SK278537B6 - Synthetic peptides, biologically active fragment and non-toxic synthetic peptide salt - Google Patents
Synthetic peptides, biologically active fragment and non-toxic synthetic peptide salt Download PDFInfo
- Publication number
- SK278537B6 SK278537B6 SK4357-83A SK435783A SK278537B6 SK 278537 B6 SK278537 B6 SK 278537B6 SK 435783 A SK435783 A SK 435783A SK 278537 B6 SK278537 B6 SK 278537B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- leu
- arg
- gln
- ala
- ser
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 77
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 31
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 13
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 title claims abstract description 10
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 2
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 26
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 30
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 30
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 24
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 24
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 19
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 13
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 11
- 102000038461 Growth Hormone-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- -1 monocyclic heterocyclic amides Chemical class 0.000 description 10
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 10
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 10
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 9
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 3
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 2
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 2
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 2
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNTWKPAKVQFCCF-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1h-triazole Chemical compound N1NC=CN1 SNTWKPAKVQFCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 101710183427 CREB3 regulatory factor Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 101800000736 Growth hormone-releasing factor Proteins 0.000 description 1
- 101000664737 Homo sapiens Somatotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 206010021067 Hypopituitarism Diseases 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYMWSBVKAPVTPI-UHFFFAOYSA-N N1N=[C-]N=C1 Chemical class N1N=[C-]N=C1 GYMWSBVKAPVTPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025240 Pituitary deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical class C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000003289 ascorbyl group Chemical class [H]O[C@@]([H])(C([H])([H])O*)[C@@]1([H])OC(=O)C(O*)=C1O* 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N benzene Substances C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 239000012351 deprotecting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WMYNMYVRWWCRPS-UHFFFAOYSA-N ethynoxyethane Chemical group CCOC#C WMYNMYVRWWCRPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N isoxazole Chemical class C=1C=NOC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940072783 liquimat Drugs 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002182 neurohumoral effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000003068 pituitary dwarfism Diseases 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003890 succinate salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka syntetických peptidov, ktoré ovplyvňujú funkciu hypofýzy u ľudí a ďalších cicavcov tak, že podporujú uvoľňovanie rastového hormónu. Vynález sa týka aj ich aktívnych fragmentov a netoxických solí.
Doterajší stav techniky
Už po roku 1950 bolo známe, že hypotalamus ovplyvňuje všetky sekrečné funkcie hypofýzy. Išlo o neurohumorálny typ riadenia, pri ktorom špecializované neurosekretorické neuróny hypotalamu produkujú zvláštne polypeptidy, ktoré riadia krátkodobo a dlhodobo sekréciu každého hypofýzámeho hormónu. K dnešnému dňu bol faktor, ktorý riadi uvoľňovanie tyreotropínu a prolaktínu nazvaný tripeptidom TRF, zlúčenina pre gonadotropíny a to pre luteinizačný hormón a folikulostimulačný hormón je nazývaná dekapeptidom LRF, LH-RH, GnRH alebo Gn-RF. Pre hormóny β-endorfln a adrenokortikotropín ide o polypeptid so 41 aminokyselinami nazývaný CRF. Okrem toho bol zistený aj inhibičný faktor, ktorý spôsobuje inhibíciu sekrécie rastového hormónu. Všetky tieto faktory vrátane somatostatínu bolo možné syntetizovať a boli pripravené aj analógy prirodzených látok, ktoré majú často väčšiu účinnosť než látky prírodné.
Až dosiaľ nebol charakterizovaný zodpovedajúci faktor pre rastový hormón alebo somatotropín, hoci fyziologické a klinické dôkazy jeho existencie boli zrejmé. Jedným z hlavných problémov izolácie a charakterizácie faktora, ktorý uvoľňuje rastový hormón (ďalej GRF) spočíva v tom, že účinný peptid je zrejme prítomný v každej časti hypotalamu v nesmieme malom množstve, ktoré je zrejme poriadku 50 až 150 femtomolov. Je to množstvo oveľa nižšie, než ako bolo kedy prepočítané pre ostatné faktory. Dôvod je zrejme ten, že hypotalamický GRF má výnimočne veľkú účinnosť.
Ďalší problém pri izolácii hypotalamického GRF spočíva v tom, že v hypotalamických extraktoch sa nachádza veľké množstvo somatostatínu, ktorý ruší akékoľvek biologické pokusy. V priebehu minulých rokov niekoľko laboratórií prehlásilo, že sa im podarilo izolovať hypotalamický GRF. Vždy išlo o artefakty, ako bolo neskoršie dokázané v publikáciách Schally A. V. S. a ďalší, J. Biol. Chem., 246, 6647, 1971, Veber D. F. a ďalší. Biochem. Biophys. Res. Commun., 45, 235, 1971. Tieto nesprávne výsledky sú zrejme spôsobené ťažkosťami pri biologickom stanovení.
Teraz bol izolovaný polypeptid so 44 zvyškami aminokyselín z nádoru Langerhansových ostrovčekov, tento polypeptid bol čistený, charakterizovaný a chemicky syntetizovaný a skúšaný a bolo dokázané, že uvoľňuje rastový hormón (GH) z hypofýzy.
Išlo o peptid s raťazcom
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2·
Zrejme ide o látku pankreatického pôvodu, ktorá uvoľňuje rastový hormón, táto látka bola nazvaná PGRF a tiež somatokrinín. Súčasne boli izolované aj ďalšie dva vysoko čistené peptidy, ktoré taktiež spôsobujú uvoľňovanie rastového hormónu a ktoré boli označené ako PGRF (1-37) voľná kyselina a PGRF (1-40) voľná kyselina. Tieto peptidy je možné použiť na podporu rastu teplokrvných živočíchov a studenokrvných živočíchov v poľnohospodárstve.
PGRF je možné spracovať na farmaceutické pros5 triedky, je možné použiť aj jeho analógy alebo biologicky účinné fragmenty, netoxické soli a podobne, dispergované vo farmaceutický prijateľnej kvapaline alebo v tuhom nosiči. Tieto prostriedky je možné použiť v ľudskom a veterinárnom lekárstve krátkodobo a dlhodobo 10 na diagnostické a liečebné účely.
Nomenklatúra, použitá pri pomenovaní peptidov je v súlade s publikáciou Schroder a Lubke, The Peptides”, Academic Press (1965), v ktorých v súlade s bežným názvoslovím sa aminokyselina N-terminálneho zakonče15 nia nachádza vľavo a karboxylová skupina na C-zakončení vpravo. V prípade, že aminokyselina má izomému formu, ide o L-formu použitej aminokyseliny, ak nie je výslovne uvedené inak.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoria syntetické peptidy všeobecného vzorca (I),
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-R34-Asn-Gln-Glu-R38-Gly-R40-R41-R kde
R znamená skupinu OH alebo NH2,
R34 znamená Ser alebo Ala,
R38 znamená Arg alebo Ser,
R4® znamená Ala alebo Arg a
R4' znamená Arg, Arg-Ala, Arg-Ala-Arg, Arg-Ala-Arg-Leu alebo chýba, ako aj biologicky aktívne fragmenty týchto látok obsahujúce aspoň prvých 27 zvyškov aminokyselín 40 a ich netoxické soli.
Podstatu vynálezu tvorí taktiež biologicky aktívny fragment syntetického peptidu všeobecného vzorca(I) podľa nároku 1, obsahujúci reťazec aminokyselín
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-, najmä zlúčeniny zo skupiny biologicky aktívnych fragmentov.
(a) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-OH.
(b) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-AsnGln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-OH.
(c) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-AsnGln-Glu-Arg-Gly-Ala-OH.
II II
II (d) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-OH.
(e) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-5
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-OH.
(f) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-10
-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-OH.
(g) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-15
-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-Nl·^.
(h) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Scr-Tyr-Arg-
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ala-Asn-20
-Gln-Glu-Ser-Gly-Arg-OH.
(i) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-25
-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-NH2· (j) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-30
-Gln-Glu-OH.
(k) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-35
-Gln-Glu-NH2.
a tiež netoxické soli týchto peptidov a ich fragmentov.
Peptidy sa výhodne pripravujú v tuhej fáze, tak ako bolo opísané v publikácii Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 40 85, str. 2149, 1963, hoci je možné použiť aj iné spôsobychemickej syntézy. Syntéza v tuhej fáze sa začína od C-terminálneho zakončenia tak, že sa naviaže chránená a-aminokyselina na vhodnú živicu. Tento východiskový materiál je možné získať tak, že sa esterovou väzbou na- 45 viaže chránená α-aminokyselina Leu alebo Ala na chlórmetylovanú alebo hydroxymetylovanú živicu alebo amidovou väzbou na živicu BHA alebo MBHA.
Voľba ochrannej skupiny na aminokyseline nie je kritická, musí však ísť o skupinu, ktorá nie je odstránená v 50 priebehu odstránenia ochrannej skupiny na a-aminoskupine pri syntéze. Znamená to, že ochranná skupina na α-aminoskupine a na bočnom reťazci nemôže byť totožná.
Pri voľbe ochrannej skupiny na určitom bočnom reťazci ^5 pri syntéze peptidov je potrebné zachovať nasledujúce pravidlá:
a) ochranná skupina má byť stále vzhľadom na reakčné činidlo a za reakčných podmienok pri odstraňovaní ochrannej skupiny na α-aminoskupinc vo všetkých stup- 60 ňoch syntézy,
b) ochranná skupina si musí zachovať svoje vlastnosti a nesmie byť odštiepená v priebehu väzby a
c) ochranná skupina na bočnom reťazci musí byť odstránená po skončení syntézy za reakčných podmienok, pri ktorých nebude poškodený peptidový reťazec.
Príprava hydroxymetylovanej živice je opísaná v publikácii Bodansky a ďalší, Chem. Ing., (Londýn), 38, 1597 až 1598, 1966. Chlórmetylované živice bežne dodávajú Bio-Rad Laboratories Richmond, Kalifornia a Lab. Systcms, Inc. Príprava tejto živice bola opísaná v publikácii Stewart a ďalší, Solid Phase Peptide Synthesis, (Freeman a Co., San Francisco 1969, kapitola 1, str. 1 až
6) BHA a MBHA živice sa bežne dodávajú a používajú sa len v tom prípade, že požadovaný peptid obsahuje α-karboxamid na C-terminálnom zakončení.
Ala, chránený BOC sa naviaže na chlórmetylovanú živicu spôsobom podľa publikácie Monahan a Gilon, Bipolymer 12, str. 2513 až 2519, 1973 v prípade, že je požadovaný napríklad peptid so 40 kyselinami. Po väzbe BOC-Ala na živici sa odstráni ochranná skupina na α-aminoskupine, napríklad kyselinou trifluóroctovou (TFA), v metylénchloride. Ochranná skupina sa odstráni pri teplote 0 °C až teplote miestnosti. Je možné tiež použiť ďalšie bežné činidlá na odstránenie ochrannej skupiny na α-aminoskupinc, tak ako boli opísané v publikácii Schroder a Lubke, The Peptides, 1, str. 72 až 75 (Academic Press 1965).
Po odstránení ochrannej skupiny na a-aminoskupine Ala sa postupne nadväzujú zvyšné chránené aminoskupiny v požadovanom poradí za vzniku medziproduktu, tak ako bol definovaný alebo je možné niektoré aminokyseliny viazať pred syntézou a až potom ich pripojiť k výslednému produktu. Príslušné činidlo na naviazanie aminokyselín sa volí v súlade s pravidlami, ktoré sa v danej oblasti techniky bežne dodržujú. Zvlášť vhodným činidlom jc Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodi-imid (DCCI).
Aktivačné činidlá, používané pri syntéze peptidov na tuhej fáze sú dobre známe. Príkladom vhodných aktivačných činidiel môžu byť:
1) karbodiimidy, napríklad N,N'-diizopropylkarbodi-imid, N-etyl-N'-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid,
2) kyanidy, napríklad N.N'-dibenzylkyánamid,
3) ketimidy,
4) izcxazóliové soli, napríklad N-etyl-5-fenylizoxalium-3'-sulfonát,
5) monocyklické heterocyklické amidy aromatickej povahy s obsahom 1 až 4 atómov dusíka v kruhu, napríklad imidazoly, pyrazolidy a 1,2,4-triazolidy, špecifickými heterocyklickými amidmi na toto použitie sú Ν,Ν'-karbonyldiimidazol a N,N'-karbonyl-di-l,2,4-triazol,
6) alkoxylovaný acetylén, napríklad etoxyacetylén,
7) reakčné činidlá, ktoré tvoria zmesový anhydrid s karboxylovou skupinou aminokyseliny, napríklad etylchlórmravčan a izobutylchlórmravčan a
8) reakčné činidlá, ktoré tvoria s karboxylovou skupinou aminokyseliny aktívny ester, napríklad heterocyklické zlúčeniny s obsahom dusíka, ktoré nesú na jednom atóme kruhu hydroxyskupinu, napríklad N-hydroxyftalimid, N-hydroxysukcínimid a 1-hydroxybenzotriazol (HOBT).
Ďalšie aktivačné činidlá a ich použitie pri väzbe peptidov sú opísané v publikácii Schrodera a Lubkeho tak, ako boli uvedené v kapitole III a v publikácii Kappor J., Pharm. Sci., 59, str. 1 až 27, 1970.
Každá chránená aminokyselina alebo reťazec aminokyselín sa privádza pri syntéze na tuhej fáze v dvojnásobnom alebo vyššom prebytku, väzba sa vykonáva v prostredí zmesi dimetylformamidu (DMF) a metylénchloridu v pomere 1:1 alebo v samotnom dimetylformamide alebo metylénchloride.
Ί.
I
SK 278537 Β6
V prípade, že dôjde k neúplnej väzbe, je potrebné väzbu opakovať pred odstránením ochrannej skupiny na aaminoskupine a pred väzbou ďalšej aminokyseliny. Úspech reakcie v každom stupni je možné sledovať ninhydrínovou reakciou podľa publikácie E. Kaiser a ďalší, Anal. Biochem., 34, 595, 1970.
Po získaní požadovaného reťazca aminokyselín sa peptid, ktorý je medziproduktom, odstráni zo živice reakčným činidlom, napríklad fluoridom vodíka, ktorý štiepi peptid od živice a súčasne odštiepi všetky zvyšné ochranné skupiny na bočnom reťazci za vzniku výsledného peptidu.
Medziprodukt je možné oddeliť od živice aj alkoholom a potom sa C-terminálny alkylester premení na kyselinu hydrolýzou. Ochranné skupiny na bočnom reťazci je možné odštiepiť ako je opísané alebo napríklad katalytickou redukciou s použitím paládia alebo síranu bámatého. Použitím fluorovodíka sa do reakčnej zmesi pridáva anizol a metyletylsulfid ako činidlo pohlcujúce kyselinu.
V nasledujúcich príkladoch bude opísaný výhodný spôsob syntézy PGRF na tuhej fáze. Syntézu kratšieho fragmentu peptidu je možné uskutočniť rovnako tak, že sa oddelí určitý počet aminokyselín na niektorom konci reťazca, biologicky účinné fragmenty by však mali obsahovať reťazec, uvedený na N-zakončení.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Syntézu PGRF (1 až 44) vo forme voľnej kyseliny vzorca
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-GIn-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-OH dodáva napríklad z Lab Systeme, Inc. s obsahom 0,9 Meq Cl/g. Väzba BOC-Leu na živici sa vykonáva podľa publikácie Monahana a ďalších, Biopolymers, zväzok 12 (1973) strany 2513 až 2519 a výsledok je substitúcia 0,22 mmolu Leu na gram živice. Všetky použité rozpúšťadlá sa vopred premyjú inertným plynom, výhodne héliom, aby bolo isté, že neobsahujú kyslík, ktorý by mohol nežiaducim spôsobom oxidovať síru na zvyšku Met.
Po odstránení ochrannej skupiny a neutralizácii sa postupne buduje na živici peptidový reťazec. Odstránenie ochrannej skupiny, neutralizácia a pridanie každej aminoskupiny sa vykonáva podľa publikácie Guillemin a ďalší US patentový spis č. 3 904 594. Špecifické podmienky väzby sú uvedené v nasledujúcej tabuľke:
| Stupeň | Reakčné činidlo a postup Čas miešania v minútach | |
| 1 | Premytie metylénchloridom (2x) | 0,5 |
| 2 | 50% kyselina trifluóroctová (TFA) + 5% 1,2-etánditiol v metylénchloride (lx) | 0,5 |
| 3 | 50% kyselina trifluóroctová + 5% 1,2-etánditiol v metylénchloride (lx) | 20,0 |
| 4 | premytie metylénchloridom (3x) | 0,5 |
| 5 | premytie metanolom (2x) | 0,5 |
| 6 | 10% trietylamin (Et^N) v metylénchloride, neutralizácia (2x) | 0,5 |
premytie metanolom (2x)0,5
10% trietylamin (EtjN) v metylén- chloride, neutralizácia (2x)0,5 premytie metanolom (2x)0,5
10 premytie metylénchloridom (2x)0,5
BOC-aminokyselina (1 mmol/g živice) a ekvivalentné množstvo dicyklohexyl-
| karbodiimidu v metylénchloride | 120 | |
| 12 | premytie metylénchloridom (lx) | 0,5 |
| 10 13 | 50% dimetylformamid v metylénchloride (2x) | 0,5 |
| 14 | 10% trietylamin v metylénchloride (lx) 0,5 | |
| 15 | metanol (2x) | 0,5 |
| 16 | metylénchlorid (2x) | 0,5 |
| 15 17 | 25% anhydrid kyseliny octovej v metylénchloride (2 ml/g živice) | 20,0 |
| 18 | premytie metylénchloridom (2x) | 0,5 |
| 19 | premytie metanolom (2x) | 0,5 |
* Pri väzbe Asn a Gin sa použije 1,136 molámy prebytok 1-hydroxybenzotriazolu v tomto stupni.
Pri väzbovej reakcii sa zvyčajne používa 1 mol aminokyseliny, chránenej BOC v metylénchloride na gram 25 živice a 1 ekvivalent 0,5 molámeho dicyklohexylkarbodiimidu v metylénchloride alebo 30% dimetylformamid v metylénchloride počas 2 hodín. Pri väzbe Arg sa používa zmes 10 % dimetylformamidu s metylénchloridom. Bzl sa používa ako ochranná skupina na hydroxylovej 30 skupine bočného reťazca pre Ser a Thr. 2-Chlórbenzyloxykarbonyl (2C1-Z) sa používa ako ochranná skupina pre bočný reťazec Lys. Tos sa používa na ochranu guanidínovej skupiny Arg a karboxylová skupina Glu alebo Asp sa chráni ako Bzl ester. Fenolová hyd35 roxylová skupina Tyr sa chráni 2,6-dichlórbenzylovou skupinou. Na konci syntézy sa získa nasledujúci produkt: X°-Tyr(X2)-Ala-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-Asn-Ser(x5)-Tyr(X2)-Arg(X6)-Lys(X7)-Val-Leu-Gly-Gln40 -Leu-Ser(X3)-Ala-Arg(x6)-Lys(X7)-Leu-Leu-Gln-Sep(X3)-Ile-Met-Ser(X5)-Arg(X6)-Gln-Gln-Gly-Glu(X3)-Ser-(X5)-Asn-Gln-Glu(X3)-Arg(X6)-Gly-Ala-Arg(X6)-Ala-Arg(X6)-Leu-(X8), kde
X1 znamená BOC,
X2znamená 2,6-dichlórbenzyl, X3znamená benzylester, X4znamená Bzl, 50 X3znamená Bzl,
X^znamená Tos, X7znamená 2C1-Z a X8znamená -O-CF^-benzénpolystyrénová živica ako tuhá fáza.
Po naviazaní posledného zvyšku Tyr na živicu sa odstráni skupina BOC pôsobením 45% TPA v metylénchloride. Na odštiepenie zvyšku reťazca a odstránenie ochranných skupín sa pridá 1,5 ml anizolu, 0,25 ml metyletylsulfídu a 10 ml fluorovodíka na 1 g peptidu, via60 zaného na živicu pri teplote -20 °C sa nechá reakčná zmes stáť pol hodiny a potom ešte pol hodiny pri teplote 0 °C. Fluorovodík sa odstráni vo vákuu a zvyšok peptidu, viazaného na živicu sa striedavo premýva bezvodým dietyléterom a chloroformom, potom sa peptid extrahuje 65 2 M vodným roztokom kyseliny octovej, zbaveným plynov. Lyofilizáciou tohto extraktu sa získa biely .ľ!
vločkovitý materiál.
Odštiepený peptid, zbavený ochranných skupín sa potom rozpustí v 30% kyseline octovej a preflltruje sa na vrstve Sephadexu G-50.
Peptid sa potom ďalej čistí ionomeničovou chromá- 5 tografiou na karboxymetylcelulóze CM-32 (Whatman), stĺpec má rozmery 1,8 x 18 cm, objem vrstvy 50 ml, použije sa gradient, ktorý· vzniká tak, že sa po kvapkách pridáva 1 liter 0,4 M octanu amónneho s pH 6,5 do miešacej banky s obsahom 10 400 ml 0,01 M octanu amónneho s pH 4,5. Konečné čistenie sa vykonáva chromatografiou na Sephadexe G-50 (Phartnacia) s použitím zmesi n-butanolu, etanolu, pyridínu a 0,2% octanu amónneho v objemovom pomere 4:1:1:7. Podrobnosti, týkajúce sa čistenia sú všeobecne 15 uvedené v publikácii Ling a ďalší Biochem. Biophys Res. Commun. 95, 945 (1980). Chromatografické frakcie sa sledujú chromatografiou na tenkej vrstve a spoja sa len frakcie s dostatočnou čistotou.
Analýza aminokyselín sa vykonáva hydrolýzou v u- 20 zavretých trubiciach spôsobom podľa Anál, Biochem., 126, 144 až 156 (1982) s použitím analyzátora aminokyselín Liquimat III na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom:
Asx(2,63), Thr(0,75), Ser(3,5), Glx(6,83), Gly(2,87), Ala(5,10), Val(0,9), Met(l,23), Ile(l,84), Leu(5,045), Tyr(2,09), Phe(0,91), Lys(2,31) a Arg(6,6l).
Analýza overila správnosť sledu.
Príklad 2
Syntéza PGRF (1 až 40) vzorca:
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-OH sa vykonáva postupne s použitím zariadenia Beckman 990 Peptide Synthesizer na chlórmetylovanej živici spôsobom podľa príkladu 1. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je získaný peptid v podstate čistý. 45
Analýza aminokyselín bola vykonávaná po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom:
Asx(3,89), Thr(0,88), Ser(3,66), Glx(7,04),
Gly(3,07), Ala(4,02), Val(0,96), Met(l,01), 50
Ile( 1,86), Leu(4,28), Tyr(2,0), Phe(0,86),
Lys(2,24) aArg(4,15).
Analýza potvrdila správnosť sledu.
Príklad 2A
Syntéza PGRF (1 až 34) vo forme voľnej kyseliny vzorca:
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg- 60
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-OH sa vykonáva postupne spôsobom podľa príkladu 1 s použitím prístroja Beckman 990 Peptide Synthesizer na chlórmetylovanej živici. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je produkt v podstate čistý.
Analýza aminokyselín bola vykonávaná po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom:
Asx(2,87), Thr(0,78), Scr(3,78), Glx(5,l 1),
Gly(l,93), Ala(3,03), Val(0,88), Met(0,96),
Ile(l,88), Leu(4,14), Tyr(2,05), Phe(l,07), Lys(2,29) a Arg(3,22).
Analýza potvrdila správnosť sledu.
Príklad 2B
Syntéza PGRF (1 až 31) vo forme voľnej kyseliny vzorca
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-OH sa vykonáva postupne s použitím prístroja Beckman 990 Peptide Synthesizer na chlórmetylovanej živici spôsobom podľa príkladu 1. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je peptid v podstate čistý.
Analýza aminokyselín sa vykonáva po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom: Asx(2,73), Thr(0,75), Ser(2,77), Glx(3,95), G1y(0,98), Ala(3,06), Val(0,80), Met(0,98), Ile(l,77), Leu(4,28), Tyr(2,23), Phe(l,07),
Lys(2,29) a Arg(3,22).
Analýza potvrdila správnosť sledu.
Príklad 2C
Syntéza PGRF (1 až 28) vo forme voľnej kyseliny vzorca
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-OH sa vykonáva postupne spôsobom podľa príkladu 1 s použitím prístroja Beckman 990 Peptide Synthesizer na chlórmetylovanej živici. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je peptid v podstate čistý.
Analýza aminokyselín sa vykonáva po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom:
Asx(2,66), Thr(0,83), Ser(2,66), Glx(l,98),
Gly(0,81), Ala(2,89), Val(0,90), Met(l,15),
Ile(l,72), Leu(4,14), Tyr(2,43), Phe(l,58), Lys(2,15) a Arg(2,19).
Analýza potvrdila správnosť sledu.
Príklad 3
Syntéza PGRF (1 až 44) amidu vzorca
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu5
I .1.1
-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2 sa vykonáva postupne s použitím prístroja Beckman 990 Peptide Synthesizer na živici MBHA spôsobom podľa príkladu 1. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je výsledný peptid v podstate čistý.
Analýza aminokyselín sa vykonáva po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom: 10
Asx(3,75). Thr(0,80), Ser(3,60), Glx(6,98), Gly(3,16), Ala(5,04), Val(0,77), Met(l,02), Ile(l,79), Leu(5,41), Tyr(2,03), Phe(0,84), Lys(2,39) a Arg(6,43). 15
Analýza potvrdila správnosť sledu.
Príklad 4
Syntéza PGRF analógu vzorca 20
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Lcu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ala-Asn-Gln-Glu-Ser-Gly-Arg-OH 25 sa vykonáva postupne s použitím prístroja Beckman 990 Peptide Synthesizer na chlórmetylovanej živici (napríklad Lab Systems, Inc.) spôsobom podľa príkladu 1. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapali- 30 novej chromatografii je výsledný peptid v podstate čistý.
Analýza aminokyselín sa vykonáva po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom:
Asx(4,35), Thr(l,06), Ser(3,8O), Glx(7,53),35
Gly(2,96), Ala(4,05), Val(0,97), Met(0,86),
Ile(l,94), Leu(3,70), Tyr(2,05), Phe( 1,06), Lys(2,06) a Arg(3,53).
Analýza potvrdila správnosť sledu.40
Príklad 5
Syntéza PGRF (1 až 40) amidu vzorca
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-45
-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-AIa-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-NHj sa vykonáva postupne s použitím prístroja Beckman 99050
Peptide Synthesizer na živici MBHA spôsobom podľa príkladu 1. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je peptid v podstate čistý.
Analýza aminokyselín sa vykonáva po hydrolýze na overenie správnosti sledu. Boli získané nasledujúce výsledky:
Asx(3,76), Thr(0,88), Ser(3,68), Glx(6,89). 60
Gly(3,12), Ala(4,08), Val(0,88), Met(l,36),
Ile(l,76), Leu(4,24), Tyr(2,00), Phe(0,80), Lys(2,32) a Arg(4,16).
Analýza potvrdila správnosť sledu. 65
Príklad 6
Syntéza PGRF (1 až 37) vo forme voľnej kyseliny vzorca
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Lcu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-OH sa vykonáva postupne s použitím prístroja Beckman 990 Peptide Synthesizer na chlórmetylovanej živici spôsobom podľa príkladu 1. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je peptid v podstate čistý.
Aminokyselinová analýza sa vykonáva po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom:
Asx(3,92), Thr(0,79), Ser(3,62), Glx(7,05), Gly(l,97), Ala(3,l7), Val(l,03), Met(l,00), Ile(l,91), Leu(4,37), Tyr(l,86), Phe(0,76), Lys(2,15) a Arg(3,40).
Analýza potvrdila správnosť sledu.
Príklad 6 A
Syntéza PGRF (1 až 37) amidu vzorca:
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Mct-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-NH2 sa vykonáva postupne s použitím pristroja Beckman 990 Peptide Synthesizer na živici MBHA spôsobom podľa príkladu 1. Pri chromatografii na tenkej vrstve a vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii je peptid v podstate čistý.
Aminokyselinová analýza sa vykonáva po hydrolýze na overenie správnosti sledu s nasledujúcim výsledkom:
Asx(4,02), Thr(0,80), Ser(3,49), Glx(6,90), Gly(l,92), Ala(3,08), Val(l,05), Met(l,01), Ile(l,77), Leu(4,05), Tyr(2,02), Phe(l,14), Lys(2,50)aArg(3,27).
Analýza potvrdila správnosť sledu.
Príklad 7
Na stanovenie účinnosti uvedených peptidov pri uvoľňovaní rastového hormónu boli vykonávané pokusy in vitro s použitím syntetického PGRF (1 až 40) z príkladu 2 a súčasne s ekvimolámou koncentráciou extrahovaného a čisteného natívneho PGRF (1 až 40) a GRF štandardu so známym účinkom. GRF štandard je opísaný a definovaný v publikácii Brazeau a ďalší Endocrinology, zv. 110, A538 (1982) ako také množstvo preparátu krysieho hypotalamu, ktoré vyvoláva polovicu maximálnej odpovede v zmysle uvoľnenia rastového hormónu z buniek hypofýzy, pestovaný v jednej vrstve. Používajúce kultúry buniek krysej hypofýzy boli odobrané pred štyrmi alebo piatimi dňami. Používajú sa na porovnanie kultúry v definovanom štandardnom prostredí a kultúry, ktoré sú považované za optimálne na sekréciu rastového hormónu, spôsob bol opísaný v publikácii Brazeau a ďalší, Regulátory Peptides, 1, 255, 1981. Skúmaná látka sa inkubuje s bunkami 3 až 4 hodiny, potom sa odoberie určitá časť živného prostredia a meria
II sa obsah imunoreaktívneho GH (ir GH) rádioimunologickým spôsobom.
Výsledky tohto porovnania ukazujú, že pri použití v ekvimolámom množstve má syntetický PGRF (1 až 40) plnú biologickú účinnosť natívneho peptidu, ako je zrejmé 5 z tabuľky I. EDjq pre syntetický peptid je približne 113 pikogramov, to znamená, že táto látka je oveľa účinnejšia než akákoľvek iná molekula, skôr uznávaná za faktor, uvoľňujúci rastový hormón.
1C Tabuľka I
| GRF štandard | Sekrécia rastového hormónu |
| (jednotky) | in vitro (% kontrol) |
| 0,63 | 173 ±0,4 |
| 1,25 | 230 ±5 |
| 2,50 | 347 ± 13 |
| 5,00 | 474 ±3 |
| 10,00 | 674 ±6 |
Natívny PGRF (1 až 40) (femtomoly)
12,5 234 ±17
351 ±7
528 ±16
100 720 ±32
200 748 ± 7
269 ±20
100 701 ±6
1000 990 ±42
Okrem pokusov in vitro boli vykonávané tiež pokusy 35 in vivo tak, že bol syntetický peptid injekčné podaný normálnym krysím samcom s hmotnosťou 200 g, v pentobarbitálovej narkóze. Výsledky, uvedené v nasledujúcej tabuľke II ukazujú, že syntetický peptid PGRF je silným stimulátorom sekrécie hypofyzámeho rastového hormó- 40 nu.
Tabuľka II
Ciinky «ynl.tieltíhn PCRF (1 a£ 40) na uvolflovanle rastnvŕh.· hnreónu hypofýzy po vnútrožilovaj injekcii nornálnej (4 «viaraté nu j.drw cAvku)
Dávka v «y odpnvod ako hladina lr GH v lér* v ng/et v uvedenú dobu pred u pu injekcii
-1 a In «5 air> *10 ain *14 «in «30 ain «60 aln
Ďalšie pokusy ukázali, že syntetický analóg PGRF z príkladu 4 má približne rovnakú biologickú účinnosť ako natívny PGRF (1 až 40) a to isté platí pre syntetické fragmenty z príkladu 6 a 6A. Okrem PGRF (1 až 40) peptid s α-karboxamidovou skupinou na C-terminálnom konci z príkladu 5 má v podstate dvojnásobnú biologickú účinnosť než syntetický peptid, skúmaný v príklade
Príklad 8
Boli opakované pokusy in vitro z príkladu 7 s použitím natívneho PGRF (1 až 40) a natívneho PGRF (1 až 44) a výsledky ukázali, že natívny PGRF (1 až 44) má viac než dvojnásobnú biologickú účinnosť.
Ďalšie pokusy dokázali, že voľný syntetický PGRF (1 až 44) podľa príkladu 1 má trochu nižšiu účinnosť než natívny PGRF (1 až 44), ale syntetický PGRF (1 až 44) amid má v podstate tú istú účinnosť ako natívny PGRF (1 až 44). Syntetický PGRF (1 až 44) amid pri podaní laboratórnym zvieratám (krysám) parenterálne má ten istý typ účinnosti ako PGRF (1 až 40) v tabuľke U príkladu 7, je však 2,5 až 3,0 x účinnejší než PGRF (1 až 40) vo forme voľnej kyseliny.
V USA sa ročne narodí jeden hypofyzámy trpaslík na 7000 až 15000 narodených detí, čo znamená, že tieto deti sú príliš malépreto, že majú príliš nízku hladinu hypofyzámeho rastového hormónu v krvi. Podľa klinických výsledkov je možné predpokladať, že väčšina týchto chorých detí má normálnu hypofýzu a veda spočíva v tom, že nedochádza v dostatočnej miere k syntéze alebo sekrécii hypotalamického faktora, ktorý riadi uvoľflovanie rastového hormónu. Syntetický PGRF by mohol byť ideálnym prostriedkom pre týchto chorých, ktorí boli skôr liečení injekciami ľudského hypofyzámeho rastového hormónu, ktorý je nesmieme drahý a ťažko sa získava, pretože je možné ho získať len z ľudského pitevného materiálu. Ľudský rastový hormón bude zrejme možné tiež v budúcnosti pripraviť s použitím rekombinantnej DNA, dosiaľ však nie je dostupný. Syntetický PGRF má oveľa jednoduchšiu molekulu a mohol by vyriešiť problém všetkých ľudí s nedostatočnou činnosťou hypofýzy na svete, ktorý sa odhaduje na niekoľko stotisíc.
Syntetický PGRF je prvou známou molekulou, ktorá špecificky ovplyvňuje činnosť hypofýzy' pokiaľ ide o vylučovanie rastového hormónu a znamená teda tiež možnosť prvého bežného testu na sekréciu rastového hormónu vo všetkých prípadoch, kde sa predpokladá špecifická nedostatočnosť hypofýzy v tomto zmysle. Táto látka by teda mohla nahradiť doterajšie namáhavé metódy, ako je zisťovanie možnosti sekrécie rastového hormónu pomocou infúzie arginínu, hypoglykémie, injekcie L-DOPA a podobne.
Syntetický PGRF by mal byť použitý vo všetkých prípadoch, kedy je žiaduce dosiahnuť pozitívnu dusíkovú bilanciu, napríklad pri liečení rán, liečbe rozsiahlych popálenín, v období po veľkých operačných výkonoch a tiež v starobe, rovnako ako u predčasne narodených detí. Zvyšovanie sekrécie rastového hormónu má význam tiež u chorých po ožiarení pri liečbe nádorov, v tomto prípade zvýšenie hladiny rastového hormónu podporuje krvotvomý systém. Pri podávaní u ľudí majú mať syntetické peptidy PGRF čistotu aspoň 93 %, výhodne 98 %. Táto čistota znamená, že zvyšok tvorí len podobné peptidy alebo ich fragmenty.
Väčšina biologicky aktívnych peptidov má zvyčajne okrem požadovanej účinnosti ešte ďalší biologický účinok. Je teda možné, že PGRF bude mať ešte ďalší účinok, ktorý by mohol mať praktický význam. Napriek tomu, že PGRF bol extrahovaný a izolovaný z nádoru ľudskej slinivky brušnej, je celkom zrejmé, že sled aminokyselín v PGRF (1 až 44) amidu je ten istý ako sled v ľudskom hypotalamickom faktore na uvoľňovanie rastového hormónu.
Chronické podávanie syntetického PGRF hospodárskym zvieratám alebo iným teplokrvným zvieratám zrejme zvýši ich anabolizmus a zvýši teda ich hmotnosť v prospech svalovej hmoty. V budúcnosti by bolo zrejme možné použitie u rýb a ďalších studenokrvných živočíchov. U zvierat je možné pripustiť nízku čistotu,
I 1.1
II stačí napríklad len 5 %.
Syntetický PGRF alebo jeho netoxické soli je možné spracovať s nosičmi, prijateľnými z farmaceutického hľadiska na farmaceutické prostriedky, ktoré je možné podávať cicavcom vrátane ľudí vnútrožilovo, podkožné, vnútrosvalovo alebo perorálne. Potrebná dávka sa stanoví v závislosti od závažnosti chorobného stavu, od jeho povahy a tiež s ohľadom na trvanie liečby.
Uvedené peptidy je možné podávať aj vo forme netoxických solí, prijateľných z farmaceutického hľadiska, napríklad adičných solí s kyselinami alebo komplexov s kovmi, napríklad zinkom, železom a podobne, tieto komplexy sú tiež považované za soli. Príkladom adičných solí s kyselinami môžu byť hydrochloridy, hydrobromidy, sírany, fosforečnany, malcáty, octany, citronany, benzoáty, jantarany, jablčnany, askorbáty, vínany a podobne. V prípade, že sa účinná látka spracováva na tablety, môžu tieto tablety obsahovať spojivo, napríklad tragakant, kukuričný škrob alebo želatínu, činidlo, napomáhajúce vzniku rozpadu, napríklad kyselinu alginovú a klzné látky, napríklad stearan horečnatý. Pri podaní v kvapalnej forme je možné použiť sladidlá a/alebo iné chuťové látky, pri vnútrožilovom podaní sa látka rozpustí v izotonickom roztoku chloridu sodného, v roztoku fosfátového pufra alebo v inom vhodnom injekčnom prostredí.
Uvedené peptidy by mali byť podávané pod vedením lekára, farmaceutické prostriedky obsahujú tieto peptidy zvyčajne spolu s nosičom, prijateľným z farmaceutického hľadiska. Zvyčajná dávka sa pohybuje v rozmedzí 20 až 2000 ng uvedeného peptidu na 1 kg hmotnosti.
Aj napriek tomu, že vynález bol opísaný v súvislosti s výhodnými uskutočneniami, je zrejmé, že odborník môže uskutočniť rôzne zmeny a modifikácie, ktoré nevybočujú z rozsahu vynálezu. Je napríklad možné uskutočniť niektoré modifikácie reťazca, ktorý obsahuje 44 zvyškov, zvlášť je možné vynechať niektoré časti sledu v blízkosti koncovej karboxylovej skupiny uvedeného peptidu, tak ako sa to v súčasnej dobe bežne vykonáva, v tomto prípade sa získavajú fragmenty s kratšou dĺžkou než 40 zvyškov, ide napríklad o PGRF (1 až 27), tieto fragmenty zvyčajne nesú na C-terminálovom zakončení skupinu NH2 alebo OH a uchovávajú si veľmi podstatnú časť účinnosti uvedených peptidov. Tieto peptidové fragmenty taktiež patria do rozsahu vynálezu. Okrem toho je možné pridávať zvyšky na ktoromkoľvek konci alebo na oboch koncoch a/alebo je možné všeobecne ekvivalentné zvyšky zaviesť namiesto prírodné sa vyskytujúcich zvyškov tak, ako je to dobre známe v chémii peptidov za vzniku analogických zlúčenín, ktoré majú aspoň podstatnú časť účinnosti natívneho polypeptidu. Všetky tieto modifikácie taktiež patria do rozsahu vynálezu.
Claims (10)
- PATENTOVÉNÁROKYI. Syntetické peptidy všeobecného vzorca (I),H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-GIy-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-R34-Asn-Gln-Glu-R38-Gly-R40-R41-R kdeR znamená skupinu OH alebo NH2,R34 znamená Ser alebo Ala, R38 znamená Arg alebo Ser,R4^ znamená Ala alebo Are a41 °R“*1 znamená Arg, Arg-Ala, Arg-Ala-Arg, Arg-Ala-ArgLeu alebo chýba,5 ako aj biologicky aktívne fragmenty týchto látok obsahujúce aspoň prvých 27 zvyškov aminokyselín a ich netoxické soli.
- 2. Syntetické peptidy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 v ktorých R34 znamená Ser, R38 znamená10 Arg a R4'-* znamená Ala.
- 3. Syntetické peptidy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, v ktorých R34 znamená Ala, R38 znamená Ser a R40 znamená Arg.
- 4. Syntetické peptidy všeobecného vzorca (I) podľa15 niektorého z nárokov 1 až 3, v ktorých R44 znamená Arg-Ala-Arg-Leu.
- 5. Syntetické peptidy všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 4, v ktorých R znamená sku-20 pinu NH2.
- 6. Syntetické peptidy všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 4, v ktorých R znamená hydroxyskupinu.
- 7. Syntetický peptid všeobecného vzorca (I) podľa 25 nároku 1,H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-OH.
- 8. Biologicky aktívny fragment syntetického peptidu30 všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, obsahujúci reťazec aminokyselínH-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln35 -Asp-Ile-Met-.
- 9. Biologicky aktívny fragment podľa nároku 8, zo skupiny40 (a) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-OH.(b) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-45 -Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-OH.(c) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-50 -Ly s-V al-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-GIy-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-OH.(d) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-55 -Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-OH.(c) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu60 -Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-OH.(f) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-OH.II .1:1 (g) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2.(h) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ala-Asn-Gln-Glu-Ser-Gly-Arg-OH.(i) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-NH2.(j) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-OH.(k) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-NH2.
- 10. Netoxická soľ syntetického peptidu podľa niektorého z nárokov 2 až 7 alebo jeho biologicky aktívneho fragmentu podľa niektorého z nárokov 8 alebo 9.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/418,248 US4517181A (en) | 1982-09-15 | 1982-09-15 | Mammalian PGRF |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK435783A3 SK435783A3 (en) | 1997-09-10 |
| SK278537B6 true SK278537B6 (en) | 1997-09-10 |
Family
ID=23657331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK4357-83A SK278537B6 (en) | 1982-09-15 | 1983-06-15 | Synthetic peptides, biologically active fragment and non-toxic synthetic peptide salt |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4517181A (sk) |
| JP (1) | JPS5916863A (sk) |
| AT (1) | ATE17737T1 (sk) |
| BG (1) | BG37523A3 (sk) |
| CZ (1) | CZ281507B6 (sk) |
| DE (1) | DE3362003D1 (sk) |
| DK (1) | DK162649C (sk) |
| HU (1) | HU198952B (sk) |
| IE (1) | IE55361B1 (sk) |
| RO (1) | RO88703A (sk) |
| SK (1) | SK278537B6 (sk) |
| YU (1) | YU44041B (sk) |
| ZA (1) | ZA834051B (sk) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4703035A (en) * | 1982-10-04 | 1987-10-27 | The Salk Institute For Biological Studies | Human pancreatic GRF amidated fragments |
| US4628043A (en) * | 1983-04-26 | 1986-12-09 | The Salk Institute For Biological Studies | Hypothalamic GRF agonists |
| BE898666A (fr) * | 1984-01-12 | 1984-05-02 | Wallone Region | Procede de preparation de clones bacteriens portant une information genetique optimalisee pour la production du facteur de declenchement de l'hormone de croissance humaine dans escherichia coli |
| US4747825A (en) * | 1984-06-29 | 1988-05-31 | Ferring Laboratories, Inc. | Apparatus and methodology for pulsed administration of growth promoting agents |
| FR2567524B1 (fr) * | 1984-07-10 | 1987-11-27 | Sanofi Sa | Procede de synthese de la somatocrinine en phase liquide et peptides intermediaires |
| CA1271600A (en) * | 1985-01-07 | 1990-07-10 | David Howard Coy | Growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith |
| US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
| CA1296253C (en) * | 1986-10-20 | 1992-02-25 | Praveen Tyle | Stabilized growth hormone compositions |
| US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| USRE33699E (en) * | 1987-07-09 | 1991-09-24 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| US4801456A (en) * | 1987-07-09 | 1989-01-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
| AU637316B2 (en) * | 1988-01-28 | 1993-05-27 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| US5153175A (en) * | 1989-05-25 | 1992-10-06 | University Of Tennesee Research Corporation | Method of inducing sleep with GHRH complementary peptide compositions |
| US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
| US5488033A (en) * | 1989-07-28 | 1996-01-30 | The Regents Of The University Of California | Treatment to reduce edema |
| US5137871A (en) * | 1989-07-28 | 1992-08-11 | Regents Of The University Of California | Treatment to reduce edema for brain and musculature injuries |
| US5015626A (en) * | 1989-08-02 | 1991-05-14 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Porcine somatotropin to improve meat quality of pigs |
| CA2085362A1 (en) * | 1990-06-29 | 1991-12-30 | Arthur M. Felix | Histidine substituted growth hormone releasing factor analogs |
| DK0490249T3 (da) * | 1990-12-10 | 1995-05-29 | Hoffmann La Roche | Fremgangsmåde til enzymatisk fremstilling af GRF(1-44)-NH2 |
| CA2084061A1 (en) * | 1991-04-09 | 1992-10-10 | Arthur M. Felix | Growth hormone releasing factor analogs |
| US5246920A (en) * | 1992-06-15 | 1993-09-21 | University Of South Florida | Treatment of hyperprolactinemia |
| US5811074A (en) * | 1992-06-29 | 1998-09-22 | University Of South Florida | Method of diagnosing pituitary dependent growth hormone deficiency |
| US5817627A (en) | 1996-06-14 | 1998-10-06 | Theratechnologies Inc. | Long-acting galenical formulation for GRF peptides |
| EP1355941A2 (en) * | 2001-02-02 | 2003-10-29 | ConjuChem, Inc. | Long lasting growth hormone releasing factor derivatives |
| JP2006504694A (ja) * | 2002-09-18 | 2006-02-09 | サントル・オスピタリエ・ドゥ・リュニヴェルシテ・ドゥ・モントリオール・（シー・エイチ・ユー・エム） | Ｇｈｒｈ類似体 |
| US20080260820A1 (en) * | 2007-04-19 | 2008-10-23 | Gilles Borrelly | Oral dosage formulations of protease-resistant polypeptides |
| US20090088380A1 (en) * | 2007-07-12 | 2009-04-02 | Pierrette Gaudreau | Ghrh analogs and therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4201840A (en) * | 1977-10-06 | 1980-05-06 | Eastman Kodak Company | Photographic film units containing a polymeric mordant which covalently bonds with certain dyes |
| DE2846412A1 (de) * | 1978-10-25 | 1980-05-08 | Behringwerke Ag | Mittel zur behandlung allergischer reaktionen |
| JPS55152459A (en) * | 1979-05-18 | 1980-11-27 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Method and reagent for measuring quantity of cyclic nucleotide |
-
1982
- 1982-09-15 US US06/418,248 patent/US4517181A/en not_active Expired - Lifetime
-
1983
- 1983-06-03 ZA ZA834051A patent/ZA834051B/xx unknown
- 1983-06-15 CZ CS834357A patent/CZ281507B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 IE IE1415/83A patent/IE55361B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 SK SK4357-83A patent/SK278537B6/sk unknown
- 1983-06-16 DK DK278383A patent/DK162649C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-06-16 HU HU832511A patent/HU198952B/hu unknown
- 1983-06-16 AT AT83303490T patent/ATE17737T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-06-16 DE DE8383303490T patent/DE3362003D1/de not_active Expired
- 1983-06-16 JP JP58108528A patent/JPS5916863A/ja active Granted
- 1983-06-16 BG BG061360A patent/BG37523A3/xx unknown
- 1983-08-01 RO RO83111789A patent/RO88703A/ro unknown
- 1983-09-15 YU YU1866/83A patent/YU44041B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ435783A3 (en) | 1996-07-17 |
| ZA834051B (en) | 1984-10-31 |
| HU198952B (en) | 1989-12-28 |
| DK278383D0 (da) | 1983-06-16 |
| IE55361B1 (en) | 1990-08-29 |
| DK162649C (da) | 1992-04-13 |
| JPH0133118B2 (sk) | 1989-07-11 |
| RO88703A (ro) | 1986-04-30 |
| IE831415L (en) | 1983-12-16 |
| DK162649B (da) | 1991-11-25 |
| SK435783A3 (en) | 1997-09-10 |
| YU186683A (en) | 1985-12-31 |
| ATE17737T1 (de) | 1986-02-15 |
| DK278383A (da) | 1983-12-17 |
| DE3362003D1 (de) | 1986-03-13 |
| JPS5916863A (ja) | 1984-01-28 |
| YU44041B (en) | 1990-02-28 |
| US4517181A (en) | 1985-05-14 |
| BG37523A3 (en) | 1985-06-14 |
| CZ281507B6 (cs) | 1996-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK278537B6 (en) | Synthetic peptides, biologically active fragment and non-toxic synthetic peptide salt | |
| FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
| FI83660C (fi) | Foerfarande foer framstaellning bukspottskoertelns grf hos maenniskan. | |
| FI92210B (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi | |
| US4610976A (en) | Porcine GRF | |
| US4585756A (en) | Bovine GRF | |
| FI87080C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av grf-analoger | |
| US4605643A (en) | Ovine GRF | |
| US7026281B1 (en) | Antagonistic analogs of GH-RH inhibiting IGF-I and -II | |
| HU199508B (en) | Process for producing grf analogues and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| FI81589B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-peptidanaloger. | |
| EP0067608B1 (en) | Crf and analogs | |
| CA1247599A (en) | Mammalian pgrf | |
| US4908352A (en) | Urotensin peptides | |
| US4703035A (en) | Human pancreatic GRF amidated fragments | |
| CZ3004U1 (cs) | Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem |