand mit Aether versetzt, v/obei sich ein Pulver bildet. Das Pulver wird über Nacht in einem Exsikkator über Natriumhydroxyd getrocknet und in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Diese Lösung wird unter Eiskühlung mit 0,56 ml (0,004 Mol) Triäthylamin und dann mit 1,72 g (0,004 Mol) BOC-Phe-ONB versetzt. Das Gemisch wird 6 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und das Dimethylformamid im Vakuum verdampft. Der . Rückstand wird in Aethylacetat gelöst. Die Lösung wird mit 0,2-normaler Salzsäure und 5 #-igem Natriumbicarbonat gewaschen , über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und destilliert, um das Lösungsmittel zu verdampfen. Der Rückstand wird mit Aether versetzt und das Gemisch filtriert, wobei man .Kristalle erhält, die aus Aethylacetat umkristallisiert werden. Ausbeute 4,0 g (94,6 #), Smp. 165,0 bis 170,0 ⁰C, [a]p¹-22,2° (c=O,59, Dimethylformamid). Elementaranalyse für C.-..H,--. Q, ,.N_nS-H₀O Berechnet: C 56,92; H 6,09; N 11,71; S 2,92 Gefunden : C 56,58; H 5,76; N 11,66; S 3,17 Rf¹ = 0,65.

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(7) Herstellung von Z~Arg(MBS)~Pro-Pro~Gly-0 Bu

4,9 g (0,0106 Mol) öliges Z-Pro-Pro-Gly-O^u
(Rf^3-=O,80) werden in 70 ml Methanol gelöst und 3 Tage lang der katalytischen Hydrierung über Palladiumschwarz; unterworfen. Der Katalysator wird abfiltriert und das Piltrat
zur Trockene eingeengt. Der ölige Rückstand wird in 100 ml eines Mischlösungsmittels aus Dioxan und Tetrahydrofuran
(9:1) gelöst. Z-Arg(MBS)-OH, das in herkömmlicher.Weise
aus 7,^2 g (0,0106 Mol) Z-Arg(MBS)-OH-DCHA-CH CN hergestellt wurde, und 2,p g (0,0111 Mol) HONB werden zu dieser Lösung gegeben und darin gelöst. Die Lösung wird unter Eiskühlung mit 2,4 g (0,0117'MoI) N,N¹-Dicyclohexylcarbodiimid versetzt und das Gemisch 2 Tage lang bei 4 ⁰C gerührt. Der gebildete Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Piltrat zur Trockene eingedampft. Der ölige Rückstand wird in Aethylacetat gelöst und die Lösung mit 0,2-normaler Salzsäure und 5 /S-igem Natriumbicarbonat gewaschen und über
wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Aethylacetat
wird im Vakuum verdampft und der ölige Rückstand mit Aether verrieben. Das resultierende Pulver wird aus einem Gemisch aus Aethylacetat und Aether umgefällt. Ausbeute 5,5 g
(66,2 Ϊ), Sm$>. 120,0 bis 130,0 ⁰C (Zersetzung), [a]^¹-^,7° (c=O,53, Dimethylformamid).

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Elementaranalyse für C₃₇H₅₁O₁₀N₇S"1/2H₂O Berechnet: C 55,90; H 6,59; N 12,33; S 4,03 Gefunden : C 55,89; H 6,62; N 12,31; S 4,05 Rf¹^=O, 70.

(8) Herstellung von Z-Arg(MBS)-Pro~Pro-Gly-OH

4,72 g (0,006 Mol) Z-Arg(MBS)-Pro-Pro-Gly-O^tBu werden bei Raumtemperatur 30 Minuten lang mit 30 ml Trifluoressigsäure behandelt·. Die Trifluoressigsäure wird im Vakuum verdampft und der ölige Rückstand in Aethylacetat gelöst. Die Lösung wird zweimal mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Aethylacetat wird verdampft und der Rückstand mit Aether verrieben. Das resultierende Pulver wird durch Filtration isoliert und durch Umfällung aus Aethylacetat gereinigt. Ausbeute 3,5 g (85,4 JO, Smp. 80,0 bis 90,0 ⁰C (Zersetzung), [a]p¹-46,4° (c=O,56, Dimethylformamid).
Elementaranalyse für 0,,Hj₁^O₁₀N₇S-HpO Berechnet: C 53,00; H 6,06; N 13,11; S 4,29 Gefunden : C 53,13; H 6,03; N 12,60; S 4,26 Rf¹ = 0,44.

(9) Herstellung von Z-Arg(MBS)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(MBS)-ONBzI

1,06 g (1 mMol)- BOC-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(MBS)-ONBzI werden in 12 nl kalter Trifluoressigsäure gelöst _s

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worauf man diie Lösung 30 Minuten lang bei Raumtemperatur stellen lässt. Diο Lösung wird mit 0,17 ml einer 5,85-norrna-· len Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt und die? Trifluoressigsäure verdampft. Der ölige Rückstand wird mit Aether' vernetzt', wobei sich ein Pulver bildet. Das Pulver wird durch Filtration isoliert und über Nacht in einem Exsikka.tor; über Natriumhy-droxyd getrocknet, v/orauf es in 20 ml Dimethylformamid gelöst wird. Die Lösung wird unter Kühlung mit 1,28_: ml einer 10 #--igen Lösung von N-Aethylmorpholin in .Dimethylformamid neutralisiert. 7,30 mg (1 mMol) Z-ArgCMBS)-PrO-PrO-GIy-OH und 270 mg (1,5 mMol) HONB werden zu der Lösung gegeben und,darin gelöst, worauf 2^7 mg (1,2 mMol) .N,N' ^-Dicyclohexylcarbodiimid zugegeben werden. Das Gemisch wird 3 Tage lang bei k X und danach 1 Tag lang bei Raumtemperatar gerührt. Der gebildete Dicyclohexylharnstöff wird abfiltriert und das Dimethylformamid aus dem Filtrat verdampft» Der Rückstand wird durch Dekantieren mit Aether gewaschen und dreimal aus heissen Aethanol umkristallisiert. Ausbeute 1*4 g (8-4,0 Jf), Smp. 120,0 bis 125,0 ⁰C (Zersetzung), [a]p²-37,l^ (c = O₅56> Dimethylformamid). Rf²'= 0,06 (Aethylacetat/Pyridin/Esslgsäure/Wasser = 60:20:6:11). Elementaranalyse für ^C7n^Hg5^Opi^Ni5^S2*^2H2⁰ Berechnet.: C 55,62; H 5,91; N 13,1²J; S 3,76 Gefunden : C 55,62; H 5,87;. N 12,97; S 3,87

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Aminonäureanalyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C, 24 Stunden): Arg 1,94(2); Ser 0,96(1); Pro 3,08(3)·; GIy 0,96(1); Phe 1,98(2); durchschnittliche Rückgewinnung 98,0 %

(10) Herstellung von H-Arg(MBS)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-J>rp.Z Phe-Arg (MDS)-OH

4,0 g (2,4 mMol) Z-Arg(MBS)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(MBS)-ONBzI werden in 100 ml 80 #~iger wässriger Essigsäurelösung gelöst und 8 Stunden Icing der katalytischen Hydrierung über Palladiumschv/arz unterworfen. · Der Katalysator wird abfiltriert und der Rückstand im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wird mit einem Gemisch aus Aceton und Aether (1:1) verrieben und das resultierende Pulver gut mit heissem Aceton gewaschen. Ausbeute 3,4 g (100 JO, Smp. 170,0 bis l80,0 ⁰C (Zersetzung), [a]^ -51,3° (c = 0,50, Essigsäure).

Klementaranalyse für C^i.Hor-O, „N, ,-S *H~0

04 o5 J-i 15 2 2

Berechnet: C 54,19; H 6,18; N l4,8l; S 4,52 Gefunden : C 54,l6; H 6,35; N 14,76; S 4,58 Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C, 24 Stunden): Arg 2,07(2); Ser 0,93(1); Pro 2,90(3); GIy 1,00(1); Phe 1,95(2); durchschnittliche Rückgewinnung 100 %

(11) Herstellung von H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH (d.h. Bradykinin) durch Entfernung der MBS-Gruppe mit Methansulfonsäure

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280 mg (0,2 mMol) H-~Arg(MBS)-Pro-I'ro-Gly-Phe-Ser--Pro~Phe~Arg(MBS)-OH werden in einem Gemisch aus 0,12 ml Anisol und 3₅O ml Methansulfonsäure gelöst, worauf das Gemisch '10 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt wird. Aether wird zugesetzt und die resultiererde ölige Substanz durch Abdekantieren gewonnen. Die ölige Substanz, wird gut mit Aether gewaschen und in V/asser gelöst. Die Lösung wird durch;eine Säule (2,5 χ 10 cm) mit Amberlite IRA-410 (Ace- ■ tatform)-geleitet, um einen Ionenaustausch zu bewirken. Die ausströmenden Flüssigkeiten werden vereinigt und gefriergetrocknet. Ausbeute 233 mg.

Das erhaltene Pulver wird in V/asser gelöst und die Lösung in eine Säule (2,5 x 12,0 cia) mit Carboxymethylcellulose gegossen, die mit 0,01-normalem Ammoniumacetat gewaschen wird. Die Eluierung erfolgt nach der linearen Gradientenmethode mit 500 ml 0,01-normalem Ammoniumacetat und 500 ml 0,3-normalem Ammoniumacetat. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet. Ausbeute 178 mg. Die Reinigung wird unter den gleichen Bedingungen wiederholt. Ausbeute 170 mg, [o]^ -80,8° (c = 0,49, Wasser). Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C, 24 Stunden): Arg 2,03(2); Ser 0,96(1); Pro 3,03(3); GIy 1,00(1); Phe 2,02(2); durchschnittliche Rückgewinnung 94,3 %. Papierelektrophorese': pH = 1,9 (Acetatpuffer) - 4,2 cm.

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DünnechichtChromatographie:

R_f - 0,11 (Lösungsmittel: Aethylacetat/n-Butanol/

Essigsäure/Wasser - 1 :'l: 1:1) R„ = 0,72 (Lösungsmittel: n-Butanol/Pyridin/Eo-

sigsäure/V/asser = 30: 20: 6 : 2h )

Beispiel 7

Herstellung eines Inhibitors für das Angiotcnsin I in Angiotensin II überführende En^ym, der der Formel (Pyr)Glu-Trp-Pro-Arg-Pro~Gln-Ileu--Pro-Pro-0]I entspricht,

(1) Herstellung von Z-IIeu-Pro-Pro-0 'Bu

11,6 g (0,03 Mol) Z-Pro-Pro-0 Bu v/erden in Methanol 8 Stunden lang über Palladiumschwarz hydriert, worauf der Katalysator abfiltriert wird. Die Reaktion von H-Pro-Pro-0"Bu, das durch Einengen des Filtrates hergestellt wird, und Z-Ileu-ONB, das durch Kondensieren von 7,96 g (0,03 Hol) Z-Ileu-OH mit 5,^0 g (0,03 Mol) HONB und 6,19 g (0,03 Mol) DCC hergestellt wird, wird in 80 ml Dioxan 7 Stunden lang bei 80 ⁰C ausgeführt. Das Dioxan wird verdampft und der Rückstand in·Aethylacetat gelöst. Die Lösung wird mit 5 tigern wässrigem Natriumbicarbonat und 0,2-normaler Salzsäure gewaschen. Nach Verdampfen des Aethylacetats wird der ölige Rückstand durch-Säulenchromatographie über Kieselgel mit Chloroform gereinigt.

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Ausbeute 12,0 g (77**1 %) einer öligen Substanz.

(2) Herstellung von Z-Gln-Ileu-Pro~Pro--0 Bu

12,0 g (0,0233 Mol) Z-Ileu-Pro-Pro-oSu werden in Methanol 8 Stunden lang über Palladiumschwarz hydriert. Das resultierende H-Ileu-Pro-Pro-0 Bu (6,5 g, 0,0233 Mo].) und 4,17 g (0,0233 Mol) HONB werden in 50 ml Dimethylformamid gelöst, worauf die Lösung unter Kühlen auf 0 ⁰C-mit-4,81 g (0,0233 Mol) DCC versetzt .wird. Das Gemisch wird 12 Stunden lang gerührt. Der gebildete Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Filtrat mit V/asser verdünnt, worauf mit Aethylacetat extrahiert wird. Die Aethylacetatschicht wird mit 0,2-normaler Salzsäure und 5 #-igem wässrigem Natriumbicarbonat gewaschen, getrocknet und destilliert, um das Aethylacetat zu verdampfen. Der ölige Rückstand wird mit Petroläther versetzt, wobei sich Kristalle bilden. Die Kristalle werden durch Filtration isoliert und in Aothylacetat gelöst. Die Lösung wird mit 2,5 ml Ν,Ν-Dimethylaminopropylamin versetzt, worauf man das Gemisch 3 Stunden lang stehen lässt. Die Aethylacetatschicht wird mit 0,2-normaler Salzsäure gewaschen und das Aethylacetat verdampft. Der Rückstand wird mit Petroläther verrieben. Das resultierende Pulver wird durch Filtration isoliert und aus Aethanol umkristallisiert. Ausbeute 3,8 g (25,3 %), Smp. 98 bis 100 ⁰C, [αΐ^-δ^^⁰ (c = 0,69, Dimethylformamid).

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Elementaranalyse für 0.,-JKgOgNj.₂ Berechnet: C 60,72; H 7,72; N 10,73 Gefunden : C 60,38; H 7,57; N 10,69

(3) Herstellung von Z-Arg(MBS)-Pro~O^tBu

10,0 g (0,03 Mol) Z-Pro-0 Bu werden in herkömmlicher Weise über Palladiumschvrarζ hydriert, urn H-Pro-0 Bu herzustellen. Das oben hergestellte H-Pro-0 Bu sowie Z-Arg(MBS)-OH, das aus 21,0 g (0,03 Mol) Z-Ai^g(MBS)-OH-DCHA-CH CN hergestellt wurde, und 5,4 g (0,03 Mol) HONB werden in 50 ml Dioxan gelöst; 6,2 g (0,03 Mol) DCC werden zugesetzt, worauf das Gemisch in einem kalten Raum bei 4 ⁰C 48 Stunden lang gerührt wird. Der gebildete Dicyclohexy!harnstoff wird abfiltriert und das Piltrat destilliert, um das Dioxan zu verdampfen. Der Rückstand wird in Aethylacetat gelöst. Die Lösung wird mit 5 52-igem wässrigem Natriumbicarbonat und 0,2-normaler Salzsäure gewaschen, getrocknet und destilliert, um das Aethylacetat zu verdampfen. Der Rückstand wird mit Petroläther verrieben, worauf die resultierenden Kristalle zweimal aus 50 #~igem Aethanol umkristallisiert werden. Ausbeute 13,0 g (69,0 %), Smp. 137 bis 139 ⁰C, [0(1^-28,O⁰ (c = 0,53, Dimethylformamid) .

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Elementaranalyse für C,₀Hj ..ΟοΝ,-S

Berechnet: C 57,0*1; H 6,54; N 11,09; S 5,07 Gefunden ■:■ C 56,70; H 6,67; N 11,20; S 5,10

(4) Herstellung von Z-PrO-ArR(MBS)-PrO-O¹^Bu

12.6 g (0,02 Mol) Z-Arg(MBS)~Pro-O^tBu werden nach dem herkömmlichen Verfahren 16 Stunden lang in Methanol hydriert. Das oben hergestellte H-Arg(MBS)-Pro-:0 Bu und 8,^;2 g (0,02 Mol) Z-Pro-ONB werden in 100 ml Dioxan gelöst, worauf die Lösung 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt wird. Das Dioxan wird verdampft und der Rückstand in Aethylacetat gelöst. Die Lösung wird mit 5 5£-igem wässrigem Natriumbicarbonat und 0,2-normaler Salzsäure gewaschen, getrocknet und destilliert, um das Aethylacetat zu •verdampfen. Der Rückstand wird mit Aether verrieben und das resultierende Pulver aus einem Gemisch aus Aethylacetat und Aether umgefällt. Ausbeute 12,3 g (84,2 50, Smp. 90 bis 95 ⁰C (Zersetzung), [a]^¹-55»2° (c = 0,54, Dimethylformamid) .

Elementaranalyse für C^₁-H₁._qO_QN_fiS

Berechnet: C 57,60; H 6,77; N 11,52; S 4,39 Gefunden : C 57,40; H 6,77; N 11,30; S 4,27

(5) Herstellung von Z-Trp-Pro-Arg(MBS)-Pro-0 Bu

11.7 g (0,016 Mol) Z-Pro-Arg(MBS)-Pro-O^tBu werden in Methanol gelöst und nach dem herkömmlichen Verfahren

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hydriert. Das oben hergestellte H-Pro-Arg(MBS)-Pro-0 Bu sowie Z-Trp-ONB, das aus 5,²J E (0,016 Mol) Z-Trp-OH hergestellt wurde, 2,9 E (0,016 Mol) HONB und 3,3 g (0,016 Mol) DCC werden in 150 ml Dioxan gelöst. Die Lösung wird 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Dioxan wird im Vakuum verdampft und der Rückstand in Aethylacetat gelöst. Die Aethylacetatschicht wird mit 5 $~igem wässrigem Natriumbicarbonat und 0,2-normaler Salzsäure gewaschen und getrocknet. Das Aethylacetat wird verdampft und der Rückstand mit Aether verrieben. Das resultierende Pulver wird in Aethylacetat gelöst und dann mit 1 ml Ν,Ν-Dimethylaminopropylamin versetzt. Man lässt das Gemisch 1 Stunde lang stehen und wäscht die Aethylacetatschicht mit 0,2-normaler Salzsäure. Nach dem Verdampfen des Aethylacetats wird der Rückstand mit Aether verrieben und das resultierende Pulver durch Filtration isoliert. Ausbeute 11,5 g (79,0 %), Smp. 120 bis 125 ⁰C (Zersetzung), [α]ρ^]"-53,5° (c ="0,5*1., Dimethylformamid).

Elementaranalyse für ^ci}(5^H58°io^N8^S '^1/2H2° Berechnet: C 59,79; H 6,^3; N 12,13; S 3,47 Gefunden : C 59,73; H 6,37; N 11,90; S 3,^3

(6) Herstellung von (Pyr)Glu-Trp-Pro-Arg(MBS)-Pro-OH

9,15 g (0,01 Mol) Z-Trp-Pro-Arg(MBS)-PrO-O¹⁵Bu werden in Methanol nach dem herkömmlichen Verfahren hydriert

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. Das resultierende H-Trp-Pro-Arg(MBS)-PrO-O¹^u, 1,29 β (0,01 Mol) (Pyr)Glu-OII) und 1,79 E (0,01 Mol) HONB werden in 30 ml Dimethylformamid gelöst. Bei. 0 ⁰C werden 2,06 g (0,01 Mol) DCC zugesetzt, worauf dan Gemisch 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt wird. Der gebildete Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Dimethylformamid im Vakuum verdampft. Wasser wird zugesetzt und die resultierende ölige Substanz durch Dekantieren gewonnen. Die ölige Substanz wird in Aethanol gelöst und mit Wasser versetzt. Die resultierende ölige Substanz wird wieder durch Dekantieren gewonnen. Die ölige Substanz'wird in Aethanol gelöst und mit Aethylacetat versetzt. Das resultierende Pulver wird in 80 ml Trifluoressigs.äure, die 1 ml Yhioglycolsäure und 4 ml Anisol enthalten, gelöst, worauf man die Lösung kO Minuten lang bei Raumtemperatur stehen lässt. Der grösste Teil der Trifluoressigsäure wird im Vakuum verdampft und der Rückstand mit Aether verrieben, worauf das resultierende Pulver durch Filtration isoliert wird. Ausbeute 7*8 g (83,8 Ji), Smp. 130 bis 135 ⁰C (Zersetzung), [a]_ß -29,2° (c = O₃60, Dimethylformamid). Elementaranalyse für C "Pk „0 N_qS
Berechnet: C 53,72; H 6,12; N 14,46; S 3*68 Gefunden : C 53*68; H 5,84; N 13,93;' S 3,40

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(7) Herstellung; von (Pyr)GI u-Trp-Pro--Arp;(MBS) -Pro-Gin-Ileu-Pro-PrO"0^tHu

1,29 g (0,002 Mol) Z-Gln-Ilou-Pro-Pro-O^tBu werden in Gegenwart von 1 Aequivalent Salzsäure in Methanol der herkömmlichen katalytischen Hydrierung unterworfen. Das resultierende H--Gln-Ileu-Pro-Pro-O^tBu'HCl, 1,67 g (0,002 Mol) Pyr (GIu )--Trp-Pro~Arg (MBS )~Pro-0H, 537 mg (0,003 Mol) HONB und 0,26 ml (0.002 Mol) N-Aethylmorpholin werden in 15 ml Dimethylformamid gelöst. Bei 0 ⁰C werden '!95 mg (0,0024 Mol) DCC zugesetzt, worauf dab Gemisch in einem kalten Raum 12 Stunden lang bei *J ⁰C und bei Raumtemperatur 3 Tage lang gerührt wird. Der gebildete Dicyelohcxy!harnstoff wird abfiltriert und das Filtrat zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird mit Aether verrieben und das resultierende Pulver durch Säulenchromatographie über Kieselgel (3,0 χ 22,0 cm) mit dem'Lösungsmittel Rf² (Aethylacetat/ Pyridin/Essigsäure/Wasser = 60:20:6:11) gereinigt. Ausbeute

I²¹

¹D

2,2 g (83 30, Smp. 175 bis'178 ⁰C (Zersetzung), [α]^2ΐ|-68,1° (c = 0,56, Dimethylformamid).

(8) Herstellung von (Pyr)Glu-Trp-Pro-Arg-Pro-Gln-Ileu-Pro-Pro-OH durch Entfernung der MBS-Gruppe mit Methansulfonsäure

266 mg Pyr(GIu)-Trp-Pro-Arg(MBS)-Pro-Gln-Ileu-Pro-Pro-0 Bu werden in einem Gemisch aus 0,12 ml Anisol, 0,03 ml Thioglycoüsäure und 3»0 ml Methansulfonsäure gelöst. Die Lö-

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sung wird bei Raumtemperatur 30 Minuten lang gerührt und mit Aether versetzt. Die resultierende ölige Substanz wird durch Dekantieren gewonnen und gut mit Aether gewaschen. Die ölige Substanz wird in Wasser gelöst und die Lösung durch eine Säule (2,5 x 12,0 cm) mit Amberlite IRA-410 (Acetatform) geleitet, um einen Ionenaustausch auszuführen. Die ausströmende Flüssigkeit wird mit 20 ml 1-normalem Ammoniupiacetat versetzt und die gemischte Lösung auf eine Säule (2,5 x 10,0 cm) mit'Amberlite XAD-2, die mit 100 ml 0,01-normalem Ammoniumacetat gewaschen wird, aufgebracht. Das Eluieren erfolgt nach der linearen Gradienteneluierungs· methode mit 500 ml 0,01-normalem Ammoniumacetat und 500 ml 50 /£-igem Aethanol, die 0,5 % Essigsäure enthalten. Ausbeute 130 mg. Das erhaltene Produkt wird in 0,01-normalem Ammoniumacetat gelöst und die Lösung durch-eine Säule (2,5 x 10 ei) mit Carboxymethylcellulose geleitet. Die ausströmende Flüssigkeit wird vereinigt und gefriergetrocknet. Ausbeute 125 mg, [o]^ -l6O,4° (c = 0,48, Wasser). Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure', 110 ⁰C, 24 Stunden): Arg 1,02(1), Trp 0*90(1); GIu 2,10(2); Pro 3,96(4); Heu 1,02(1); durchschnittliche Rückgewinnung 91_s0 %. Dünnschichtchromatographie: Rf = 0,67 (Lösungsmittelsystem: n-Butanol/Pyridin/Essigsäure/Wasser = 30:20:6:24)

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(8 ' ) IIwrtyko3J ung von (Pyr)O 1 u^Trp-Pro-ArQ-TrO-GIn-I] euj Pro-Pro-OH durch Ei;tf &*21Hⁿ8 ^dtirJi⁵^Ili'^IlHEl-l^c· r»iitFluorruij fon-

266 mg (Pyr)Glu~Trp-Pro~Arg(MBS)-Pro-Gln-Ilou-Pro-Pro-0 Bu v:erdcn in einem Gemisch aus 0,12 ml Anisol, 0,03 ml Th3oglycolsäure und 3>0 nil Fluorsulfonsäure gelöst Die Lösung wird 30 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt und mit Aether- versetzt. Die sich ausscheidende ölige Substanz wird durch Dekantieren gewonnen, gut mit Aether gewaschen und in V/asser gelöst. Die Lösung wird durch eine Säule (2,5 χ 12,0 cm) mit Amberlite IRA-lJ 10 (Acetatform) geleitet, um einen Ionenaustausch auszuführen. 120 ml 1-normales Ammoniumacetat werden zu der ausströmenden Flüssigkeit gegeben, worauf das Gemisch auf eine Säule (2,5 χ 10,0 cm) mit Amberlite XAD-2, die mit 100 ml 0,01-normalem Ammoniumacetat gewaschen wird, aufgebracht wird. Das Eluieren erfolgt nach der linearen Gradientenmethode mit 500 ml 0,01-normalem Ammoniumacetat und 500 ml 50 %-igem Aethanol, die 0,5 % F,ssigsäure enthalten. Ausbeute 130 mg. Die erhaltene Substanz wird in 0,01-normalem Ammoniumacetat gelöst und die Lösung durch eine Säule (2,5 x 10 cm) mit Carboxymethylcellulose geleitet. Die ausströmende Flüssigkeit wird vereinigt und gefriergetrock net. Ausbeute 125 mg, [ot]_D -159,3° (c = 0,60, Wasser).

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Amirior.äurearialyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C₅ 2 H Stunden) Arg I₅Ol(I); Trp 0,89(1); GIu 1,90(2); Pro Ί,00(4); lieu 1,00(1) ; durchschnittliche Rückgewinnung 90,2 %. Dünnsohichtchromatographie: Rf =0,67 (Lösungsmittel: n-Butanöl/Pyridin/Eösigsäure/Wasser = 30: 20: 6 : ?J\) .

(8" ) Herstellung- 'Von' '(Pyr')Glü--Trp-^;Pro-Arg-Pro--Gln--T:i eu-Pro-PrO-OH/ 'duröh RntT^rnuhg der MBS-Gruppe mit Bortrist-ri-j ^; fluorncetat

ί»66 rag (0₃2 irMol) (Pyr)Glu-Trp-Pro-Arg(MBS)-Pro-

.. ,- . ■■!.■·■.,. r - - , ■ ■■

Glu-Ileu-Pro-Pro-0 Bu werden in 30 ml Trifluoressigsäure gelöst, worauf die Lösung bei 0 ⁰C 1 Stunde lang mit 75 Aequivalenten BTPA behandelt wird. Die Trifluoressigsäure _wird im Vakuum verdampft und der Rückstand in 100 ml V/asser gelöst * worauf .'.das'-unlösliche: Material: ab.f Iltriert wird. /-_ ■. Das Filtrafc wird gefriergetrocknet und der dabei erhaltene ' Rückstand in einer kleinen Menge Wasser gelöst. Die Lösung wird auf eitler Säule. (2,0 χ 10,0 cm) mit Amberlite IRA-iJlO. (Acetatförm) dem ionenaustausch unterworfen. Die ausströmende Flüssigkeit (200 ml) wird mit 1,5 g Ammoniumacetat versetzt und das Gemisch auf eine Säule (2,5 x 1*1,0 cm) mit Amberlite XAD-2, die mit 100 ml 0,01-molarem Ammoniumacetat gewaschen wird, aufgebracht. Das Eluieren erfolgt nach der exponentiellen Gradientene'uierungsmethode mit 1000 ml 0,01-molarem Ammohiumacetai. ;nd 1000 ml 50 ^-igem

Λ '

SÖ9884/1139U \λ f^--o?

Methanol j die 0,5 % Essigsäure enthalten. Die gewünschten Fraktionen v.'crden vereinigt, worauf das Acthanol verdampft wird. Der Rückstand v;ird gefriergetrocknet und der dabei erhaltene pulvrige Rückstand in Wasser gelöst. Die Lösung wird durch eine Säule (2,0 χ 7>5 ein) mit Carboxymethylcellulose geleite.t. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet. Ausbeute 130 mg, [α]" -152,8 (c = 0,19, V/asser).

Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C, 24 Stunden): Arg 1,02(1); Trρ 0,9¹J(I); GIu 2,04(2); Pro 3*98(4); Heu 1,00(1); durchschnittliche Rückgewinnung 92,0 %.

Beispiel 8

Herstellung von GnRH [d.h. (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₀

(1) Herstellung von Z-Arg(MBS)-Pro-OH

(a) Das Z-Arg(MBS)-OH, das aus 14,0 g (0,02 Mol) Z-Arg(MBS)-OH-DCHA-CH CN hergestellt ist, und 4,0 g (0,022 Mol) HONB v/erden in 100 ml Dioxan gelöst. Unter Kühlen werden 4,33 g (0,021 Mol) DCC zugesetzt, worauf das Gemisch über Nacht bei 4 ⁰C gerührt wird. Der gebildete Dicyelohexylharnstoff wird abfiltriert. Das Filtrat wird mit einer Lösung von H-Pro-OMe, das aus 4,98 g (0,03 Mol) H-Pro-OMe-HCl und 4,2 ml (0,03 Mol) Triäthylamin hergestellt wurde, in 100 ml Dimethylformamid kombiniert, worauf das

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Gemisch 2 Tage lang bei Raumtemperatur gerührt wird. Nach dein Verdampfen des Dioxans wird das zurückbleibende. Dimethylformamid mit Wasser verdünnt, worauf das resultierende OeI mit Aethylacetat extrahiert wird. Die Aethylacetatschicht wird mit 5 #~igem wässrigem Natriurnhydrogencarbone.t und mit 0,2-normaler Salzsäure gewaschen, worauf 2,5 ml Ν,Ν-Dirnetbylarninopropylamin zugesetzt werden. Man lässt das Gemisch 1 Stunde lang stehen. Die Aethylacetatschicht wird mit'1-normaler Salzsäure gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Durch Verdampfen des Aethylacetats erhält man 10 g einer öligen Substanz.

Die ölige Substanz wird in 100 ml Methanol gelöst und mit 50 ml 1-normaler Natronlauge versetzt. Man ■lässt das Gemisch 4 Stunden lang bei Raumtemperatur stehen. Eine angemessene Menge Zitronensäurekristalle wird zugesetzt, um das Gemisch anzusäuern, worauf das Methanol durch Verdampfen entfernt wird. Der ölige Rückstand wird mit Aethylacetat extrahiert. Die Aethylacetatschicht wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und der Destillation im Vakuum unterworfen. Der ölige Rückstand wird durch Säülenchromatographie über Kieselgel (Lösungsmittel: Chloroform, Säule 6,0 χ 15jO cm) gereinigt. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und eingeengt. Der Rückstand wird mit■ Aether verrieben, wobei die gewünschte Verbindung als Pulver erhalten wird. Ausbeute 3,5 g (30,5 %), Smp. 90,0 bis

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93,0° (Zersetzung), [a]jp-27₅5° (c = 0,59, Methanol). Element o.ranaly se für C₂^H-,,-,OqN₁^S-H₃O Berechnet: C 5?,60; II 5,9²I; N 11,80; S 5,¹IO Gefunden : C 52,64; H 5,56; N H₃2.1; S 5,43

(b) ¹IOO mg Z~Arg(MBS)~Pro-0 Bu v/erden in Trifluoressigsjlure gelöst, v;orauf man die Lösung 45 Minuten lang bei Raumtemperatur belässt. Nach dein. Verdampf en des grössten Teiles der Trifluoressigsäure wird der ölige Rückstand in AethyHacetat gelöst. Die Aethylacetatschieht wird mit Wasser gewaschen und getrocknet. Nach dem Verdampfen des Aethylacetats im Vakuum wird der ölige Rückstand mit Aether verrieben, wobei ein Pulver erhalten wird. Ausbeute 310 mg, Smp. 9.3,0 bis 95,0 ⁰C, [a]jp-29,2° Ce » 0,55, Methanol). Elementaranalyse für C^gH,,OnN^S·HpO Berechnet: C 52,60; H 5,9¹I; N 11,80; S 5,40 Gefunden : C 52,64; H 5,56; N 11,69; S 5,17

(2) Herstellung von Z-

3,^5 g (6 mMol) Z-Arg(MBS)-Pro-OH und 1,29 g (7,2 mMol) HONB werden in Dioxan gelöst, worauf unter Kühlung 1,36 g (6,6 mMol) DCC zugesetzt werden. Das Gemisch wird 5 Stunden lang gerührt und der gebildete Dicyelohexylharnstoff durch Filtrieren entfernt; das Piltrat wird mit 740 mg (10 mMol) H-GIy-NHp versetzt und das Gemisch über Nacht gerührt. Das Dioxan ward verdampft und der ölige Rückstand in Aethylacetat gelöst. Die Lösung wird mit 5 %-

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s £ r f w e κ c ο a

- 4ο -

i gem Natriumbicarboriat und mit 0,2-norrnnler Salzsäure gewaschen und getrocknet. Das Aethylacetat wird verdampft
und der ölige Rückstand mit Petroläthor verrieben. Das resultierende Pulver v/ird aus Aethylacetat und Petroläther
unigefällt. Aubeute 2,8 g (74,0 %) , Snip. 90 bis 95,0 ⁰C
(Zersetzung), [a]Jp-19,2° (c = 0,53, Methanol).
Elementaranalyce für CpgH-ryOgN-S
Berechnet: C .53,24; H 5,90; N 15,52; S 5,08
Gefunden : 'C 53,95; H 6,32; N 14,97; S 4,40

(3) Herstellung von Z-Leu-Arg(HBS)-PrO-GIy-NH₀

2,7 g (0,0042 Mol) Z-Arg(MBS)-Pro-Gly-NH₂ werden in 50 ml Methanol gelöst und bei Raumtemperatur 8 Stunden lang der k'atalytischen Hydrierung über Palladiumschwarz
unterworfen. Das Methanol wird verdampft und der ölige
Rückstand in 50 ml Dioxan gelöst. Diese Lösung wird mit
Z-Leu-ONB, das aus 11,11 g.(O,OO42 Mol) Z-Leu-OH, 752 mg
(O",OO42 Mol) HONB und 866.mg (0,0042 Mol) DCC hergestellt ist, versetzt und das Gemisch über Nacht gerührt. Das Dioxan wird im Vakuum verdampft und der ölige Rückstand mit einem Gemisch aus Aethylacetat und n-Butanol (1:1) extrahiert. Die organische Schicht wird mit 5 #-igem Natriumbicarbonat und mit 0,2-normaler Salzsäure gewaschen und getrocknet. Das Lösungsmittel wird verdampft und der Rückstand mit^ Aether verrieben. Das resultierende Pulver wird

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au.'- Aetbylaeetat umgefällt. Ausbeute 2,2 g (70,3 JS), Snip. 123,0 bis 130,0 "C, [«]|p--35,6° (c = 0,57; Methanol).

Elementaranalyse für C^JI_ijCO NyS-l/2H_?0 Berechnet: C 5'1,3O; II 6,68; N 1^1 ,PWl; S 4,25 Gefunden : C 5^Ji,-l8; II 6,52; N l4,68; S >i ,33 Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C, 24 Stunden) Arg 1,03(1); Pro l,00(i)j. GIy 0,97(1); Leu 0,93(1); durchschnittliche Rückgewinnung 98,0 %.

(^ij) Herste IJLuns__von_JPyr)GIu-His-Trp-Ser-T\y^^^^ Arfl(MBS)-Pro-Gly-NHp

1,3^ g (I₅B raMol) Z-Leu-Arg(MBS)-PrO-GIy-NH₂ wer-' den in 70 rnl Methanol gelöst und 8 Stunden lang der katalytischen Hydrierung über Palladiumschwarz unterworfen. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wird über Nacht in einem Exsikkator im Viikuum getrocknet und in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Diese Lösung wird mit 1,37 g (1,8 mMol) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH und 645 mg (3,6 mMol) HOWB versetzt und das Gemisch auf -10 ⁰C abgekühlt. 7*13 mg (3>6 mMol) DCC werden zugesetzt, worauf das Gemisch über Nacht gerührt wird. Der gebildete Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Piltrat im Vakuum destilliert. Der Rückstand wird mit Acetonitril versetzt. Das resultierende Pulver wird durch Filtration isoliert und zweimal 509884/1139

durch Umfällungen aus Aothanol gereinigt. Ausbeute 1,78 g

(73,0 %), Smp. 180 bis 185 ⁰C (Zersetzung), [cx]£³-27,4°

(c = 1,07, DMP).

Elementaranalyse für ^C5₂ ^H8l°l6^N17^S'^H2^O

Berechnet: C 5¹1,33; H 6,10; N 17 ,38 ; ■ S 2,3^;4 Gefunden : C 5^;4»¹17 ; H 6,23; N 16,6'I; S 2,27

(5) Herst ellung von (Pyr)Glu- Hi. s-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Ar g-Pro~G Iy-NIh, (d.h. GnRH)

676 mg (0,5 mMol) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser~Tyr-Gly-Leu-Arg(MBS)-Pro-Gly-NHp v/erden 7,u einem Gemisch aus 7 ml Methansulfonsäure, 0,5 ml Anisol und 0,05 ml Thioglycolsäure gegeben, worauf das Gemisch 1 Stunde lang bei Raumtemperatur gerührt wird. Aether wirä zugesetzt und die resultierende ölige Substanz durch Dekantieren mit Aether gewaschen. Die ölige Substanz wird in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung durch eine Säule (2,5 x 10,0 cm) mit Amberlite IRA-AlO (Acetatform) .geleitet. Die ausströmende Flüssigkeit (200 ml) wird in eine Säule (2.,5 x 14,0 cm) mit Carboxymethylcellulose gegossen, die mit 500 ml 0,005-molarem Ammoniumacetat eluiert wird. Das Eluieren erfolgt nach der linearen Gradienteneluierungsmethode mit 5OO ml 0,005-molarem Ammoniumacetat und 500 ml 0,2-molarem Ammoniumacetat. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und auf eine Säule (2,5 x 12,0 cm) mit Amberlite XAD-2

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aufgebracht. Die Säule wird mit 200 ml 0,005-niolarem Ammoniumacetat gewaschen und nach der linearen Gradientenmethode mit ;j00 ml 0,00[>-molarein Ammoniumacetat und [500 ml 60 %■■ igem wässrigem Aethanol eluiert. Die gewünschten Fraktionen worden vereinigt, worauf das Aethanol verdampft wird. Der Rückstand wird gefriergetrocknet und der dabei erhaltene Rückstand in 0,1-molarer Essigsäure gelöst. Die Lösung wird durch-eine Säule (3 x 130 cm) mit Sephadex LH-20 geleitet, ■ worauf die gewünschten Fraktionen vereinigt und gefriergetrocknet werden. Ausbeute 375 mgj [«]_n -50,5 (c = 0,ll9_? 5 % wässrige Essigsäure).

Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure?, 110 ⁰C₅ ?J\ Stunden): His 0,96(1); Arg 0,96(1); Trp 0,83(1); Ser 0,89(1); GIu .1,06(1); Pro 1,02(1); GIy 2,06(2); Leu 1,00(1); Tyr 1,00(1); durchschnittliche Rückgewinnung 89,0 %.

Die Verbindung zeigt die gleichen chemischen und biologischen Eigenschaften wie eine authentische Probe.

Beispiel 9 Herstellung von Tuftsin

(1) Herstellung von Z-Pro-Arg(MBS)-OH

2,76 g (8 mMol) H-Arg(MBS)-OH werden in 15 ml Dimethylformamid gelöst, worauf man unter Kühlung 1,12 ml (8 mMol) Triät'hylarain und danach 3,28 g (8 mMol) Z-Pro-ONB

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zt. Das Gemisch wird 6 Stunden- lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wJrd mit 1,5 ml Essigsaure versetzt und das Dimethylformamid im Vakuum verdampft. Der ölige Rückstand wird in Aethylacetat gelöst und die Aethyl acetatschicht dreimal mit Wasser gewaschen. Das Aethylacetat wird im Vakuum verdampft. Der ölige Rückstand_wird mit Aether verrieben und aus einem Gemisch aus Chloroform und Aether umgefällt. Ausbeute 3,9 g (85,0 50, Smp. 80,0 bis 85,0 ⁰C (Zersetzung), [a]^'-l6,3° (c = 0,58, DMP). Elementaranalyse für C₂^H,,OgN^S₂ Derechnet: C 53,¹H; H 5,86; N 12,00; S 5,^9 Gefunden : C 53,37; H 5,78· N 11,66; S 5,20

(2) Herstellung von BOC-Lys(%)-Pro-Arg(MBS)-OH'

3,i|6 g (6 mMol) Z-Pro-Arg(MBS)-OH werden in 100 ml eines Gemisches aus Methanol, Wasser und Essigsäure (6:3:1) gelöst und 8 Stunden lang der katalytischen Hydrierung über Palladiumschwarz unterworfen. Der Katalysator wird entfernt und das Piltrat im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit Wasser versetzt und das Wasser im Vakuum verdampft. Dieses Verfahren wird dreimal wiederholt, um die Essigsäure zu entfernen. Der Rückstand wird in 10 ml Dimethylformamid gelöst, worauf 0,84 ml (6 mMol) Triäthylamin und 3,36 g (6 mMol) BOC-Lys(Z)-OTcp zugegeben werden. Das Gemisch wird 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. 2 ml Essigsäure wurden zugesetzt, worauf das Dimethylformamid im Vakuum

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verdampft wird. Der¹ Rückstand wird in Aothylacetat gelöst. Die Aethylacetatschicht wird, dreimal mit Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum destilliert, um das Aothyl acetat zu verdampfen. Der Rückstand wird durch Säulenchromatographie über Kieselgel [Säule 6,0 χ 6,0 cm, Lösungsmittel Chloroform/Methanol (97:5)1 gereinigt. Ausbeute 3,4 g (70,9 %), Snip. 103,0 bis 109 ⁰C (Zersetzung)., [a]^-19^° (c = 0,70, DMP).
Elementaranalyse für C Hp₇O₁ -N₇S-Iz^H₂O Berechnet: C 5'1,67; H, 6,69; N 12,06; S 3,9*» Gefunden : C 54,72; Z 6,70; N 11,78; S 3>8O

(3) Herstellung von Z-Thr-Lys(Z)-Pro-Arg(MBS)-OH

1,86 g (2,3 mMol) BOC-Lys(Z)-Pro-Arg(MBS)-OH werden in 10 ml Trifluoressigsäure gelöst, worauf die Lösung 20 Minuten lang bei 10 ⁰C gerührt wird. Der grösste Teil der Trifluoressigsäure wird im Vakuum verdampft und Aether zugesetzt. Der resultierende Niederschlag wird durch Filtration isoliert und getrocknet. Das Produkt wird in 10 ml Dimethylformamid gelöst, worauf 0,64 ml (4,6 mMol) Triäthylamin unter Kühlen mit Eis zugegeben und dann 9552 mg (2,3 mMol) Z-Thr-ONB zugesetzt werden. Das Gemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. 2 ml Essigsäure werden zugegeben, worauf das Dimethylformamid im Vakuum verdampft wird. Der ölige Rückstand wird mit Aether ver-

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- Ji 6 -

setzt. Das resultierende Pulver wird durch Filtration isoliert und aus einem Gemisch aus Aelhylacetat und Aether

umgei'ällt. Ausbeute 2,1 g (95,5 %) , Smp. 90,0 biß 9[3,O⁰C

Elementaranalyse für C₁, ,)l_rO0. -,NoS

44 'jo 13 ο

Berechnet: C 56,28; H 6,23; N 11,93; S 3,42 Gefunden : C 55,99; H 6,22; N 11,56; S 3,36

(4) Herstellung von H-Thr-Lys-Pro-Arg-OH (d.h. Tufts^irQ

1,88 g (2 mMol) Z-Thr-Lys(Z)-Pro-Arg(MBS)-OH werden bei Raumtemperatur 45 Minuten lang mit einem Gemisch aus 1,0 ml Anisol und 17 ml Methansulfonsäure behandelt. Aether wird zugesetzt und die resultierende Ölige Substanz unter Dekantieren gut mit Aether gewaschen. Die ölige Substanz wird in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung durch eine Säule (2,5 χ 10,0 cm) mit Amberlite lRA-410 (Acetatform) geleitet. Die ausströmende Flüssigkeit (200 ml) wird vereinigt und auf eine Säule (2,5 x 15,0 cm) mit Carboxymethylcellulose aufgebracht, die mit 500 ml V/asser gewaschen wird. Das Eluieren erfolgt nach der linearen Gradientenmethode mit 500 ml Wasser und 500 ml 0,2-molarem Ammoniumacetat. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet· Der dabei erhaltene Rückstand wird in 0,1-molarer Essigsäure gelöst und die Lösung durch eine Säule (3,0 χ 130,0 cm) mit Sephadex LH-20 geleitet. Die gewünsch-

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ton Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet. Ausbeute 840 mg, f α] jp-60,2⁰ (c = 0,55, 5 %iße Essigsäure) Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C₅ 24 Stunden) Lys 1,01(1); Arg I₃OO(I); Thr 0,99(1); Pro 1,06(1); durchschnittliche Rückgewinnung 100 %.

Das erhaltene Produkt zeigt eine starl:e_ chemotaktisehe Wirkung.

Beispiel 10
Herstellung; von H-Thr-Lys-Arg-OH

Herstellung von BOC-Lys(Z)-Arg(MBS)-OH

2,76 g (8 UiMoI) H-Arg(MBS)-OH werden in 15 ml Dimethylformamid gelöst, worauf unter Eiskühlung 1,12 ml (8 mMol) Triäthylamin zugesetzt und dann ^,^8 g (8 mMol) BOC-Lys(Z)-OTcp zugegeben werden. Das Gemisch wird 48 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt- 3 ml Essigsäure werden zugegeben, worauf das Dimethylformamid im Vakuum verdampft wird. Der ölige Rückstand wird in Aethylacetat gelöst und die Aethylacetat schicht mit Wasser gewaschen.' Das Aethylacetat wird im Vakuum verdampft und der Rückstand mit Aether verrieben. Das resultierende Pulver wird aus Acetonitril und Aether umgefällt. Ausbeute 4,8 g (84,4 %), Smp. 95,0 bis 100 ⁰C (Zersetzung), [_a]^-i\₉2° (c = 0,69, DMF).

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- J|8 -

Ele;::-;ii,ar&nalyf.o für C H_i(gO-^NgS

Doro-hnet: C 5^]l,38; H 6,156; N 11,89; S Ί, ¹^l Gc-fuiicien : C 13¹1,06; Jl 6,49; N 11,8*1; S Ί,ΐ|8

riP: von Z-Thr-Lys (Z)-Arg(MBS) -OH

'1,2*1 g (6 iriMol) BOC-Lys(Z)-Arg(MBS)-OH werden in 30 ml TrifluorosoigRiiure gelöst, worauf die Lösung 20 Minuten Ir-Mg bei 10 ⁰C gerührt wird. Der grösste Teil der Trifluofc-fiS-igsäure v;ird im Vakuum verdampft und Aether zugesetzt. Der resultierende Niederschlag wird durch Filtration isoliert und getrocknet. Das Produkt wird in 20 ml Dimethylformamid gelöst, worauf unter Eiskühlung I₅68 ml (12 mltol) Triethylamin zugesetzt und dann 2,^9 g (6 mMol) Z-Thr-ONB zugegeben werden. Das Gemisch wird 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. 3 ml Essigsäure werden zugegeben, worauf das Dimethylformamid im Vakuum verdampft wird. Der ölige Rückstand wird in Aethylacetat gelöst. Die Aethylacetatschicht wird mit Wasser gewaschen und der Destillation im Vakuum unterworfen, um das Aethylacetat zu verdampfen. Der ölige Rückstand wird mit Aether verrieben und aus Aethylacetat und Aether umgefällt. Ausbeute ¹IJ g (93,1 %), Smp. 77 bis 82,0 ⁰C (Zersetzung), [α]^-0,9° (c = 0,53,

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Klei.-.'intoranalyse für C._/cJIi--, Ο-, _?NyS

Berechnet: C 55,63; H 6,11; N 11,65; S 3,8l Gefunden : C 55,30; II 6,18; N 11,55; S 3,95

(3) !/mil- ⁽Ι1Ι_^{υ !}?ß_Y-°iLJt^IlzMiizALcJl

1,68 g (2 lnMol) Z-TlIr-LyS(Z)-ArS(MBS)-OH werden bei Raumtemperatur '15 Minuten lang mit einem Gemisch aus 1,0 ml Anisol und 17,0 ml Methansulfonsäure behandelt. Aether wird zugesetzt und die resultierende ölige Substanzgut mit Aether gewaschen. Die ölige Substanz wird in 10 ml

Wasser gelöst und die Lösung durch eine Säule (2,5 x 10,0 cm) mit Amberlite IRA-^lO (Acetatform) geleitet. Die ausströmende Flüssigkeit (200 ml) wird vereinigt und auf eine Säule (2,5 x 15,0 cm) mit Carboxymethylcellulose aufgebracht, die mit 200 ml Wasser gewaschen wird. Das Eluieren erfolgt nach der linearen Gradientenmethode mit 200 ml Wasser und 500 ml 0,2-molarem Ammoniurnacetat. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet. Der dabei erhaltene Rückstand wird in 10 ml 0,1-molarer Essigsäure gelöst und die Lösung durch eine Säule (3,0 χ 130,0 cm).mit Sephadex LH-20 geleitet. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet. Ausbeute 737 mg, [a]jp-8,8° (c = 0,55, 5 #-ige Essigsäure).

Aminosäureanalyse (6-normale Salzsäure, 110 ⁰C, 24 Stunden): Lys 1,00(1); Arg 1,03(1);'Thr 1,00(1); durchschnittliche

50988Λ/1139

Rückgewinnung 100 %).

Ira folgenden wird die erfindungsgemässe Herstellung von Polypeptiden schematiccn dargestellt:

(1) Herstellung von H~Thr--Pro~Arg--Lys--OII

BOC-Arg(MBS)-OH ι

H-Lys(Z)-0Me ι

!!OMB/Dec

BOC~Arß(MBS )~I.ys(Z )~0He

Z-Thr-Pro-OH

H-Arg(HE3)-Ly s(Z)-OMe I

HOHB/DCC Z~Thr~Pro-Arg (MBS)-Ly s(Z) -OMe

HaOII Z~0)hr~Pr o-Arg (M3S) -Ly s (Z )~0H

CH₃SO₃II

H-Thr-Pro-Arg-Lys-OH

509884/1139

Z-Arg(MBS)-OH L-	H-GIy-OMe I
	HOWB/33CC
Z-Arg(MBS)	-GIy-OMe
	H_?/Pd
Z-ß-Ala-ONB Η-Arg (KBS ) -G-Iy-OMe I I

Z-p-Ala-Arg(MBS)-GIy-OMe I

I NaOH Z-ß-Ala-Arg(MBS)-GIy-OH

H~Phe-Phe-Tyr-NK₉ !

HOliB/DCC

Z-ß-Ala-Arg (MBS)-G-ly-Phe-Phe-Ty r~NH₂

φ CH₅SO₅H

H~ß-Ala-Ai-g-G-ly-Phe~Phe-Tyr-NH₂

(2) Herstellung von H-ß-Ala-Arg-GIy-Phe-Phe-Tyr-l·]!!.?. (a)

509884/1139

Z-Arg (I-iD3)—0I

- b2 -

_, I J

HOHB/DCC

Z-Arg(MBS)~GIy-Ph e-Ph e-Tyr-HH,

H₂/Pd·

Z-ß-Ala-OHlJ H-Arg (MBS) -Gly-Phe-Phe-Tyr

^L—r—'. ■;

Z-ß-Ala_:-Arg (MBS) -Gly-Phe-Phe- Ty T-

CH₃SO₃II

H~ß-Ala-Arg-Gly-Phe~Phe~Tyr-NH₂ (3) Herstellung von P»Glu-His-Trp-SGr-^rj?yr-D-Leu-Lou-Arg-Pro-HHEt Z-Pro-NHEt

Z-Arg(MBS)-Prο~0H

/Pd

Z-Arg(MBS)-OH H-Pro-NHEt

HONB/DCO

Z-Arg(MBS)-Pro-NHEt I Hp/Pd

Z-Leu-ONB H-Arg (MBS) -Pr o-lJHE t I [ J

Z-Leu-Arg (MBS)-Pro-MEt

H₂/Pd

Η-Leu-Arg(MBS)-PrO-NHEt P'Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-OH

P»Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(l-IBS)-ProrNH13t

CH-SO-H 509884/1139 ^{3 5}

P»Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu~Leu-Arg(MBS)-Pro-NHEt

(H) Horste]lung von a'-CMu-HiG-Trp-Scr-'J.'yr-D-Aia-Lcu-Arß-Pro-MllET

Z-D-AIa-OMB

Ii-Le u-Λ Tß (RBS) -Pr o-lMS t I

Z-D-AIa---Leu-Arg (KB8) .-Pro-NIIEt

Z-Ser-Tyr-HH * NiL

IL>/Pd

'HCl/NaNO,

Z-Ser-Tyr-tT,

H~D~Ala~Leu~Arg (HBS) -Pro -MIEt

Z-Sor- Tyr-D-Ala-Leu-Arß (HBS) -Pro-MIEt

H₂/Pd

P· Glu-His-Trp-OH H-S er-Ty r-D-Ala-Leu-Arg (MBS) -PrO-IIIIEt

honb/dcc

P · Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala -Leu-Arg (MES) --Pro-NHEt

P«Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg(MES)-Pro-MHEt

(5) Herstellung von H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-Eis-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro~Val-Gly-Lys-Lys-Arg~Arg~Pro-Val~Lys-Val-Tyr~ Pro~OH [ACTH(I-;

Z-Arg( ί-ffiS )-Pro-0^xBu

H_Q/Pd

Z-Arg(MB8)-0K ι

H-Arg(MBS )-Ρΐ·ϋ- . ι

H0N3/DCC

η η ο α

MJ33) -Arg (MBS) »Pro-· 0 Bu

HOITß/DCC

CJVCÜOH Z-Arg(I-IBS)- Arg(HBS)-Γιό-ΟΗ

H-VaI-Ly s (BOG )~Val-aⁱyr-Pro-O^tBu

Z-Are(tlB3)-Arg(KBS )-Pj-o-Val~Lys (BOG) -VaI-Ty r-Pr ο --0 ^Bu

II₂/Pd

Η-Arg (MBS )_rArg(MBS )~Pro-Val-Ly ü (BOC )-Val-Tyr~Pro-O^tBu

Z-Lys (BOG )-Pro-Val-Gly-Lys (BOC)«Lys(BOG )-0H (oder Azidmethode)

ι

Γ HOiüJ/DCC
Ψ

Z-Lys(BOG)-Prο-VaI-GIy-Lys(BOG)-Lys(BOG)-Arg(MBS)~Arg(MBS )-■ Pr o-Val-Lyö (BOC )-Val-Tyr~Pr 0-O¹^Bu (I)

. Z-Arg(MBS)-OH I

H-Trp-Gly-OHe ι

HONB/DCC

Z~Arg(MBS)-Trp-Gly-OMe "H₂/Pd

Z-Phe-OMB
ι

H-Arg(MBS)-Trp-Gly~OMe I

Z-Phe~Arg(MBS)-Trp-Gly-OMe

NaOH

. Z-Phe-Arg(IfflS)-Trp-Gly-OH Z-GIu(0^TBu)-HiS-NH-

I HCl/NaNO,

H-Phe-Arg(MBS)-Trp-Gly-OH

509884/1139 vj

B0C-~Ser»Tyr-3or~I-lel· HII-IUI₂

Z-GIu(O¹Bu)-HiG-Ph G-Arg (IjBG )-Trp-aiy--OH HCl/NaN0_o , „ _/m

2 0

¹PJ

Tv

I .J

O
BOC-Ser-Tyr-Ser-Ιΐοt-Glu(O ^bBu)-Hi D-Phc-Arg(KBS)-Trp-G_ly-OH .

HONB/DCC

H-Jjys (BOG )-Pro-Val-Gly-Lys (BOG )-Lys (BOC )-•TBS)-Arg (MES )-Pro~Val-Lys (BOO )-Val-Tyr~Pro-O^tBu

BOC--Ser»Tyr-Ser«Iiet-Glu(O^tBu)--His-P]ie-Are(li3S)-Trp"Gly™

Lys (BOC )-Pro-Val-Gly-Lys (BOG )-Lys (BOC )-Arg(I-iBS)-Arg(KCS). Pro-Val-Lys(BOG)-Val-Tyr-Pro-O^tBu

CH₃SO₃H

H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg~Trp-Gly-Lys-Pro~Val~Gly-Lys~Lys-Arg~Arg-Pro-Val~Lys-Val-Tyr-Pro-OH

Thioglycolsäure ACTH (1-24)

(6)'Herstellung von H-SGT-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu-Asp-Glu-Ser-Ala-Glu-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-Phe-OH (menschliches ACTH; α -ACTH)

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11-Λ r;n~G ly-Ala-Gln (O¹TJu) -Asp (O¹IIiI) ■ GIu (0^bB α) - -Π er· -AIa-G Iu (0 Hu)- Ala-Pli e-Pr o-Leu-Glu (0¹TJu) -Phe- 0"¹Bu

Z-VaI-Ly ο (BOC )~^al~Tyr--Pro--0H

HONB/30CC

Z-VaI- Ly s (BOC) -Vfil-^yr-Pr d-Aßii-G Iy- AIa-G Iu (0 ^tBu) -Acp (O¹³Bu) GIu (O¹¹Bu)-S er» AD^-GIu (O¹Bu) -AIa-Ph e-Pr o-Lcu-Glu (O¹Bu V-PhG-O¹Bu

H₂/Pd

H-VaI-Lys(BOC)«Val-Tyr-Pro-Asn-Gly-AIa-GIu(O¹Bu)-Asp(O¹Bu)-

Λ-r

.t.

GIu(O '^bBu)-Ser-Ala-Glu(O^l'Bu)-Ala-Phe-Pro~LGU--Glu(O^tBu)-Plic-O^t Bu

(II)

Z-Arg (MBS) -Arg (MBS) - Pro-OH

Z-LyB(BOC)-OIfB

Η-Arg (KBS)-Arg(IffiS) ~ Pro -OH I

Z~Lys(BOC)~Arg(TffiS)-Arg(MBS)~Pro~OH

Z-Lys(BOC)-ONB H-LyG(BOC)-Arg(MBS )~Arg(MBS)~ Pro-OH I 1

Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(MBS)-Arg(MBS)- Pro~0H

(II) ■ ■

HONB/DCC

Z-Lys(BOC)~Lys(BOC)-Arg(MBS)-Arg(MBS)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu(O^tBu)-Asp(O^tBu)-Glu(O^tBu)-Ser-Ala-Glu( 0^u)-AIa-PlIe-PrO-LeU-GIu (O¹TiU) -Phe-0*Bu

,H₂/Pd

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-LyK(BOC )»Ly;.:(BQC)~Ar- (KB3)"Arf;(I-i!>3)-.pro-Val«Lys(BOGT~ * "^^

S or-Ala-Glu (0"¹Bu)-Ala~Phe-Pro~Lcu«Glu (.O¹ Bu )·-Ph e-O^Ti

Z-Lyc (IiOC )-Pro-Val-Gly-OII

II0H.8/DCC

Z-Ly 8 (BOG) -Pro- -VaI-GIy-Lys (BOC) -Ly a (BOG)-Arg (KBÜ) - Arc (&B3)-Pro-Val-Ly s (BOG) -Val-i'y r-Pro -A sn-G ly-Ala-G.1 u (O⁺Bu) · -Asp (O⁺¹Bu) Glu(0⁺'Bu)-Ser.-Ala-Glu(o"^r'Bu)-/Q.a-Phe-Pro-LGu-Glu(O^tBu)-PhG-O^tBu

H₂/Pd

H-Lys (BOG )-Pro-Val-Gly.-Lys (BOC)-Ly s (BOC)-Arg (IiBS)-Arg (IiBS )-Pro-Val-Lys(BOC)~VaI-Tyr-Pro~Asn~Gly-A3a-Glu(0⁺Bu)-Asp(O⁺Bu)-GIu(O⁺Bu)-S er-Ala-Glu(O⁺Bu)-Ala-Pho-Pro-Leu-GIu(O⁺Bu)-PhG-O⁺Bu

BOC-Ser-Tyr-Ser~Met-G3u(O⁺3u)-His--Phe~Arß(HBS)-Trp"Gly-OH-

HONB/DCC

BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(O¹'Bu)~His-Phe-Arg(I-IBS )-Trp-Gly-Lys (BOC )-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(HBS)-Arg(MBS)-Pro-Val-Lys (BOC) ~Val»Tyr-Pr O'-Asn-Gly-Ala-Glu (O⁺Bu ) -Asp (O⁺Bu) -Glu( O⁺Bu) Ser-Ala-Glu(0⁺Bu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(0⁺Bu)-Phe-0⁺Bu

0 \

CH₅SO₃H

H-Ser-Tyr-Ser~Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly~Lys-Pro-Val-Gly-Lys- Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu-Asp-Glu- Ser-Ala-Glu^Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-Phe-OH

5098*84/1139 1 Thioglycolsäure

a_h-ACTH (menschliches ACTH)

Claims

Patentansprüche

\1) Aminosäure mit durch Niederalkoxybonzolsulfonylgruppen oder Trinideralkylbenzolsulfonylgruppen geschützten Guanidinogruppen oder Peptid, das den Rest einer auf diese •Weise geschützten Aminosäure enthält.

2) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1,·dadurch gekennzeichnet, dass die Aminosäure Arginin ist.

3) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Niederalkoxybenzolsulfonylgruppe 1 bis 3 Kohlenstoffatome im Alkoxyrest enthält.

4) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Niederalkoxybenzolsulfonylgruppe eine Methoxybenzolsulfonylgruppe ist.

5) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Niederalkoxybenzolsulfonylgruppe eine p-Methoxybenzolsulfonylgruppe ist.

6) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Triniederalkylbenzolsulfonylgruppe Alkylreste mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen enthält.

7) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1, dadur.ch gekennzeichnet, dass die Triniederalkylbenzolsulfonylgruppe eine Trimethylbenzolsulfonylgruppe ist.

8) Aminosäure oder"Peptid.nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Triniederalkylbenzolsulfonylgruppe eine 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonylgruppe ist.

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SJ) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Trin:i ederalky.lbenzolsulfonylgrupp·-? eine -Triisopropylbenzolsulfony3 gruppe ist.

10) Aminosäure oder Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, days die Triniederalkylbem;olsulfony]-gruppe eine ?._Pk ,6-TriisopropylbenzolsulTony!gruppe ist.

11) Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Bradykinin mit geschützten Guanidinogruppen
ist.

12) Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es der Formel (Pyr)Glu-Trp-Pro-Arg-Pro-G]n-Ileu-Pro-Pro-OH entspricht und dass seine Guanidinogruppe geschützt ist.

13) Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es luteinisierendes Hormon freisetzendes Hormon
(LH-RH) ist j dessen Guanidinogruppe geschützt ist.

lh) Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Tuftsin ist, dessen Guanidinogruppe geschützt ist.

15) Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es der Formel H-Thr-Lys-Arg-OH entspricht und
dass seine Guanidinogruppe geschützt ist.

16) Verfahren zum Schützen von Guanidinogruppen
in Aminosäuren oder Peptiden, dadurch gekennzeichnet, dass man Niederalkoxybenzolsulfonylgruppen oder Triniederalkyl-

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benzolsulfony!gruppen in die Guanidinogruppen einführt.

17) Verfahren nach Anspruch l6, dadurch gekennzeichnet, dass man die Einführung der Niederalkoxybenzolsulfonylgruppe oder Triniederalkylbenzolsulfonylgruppe ausführt, indem man eine-Guanidinogruppen enthaltende Aminosäure oder ein Guanidinogruppen enthaltendes Peptid mit einem reaktionsfähigen Derivat einer Niederalkoxybenzolsulfonsäure oder Triniederalkylbensolsulfonsäure umsetzt und schliesslich die Schutzgruppe entfernt, nachdem man die so geschützte Aminosäure oder das so geschützte Peptid einer chemischen Modifizierung unterworfen hat.

18) Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass man die Entfernung der Schutzgruppe ausführt, indem man die Aminosäure oder das Peptid mit geschützter Guanidinogruppe mit einer Niederalkylsulfonsäure oder einer Halogensulfonsäure umsetzt.