DK162649B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af pgrf eller pgrf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable additionssalte heraf samt mellemprodukt til brug ved fremgangsmaaden - Google Patents
Analogifremgangsmaade til fremstilling af pgrf eller pgrf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable additionssalte heraf samt mellemprodukt til brug ved fremgangsmaaden Download PDFInfo
- Publication number
- DK162649B DK162649B DK278383A DK278383A DK162649B DK 162649 B DK162649 B DK 162649B DK 278383 A DK278383 A DK 278383A DK 278383 A DK278383 A DK 278383A DK 162649 B DK162649 B DK 162649B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- arg
- ala
- leu
- ser
- gln
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 80
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 29
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 10
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 5
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 claims abstract description 3
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 63
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 45
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 45
- -1 alkyl amides Chemical class 0.000 claims description 38
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 27
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 27
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 18
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 17
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 6
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 claims description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 2
- NNMUHYLAYUSTTN-FXQIFTODSA-N Asn-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O NNMUHYLAYUSTTN-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 2
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- WGWPRVFKDLAUQJ-MITYVQBRSA-N sermorelin Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WGWPRVFKDLAUQJ-MITYVQBRSA-N 0.000 claims 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 abstract description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 32
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 32
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 31
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 27
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 24
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 20
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 14
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 14
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 11
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 10
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 6
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 6
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 6
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 3
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 3
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 3
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 239000003501 hydroponics Substances 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 208000003068 pituitary dwarfism Diseases 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWOOKDULMBMMPN-UHFFFAOYSA-N 3-(2-ethyl-1,2-oxazol-2-ium-5-yl)benzenesulfonate Chemical compound O1[N+](CC)=CC=C1C1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 MWOOKDULMBMMPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 101710183427 CREB3 regulatory factor Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 101800000736 Growth hormone-releasing factor Proteins 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001075374 Homo sapiens Gamma-glutamyl hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 101000664737 Homo sapiens Somatotropin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 208000009164 Islet Cell Adenoma Diseases 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- GYMWSBVKAPVTPI-UHFFFAOYSA-N N1N=[C-]N=C1 Chemical class N1N=[C-]N=C1 GYMWSBVKAPVTPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical class C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000006136 alcoholysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 125000002668 chloroacetyl group Chemical group ClCC(=O)* 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 150000001912 cyanamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WMYNMYVRWWCRPS-UHFFFAOYSA-N ethynoxyethane Chemical group CCOC#C WMYNMYVRWWCRPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical class [H]C#C* 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-O hydron;1,2-oxazole Chemical class C=1C=[NH+]OC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 150000007928 imidazolide derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002529 islet cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940072783 liquimat Drugs 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000002182 neurohumoral effect Effects 0.000 description 1
- 210000004522 neurosecretory neuron Anatomy 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000022102 pancreatic neuroendocrine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003170 phenylsulfonyl group Chemical group C1(=CC=CC=C1)S(=O)(=O)* 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000001557 phthalyl group Chemical group C(=O)(O)C1=C(C(=O)*)C=CC=C1 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000009666 routine test Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilane Chemical group C[SiH](C)C PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
DK 162649 B
Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt peptid med formlen (I): Η-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-5 GIn-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gl n-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-
Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-R^-R eller C-termi-nalt forkortede biologisk aktive fragmenter deraf med mindst 27 ami nosyrerester strækkende sig fra og med N-terminalen, hvori R er OH eller NH2, og R41 er Arg, Arg-Ala, Arg-Ala-Arg, 10 Arg-Ala-Arg-Leu eller des-R4i, samt farmaceutisk acceptable additionssalte heraf, der fremmer afgivelsen af væksthormon fra hypofysekirtlen. Opfindelsen angår også et mellemprodukt til brug ved fremgangsmåden.
15 Siden begyndelsen af 1950'erne har fysiologer og læger er kendt, at hypothalamus i hjernen styrer alle adenohypofysens sekretionsfunktioner. Denne styring er neurohumoral, idet specialiserede neurosekretionsneuroner i hypothalamus producerer særlige polypeptider, hvis virkning og rolle for hvers vedkom-20 mende er akut og kronisk at udløse sekretionen af hvert hypofysehormon. Indtil i dag er en hypothalam afgivelsesfaktor blevet karakteriseret for hypofysehormonerne thyrotropin og prolactin (tripeptidet TRF), for hypofysegonadotropinerne luteiniserende hormon og follikelstimulerende hormon (deca-25 peptidét LRF, LH-RH, GnRH eller Gn-RF) og for hypofysehormonerne Ø-endorphin og adrenocorticotropin (41-aminosyrepoly-peptidet CRF). Endvidere er en inhiberende faktor blevet karakteriseret: Hypothalam somatostatin inhiberer på hypofyse niveauet sekretionen af væksthormon. Hver af disse hypothalame 30 afgivelses- eller frigørelsesfaktorer samt somatostatin er blevet reproduceret ved hjælp af total syntese, og mange analoge til de naturlige stoffer er blevet syntetiseret, herunder nogle med langt større virkning end de naturlige forbindelser.
35 2
DK 162649 B
Indtil i dag er en tilsvarende hypothalam frigørelsesfaktor for hypofysekirtlens væksthormon eller somatotropin ikke blevet karakteriseret, selvom der har foreligget et betydeligt fysiologisk og klinisk vidnesbyrd for dets eksistens. Et af 5 hovedproblemerne vedrørende isolationen og karakteriseringen af den hypothalame væksthormonfrigørelsesfaktor (i det følgende GRF) består i, at det aktive peptid viser sig at være til stede i hvert hypothalamisk fragment i uendeligt små mængder, der antages at være af størrelsen 5-150 femtomol. Denne mængde 10 er langt mindre end nogen som helst anden beregnet mængde for de andre hypothalame frigørelsesfaktorer. Det er en naturlig følgeslutning i overensstemmelse med denne angivelse, at hypo-thalamt GRF har ekstremt høj virkningsstyrke.
15 Et andet betydeligt problem ved isolationen af hypothalamt GRF har været tilstedeværelsen i hypothalame ekstrakter af meget store mængder somatostatin, der selvsagt hindrer eller ville medføre afvigende resultater ved enhver forsøgt biobestemmelse. I løbet af de sidste få år har flere laboratorier gjort 20 krav på at have isoleret og karakteriseret den hypothalame GRF. Alle disse påstande drejede sig om stoffer, der ikke normalt findes i celler eller væv, men som dannes ved hjælp af kunstige midler, således som det senere blev erkendt af forfatterne (Schally, A.V.S. et al., J. Biol. Chem. 246, 6647, 25 1971; Veber D.F. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 45, 235, 1971). Sådanne ukorrekte påstande kan delvis forklares af vanskeligheden af de biobestemmelser, der er tale om ved vurdering af frigørelse af væksthormon.
30 Et 44-rest-polypeptid er blevet isoleret fra en human øcelle-svulst, renset, karakteriseret, syntetiseret og undersøgt, hvilket polypeptid fremmer frigørelsen af væksthormon (GH) fra hypofysen. Dette peptid har sekvensen: 35 3
DK 162649 B
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-
Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2.
5 Det antages at være og omtales i det følgende som PGRF (der står for humant pancreatisk GRF), og det vil også i blive betegnet somatocrinin. To andre høj rensende peptider blev også isoleret sammen dermed, hvilke peptider udviste GH-frigørende aktivitet og er PGRF(1-37)-OH og PGRF(1-40)-OH. Disse peptider 10 kan anvendes til at fremme væksten af varmblodede dyr og af koldblodede dyr i hydroponik.
Man kan fremstille farmaceutiske midler indeholdende PGRF, et analogt eller biologisk aktivt fragment deraf eller et ikke-15 toksisk salt af ethvert af de ovennævnte dispergeret i en farmaceutisk acceptabel væske eller fast bærer.
Sådanne farmaceutiske midler kan anvendes inden for klinisk medicin, både human og veterinær, til akut eller kronisk ad-20 ministration med henblik på diagnostiske eller terapeutiske formå 1.
Den nomenklatur, der anvendes til at definere peptiderne, er den af Schroder & Lubke angivne i "The Peptides", Academic 25 Press ’(1965), hvori aminogruppen ved N-terminalen i overensstemmelse med konventionel angivelse forekommer til venstre, og carboxylgruppen ved C-afsiutningen forekommer til højre.
Når .aminosyreresten har isomere former, er det L-formen af aminosyren, der er angivet, med mindre andet udtrykkeligt er 30 anført.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man (a) ud fra et peptidmellemprodukt med formlen (II): 35
DK 162649 B
4 xl-Tyr(X2)-Ala-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-Asn-Ser(X5)-Tyr(X2)-Arg(X6)-Lys(X7)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X5)-Ala-Arg(X6)-Lys(X7)-Leu-Leu-Gln-Asp{X3)-Ile-Met-Ser(X5)-Arg(X6)-Gln-Gln-Gly-Glu(X3)-Ser(X5)-Asn-Gln-Glu(X3)-Arg(X5 eller X6)-5 Gly-Ala(X8)-R41(X6)-X8, eller en C-terminalt forkortet version deraf med mindst 27 aminosyrerester strækkende sig fra og med N-terminalen, 10 hvori X* er hydrogen eller en α-aminobeskyttelsesgruppe, X2 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Tyr's phenoliske hydroxyl gruppe , X3 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for carboxyIgruppen i Asp eller Glu, X4 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Thr's alkoholiske hydroxylgruppe, X5 er 15 hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Ser's alkoholiske hydroxylgruppe, X6 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Arg's guanidinogruppe, X7 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for sidekædeaminogruppen i Lys, og X8 er valgt blandt OH, 0CH3, lavere alkylestere, lavere alkylamider, hydrazid, 20 -0-CH2~harpiksbærer og -NH-harpiksbærer, forudsat at mindst et af symbolerne χΐ til X8 er andet end H eller OH, (b) fraspalter beskyttelsesgrupper og eventuelt covalent bunden harpiksbærer til opnåelse af polypeptidet, og om ønsket omdanner det resulterende peptid til et ikke-toksisk additionssalt deraf.
25
Peptiderne syntetiseres ved hjælp af en egnet metode, såsom ved hjælp af udelukkende fastfaseteknik, ved hjælp af delvis fastfaseteknik, ved hjælp af fragmentkondensation, ved hjælp af klassiske opløsningskoblinger eller ved anven-30 delse af fornylig udviklet DNA-rekombinationsteknik. F.eks. er metoden til udelukkende fastfasesyntese angivet i lærebogen "Solid-Phase Peptide Synthesis", Stewart & Young, Freeman & Co., San Francisco, 1969, og den er eksemplificeret i USA patentskrift nr. 4.105.603. Fragmentkondensa-35 5
DK 162649B
tionssyntesemetoden er eksemplificeret i USA patentskrift nr. 3.972.859. Andre til rådighed stående synteser er eksemplificeret i USA patentskrifterne nr. 3.842.067 og nr. 3.862.925. Fremstilling af de syntetiske peptider under anvendelse af 5 DNA-rekombinationsteknik vil sandsynligvis blive benyttet til at tilfredsstille kommercielle behov i stor skala.
Fælles for synteser af koblingstypen er beskyttelsen af de forskellige aminosyremolekyldeles labile sidekædegrupper med egnede beskyttelsesgrupper, der vil hindre en kemisk reaktion 10 i at finde sted på dette sted, indtil gruppen til sidst fjernes. Fælles er sædvanligvis også beskyttelsen af en a-aminogruppe på en aminosyre eller et fragment, medens denne enhed reagerer ved carboxylgruppen, efterfulgt af selektiv fjernelse af α-aminobeskyttelsesgruppen med henblik på at lade efter-15 følgende omsætning finde sted på dette sted. Følgelig er det fælles, som et trin i syntesen, at en intermediær forbindelse dannes, hvilken forbindelse indeholder hver af aminosyre-resterne placeret i den ønskede rækkefølge i peptidkæden og med sidekædebeskyttelsesgrupper knyttet til de pågældende 20 aminosyrerester.
Inden for opfindelsens rammer skal også betragtes mellemprodukter med formlen: X1-Tyr(X2)-Ala-Asp(X3)-Ala-11e-Phe-Thr(X4)-Asn-Ser(X5) -
Tyr(X2)-Arg(X1)-Lys (X7)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X5)-Ala- 25 Arg(X^)-Lys (X7)-Leu-Leu-Gin-Asp(X3)-Ile-Met-Ser(X5)-
Arg(X1)-Gln-Gln-Gly-Glu(X3)-Ser (X5)-Asn-Gln-Glu(X3)-
Arg(X5 eller X1)-Gly-Ala(X1)-Arg(X1)-Ala-Arg(X1)-8 1
Leu-X , hvori RX er enten hydrogen eller en a-aminobeskyt-telsesgruppe. α-aminobeskyttelsesgrupperne, der er tale om 30 med symbolet X^, er sådanne, der vides at være anvendelige inden for trinvis syntese af polypeptider. Til de klasser af α-aminobeskyttelsesgrupper, der dækkes af X*, hører (1) beskyttelsesgrupper af acyltypen, såsom formyl, trifluor-acetyl, phthalyl, toluensulfonyl(Tos), benzensulfonyl, nitro-
DK 162649 B
6 phenylsulfenyl, tritylsulfenyl, o-nitrophenoxyacetyl, chlor-acetyl, acetyl og γ-chlorbutyryl; (2) aromatiske beskyttelsesgrupper af urethantypen, såsom benzyloxycarbonyl(Z) og substitueret Z, såsom p-chlorbenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxy-5 carbonyl, p-brombenzyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbo- nyl; (3) alifatiske urethan-beskyttelsesgrupper, såsom t-butyl-oxycarbonyl (BOC), diisopropylmethyloxycarbonyl, isopropyloxy-carbonyl, ethoxycarbonyl og allyloxycarbonyl; (4) cykloalkyl-beskyttelsesgrupper af urethantypen, såsom cyklopentyloxy-10 carbonyl, adamantyloxycarbonyl og cyklohexyloxycarbonyl; (5) beskyttelsesgrupper af thiourethantypen, såsom phenylthio-carbonyl; (6) beskyttelsesgrupper af alkyltypen, såsom tri-phenylmethyl {trityl) og benzyl; og (7) trialkylsilangrupper, såsom trimethylsilan. Den foretrukne a-aminobeskyttelsesgrup-15 pe er BOC.
2 X er en beskyttelsesgruppe for den phenoliske hydroxylgruppe i Tyr valgt blandt tetrahydropyranyl, tert.-butyl, trityl,
Bzl, CBZ, 4Br-CBZ og 2,6-dichlorbenzyl. Den foretrukne be- 2 skyttelsesgruppe er 2,6-dichlorbenzyl. X kan være hydrogen, 20 hvilket betyder, at der ikke findes nogen beskyttelsesgruppe på hydroxylgruppen.
3 X er hydrogen eller en esterdannende beskyttelsesgruppe for carboxylgruppen i Asp eller Glu og er valgt blandt Bzl, 2,6-dichlorbenzyl, methyl og ethyl.
25 X^ og X^ er beskyttelsesgrupper for hydroxylgruppen i Thr og Ser og er valgt blandt acetyl, benzoyl, tert.-butyl, trityl, tetrahydropyranyl, Bzl, 2,6-dichlorbenzyl og CBZ. Den 4 5 foretrukne beskyttelsesgruppe er Bzl. X og/eller X kan være hydrogen, hvilket betyder, at der ikke findes nogen beskyttel-30 sesgruppe på hydroxylgruppen. 1 X er en beskyttelsesgruppe for guanidinogruppen i Arg og er valgt blandt nitro, Tos, CBZ, adamantyloxycarbonyl og BOC eller er hydrogen.
7 7
DK 162649 B
X er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for sidekædeammo-substituenten i Lys. Eksempler på egnede sidekæde-aminobeskyt-telsesgrupper er 2-chlorbenzyloxycarbonyl (2-C1-Z), Tos, CBZ, t-amyloxycarbonyl og BOC.
5 Udvælgelsen af en sidekasde-aminobeskyttelsesgruppe er ikke afgørende, men gruppen skal være en sådan, der ikke fjernes under afbeskyttelse af oraminogrupperne under syntesen. Derfor kan α-aminobeskyttelsesgruppen og sidekæde-aminobeskyttel-sesgruppen ikke være det samme.
Q
10 X er valgt blandt OH, OCH^, estere, amider, hydrazider, -O-C^-harpiksbærer og -NH- harpiksbærer, idet grupperne bortset fra OH og amider i almindelighed betragtes som beskyttelsesgrupper .
I formlen for mellemproduktet er i det mindste én af grupper-15 ne X"*", X3, X3, x\ X5, X6, X7 og X8 en beskyttelsesgruppe.
Ved udvælgelsen af en bestemt sidekædebeskyttelsesgruppe, der skal anvendes til syntesen af peptiderne, følges følgende regler: (a) beskyttelsesgruppen skal være stabil overfor reagenset og under de reaktionsbetingelser, der vælges til fjer-20 nelse af α-aminobeskyttelsesgruppen på hvert trin i syntesen, (b) beskyttelsesgruppen bør bevare sine beskyttelsesegenskaber og ikke blive fraspaltet under koblingsbetingelser, og (c) sidekædebeskyttelsesgruppen bør efter afslutningen af syntesen omfattende den ønskede aminosyresekvens kunne fjernes 25 under reaktionsbetingelser, der ikke vil ændre peptidkæden.
Peptiderne fremstilles fortrinsvis under anvendelse af fast-fasesyntese, såsom den der er beskrevet af Merrifield i J.
Am. Chem. Soc., 85, side 2149 (1963), selvom andre tilsvarende kendte kemiske synteser også kan anvendes som tidligere 30 nævnt. Fastfasesyntese begyndes fra peptidets C-afsluttede ende ved kobling af en beskyttet α-aminosyre til en passende harpiks. Et sådant udgangsmateriale kan fremstilles ved
DK 162649 B
8 via en esterbinding at knytte α-aminobeskyttet Leu eller Ala til en chlormethyleret harpiks eller en hydroxymethylharpiks eller via en amidbinding til en BHA-harpiks eller en MBHA-harpiks. Fremstillingen af hydroxymethylharpiksen er beskre-5 vet af Bodansky et al., Chem. Ind. (London) 38, 1597-98 (1966). Chlormethylerede harpikser kan kommercielt fås fra Bio Rad Laboratories, Richmond, Californien, og fra Lab. Systems,
Inc. Fremstillingen af en sådan harpiks er beskrevet af Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis" (Freeman & Co., 10 San Francisco 1969), kapitel 1, side 1-6. BHA- og MBHA-har-piksbærere går i handelen og benyttes generelt kun, når det ønskede polypeptid, der skal syntetiseres, har et a-carbox-amid ved C-afslutningen.
Ala, der er beskyttet med BOC, kobles til den chlormethyle-15 rede harpiks i overensstemmelse med proceduren ifølge Monahan og Giion, Biopolymer 12, side 2513-19, 1973, når det f.eks. er ønskeligt at syntetisere 40-aminosyrepeptidet. Efter koblingen af BOC-Ala til harpiksbæreren fjernes a-aminobeskyt-telsesgruppen, såsom ved anvendelse af trifluoreddikesyre 20 (TFA) i methylenchlorid, TFA alene eller HC1 i dioxan. Af- . beskyttelsen udføres ved en temperatur mellem ca. 0°C og stuetemperatur. Andre standardspaltningsreagenser og betingelser til fjernelse af bestemte α-aminobeskyttelsesgrupper kan anvendes som beskrevet af Schroder & Lubke i "The Peptides", 25 1, side 72-75 (Academic Press 1965).
Efter fjernelse af Ala's α-aminobeskyttelsesgruppe kobles de tilbageværende α-amino- og sidekædebeskyttede aminosyrer trinvis i den ønskede orden til opnåelse af mellemproduktforbindelsen defineret i det følgende, eller også kan nogle 30 af dem som et alternativ til tilsætning af hver aminosyre separat i syntesen blive koblet til hinanden forud for tilsætning til fastfasereaktoren. Udvælgelsen af et passende koblingsreagens ligger inden for den teknik, der beherskes af fagmanden på området. Særlig egnet som koblingsreagens er
DK 162649 B
9 N,N'-dicyklohexylcarbodiimid (DCCX).
De aktiveringsreagenser, der anvendes til fastfasesyntesen af peptiderne, er velkendte på peptidområdet. Eksempler på egnede aktiverende reagenser er: (1) carbodiimider, såsom 5 N,N1-diisopropylcarbodiimid, N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)- carbodiimid; (2) cyanamider, såsom Ν,Ν'-dibenzylcyanamid; (3) ketoiminer; (4) isoxazoliumsalte, såsom N-ethyl-5-phenyl--isoxazolium-3'-sulfonat; (5) monocykliske nitrogenholdige heterocykliske amider af aromatisk karakter indeholdende 1-4 10 nitrogenatomer i ringen, såsom imidazolider, pyrazolider og 1,2,4-triazolider. Specifikke heterocykliske amider, der er anvendelige, indbefatter Ν,Ν'-carbonyldiimidazol, Ν,Ν'-carbo-nyl-di-l,2,4-triazol; (6) alkoxylerede acetylener, såsom ethoxy-acetylen; (7) reagenser, der danner et blandet anhydrid med 15 carboxylmolekyldelen af aminosyren, såsom ethylchlorformiat og isobutylchlorformiat, og (8) reagenser, der danner en aktiv ester med aminosyrens carboxylmolekyldel, såsom nitrogenholdige heterocykliske forbindelser med en hydroxygrup-pe på et ringnitrogenatom, f.eks. N-hydroxyphthalimid, N-hy-20 droxysuccinimid og 1-hydroxybenzotriazol (HOBT). Andre aktiverende reagenser og deres anvendelse til peptidkobling er beskrevet af Schroder & Lubke, supra, i kapitel III, og af Kapoor, J. Phar. Sci., 59, side 1-27 (1970).
Hver beskyttet aminosyre eller aminosyresekvens indføres i 25 fastfasereaktoren i ca. et dobbelt eller højere overskud, og koblingen kan udføres i et medium af dimethylformamid (DMF): CH2C12 (1:1) eller i DMF eller CH2C12 alene. I tilfælde, hvor ufuldstændig kobling finder sted, gentages koblingsproceduren før fjernelse af a-aminobeskyttelsesgruppen forud for kob-30 lingen af den næste aminosyre. Vellykketheden af koblingsreaktionen på hvert trin i syntesen måles ved hjælp af ninhydrin-reaktionen, således som beskrevet af E. Kaiser et al., Anal. Biochem. 34, 595 (1970).
Efter at den ønskede aminosyresekvens er blevet afsluttet,
DK 162649 B
10 fjernes det intermediære peptid fra harpiksbaereren ved behandling med et reagens, såsom flydende hydrogenfluorid, der ikke alene spalter peptidet fra harpiksen, men også fraspal- 2 3 ter alle tilbageværende sidekædebeskyttelsesgrupper X , X ,
4 5 6 7 8 X
5 X , X , X , X og X samt α-aminobeskyttelsesgruppen X til opnåelse af peptidet.
Som en alternativ vej kan mellemproduktpeptidet skilles fra harpiksbæreren ved hjælp af alkoholyse, hvorefter den udvundne C-afsluttede alkylester omdanes til syren ved hjælp af 10 hydrolyse. Hvilke som helst sidekædebeskyttelsesgrupper kan derpå fraspaltes som tidligere beskrevet eller ved hjælp af andre kendte procedurer, såsom ved katalytisk reduktion (f.eks. Pd på BaSO^). Ved anvendelse af hydrogenfluorid til spaltning indføres anisol og methylethylsulfid i reaktionsbehol-15 deren til skylning.
Det følgende eksempel viser den foretrukne metode til syntetisering af PHRF ved hjælp af fastfaseteknikken. Det vil selvsagt forstås, at syntesen af et tilsvarende kortere peptidfragment foretages på samme måde ved blot at fjerne det på-20 krævede antal aminosyrer ved den ene eller den anden ende af kæden. Det antages imidlertid i øjeblikket, at biologisk aktive fragmenter bør indeholde den angivne sekvens ved N-afslutningen.
Eksempel 1 25 Syntesen af PGRF (1-44)-OH med formlen: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-
Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-
Arg-Leu-OH
30 udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat med en chlormethyleret harpiks, såsom
DK 162649 B
11 den der fås fra Lab Systems, Inc. og indeholder 0,9 Meq Cl/g. Kobling af BOC-Leu til harpiksen udføres ved hjælp af den generelle procedure, der er angivet af Monahan et al. i Biopolymers, bind 12 (1973), side 2513-2519, og den resulterer 5 i indføring .af ca. 0,22 mmol Leu pr. g harpiks. Alle benyttede opløsningsmidler afgasses omhyggeligt ved gennembobling med en inert gas, fortrinsvis helium, til sikring af fravær af oxygen, som på uønsket måde kunne oxidere svovlet i Metresten.
10 Efter afbeskyttelse og neutralisering opbygges peptidkæden trin for trin på harpiksen. Afbeskyttelse, neutralisering og tilføjelse af hver aminosyre udføres generelt i overensstemmelse med den procedure, der detaljeret er angivet af Guillemin et al. i USA patentskrift nr. 3.904.594. Koblinger-15 ne udføres specifikt som angivet i det følgende skema.
SKEMA
Trin Reagenser og operationer Blandetider, min.
1- CH2Cl2-vask (2 gange) 0,5 20 2 50% trifluoreddikesyre (TFA) + 5% 1,2-ethandithiol i CH2Cl2 (1 gang) 0,5 ' 3 50% trifluoreddikesyre (TFA) + 5% 1,2-ethandithiol i CH2C12 (1 gang) 20,0 4 CH2Cl2-vask (3 gange) 0,5 25 5 CH^OH-vask (2 gange) 0,5 6 Neutralisation med 10% triethylamin (Et^N) i CH2C12 (2 gange) 0,5 7 CH^OH-vask (2 gange) 0,5 8 Neutralisation med 10% triethylamin 30 (Et3N) i CH2C1 (2 gange) 0,5
DK 162649 B
12 9 CH^OH-vask (2 gange) 0,5 10 C^C^-vask (2 gange) 0,5 11 *BOC-aminosyre (1 mmol/g harpiks) plus ækvivalent mængde dicyklohexyl-5 carbodiimid (DCC) i CH2C12 120 12 CH^C^-vask (1 gang) 0,5 13 Vask ned 50% dimethylformamid .
i CH2C12 (2 gange) 0,5 14 Vask med 10% triethylamin (Et«N) i 10 CH2C12 (1 9anS) 0,5 15 CH^OH-vask (2 gange) 0,5 16 CH2Cl^-vask (2 gange) 0,5 17 25% eddikesyreanhydrid i CEL Cl« (2 ml/g harpiks) 20,0 15 18 CH2Cl2-vask (2 gange) 0,5 19 CH.jOH-vask (2 gange) 0,5 * Til koblingen af Asn og Gin indførtes et 1,136 molært overskud af 1-hydroxybenzotriazol (HOBt) på dette trin.
Til koblingsreaktionen anvendes kort og godt 1 mmol BOC-be-20 skyttet aminosyre i methylenchlorid pr. g harpiks plus et ækvivalent 0,5 molær DCCI i methylenchlorid eller 30% DMF i methylenchlorid i 2 timer. Når Arg kobles, anvendes en blanding af 10% DMF og methylenchlorid. Bzl anvendes som hydroxyl-sidekædebeskyttelsesgruppen for Ser og Thr. 2-chlor-benzyl-25 oxycarbonyl (2C1-Z) anvendes som beskyttelsesgruppe for Lyssidekæden. Tos anvendes til beskyttelse af Arg's guanidino-gruppe, og Glu- eller Asp-carboxylgruppen beskyttes som Bzl-esteren. Tyr's phenoliske hydroxylgruppe beskyttes med 2,6-dichlorbenzyl. Ved afslutningen af syntesen opnås følgende 3 0 sammensætning: 13
DK 162649 B
X1-Tyr(X2)-Ala-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-Asn-Ser(X5) -Tyr (X2)-Arg (X6)-Lys (X7)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X5)-Ala-Arg(X6)-Lys (X7)-Leu-Leu-Gln-Asp(X3)-Ile-Met-Ser(X5) -Arg (X6)-Gln-Gln-Gly-Glu(X3)-Ser (X5)-Asn-Gln-Glu(X3)-5 Arg(X°)-Gly-Ala-Arg(X^)-Ala-Arg(X^)-Leu-X^, 12 3 hvori X er BOC, X er 2,6-dichlorbenzyl, X er benzylester, X4 er Bzl, X^ er Bzl, X^ er Tos, X7 er 2C1-Z, og X^ er -O-C^- benzen-polystyren-harpiksbærer.
Efter at den sidste Tyr-rest er blevet koblet til harpiksen, 10 fjernes BOC-gruppen med 45% TFA i C^C^· Med henblik på spalt ning og afbeskyttelse af den tilbageværende beskyttede peptidharpiks behandles denne med 1,5 ml anisol, 0,25 ml methyl-ethylsulfid og 10 ml hydrogenfluorid (HF) pr. g peptid-harpiks ved -20°C i 0,5 time og ved 0°C i 0,5 time. Efter fjernel-15 se af HF under højvakuum, vaskes det tilbageværende harpiks peptid skiftevis med tør diethylether og chloroform,og peptidet ekstraheres derpå med afgasset 2N vandig eddikesyre. Lyo-filisering af eddikesyreekstrakten fører til et hvidt, fnugget materiale.
20 Det-fraspaltede og afbeskyttede peptid opløses derpå i 30% eddikesyre og underkastes "Sephadex" G-50 fin gelfiltrering.
Peptidet renses derpå yderligere ved hjælp af CM-32 carboxy-methylcellulose (Whatman)-kationbytterkromatografi (1,8 x 18 cm, = 50 ml) under anvendelse af en konkav gradient 25 dannet ved drypning af 1 liter 0,4 M NH^OAc, pH 6,5, i en blandekolbe indeholdende 400 ml 0,01 M NH^OAc, pH 4,5. Slut-rensning udføres ved anvendelse af skillekromatografi på "Sephadex" G-50 fin bærer (Pharmacia) med et nBuOH : EtOH : pyridin : 0,2% N HOAc (4:1:1:7) opløsningsmiddelsystem. Rens-30 ningsdetaljer er generelt anført af Ling et al. i Biochem.
Biophys. Res. Commun. 95, 945 (1980). De kromatografiske fraktioner måles omhyggeligt ved hjælp af TLC og kun de fraktioner, der udviste betydelig renhed, blev samlet.
DK 162649 B
14
Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse i lukkede rør under anvendelse af den i Anal. Biochem., 126, 144-156 (1982) beskrevne metode og under anvendelse af en Liquimat III amino-syreanalysator til kontrol af, at den korrekte sekvens var 5 opnået, hvilket fører til følgende resultater: Asx(3,62),
Thr(0,15), Ser(3,5), Glx(6,83), Gly(2,87), Ala(5,10), Val(0,9), Met(l,23), Ile(8,84), Leu(5,045), Tyr(2,09), Phe(0,91), Lys (2,31) og Arg(6,61). Analyse bekræftede den korrekte sekvens.
Eksempel II
10 Syntesen af PGRF(l-40) med formlen: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-
Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-OH
udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 15 peptidsynteseapparat med en chlormethyleret harpiks på den i eksempel 1 beskrevne måde. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af opnåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resultater: 20 Asx( 3,89), Thr(0,88), Ser(3,66), Glx(7,04), Gly(3,07), Ala (4,02), Val(0,96), Met(l,01), Ile(l,86), Leu(4,28), Tyr(2,0), phe(0,86), Lys(2,24) ogArg(4,15). Analyse bekræftede den korrekte sekvens.
Eksempel IIA
25 Syntesen af PGRF(l-34)-OH med formlen:
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-' Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-OH
15
DK 162649 B
udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat med en chlormethyleret harpiks på den i eksempel I beskrevne måde. Peptidet bedømme som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
5 Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af opnåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resulta ter: Asx(2,87), Thr(0, 78), Ser(3,78), Glx(5,ll), Gly(l,93),
Ala(3,03), Val(0,88), Met(0,96), Ile(l,88), Leu(4,14), Tyr(2,05) Phe(l,07), Lys(2,29) og Arg(3,22). Analyse bekræftede den 10 korrekte sekvens.
Eksempel IIB
Syntesen af PGRF{1-31)-OH med formlen:
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-15 Gln-Gln-OH
udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat med en chlormethyleret harpiks på den i eksempel I beskrevne måde. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
20 Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af op nåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resultater: Asx(2,73), Thr(0,75), Ser(2,77), Glx(3,95), Gly(0,98), Ala(3,06) Val(0,80), Met(0,98), Ile(l,77), Leu(4,28), Tyr(2,23), Phe (1,14), Lys(2,34) og Arg(3,22). Analyse bekræftede den korrek-25 te sekvens.
Eksempeol IIC
Syntesen af PGRF(1-28)-OH med formlen: i ! i H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu- t
j Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-OH
16
DK 162649 B
udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat med en chlormethyleret harpiks på den i eksempel I beskrevne måde. Peptidet bedømmes som veårende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
5 Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af op nåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resultater: Asx(2,66), Thr(0,73), Ser(2,66), Glx(l,98), Gly(0,81), Ala(2,89}, Val(0,90), Met(l,15)f Ile(l,72), Leu(4,14), Tyr (2,43), Phe(l,58), Lys(2,15) ogArg(2,19). Analyse bekræf-10 téde den korrekte sekvens.
Eksempel III
Syntesen af PGRF(1-44)-amid med formlen: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Vai-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-15 Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-
Arg-Leu-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat med en MBHA-harpiks på den i eksempel I beskrevne måde. Dette peptid bedømmes som værende i det 20 væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af opnåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resultater Asx(3,75), Thr(0,80), Ser(3,60), Glx(6,98), Gly(3,16), Ala (5,04), Val (0,77), Met(l,02), Ile(l,79), Leu(.5,41), Tyr(2,03), 25 Phe(0,84), Lys(2,39) og Arg(6,43). Analyse bekræftede den korrekte sekvens.
Eksempel IV
Syntesen af en PGRF-analog med formlen: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
DK 162649 B
17
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-
Gln-Gln-Gly-Glu-Ala-Asn-Gln-Glu-Ser-Gly-Arg-OH
udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat med en chlormethyleret harpiks, såsom 5 den der kan fås fra Lab Systems, Inc., på den i eksempel I beskrevne måde. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af opnåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resultater: 10 Asx(4,35), Thr(1,06), Ser(3,80), Glx(7,53), Gly(2,96), Ala (4,05), Val(0,97), Met(0,86), Xle(l,94), Leu(3,70), Tyr(2,05), Phe(l,06), Lys(2,06) og Arg(3,53). Analyse bekræftede den korrekte sekvens.
Eksempel V
15 Syntesen af et PGRF(l-40)-amid med formlen: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-
Glri-Gln-Gly-Glu~Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 20 peptidsynteseapparat med en MBHA-harpiks på den i eksempel I beskrevne måde. Dette peptid bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af opnåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resulta-25 ter: Asx(3,76), Thr(0,88), Ser(3,68), Glx(6,89), Gly(3,12),
Ala(4,08), Val(0,88), Met(l,36), Ile(l,76), Leu(4,24), Tyr (2,00), Phe(0,80), Lys(2,32) og Arg(4,16). Analyse bekræftede den korrekte sekvens.
DK 162649 B
18
Eksempel VI
Syntesen af PGRF(l-37)- OH med formlen:
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-5 Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-OH
udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat roed en chlormethyleret harpiks på den i eksempel I beskrevne måde. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
10 Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af opnåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resultater: Asx(3,92), Thr(0,79), Ser(3,62), Glx(7,05), Gly(l,97), Ala(3,17), Val(l,03), Met(l,0), Ile(l,91), Leu(4,37), Tyr(l,86), Phe (0,76), Lys(2,15) og Arg(3,40). Analyse bekræftede den korrek-15 te sekvens.
Eksempel VIA
Syntesen af PGRF(1-37)-amid med formlen: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-20 Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-NI^ | udføres på trinvis måde under anvendelse af et Beckman 990 peptidsynteseapparat med en MBHA-harpiks på den i eksempel I beskrevne måde. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
25 Aminosyreanalyse udføres efter hydrolyse til kontrol af opnåelse af den korrekte sekvens og fører til følgende resultater: Asx(4,02), Thr(0,80), Ser(3,49), Glx(6,90), Gly(l,92),
Ala(3,08), Val(1,05), Met(l,01), Ile(l,77), Leu(4,05), Tyr(2,02) Phe(l,14), Lys(2,50) ogArg(3,27). Analyse bekræftede den 30 korrekte sekvens.
19
DK 162649 B
Eksempel VII
Til bestemmelse af effektiviteten af peptiderne med hensyn til fremme af frigørelsen af væksthormon udføres in vitro bestemmelser under anvendelse af syntetisk PGRF(l-40) ifølge 5 eksempel II til sideløbende sammenligning med ækvimolære koncentrationer af det ekstraherede og rensede naturlige PGRF (1-40) og af en GRF-referencestandard med en kendt effektivitet til fremme af frigørelsen af væksthormon fra hypofyseceller. GRF-referencestandarden er beskrevet og defineret 10 af Brazeau, et al. i Endocrinology, bind 110, A538 (1982) og er en mængde af et produkt af rottehypofyseoprindelse, som frembringer en halv-maksimal reaktion med hensyn til GH-frigørelse ved en hypofysecellemonolag-biobestemmelse. Der anvendes kulturer indbefattende celler af rottehypofysekirt-15 ler, der er fjernet 4-5 dage forinden. Både kulturer af et defineret standardmedium og kulturer, der betragtes som optimale til udsondring af væksthormon, anvendes til den sammenlignende afprøvning på den generelle måde, der er beskrevet af Brazeau et al. i Regulatory Peptides, 1, 255, 1981. Inkuba-20 tion med det til afprøvning bestemte stof udføres i 3-4 timer, og aliquot mængder af kulturmediet fjernes og behandles til måling af deres indhold af immunoreaktivt GH(ir GH) ved en veldefineret radioimmunobestemmelse.
Resultaterne af denne sammenlignende afprøvning viser, at 25 i ækvimolære mængder har det syntetiske PGRF(1-40) det naturlige peptids fulde biologiske virknino, således som vist i tabel I. ED5ø for det syntetiske peptid er ca. 113 picogram, hvilket er langt mere virksomt end noget som helst andet molekyle, der hidtil har gjort krav på at være en GH-frigørende 30 faktor.
Resultaterne for de forkortede PGRF-analoge peptider er vist i den følgende tabel, som er taget fra side 859 i Biochem. and Biophys. Res. Comm., Vol. 123, nr. 2, p. 854-861, 1984: 20
DK 162649 B
Tabel
Relative virkningsstyrker af hGRF-analoger med C-terminal forkortelse 5 __________·_
Analoger Virkningsstyrke 95% konfidensgrænser 10 hGRF(1-44)NH2 1 hGRF(1-44)0H 0,70 0,56-0,87 hGRF(l-40)NH2 0,91 0,72-1,14 hGRF(1-40)OH 0,34 0,27-0,43 hGRF(1-37)NH2 0,50 0,40-0,62 15 hGRF(1-37)OH 0,27 0,20-0,36 hGRF(1-34)OH 0,23 0,19-0,30 hGRF(l-31)NH2 0,68 0,52-0,89 hGRF(1-31)OH 0,40 0,29-0,55 hGRF(1-30)NH2 0,51 0,39-0,64 20 hGRF(1-30)OH 0,27 0,18-0,49 hGRF(l-29)NH2 0,51 0,37-0,70 hGRF{1-29)OH 0,25 0,20-0,31 hGRF(1-27)NH2 0,12 0,09-0,17 hGRF(1-24)OH 0,0002 25 hGRF (1-23 ) NH2 0,0024 0,00.2-0,003 hGRF(1-22)NH2 0,00001 hGRF(1-21)NH2 0,000001 hGRF(1-19)NH2 Inaktiv op til io~9 m 30 35
DK 162649 B
21 TABEL I.
GH-sekretion in vitro, GRF-referencestandard a - , . , .
% af kontrolprøver 0,63 enhed 173 i 0,4 5 1,25 enheder 230 - 5 2,50 enheder 347 - 13 5,00 enheder 474 - 3 10,00 enheder 674 - 6
Naturligt PGRF(l-40) 10 12,5 femtomol 234 ± 17 25 femtomol 351 ί 7 50 femtomol 528 - 16 .100 femtomol 720 - 32 200 femtomol 748 - 7 15 Syntetisk PGRF(l-40) 10 femtomol 269 - 20 100 femtomol 701 - 6 1000 femtomol 990 ί 42
Foruden in vitro prøverne for sekretion af væksthormon blev 20 in vivo forsøg også foretaget ved indsprøjtning af det syn tetiske peptid i normale hanrotter med en legemsvægt på ca. 200 g, der var bedøvet med pentobarbital. Resultaterne anført i tabel II viser, at det syntetiske PGRF-peptid er en kraftig stimulator af sekretionen af hypofysevæksthormon.
DK 162649 B
22 TABEL II.
In vivo virkninger af syntetisk PGRF(1-40) på frigørelsen af hypofysevæksthormon efter en enkelt intravenøs indsprøjtning i normale rotter (4 dyr pr. behandlingsdosis).
5 Reaktioner i serum ir-GH i nanogram/ml på anførte tidspunkter før og efter Doser indsprøjtning -1 min. +5 min. +10 min. -+15 min. +30 min. +60 min.
0 mikrogram 173+ 47 251+ 81 339+139 396+121 749+440 316+ 76 10 0,01 pg 173+ 23 284+ 20 238+ 51 201+ 47 261+ 50 29¾ 25 0,1 pg 276+126 694+ 246 582+290 758+562 280+ 70 424+129 1,0 μg 142+ 24 4551+1825 1748+564 730+158 234+ 53 267+129 10,0 pg 234+76 7077+1943 4676+585 2464+378 616+112 223+26
Yderligere forsøg viser, at syntetisk PGRF-analog ifølge ek-15 sempel IV udviser i det væsentlige den samme biologiske virk ningsevne som det naturlige PGRF(1-40), og at de syntetiske fragmenter ifølge eksemplerne VI og VIA også udviser meget betydelig biologisk virkning. Yderligere har PGRF(1-40)-pep= tidet med α-carboxamidet ved C-terminalen ifølge eksempel V 20 stort set en biologisk virkningsstyrke, der er dobbelt så stor som virkningsstyrken af det ifølge eksempel VII undersøgte syntetiske peptid.
Eksempel VIII
De i eksempel VII beskrevne in vitro bestemmelser gentages un-25 der anvendelse af naturligt PGRF(l-40) og naturligt PGRF(l-44)i, og resultaterne viser, at naturligt PGRF(1-44) har mere end ca. dobbelt så stor biologisk virknings styrke.
DK 162649 Β ί 23
Yderligere afprøvning viser, at syntetisk PGRF(1-44)-fri syre, der er syntetiseret som angivet i eksempel I, udviser noget mindre virkningsevne end naturligt PGRF(1-44), og at syntetisk PGRF(1-44)-amid udviser i det væsentlige den sam-5 me virkningsevne som naturligt PGRF(1-44). Syntetisk PGRF(1-44)-amid udviser ved indsprøjtning i laboratoriedyr (rotter) den samme type GH-frigørende virkning, som udvistes åf PGRF(1-40) i tabel II i eksempel VII, men er ca. 2,5 til 3,0 gange mere virksom på vægtbasis end PGRF(1-40)-OH.
10 Ca. 1 ud af 7000 til 15.000 i USA fødte børn vides at være deficiente med hensyn til hypofysevæksthormon eller "hypofyse-dværge", d.v.s. at de er dværge, fordi de mangler de normale mængder hypofyse-GH i deres blod. Der er kliniske årsager til at formode, at de fleste af disse patienter har en nor-15 mal hypofysekirtel, og at årsagen til deres problem er en mangel i enten syntesen eller sekretionen af den hypothalame frigørelsesfaktor for GH. Syntetisk PGRF forventes af være det ideelle til behandling i de tilfælde, hvor der hidtil hår været behandlet med indsprøjtninger af humant hypofyse-20 GH, som er et overordentligt dyrt præparat, der udelukkende opnås fra menneskehypofyser ved autopsi. Humant GH, der er fremstillet ved hjælp af DNA-rekombinationsteknik, står, selv om det er fremført i litteraturen, i øjeblikket ikke til rådighed for rutinemæssig anvendelse. Syntetisk PGRF 25 er et langt simplere molekyle og skulle frembyde betydelige fordele til anvendelse overalt i verden, hvor antallet af sådanne hypofysedværge bedømmes til at andrage flere hundrede tusinde.
På grund af, at syntetisk PGRF er det første kendte molekyle, 30 der specifikt fastsætter hypofysefunktionen i henseende til GH-sekretion, repræsenterer det således den første rutineprøve for GH-sekretion i alle tilfælde, hvor en specifik 24
DK 162649 B
defekt ved hypofysefunktionen formodes af en læge. Syntetisk PGRF bør fremover erstatte de besværlige metoder, der i øjeblikket anvendes (arginininfusioner, hypoglycemia, L-DOPA-injektioner etc.) til bestemmelse af GH-sekretions-5 evne som en diagnostisk procedure.
Syntetisk PGRF bør have interesse i alle tilfælde inden for klinisk medicin, hvor en læge ønsker at begunstige en positiv nitrogenbalance og anabolisme, såsom sårheling, behandling af omfattende forbrændinger, post-operative perioder 10 efter omfattende kirurgi samt andre lægelige tilfælde af svækkelse inkl. mange syndromer til gerontologisk behandling samt den pediatriske behandling af for tidligt fødte børn. Stimulation af GH-sekretion er af interesse hos patienter under og efter kraftig strålebehandling for massive svulster, 15 igen for at fremme anabolisme og også for at drage fordel af virkningerne af GH på stimulationen af det hæmatopoietiske systems stamceller. Til administration til mennesker bør syntetiske PGRF-peptider have en renhed på mindst ca. 93% og'fortrinsvis mindst 98%. Denne renhed betyder, at det be-20 regnede peptid udgør den anførte vægtprocent af alle lignende peptider og tilstedeværende peptidfragmenter.
De fleste af de biologisk aktive peptider har vist sig at have andre biologiske virkninger end de virkninger, for hvilke de oprindeligt har været kendt. I betragtning af sådanne 25 fortilfælde er det sandsynligt, at PGRF vil vise sig at have ekstrahypofysære virkninger, der kan have praktisk interesse. Selv om PGRF blev ekstraheret og isoleret fra en human pan-creassvulst, antages det på basis af generel erfaring og eksperimenteren, at aminosyresekvensen i PGRF(1-44)-amid er 30 den samme som sekvensen i human hypothalam GH-frigørende faktor.
r r 25
DK 162649 B
Kronisk administration af syntetiske PGRF-peptider til landbrugsdyr eller andre varmblodede dyr forventes at fremme anabolisme og således forøge legemsvægten i henseende til muskelmasse. Brug i hydroponik til opdræt af fisk 5 og andre koldblodede havdyr ved vækstacceleration kommer også i betragtning. Administration til dyr i en renhed så lav som ca. 5% kan være acceptabel.
Syntetisk PGKF eller de ikke-toksiske salte deraf kan i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer til dannelse 10 af et farmaceutisk middel administreres til pattedyr inkl. mennesker, enten intravenøst, subkutant, intramuskulært eller oralt. Administrationen kan foretages af en læge til stimulation af frigørelsen af væksthormon, når værten, der behandles, kræver en sådan terapeutisk behandling. Den 15 nødvendige dosis vil variere med den pågældende lidelse, der behandles, med lidelsens alvorlighed og med varigheden af den ønskede behandling.
Sådanne peptider administreres ofte i form af farmaceutisk acceptable ikke-toksiske salte, såsom syreadditionssalte eller 20 metalkomplekser, f.eks. med zink, jern eller lignende (der betragtes som salte til nærværende ansøgnings fonnål). Eksempler på sådanne syreadditionssalte er hydrochlorid, hydro= bromid, sulfat, phosphat, maleat, acetat, citrat, benzoat, succinat, malat, ascorbat, tartrat og lignende. Hvis den ak-25 tive bestanddel skal administreres i tabletform, kan tabletten indeholde et bindemiddel, såsom traganth, majsstivelse eller gelatine, et desintegrerende middel, såsom alginsyre, og et smøremiddel, såsom magnesiumstearat. Hvis administration i flydende form ønskes, kan sødemidler og/eller aroma-30 midler anvendes, og intravenøs administration i isotonisk saltvand, phosphatpufferopløsninger eller lignende kan foretages .
Claims (5)
15 Patentkrav.
1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af PGRF eller PGRF-analoge peptidforbindelser med formlen (I): H-Tyr-Ala-Asp-Ala-20 Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala- Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-R4i~R eller C-terminalt forkortede biologisk aktive fragmenter deraf med mindst 27 aminosyreres-ter strækkende sig fra og med N-terminalen, hvori R er OH el-25 ler NH2, og R41 er Arg, Arg-Ala, Arg-Ala-Arg, Arg-Ala-Arg-Leu eller des-R4i, °9 farmaceutisk acceptable additionssalte deraf» kendetegnet ved, at man (a) ud fra et peptidmellemprodukt med formlen (II): 30 χ-1-Tyr (χ2)-Ala-Asp(χ2) - Ala-Ile-Phe-Thr (X^) -Asn-Ser (χ5) _ Tyr(x2)-Arg(x6)-Lys(x7)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(x5)-Ala- Arg(x6)-Lys(X7)-Leu-Leu-Gln-Asp(X3)-ile-Met-Ser(x5)-Arg(x6)-Gln-Gln-Gly-Glu(x3)-Ser(x5)_Asn-Gln-Glu(x3)-Arg(x5 eller χ6)-Gly-Ala(x6)-R41(x6)-X8, 35 eller en C-terminalt forkortet version deraf med mindst 27 aminosyrerester strækkende sig fra og med N-terminalen, * I DK 162649 B hvori X* er hydrogen eller en α-aminobeskyttelsesgruppe, X2 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Tyr's phenoliske hy-droxylgruppe, X3 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for carboxylgruppen i Asp eller Glu, X1 er hydrogen eller en be-5 skyttelsesgruppe for Thr's alkoholiske hydroxylgruppe, X2 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Ser's alkoholiske hydroxylgruppe, X3 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Arg's guanidinogruppe, X4 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for sidekædeaminogruppen i Lys, og X5 er valgt blandt 10 OH, OCH3, lavere alkylestere, lavere alkylamider, hydrazid, -0-CH2-harpiksbærer og -NH-harpiksbærer, forudsat at mindst et af symbolerne X1 til X5 er andet end H eller OH, (b) fraspalter beskyttelsesgrupper og eventuelt covalent bunden harpiksbærer til opnåelse af polypeptidet, og om ønsket omdanner det 15 resulterende peptid til et ikke-toksisk additionssalt deraf.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R41 er Arg-Ala-Arg-Leu.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendeteg net ved, at R er NH2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendeteg net ved, at R er OH. 25 2 Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at formlen for forbindelsen er H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2· 30 3 Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-5, kendetegnet ved, at X1 er BOC, X2 er 2,6-dichlorbenzyl, X3 er Bzl, X1 er Bzl, Xs er Bzl, X5 er Tos, X4 er 2-chlorbenzyloxy-carbonyl, og X5 er -0-CH2~harpiksbærer. 35 4 Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-5, kende 5 tegnet ved, at X1 er BOC, X2 er 2,6-dichlorbenzyl, X3 er DK 162649 B Bzl, X4 er Bzl, X5 er Bzl, X6 er Tos, X7 er 2-chlorbenzyl0xy-carbonyl, og X8 er -NH-harpiksbærer.
8. Peptid til anvendelse som udgangsmateriale ved fremgangs-5 måden ifølge krav 1 og med formlen: χΙ-Tyr(X2)-Ala-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Tyr(X4)-Asn-Ser(X8)-Tyr(X2)-Arg(X8)-Lys(X7)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X8)-Ala-Arg(X6)-Lys(X7)-Leu-Leu-Gln-Asp(X8)-Ile-Met-Ser(X5)-10 Arg(X8)-Gln-Gln-Gly-Glu(X3)-Ser(X5)-Asn-Gln-Glu(X3)-Arg(X5 eller X6)-Gly-Ala-Arg(X6)-Ala-Arg(X6)-Leu-X8 eller en C-terminalt forkortet version deraf med mindst 27 aminosyrerester strækkende sig fra og med N-terminalen, 15 kendetegnet ved, at X* er hydrogen eller en a-aminobeskyttelsesgruppe, X2 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Tyr's phenoliske hydroxylgruppe, X3 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for carboxylgruppen i Asp eller Glu, X4 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe 20 for Thr's alkoholiske hydroxylgruppe, X5 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Ser's alkoholiske hydroxylgruppe, X8 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for Arg's guanidinogruppe, X7 er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for sidekædeami nogruppen i Lys, og X8 er valgt blandt 25 HO, OCH3, lavere alkylestere, lavere alkylamider, hydra-zid, 0-CH2“harpiksbærer og -NH-harpiksbærer, forudsat at mindst én X-gruppe er hverken H eller OH. 30 35
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US8200812 | 1982-06-16 | ||
| US8200812 | 1982-06-16 | ||
| US41824882 | 1982-09-15 | ||
| US06/418,248 US4517181A (en) | 1982-09-15 | 1982-09-15 | Mammalian PGRF |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK278383D0 DK278383D0 (da) | 1983-06-16 |
| DK278383A DK278383A (da) | 1983-12-17 |
| DK162649B true DK162649B (da) | 1991-11-25 |
| DK162649C DK162649C (da) | 1992-04-13 |
Family
ID=23657331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK278383A DK162649C (da) | 1982-06-16 | 1983-06-16 | Analogifremgangsmaade til fremstilling af pgrf eller pgrf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable additionssalte heraf samt mellemprodukt til brug ved fremgangsmaaden |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4517181A (da) |
| JP (1) | JPS5916863A (da) |
| AT (1) | ATE17737T1 (da) |
| BG (1) | BG37523A3 (da) |
| CZ (1) | CZ281507B6 (da) |
| DE (1) | DE3362003D1 (da) |
| DK (1) | DK162649C (da) |
| HU (1) | HU198952B (da) |
| IE (1) | IE55361B1 (da) |
| RO (1) | RO88703A (da) |
| SK (1) | SK278537B6 (da) |
| YU (1) | YU44041B (da) |
| ZA (1) | ZA834051B (da) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4703035A (en) * | 1982-10-04 | 1987-10-27 | The Salk Institute For Biological Studies | Human pancreatic GRF amidated fragments |
| US4628043A (en) * | 1983-04-26 | 1986-12-09 | The Salk Institute For Biological Studies | Hypothalamic GRF agonists |
| BE898666A (fr) * | 1984-01-12 | 1984-05-02 | Wallone Region | Procede de preparation de clones bacteriens portant une information genetique optimalisee pour la production du facteur de declenchement de l'hormone de croissance humaine dans escherichia coli |
| US4747825A (en) * | 1984-06-29 | 1988-05-31 | Ferring Laboratories, Inc. | Apparatus and methodology for pulsed administration of growth promoting agents |
| FR2567524B1 (fr) * | 1984-07-10 | 1987-11-27 | Sanofi Sa | Procede de synthese de la somatocrinine en phase liquide et peptides intermediaires |
| CA1271600A (en) * | 1985-01-07 | 1990-07-10 | David Howard Coy | Growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith |
| US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
| CA1296253C (en) * | 1986-10-20 | 1992-02-25 | Praveen Tyle | Stabilized growth hormone compositions |
| US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| US4801456A (en) * | 1987-07-09 | 1989-01-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| USRE33699E (en) * | 1987-07-09 | 1991-09-24 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
| WO1989007110A1 (en) * | 1988-01-28 | 1989-08-10 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| US5153175A (en) * | 1989-05-25 | 1992-10-06 | University Of Tennesee Research Corporation | Method of inducing sleep with GHRH complementary peptide compositions |
| US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
| US5137871A (en) * | 1989-07-28 | 1992-08-11 | Regents Of The University Of California | Treatment to reduce edema for brain and musculature injuries |
| US5488033A (en) * | 1989-07-28 | 1996-01-30 | The Regents Of The University Of California | Treatment to reduce edema |
| US5015626A (en) * | 1989-08-02 | 1991-05-14 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Porcine somatotropin to improve meat quality of pigs |
| EP0544706A4 (en) * | 1990-06-29 | 1993-10-13 | Hoffmann-La Roche Inc. | Histidine substituted growth hormone releasing factor analogs |
| DK0490249T3 (da) * | 1990-12-10 | 1995-05-29 | Hoffmann La Roche | Fremgangsmåde til enzymatisk fremstilling af GRF(1-44)-NH2 |
| EP0542937A1 (en) * | 1991-04-09 | 1993-05-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Growth hormone releasing factor analogs |
| US5246920A (en) * | 1992-06-15 | 1993-09-21 | University Of South Florida | Treatment of hyperprolactinemia |
| US5811074A (en) * | 1992-06-29 | 1998-09-22 | University Of South Florida | Method of diagnosing pituitary dependent growth hormone deficiency |
| US5817627A (en) * | 1996-06-14 | 1998-10-06 | Theratechnologies Inc. | Long-acting galenical formulation for GRF peptides |
| JP2004520395A (ja) * | 2001-02-02 | 2004-07-08 | コンジュケム，インコーポレーテッド | 長期持続性成長ホルモン放出因子誘導体 |
| MXPA05002991A (es) * | 2002-09-18 | 2005-10-05 | Univ Montreal Ct Hospitalier Chum | Analogos de ghrh. |
| US20080260820A1 (en) * | 2007-04-19 | 2008-10-23 | Gilles Borrelly | Oral dosage formulations of protease-resistant polypeptides |
| US20090088380A1 (en) * | 2007-07-12 | 2009-04-02 | Pierrette Gaudreau | Ghrh analogs and therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4201840A (en) * | 1977-10-06 | 1980-05-06 | Eastman Kodak Company | Photographic film units containing a polymeric mordant which covalently bonds with certain dyes |
| DE2846412A1 (de) * | 1978-10-25 | 1980-05-08 | Behringwerke Ag | Mittel zur behandlung allergischer reaktionen |
| JPS55152459A (en) * | 1979-05-18 | 1980-11-27 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Method and reagent for measuring quantity of cyclic nucleotide |
-
1982
- 1982-09-15 US US06/418,248 patent/US4517181A/en not_active Expired - Lifetime
-
1983
- 1983-06-03 ZA ZA834051A patent/ZA834051B/xx unknown
- 1983-06-15 CZ CS834357A patent/CZ281507B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 SK SK4357-83A patent/SK278537B6/sk unknown
- 1983-06-15 IE IE1415/83A patent/IE55361B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-06-16 DK DK278383A patent/DK162649C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-06-16 JP JP58108528A patent/JPS5916863A/ja active Granted
- 1983-06-16 HU HU832511A patent/HU198952B/hu unknown
- 1983-06-16 BG BG8361360A patent/BG37523A3/xx unknown
- 1983-06-16 DE DE8383303490T patent/DE3362003D1/de not_active Expired
- 1983-06-16 AT AT83303490T patent/ATE17737T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-08-01 RO RO83111789A patent/RO88703A/ro unknown
- 1983-09-15 YU YU1866/83A patent/YU44041B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ435783A3 (en) | 1996-07-17 |
| DE3362003D1 (de) | 1986-03-13 |
| HU198952B (en) | 1989-12-28 |
| DK162649C (da) | 1992-04-13 |
| ZA834051B (en) | 1984-10-31 |
| ATE17737T1 (de) | 1986-02-15 |
| US4517181A (en) | 1985-05-14 |
| DK278383D0 (da) | 1983-06-16 |
| IE55361B1 (en) | 1990-08-29 |
| JPH0133118B2 (da) | 1989-07-11 |
| CZ281507B6 (cs) | 1996-10-16 |
| JPS5916863A (ja) | 1984-01-28 |
| SK435783A3 (en) | 1997-09-10 |
| SK278537B6 (en) | 1997-09-10 |
| YU44041B (en) | 1990-02-28 |
| IE831415L (en) | 1983-12-16 |
| BG37523A3 (en) | 1985-06-14 |
| YU186683A (en) | 1985-12-31 |
| DK278383A (da) | 1983-12-17 |
| RO88703A (ro) | 1986-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK162649B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af pgrf eller pgrf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable additionssalte heraf samt mellemprodukt til brug ved fremgangsmaaden | |
| FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
| FI92210B (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi | |
| FI83660B (fi) | Foerfarande foer framstaellning bukspottskoertelns grf hos maenniskan. | |
| US4610976A (en) | Porcine GRF | |
| US4585756A (en) | Bovine GRF | |
| FI87080B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av grf -analoger. | |
| US4605643A (en) | Ovine GRF | |
| HU199508B (en) | Process for producing grf analogues and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| FI81589B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-peptidanaloger. | |
| EP0067608B1 (en) | Crf and analogs | |
| KR0163033B1 (ko) | Grf 유사체 viia | |
| CA1247599A (en) | Mammalian pgrf | |
| US4908352A (en) | Urotensin peptides | |
| EP0307860B1 (en) | Cyclic GRF-analogs | |
| US4393050A (en) | Analogs of extended N-terminal somatostatin | |
| US4959352A (en) | Cyclic growth hormone releasing factor analogs and method for the manufacture thereof | |
| CA1271899A (en) | Grf analogs |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |