CZ3004U1 - Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem - Google Patents
Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem Download PDFInfo
- Publication number
- CZ3004U1 CZ3004U1 CZ19943013U CZ301394U CZ3004U1 CZ 3004 U1 CZ3004 U1 CZ 3004U1 CZ 19943013 U CZ19943013 U CZ 19943013U CZ 301394 U CZ301394 U CZ 301394U CZ 3004 U1 CZ3004 U1 CZ 3004U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- arg
- leu
- gln
- glu
- ala
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 110
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 32
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 24
- -1 pGl-Phs Chemical compound 0.000 claims description 21
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 12
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 12
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 7
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N D-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims 1
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- SGCGMORCWLEJNZ-UWVGGRQHSA-N His-His Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C([O-])=O)C1=CN=CN1 SGCGMORCWLEJNZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 1
- DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N L-alanyl-L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 claims 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 53
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 53
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 38
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 32
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 31
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 24
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 21
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 16
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 16
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 16
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 5
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N N-methyl-L-phenylalanine Chemical compound C[NH2+][C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N (2s)-4-methyl-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC(C)C XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical class OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 150000002688 maleic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 2
- NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M potassium fluoride Chemical compound [F-].[K+] NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 108010036509 somatotropin releasing factor 40 Proteins 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 2
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- NXJOFTRBTBDSHB-UHFFFAOYSA-N (4-methyl-1,4-diazepane-1-carbothioyl)sulfanyl 4-methyl-1,4-diazepane-1-carbodithioate Chemical compound C1CN(C)CCCN1C(=S)SSC(=S)N1CCN(C)CCC1 NXJOFTRBTBDSHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-QMMMGPOBSA-N 4-chloro-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical class OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- NVEASDQHBRZPSU-BQBZGAKWSA-N Gln-Gln-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O NVEASDQHBRZPSU-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000270666 Testudines Species 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N dihydrogen phosphate;triethylazanium Chemical compound OP(O)(O)=O.CCN(CC)CC UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000017363 positive regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 235000003270 potassium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011698 potassium fluoride Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 108010078767 somatotropin releasing hormone (1-43) Proteins 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000003890 succinate salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Chemical class 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
uvolňující růstový hormon (rGRF) a odpovídající faktor <v.
cr,
- z Ví (pGRF )
Nyní byly syntetizovány nové polypeptidy, které uvolňují růstový hormon z buněk hypofýzy, pěstovaných v tkáňové kultuře, tyto peptidy alespoň částečně odolávají rozkladu enzymu v živočišném organismu. Uvedené peptidy splňují alespoň jeden z následujících požadavků:
o s. l· f s
a) zbytek v poloze 1 je substituován bud způsobem N Me , _alfa,. nebo C Me,
b) D-Leu je v poloze 17 a/nebo v poloze 23 a/nebo
c) D-Glu nebo D-Asp se nachází v poloze 25.
Peptidy mohou splňovat větší počst těchto požadavků, musí však splňovat alespoň jeden z nich. Zbytkem v poloze 1 může být Tyr, D-Tvr, Met, Phe, D-?he, pCl-Phe, Leu. His s D-His (tento zbytek může nést msthvlovou skucinu buď ooů:
by obvykle obsahují O-ALa vo:lozs 2 s/nsbc C-Aso v a/nebo D-Aro nebo D-S=r v poloze 3 a/nebo ϋ-Tyr v poloze a /'nebo D-Ala v poloze 15. Peptidy s výhodou jsou su:
ny s kuconar
D-Mst. Nis nebo iivs míst
V O'
ΩΚ
Farmaceutické prostředky mohou obsahovat berné dále uvedeným způsobem,3 délce 23 sž 44 zbytků aminokyselin, nebo netoxické soli těchto zbytků ve formě disperze v kapalině, přijatelná z farmaceutického nebo veterin hlediska nebo v pevném nosiči. Takto získaný prostředek je možno použít v klinickém lékařství, a to v lidském a veterinárním lékařství k léčebným účelům a také k účelům d i a ono s t i o kým. Sloučeniny je možno užít k urychlení růstu teplokre;oh živočichů včetně drůoeže a v zemědělství i k urychlení růstu studenokrevných živočichů, například ryb a pod.
Nomenklatura pro nové peptidy byla užita podle publikace Schroder a Lubke The Psptides, Academie Press (1965), tak, že v souladu s běžným názvoslovím se aminoskupina na N-terminálním zakončení nachází na levé straně a karboxylová skupina na C-terminálním zakončení se nachází na pravé -straně.
U přírodních aminokyselin se rozumí těmito kyselinami přirozeně se vyskytující látky, které se nacházejí v bílkovinách, a to Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp , Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp a His. Nle znamená norleucin a Nva znamená norvalin. V případě, že zbytek aminokyseliny má isomern.í formy, rozumí se vždy L-forma, není-li výslovněuvedenojinak.
| techn | lekán | r* <a o *. | ||||
| Předmětem ře | C ÍA **» t | jsou | peptidy obecného | vzorce I | ||
| σ _ ο ’Ί | -P - A s2 3 | Ile- | 2 a _ T | _ 3 _ C | ~ - “ - ’ ' ~ ~ ' η -Ί ~ ' | , , - r e . - - - |
| -Gin | 17 13 | ,-A _ ~ ~ | ™ ’ | C -2 -3 7 ' o _ 2 3 ''2- 25--- | 2 - - A 2 Γ 2 z | |
| -Gin | -Gln-Gly- | Glu- | 0 ;,3^ | Asn-Gin | „,3 ,.i3 | _ ~ 2 |
| ' 7 X) . \ ·*· / | ||||||
| kde | ||||||
| R1 | znamená His nebo NalfaMe | Tyr, 0-K nebo | D-Ty is, p bez | r, Met, Pne. O-Phe, pCl q 1 T n substituci typu C substituce, | -Pne, Leu 3Me nebo | |
| r2 | znamená | Ala | nebo | D-AIa, - | ||
| S3 | znamená | Asp | nebo | □-Asp, | ||
| R3 | znamená | Ser. | Asn, | D-Seo, | Π2 30 U A 5 Π . | |
| riq | z n a ~ s n á | Tyo | nebo | G-Tyr, | ||
| R12 | z n a m e n a | Are | nebo | 1 ' AP | ||
| R13 | Z ΓΊ Ξ ffi S Π 2 | Ile | nebo | Val, | ||
| R15 | znamená | Gly | nebo | D-Ala, | ||
| R17 | znamená | Leu | nebo | D-Leu, | ||
| R13 | znamená | Tyr | nebo | c~ - - J | ||
| R23 | znamená | Leu | η e o o | D-Leu, | ||
| R24 | znamená | His | nebo | Gin, | ||
| R25 | znamená | Glu, | As ρ, | , O-Glu | nebo D-Asp, | |
| R27 | znamená | M 2 ΐ | . D-Met, Ala. | , tile, lis, Leu, | Hvs nebo | |
| R23 | znamená | Asn | nebo | Sec, | ||
| r34 | znamená | Arg | nebo | Ser, | ||
| R38 | znamená | Gin | nebo | Arg, |
| R39 | znamená | Arg | nebo | Glv, |
| R40 | znamená | Ser | nebo | Ala, |
| P72 | znamená | Phe | , Ala | nebo Val |
| R , , | znamená | Aen | nebo | \ -v ~ |
| 43 | ||||
| □ '1 A A | zmarněna | Val | nebo | L e j ; |
| ~r τ | ||||
| za p | recpokladu, | že b'j | £ |
S ) n fil £ SLlbSuitUCi u V p U C !-'s nebo
b) R,a./nsbo Ro, znamená D-Leu nebo ‘17 '23
R2_ znamená D-Glu nebo D.-Asp, přičemž navíc je možno vynechat některý ze zbytků
V R49~Rí
Arn-S - D _ O 3 ‘72 73 ''44’ R40“Ar9_R42‘R43r'4í ’ R39-R40-Ar9_R42-R43_R44’ R38“R39~R40~Ar9'R42~R43R Glu_R38R39R40Ar9'R42“R43R4i’
Gln-Glu-R-jg-R^-R^-Arg-R^-R^-R^,
Asn-Gln-Glu-R-jg-R^-R^-Arg-R^-R^-R^, R34_Asn_9^n_9^L!-R3g_R39-R70-Ar3”R42R43'R4A! G^U-R34~A3n’'G^n-G^u”R33R39~R40-Al'9”R42R43-R44’
43~'7A
GLn-.Gly-Glu-R54-A5n^Gln-Glu-R53-Rjg-R40-Arg-R4?-R43-R4i,,
Gly-Glu-R34-Asn-Gln-Glu-R3g-R;J9-R40-Arg-R47-RZl^-RZti,
Gin-Gin Gly-Gl'J-R,4-45n-Gln-Glu-R7Q-R D αγπ-° r
A4 33 39 K4o-Arg-‘'42-K4-55 £ τ' q r* τ'.
i e o o d r
Nové peptidy lze získat na pevné fázi, částečně na pevné fázi, kondenzací fragmentů nebo klasickým způsobem v roztoku. Je také možno užít techniky, užívající rekombinantní DNA k přípravě části analogu, který obsahuje pouze zbytky aminokyselin. Například technika pevné fáze ně popsána v publikaci Solid-Phase Peptide Synthesis, Stewart a Young, Freeman a Co., San Francisco, 1969, příkladem těchto způsobů mohou být postupy, které jsou popsány v US patentovém spisu č. 4’ 105 603 z 8. srpna 1978 (Vale a další) Klasická syntéza v roztoku je podrobně popsána v publikaci Methoden der Organischen Chemie (Nouben~Weyl): Synthese von Peptiden, E. Wunsch (vydavatel), 1974, Feorg Thieme vydavatelství, Stuttgart, NSR. Příkladem tohoto postupu může být způsob, popsaný v US patentovém spisu č. 3 972 859 z 3. srpn 1976, další způsoby tohoto 'typu jsou popsány také v US paten tovém spisu č. 3 842 067 z 15. října 1974 a č. 3 862 925 z 23. ledna 1975.
Společným znakem všech těchto způsobů je ochrana stabilních skupin na postranním řetězci různých zbytků aminokyselin vhodnými ochrannými skupinami, které brání chemické reakci v uvedeném místě až do odstranění příslušné ochranné skupiny. Je také běžné, že se v určitém stupni postupu získá meziprodukt, který obsahuje zbytky aminokyselin, umístěné v požadovaném sledu peptidového řetězce, avšak obsahuje ještě ochranné skupiny, vázané na příslušné zbytky.
Meziprodukt tohoto typu je možno vyjádřit obecným vzorcem:
X -4 (X nebo Xj-f^-R-jíX )-Ala-Ile-Phe-Thr(R4)-Rg(X4 nebo X5)-Ser(X4)-R1Q(X2)-Arg(X6)-R12(X6 nebo X7)-R13-Leu-R15-Gln(X5)-R17-R18(X2)-Ala-Arg(X6)-Lys(X7)-Leu-R23-R7/i(X nebo X5)-R25(X3)-Ile-R2--R2g(x4 nebo X5)-Arg(X6)-Gln(X5)-Gln(X5)-Glv-Glu(X3)-R34(x4 nebo Xé)-Asn(X5)- Gin ( X5)-G1u(X3 )-R-g(X5 nebo Xé)-R}9(X6)-RΛQ(X4)-Arg(Xá )nebo X^-R^-UH-pryskyřice, χΐ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na alfaamincskupině. Běží o ochranné skupiny, které se běžně užívají při postupné syntéze polypeptidů. Ochranné skupiny ve významu je možno zařadit do několika skupin, a to
1) aromatické ochranné skupiny typu urethar.u, například fluorenylmethyloxykarbony1 (FMOC), benzyloxykarbcny 1 (2) a substituované Z, například p-chlorbenzyloxykarbonyl, p-nitrobenzyloxykarbony1, p-brombenzylcxykarbcnyl a p-methoxybenzyloxykanbonyl,
2) ochranné skupiny typu alifatického ureťnanu, například terč .butyloxykarbonyl (BOC), diisopropyimethy1oxykarbonyl, isopropyloxykarbcny1, ethoxykarbony 1, allyloxykarbonyl a
3) ochranné skupiny typu cykloalkyluretha.ru, například cyklopentyloxykarbonyl, adamantyloxykarbcny1 a cyklohexyloxykarbonyl.
Výhodnou ochrannou skupinou na a to i v případě, že v poloze 1 tuovaného zbytku.
alfa-aminoskupině je BOC se užije N‘ ile-substi znamená atom vodíku nebo ochrannou skupí levý dusíkový atom aminoskupiny His, nap íkla··
X je ochranná skupina pro fenolovou hydroxylovcu skupinu
Tyr, například tetrahydropyranyl, terc.butyl, trítyl, Bzl, CBZ, 4br~C3Z a 2,6-dichlorbenzyl (DC3). Výhodnou ochrannou skupinou je 2,6-dichlorbenzyl, X? může také znamenat atom vodíku, což znamená, že se na zbytku aminokyseliny v této poloze nenachází žádná ochranná skupina.
*
X znamená atom vodíku nebo vhodnou ochranný skupinu, vytvářející ester s karboxylovou skupinou Asp nebo Glu, například benzyl(OSzl), 2,6-dichlorbenzyl, methyl a ethyl.
z
X ' je vhodná ochranná skupina pro hydroxylovcu sxupiuu
Thr nebo Ser, například acetyl, benzoyl, terc.butyl, trityl, tetrahydropyranyl, Bzl,' 2,6-dichlorbenzyl a 4
CBZ. Výhodnou ochrannou skupinou je Szl. X muže znamenat také atom vodíku, v tomto případě se na hydroxylové skupině nenachází žádná ochranná skupina.
X5 znamená atom vodíku nebo vhodnou ochrannou skupinu na postranním řetězci amidoskupiny Asn nebo Gin. S výhodou běží o xanthyl (Xan).
znamená vhodnou ochrannou skupinu pro guanidinovou skupinu Arg, například nitroskupínu, skupinu Tos, CBZ, adamantyloxykarbonyl a BOC, nebo znamená atom vodíku.
X znamená vodík nebo vhoonou ochrannou skupinu pro aminoskupinu Lys. Vhodnou aminoskupinu chránící ochrannou skupinou je například 2-chlorbenzyloxykarbonyl(2-C1-Z), Tos, t.amyloxykarbonyl a BOC.
Met může být popřípadě chráněn atomem kyslíku, s výhodou však chráněn není.
Volba ochranných skupin pro postranní řetězec není kritická, až na to, že je zapotřebí volit takovou skupinu, která není odstraněna v průběhu odstraňování ochranné skupiny na alfa-aminoskupině při syntéze. Pro některé aminokyseliny, například His, není zapotřebí obvykle užít po ukončeném navázání ochrannou skupinu nebo může jít o tutéž ochrannou skupinu.
Při volbě určité ochranné skupiny na postranním řetězci při syntéze peptidů je zapotřebí zachovávat následující všeobecná pravidla:
a) ochranná skupina si má uchovávat své ochranné vlastnosti a nemá být odštěpena při vazbě dalšího zbytku,
b) ochranná skupina má být stálá k užitým reakčním činidlům a s výjimkou Xan stálá za reakčních podmínek, zvolených pro odstranění ochranné skupiny na alfa-aminoskupině v každém stupni postupu a
c) postranní ochranné skupiny musí být možno odstranit po ukončení postupu za získání výsledného peptidu s obsahem požadovaného sledu aminokyselin tak, že v průběhu odstraňování nedojde k nežádoucím změnám v peptidovém řetězci.
V případě, že se peptidy nepřipravují technologií s použitím rekombinantní DNA, připravují se s výhodou při použití syntézy na pevné fázi, například způsobem podle publikace Merrifield, J. Am. Chem. Soc. , 85, str. 2145, 1963 přestože je možno užít také dalších ekvivalentních chemických způsobů, tak’jak byly svrchu uvedeny.
Syntéza na pevné fázi se začíná od C-terminálního zakončení peptidu tak, -že se naváže chráněná alfa-aminckyselina na vhodnou pryskyřici. Tento výchozí materiál je možno připravit tak, že se spojí chráněná alfa-aminokyselina esterovou vazbou s chlormeťnylovanou pryskyřicí nebo hydroxymethylovanou pryskyřicí nebo amidovou vazbou na pryskyřici BHA nebo na pryskyřici MBHA. Výroba hydroxymethylované pryskyřice je popsána v publikaci- Bodansky a další, Chem. Ind., (Londýn), 38, 1597 - 98, 1966. Chlormethylované pryskyřice se běžně dodávají (Bio Rad Laboratories, Richmcnd, Califcrnia, a Lab. Systems, lne.). Výroba pryskyřice tohoto typu je popsána v publikaci Stewart a další, Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman a Co., San Francisco 1969, kapitola 1. str.
až 6. Pryskyřice BHA a MBHA se rovněž běžně dodávají a obvykle se užívají pouze v tom případě, že požadovaný peptic má být syntetizován jako nesubstituovaný amid na C-terminálním zakončení.
C-terminální aminokyselina, tj. Asn, chráněná 30C a Xan, může být nejprve navázána na chlormethylovanou pryskyřici způsobem podle publikace Chemistry Letters, K. Horiki a další, 165 - 168, 1978, při použití KP v dimethylformamidu při teplotě 60 °C po dobu 24 hodin za stálého míchání v případě, že má být získán peptid s 43 zbytky. Po navázání aminokyseliny, chráněné BOC na pryskyřici jako podložku, se odstraní ochranná skupina na alfa-aminoskupině, například po10 užitím kyseliny trifluoroctové (TFA) v methylenchloridu nebo samotné kyselině trifluoroctové. Odstranění ochranné skupiny se provádí při teplotě 0 °C až teplotě místnosti. K odštěpení je možno užít také jiných běžných činidel, například kyseliny chlorovodíkové v dioxanu, užívá se podmínek, specifických pro odstranění jednotlivých ochranných skupin na alfa-aminoskupině, tak jak byly popsány v publikaci Schroder a Lubke, The Peptides, 1, str. 72 - 75 (Academie Press 1965).
Po odstranění ochranné skupiny na alfa-aminoskupině se zbývající aminokyseliny, chráněné na alfa-aminoskupině a na postranním řetězci postupně navazují v požadovaném sledu za vzniku svrchu uvedeného meziproduktu, nebo je také možné postupovat tak, že se některé aminokyseliny naváží navzájem před přidáním celého kratšího řetězce k navázané části na pevné fázi. Volbu příslušného činidla může provést každý odborník. Zvláště vhodným reakčním činidlem pro toto použití je N,N -dicyklohexylkarbodiimid (DCCI).
Aktivační činidlo, užívané při syntéze na pevné fázi, je možno volit z dobře známých činidel v chemii peptidů. Příkladem vhodných aktivačních reakčních činidel jsou karbodiimidy, například N,N-diisopropylkarbodiimid a N-ethyl-N,-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid. Je možno užít také další aktivační reakční činidlo, tato činidla a jejich použití při vazbě peptidů byla popsána v publikaci Schroder a Lubke, tak jak byla svrchu uvedena, kapitola III a v publi kaci Kapoor, J. Phar. Sci., 59, str. 1 - 27, 1970.
Každá chráněná aminokyselina nebo sled aminokyselin se přivádí k vazbě na pevnou fázi, ve čtyřnásobném nebo ještě větším přebytku, vazbu je možno provést v prostředí směsi dimethylformamidu a methylendichloridu v poměru 1 : 1 nebo v samotném dimethylformamidu nebo methylendichloridu. V příη pádě, že dojde k neúplné vazbě, opakuje se postup před odstraněním ochranné skupiny na alfa-aminoskupině a před navázáním následující aminoskupiny. Úspěch vazby v každém stupni syntézy, provádí-li se manuálně, se s výhodou ověřuje ninnydrincvou reakcí, tak jak byla popsána v publikaci
Ξ. Kaiser a další, Anal. Biochem., 34, 595, 1970. Vazbu je možno také provádět automaticky, například automatickým syntetizátorem (Beckman 990), způsob byl popsán v publikaci Rivier a další, Biopolymery, 1978, 17, str. 1927 - 1938.
Pro získání úplného požadovaného sledu aminokyselin je možno peptid, získaný jako meziprodukt, odstranit z pryskyřice jako podložky působením činidla, například kapalného fluorovodíku, který nejen odštěpí peptid z pryskyřice, ale také odštěpí veškeré zbývající ochranné skupiny na postranním řetězci, jakož i ochrannou skupinu X1 ma alfa-aminoskupině, v případě, že byla použita, čímž se získá výsledný peptid ve formě volné kyseliny. V.případě, že ve sledu se vyskytuje Met, odstraní se s výhodou nejprve ochranná skupina BOC použitím směsi kyseliny trifluoroctové a eťnandithiolu před odštěpením peptidu a pryskyřice kyselinou fluorovodíkovou k vyloučení potenciální S-alkylace. V případě, že se k odštěpení ušije fluorovodík, doplňuje se reakční směs anisolem a methylethylsulfidem jako látkami, které na sebe váží vedlejší produkty.
Řešení bude osvětleno následujícími příklady, které popisují provedení metody na pevné fázi za získání výsledného peptidu. je samozřejmé, že syntéza odpovídajícího kratšího fragmentu peptidu se provádí stejným způsobem tak, že &' pros tě vynechají příslušné aminokyseliny, je však pravděpodobné, že biologicky aktivní fragmenty by měly obsahovat svrchu uvedený sled přiléhající k N-terminálnímu zakončení.
Příklady provedení
Příklad 1
Systém peptidu vzí podrobněji vypsáno:
:e /H
TeHis /-rhC-RF-(1-43 )-OH , s í* s
N * MeHis-Ala-Asp-Ala-Ile-Pne-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Iie-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-P’ne-Asn-OH se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na chlormethylované pryskyřici se substitucí přibližně 0,1 až 0,5 mmol/g pryskyřice. Navázání BOC-Asn(Xan) na pryskyřici se provádí způsobem, popsaným ve svrchu uvedené publikaci Chemistry Letters při použití fluoridu draselného v dimethy1formamidu při teplotě přibližně 60 °C po dobu 2- hodin za stálého míchání, výsledkem je substituce přibližně 0,35 mmol Asn na gram pryskyřice.
Po odstranění ochranných skupin, a po neutralizaci se postupně buduje na pryskyřici peptidový řetězec. Odstranění ochranných skupin, neutralizace a přidání každé další aminokyseliny se provádí způsobem, který byl podrobně popsán v publikaci Rivier J. J., Amer. Chem. Soc., 96, 2986 - 2992, 1974. Všechna použitá rozpouštědla se pečlivě zbaví plynů promytím inertním plynem, například heliem nebo dusíkem, aby byla jistá nepřítomnost kyslíku, při níž by mohlo dojít k nežádoucí oxidaci síry ve zbytku Met.
Odstranění ochranných skupin se s výhodou provádí podle následujícícho schématu A.
Schéma
Reakční činidla
1. 60% kyselina triílucroctová s 2 % ethandithiolu
2. 60% kyselina triílucroctová se 2 % ethandithic-lu
3. IPA s 1 % ethandithiolu
4. 10% Et^N v methylendichloridu
5. methanol
6. 10% Et^N v methylendichloridu
7. methanol (dvakrát).
8. methylendicnlorid (dvakrát)
Doba míšení(min)
0,5
0,5
0,5
Navázání dalších aminokyselin se provádí podle následujícího schématu B.
| Reakční činidla | Schéma | B Doba míšení (mil |
| 9. DCCI | - | |
| 10. Boc-aminokyselina | 50 - 90 | |
| 11. methanol (dvakrát) | 0,5 | |
| 12. methylenčichlorid | (dvakrát) | 0,5 |
| 13. 3M Αθ£θ v methylendichloridu | 15,0 | |
| 14. methylendichlorid | - | 0,5 |
| 15. methanol | 0,5 | |
| 15. methylendichlorid | (dvakrát) | 0,5 |
Užívá se 1 až 2 mmol aminokyseliny, chráněné BOC v methylenchloridu na 1 g pryskyřice a mimoto ječen ekvivalent 1, OM DCCI v methylenchloridu podobu 2 hodin. Po navázání BOC-Arg (TOS) se užije směs 50 % dimethylformamidu a 50 % methylenchloridu. Bzl ve formě etheru se užije jako ochranná skupina pro hydroxylovou skupinu postranního řetězce Ser a Thr. Amidoskupina Asn nebo Gin se chrání Xan v případě, že se užije dicyklohexylkarbodiimidu jako činidla pro vazbu. Je také možno užít P-nitrofenylester (ONp) k aktivaci karboxylového zakončení Asn nebo Gin, a například je možno přes noc navázat BOC-Asn(ONp) při použití jednoho ekvivalentu HOBt v 50% směsi dimethylformamidu a methylenchloridu, v tomto případě není zapotřebí přidávat dicyklohexylkarbodiimid
2-chlorbenzyloxykarbonyl (2C1-Z) se užije jako ochranná skupina pro postranní řetězec Lys. Tos se užije k ochraně guanidinové skupiny Arg a k ochraně dusíkového atomu imidazclového zbytku His a karbcxylová skupina postranního řetězce Glu nebo Asp se chrání CBzl. Fenolová hydrcxylová skupina Tyr se chrání 2,6-dic'nlorbenzylovou skupinou (DC3) .
K odštěpení peptidu z pryskyřice a k odstranění ochrar ných skupin se'užije směsi 1,5 ml anisclu, 0,5 ml methyleth; sulfidu a 15 ml kyseliny fluorovodíkové na 1 g komplexu peptidu a pryskyřice při teplotě -20 °C po dobu 1/2 hodiny a pak při teplotě 0 °C 1/2 hodiny. Po odstranění fluorovodíku ve vysokém vakuu se zbytek pryskyřice a peptidu promývá stř: dave bezvodým diethyletherem a chloroformem a pak se peptid extrahuje 2N vodným roztokem kyseliny octové, zbaveným plyn; a oddělí se od pryskyřice filtrací.
Odštěpený peptid, zbavený ochranných skupin se pak rc: pustí v 0 až 5% kyselině četové a čistí se například filtrací na gelu Sephadex G-50.
Pak se peptid dále čistí preparativní nebo semi-preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografií způsobem podle publikace Rivier a další, Peptides: Structure and Biological Function, 1979, str. 125 - 128 a Marki a další. J. Am. Chem. Soc., 103, 3178, 1981. Sloupec (Waters Associa tes prep LC-500) se plní 15 - 20 C oxidem křemičitým (Vydac 300A). Gradient CH^CN v TEAP se vytvoří přístrojem (Eldex), tak jak bylo popsáno v publikaci Rivier J.,
J. Liq. Chromatography 1, 343 - 367, 1978. Chromatcgrafické frakce se pečlivě sledují vysokotlakou kapalinovou chromatografií a spojují se pouze frakce s dostatečnou čistotou. Odstranění solí z čištěných frakcí se dosahuje použitím gradientu CH^CN v 0,1% kyselině trifluoroctové. Střední část se pak lyofilizuje, čímž se získá požadovaný peptid, jehož čistota může být vyšší než 93 %.
Syntéza se opakuje při použití pryskyřice M3PA, čímž se získá stejný peptid s amidovaným C-terminálním zakončení; postupuje se způsobem, popsaným v publikaci Vale a další,
US patentový spis č. 4 292 313, čímž se naváže Asn na pryskyřici MBHA.
Příklad 2
Syntéza peptióů o 40 zbytcích o vzorci:
H-Ca'1'^aMeHis-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Me t-A.sn-Arg-Gln-Gln-Glu-Arg-Asn-Gln-C-ln-Arg-Ser-NH^ se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidu (3eckm 990) a pryskyřice M3HA způsobem, který byl obecně popsán Valem a dalšími v US patentovém spisu č. 4 292 313. Při provádění chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografi i bylo prokázáno, že se získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 3
Syntéza analogu rhGRF, to jest:
/NalfaMe-Met1, Leu27/-rhGRF(1-43)-OH vzorce a 1 f* a
N MeMet-Ala-Asp-Ale-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Leu-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beck man 990) a chlormethylované pryskyřice způsobem, který byl obecně popsán v příkladu 1. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tím~o způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 4
Syntéza fragmentu analogu hpGRF, tj.
I f 3 1 /C MePhe(4Cl) /-hpGRr(l-32)-NH2 vzorce o *1 f' ra
H-C MePhe (4C1) -Ala-Asp'~Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBRA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie je tento analog v podstatě Čistý.
Syntéza se ještě dvakrát opakuje, čímž je možno získá /4CL-Phe1/-hpGRF(1-32)-NHg a /NalfSMePhe1/-hpGRF(1-32)-NH
Příklad 5
Syntéza fragmentu analogu hpGRF, tj.
o 1 f o I /N MeTyr /-hpGRF(l-29)-NH2 vzorce:
N^^MeTyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Zhr-Asn-Ser-Tyr-Arg-LysVal-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH^ se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 6
Syntéza fragmentu řhGRF, tj.
o Ί fp ů /N I-lePhe /-rhGRF( 1-29 )-NH vzorce:
3.1- X* 3.
N MePhe-Ala-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu~Hi s-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-HH se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem podle příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie.se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 7
Syntéza /NalfaMeLeu1, Ile27/-hpGRF(1-32)-NHg vzorce:
T í* 3
N MeLeu-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Ile-Ser -Arg-Gln-Gln-Gly-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidu (Beckman 990) a pryskyřice MBHA způsobem podle příkladu 2.
Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 8
Systém fragmentu analogu rhGRF, tj. /CalfaMe(4Cl)1/-rbC-RF(l-29)-HH2 vzorce:
elfa
H-C MePhe ( 4C1) -Ala-Asp—Ala-Ile-Pbe-Thr-Ser-Se r-Ty r-A.rg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-leu-His-C-lu-Ile-Met-Asn-Arg-NH2 * .
se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem zís ká v podstatě čistý peptid.
Příklad 9
Syntéza fragmentu analogu rhGRF, tj. /NalfaMeTyr1/-rhGRF(l-29)-NH2 vzorce:
3.1 f* a.
H-N MeTyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) a pryskyřice MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledku chromatografie na tenké vrstvě a vysoké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá
V p O Č Ξ z a t ě čistý P 6 p ” i d.
Příklad 10
Syntéza /CalfaMeLeu1/-rhGRF-/Val44-NH / vzorce:
Λ 1 f P
H-C MeLeu-Al a-Asp-Al a-Ile-Phe-Thr-Se r-Ser-Ty r-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-C-lu-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-Val-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 11
Syntéza peptidů /Na^aMeTyr\ D-Leu^^/-rGRF(1-43)-OH vzorce:
N MeTy r-Ala-Asp-Al a-I le-Phe-Thr-Se r-Ser-Ty r-Arg-Arg-I le -Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-Glu-Ile-Met -Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na chlormethylované pryskyřici se substitucí přibližné 0,1 až 0,5 mmol/g pryskyřice způsobem, popsaným v příkladu 1.
Chráněný peptid se odštěpí, zbaví se ochranných skupin a čistí se obdobným způsobem jako v příkladu 1. Z čištěných frakcí je možno odstranit soli použitím gradientu CH^CN v 0,1% kyselině trifluoroctové. Střední část se pak lyofilizuje, čímž se získá výsledný peptid, jehož čistota je vyšší než 98 %.
Syntéza se opakuje při použití pryskyřice MBHA, čímž se získá týž peptid s amidovaným C-terminálním zakončením způsobem, který byl obecně popsán Valem a dalšími v US patentovém spisu č. 4 292 313 pro navázání Asn na pryskyřici MBHA.
Příklad 12
Syntéza amidovaného peptidu o 40 zbytcích o 1 fa IP?
/C MeHis , D-Leu /-hpGRF(l-40)-NH2 vzorce:
S Ί í* 3
H-C MeHis-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Arg-Gly-Ala-NHg se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 930) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným Valem a dalšími v US patentovém spisu č. 4 292 313. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chro matografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 13
Syntéza /Na^^aMe-Met^, D-Leu23, Nle^Z-rGRF-(1-43 )-OH vzorce:
O 1 f O I
N MeMet-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na chlormethylované pryskyřici způsobem, který byl popsán v příkladu 1. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatigrafie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 14
3
Syntéza fragmentu analogu, tj. /D-Leu^ J /-hpC-RF ( 1-NH2 vzorce:
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-G.ly-Gln-Leu Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě .čistý analog.
Uvedený způsob se ještě dvakrát opakuje, čímž se získá /D-Leu23,D-Glu25/-hpGRF( l-32)-NH2 a /D-Leu23 , Nle27/-hpGRF-(l-32)-NH2.
Příklad 15
2^
Syntéza fragmentu analogu hpGRF, t j . /D-Leu ,D-Asp , N1e27/-hpGRF(1-29)-NK? vzorce;
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-D-Asp-Ile-ille-Ser-Arg-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBKA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 16
Syntéza /D-Leu2, Kle27/-rGRF (1-29 ) vzorce;
H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-?’ne-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu~D-Leu-Kis-Gln-Ile-Mle-Asn-Arg-NHg se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem zís ká v podstatě čistý peptid.
, 17 2 7
Syntéza se opakuje, čímž se získá /D-Leu ,Nle /-rGRF(l-29)-NH2.
Příklad 17
Syntéza /D-Glu25,Nle27/-hpGRF(1-29)-NH2 vzorce:
Η-Tyr-Ala-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-D-Glu-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledku chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 18
Sybtéza /D-Glu25 , Nle27/-rC-RF( 1-29 )-NH2 vzorce:
K-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Che-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Hus-D-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru .peptidů (Beckman 990) způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 19
Syntéza /D-Tyr^,D-Leu^^/pGRF(1-44)-ΝΗ^ vzorce:
H-B-Tyr-Ala-Asp-Ala-Iie-?he-Thr-Asn-Ser-Iyr-Arg-Lys~Vai-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Sln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, obecně popsaným Valem a dalšími v US patentovém spisu č. 4 292 313. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 20
Syntéza ,/D-His , D-Leu OH vzorce:
17 23 2 hís .n-T.au ’ , D-Glu ,Hle“ /rGPF(1-43)H-D-Kis-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-D-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-D-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg~Ser-Arg-Pbe-Asn-OH se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na chlormethylované pryskyřice způsobem, který byl popsán v příkladu 1. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 21 ? 17?? p c,
Syntéza /D-Ala ,D-Leu ’ ,D-Asp /-hpGRF(1-32)-NHg vzorce:
H-Tyr i-Ilť 5he-/ηr-Asn—Ser—.
yr i~Lys- v;
-Gly-Gln-D-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-D-Asp-I le-Me t-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-NH^ se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidu (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografi6 se tímto způsobem zís ká v podstatě čistý analog.
Příklad 22
D-Leu
Syntéza /D-Tyr1, D-Al.a2 , D-Asp3 , D-Asn8 , D-Tyr10 , D-Ala10 ’17,23,D-Asp25,D-Mí /-hpGRF(1-29)-HH„ vzorce:
H-D-Tyr-D-Ala-D-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-D-Asn-Ser-D-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-D-Ala-Gln-D-Leu-Ser-AI a-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-D-Asp-Ile-D-Met-Ser-Arg-NH^ se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) a pryskyřice MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle výsledku chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografiC se tímto způsobem zís ká v podstatě čistý analog.
Příklad 23
Syntéza /D-His1,D-Ser8,D-Leu23,Nle27/-rGRF(1-43)-OH vzorce;
H-D-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-D-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr.Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-Glu-Ile-Hle -Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-C-ln-Arg-Ser-Arg·
-Phe-Asn-OH se provádí pc ;·tupne při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na chlormethylované pryskyřici způsobem, popsaným v příkladu 1. Podle výsledku chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografi0 se tímto způsobem získá v podstatě čistý peptid.
Příklad 24
Syntéza fragmentu analogu rGRF -D-Glu23/-rhGRF(1-29)-NHO vzorce:
HeTv.
O O
N MeTyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-ArgIle
-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-bys-Leu-Leu-His-D-Glu-Ile-Met
-Asn-Arg-NH2 se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBH způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle chromatografie na tenké vrstvě a vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem získá v pod statě čistý peptid.
Příklad 25
Syntéza /Calf/ieLeu1,D-Leu23,D-Glu25,Nle27/-rGRF-/Val^4/-NH2 vzorce:
H-Cali MeLeu-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Se r-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-D-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-Val-NH^ se provádí postupně při použití syntetizátoru peptidů (Beckman 990) na pryskyřici MBHA způsobem, popsaným v příkladu 2. Podle chromatografie na tenké vrstvě a podle vysokotlaké kapalinové chromatografie se tímto způsobem
A .
získá v podstatě čistý peptid.
Různé syntetické peptidy připravené podle jednotlivých příkladů byly srovnávány se syntetickým hpGRF ( 1 -40 ')-OH in vitro a bylo prokázáno, že všechny měly větší schopnost podporovat sekreci růstového hormonu a další podobné účinky.
Aby bylo možno stanovit účinnost některých syntetických peptidů na uvolňování růstového hormonu, byly prováděny pokusy in vitro při použití syntetického hpGRF(1-40)-OH jako standardu a ekvimolárních koncentrací různých jiných analogů a fragmentů. Byly užity kultury krysích hypofyzálnich buněk ze žláz, odebraných před 3 až 5 dny. Kultury, které byly pro toto sledování optimální, byly užity pro srovnávací zkoušky způsobem, popsaným v publikaci Vale a další,
Endocrinology, 91, 552 - 572, 1972 a ještě podrobněji v publikaci Vale a další, Endocrinology, 1983 v tisku. Inkubace se sledovanými látkami se provádí.3 až 4 hodiny, načež se odeberou podíly živného prostředí a zpracovávají se tak, že se měří obsah imunoreaktivního růstového hormonu (in GH) běžnou radioimunolcgickou zkouškou s použitím cestiček.
Výsledky tohoto srovn pro ekvimolámí koncentrace
SOU UVť :eny v i S 1 S'
Peptid srovnání v %
| hpC-RF (1-40)-OH | |
| (standard) | 100 |
| /D-Glu25,Nle27/-rGRF(1-29)-NH | 125 |
| /D-Leu23 , Nle27/-rGRF( l-29')-KH2 | 150 |
| /D-Leu17, Nle27/-rGRF(l-29)-NH2 | 12S |
| /M-MePhe1 2 * * * * /-hpC-RF ( 1 - 2 2 ) -NHj | ď 7 |
/0 Me?he1(4Cl)/-hpGRF(l-3^-LH? 4,7 /-01-rhe1/’npGRF(1-32)-KH? 2
In vitro pokusy s těmito syntetickými peptidy ukazují, že každý z nich má plnou biologickou účinnost 7 hpGRF(1-40)-OH. Maximální účinná koncentrace pro /D-Leu
7
Nle /-hpGRF(1-29)-KH2 je přibližně 1 nanomol.
Kromě testů in vitro na sekreci růstového hormonu byly prováděny také pokusy in vivo tak, že byly syntetické peptidy podány injekčně krysím samcům po předběžném ošetření FLA-63, inhibitorem hydroxylózy dopaminu, který potlačuje samovolnou sekreci růstového hormonu, aniž by ovlivňoval odpověď na zevně přiváděný GRF. Krevní vzorky byly odebírány katetrem těsně před injekcí a 5 a 20 minut co inlekci. Hladiny růstového hormonu v krvi, měřeno racio2327 imunologicky ukazují, že syntetický /D-Leu ' ,Nle /-rGRF(1-29''-LH- další D-Leu ά alfa..
a D-Glu25-analogy rGRF a svrchu . . aTfa..
i cen i i ± .·< o v aní _ jsou účinnými stimulátory sekrece hypofyzálního rusOv-..o hormonu a daleko delší dobu účinku než rGRF/1-29)-NH2 a in vivo, které jsou účinpotvrdily tyto výsledky, nanogramú až 50 mikrogramú hpGRF(l-32)-NH2. Další známé GRF né při sekreci růstového hormonu Dávky se pohybují v rozmezí 100 peptidu na 1 kg hmotnosti.
Syntetické analogy hpGRF a pravděpodobně také analogy rGRF a pGRF by měly být použitelné v lidské medicíně v případě, že je zapotřebí zVýšit produkci růstového hormonu. Stimulace sekrece růstového hormonu těmito analogy spadá v úvahu zejména u nemocných s úplným chyběním nebo nedostatečnou sekrecí růstového hormonu, a to v důsledku toho, že se tento hormon nevyrábí z toho důvodu, že chybí faktor, který jeho uvolňování podporuje. Mimo co je pravděpodobné, že zvýšená sekrece růstového hormonu a vliv této sekrece na rychlený růst může příznivě ovlivnit i vývoj lidí nebo zvířat s normálními hladinami růstového hormonu. Mimoto je možné, že by tímto způsobem bylo možno ovlivnit tukové buňky v těle a pozměnit další metabolické, imunologické a vývojové po chody, které závisí na produkci růstového hormonu. Tyto ana logy by tedy mohly být použitelné k podpoře anabolických pochodů u lidí například při těžkých popáleninách. Také by mohlo padat v úvahu podávání těchto analogů u hospodářských zvířat, například kuřat, krocanů, vepřů, koz, skotu a ovcí, a také u studenokrevných zvířat, například ryb a dalších mořských zvířat, například želv, popřípadě u obojživelníků k urychlení jejich růstu a ke zvýšení poměru bílkovin k tukům, což by současně mělo vést i k dokonalejšímu využití bílkovin, které jsou těmto živočichům podávány v krmivu.
t
Při podávání svrchu uvedených látek lidem by syntetické peptidy měly mít čistotu alespoň 93 %, s výhodou alespoň 93. %. Čistota v tomto případě znamená hmotnostní procento požadovaného peptidu ve směsi ostatních peptidu-a jejich fragmentů. Při podávání syntetických peptidů hospodářským zvířatům a jiným zvířatům k urychlení jejich růstu a ke snížení tuku stačí daleko nižší čistota, například pouze 5 %, v některých případech je přípustná čistota 0,01 %.
Syntetické peptidy nebo jejich nstoxické soli je možno zpracovávat na farmaceutické prostředky spolu s běžnými nosiči, přijatelnými z farmaceutického nebo veterinárního hlediska. Takto získané prostředky je možno podávat živočichům včetně lidí, obvyklým způsobem podání je podání nitrožilní, podkožní, nitrosvalové, kožní a popřípadě intranasální nebo perorální. K podání peptidů, vyrobených způsobem podle vynálezu, se může rozhodnout lékař v případě, že je zapotřebí zvýšit uvolňování růstového hormonu v zájmu jeho nemocného. Požadovaná dávka peptidu se může měnit podle podmínek, a to zejména v závislosti na závažnosti stavu nemocného a na Dožadované době léčení.
Peptidy podle technického řešení je často možno podávat ve formě jejich netoxických solí, například adičních solí s kyselinami nebo ve formě jejich komplexů s kovy, například zinkem, železem a podobně. Tyto komplexy se považují z hlediska přihlášky pro jednoduchost také za soli.
Jako příklad vhodných adičních solí s kyselinami je možno uvést hydrochloridy, hydrobromidy, sírany, fosforečnany, maleáty, citronany, octany, jantarany, jablečnany, benzoáty, soli kyseliny askorbové, kyseliny vinné a podobně. V případě, že účinná látka má být podávána perorálně ve formě tablet, může tableta obsahovat také pojivo, například tragakant, kukuřičný škrob nebo želatinu, dále plnidlo, které napomáhá rozpadu tablety, například kyselinu alginovou, kluznou látku, například stearan hořečnatý a podobně. V případě, že se požaduje podání v kapalné formě, může prostředek obsahovat sladidlo a/nebo chuťovou látku, při nitrožilním podání bude prostředek obsahovat zejména isotonický roztok chloridu sodného, fosfátový pufr a podobně.
Peptidy podle technického řešení je zapotřebí podávat lidem pod dohledem lékaře, farmaceutické prostředky budou obvykle obsahovat příslušný peptid spolu s běžným pevným nebo kapalným nosičem, přijatelným z farmaceutického hlediska. Při parenterálním podání se bude dávka účinné látky pohybovat obvykle v rozmezí 100 nanogramů až 50 mikrogramů peptidu na 1 kg tělesné hmotnosti.
Přestože řešení bylo popsáno v souvislosti s některými výhodnými provedeními, která představují v současné době nejlepší způsob provedení, který je znám, je samozřejmé, že bude možno provádět různé změny a modifikace, které může běžně provést každý odborník, aniž by přitom došlo k odchylkám od podstaty řešeníJe například možno provádět nejrůznější modifikace v základním peptidovém řetězci, a to zejména vynechat některé zbytky nebo skupiny zbytků od C-terminálního zakončení peptidového řetězce v souladu s běžnými způsoby, které se v současné době používají k získávání peptidů nebo peptidových fragmentů, které si uchovávají veškerou účinnost původní látky nebo podstatnou část biologické účinnosti základního peptidu. Mimoto je možno na obou koncích peptidu nebo na některém z těchto konců zbytky přidat a/nebo je možno užít místo přírodně se vyskytujících zbytků zbytky, které se obvykle pokládají za zbytky ekvivalentní, tak jak je to známo v chemii peptidů za vzniku analogů, které mají alespoň podstatnou část biologické účinnosti polypeptidů, aniž by přitom došlo k odchýlení od podstaty řešení.
Zastupuje :
j' ν' \/ —> / O
- 33 NÁROKY NA OCHRAN U
Claims (2)
1. Peptidy obecného v:
,orce
R. - R „ - R, - Αία - N = - Ph = - T - R - c a - R -A?·!-0 - i 2 3 ‘ 3 - 10 a 12 13 Gln-R17-R13-U5“Ar5-Ly5-Lsu-?'23-°2<R25-n5-R27-R23-A;?3-Gl·-,Gln-Giy-Glu-R-,-Asn-Gln-Glu-R,n-R
33 39 40 ''42“43_,'41 / 7 \
V. i ,· kde
R-, znamená Tyr, D-Tyr, Met, Pne. D-Phe, pGl-Phs, Leu, His nebo D-His, při substituci typu Da“‘aMe nebo Na-isMe nebo bez substituce, -·
'39 ‘40 '42 '43
za předpokladu, že bud
a) Rmá substituci typu C' 'Me nebo M a i r a.
Me nebo
b) R^7 a/nebo R23 znamená D-Leu nebo
c) R,-,^ znamená D-Glu nebo D-Asp, přičemž navíc je možno vynechat některý ze zbytků R44’ R43R44’ *42 43 44’
Atg-R42“R43-R44>
R10_Ar9_R42R43“R44 ’ R39“R40Ar9“R42~R43R44’ R38-R39R40“Ar9_R42R43R44’ Ε1υ Κ33_Ρ'39Κ40 ’Ar9_R42~R43'R44’ Gln-Glu-R-jg-R-^-P^Q-Ai-Q-R^-7' 43-^44 ’ Asn-Gln-Glu-R38-R39-R4Q -Arg-R^-R^-R^, R34-Asr'-^'’ri_^^U_R38-R39-R40-Al'^~R42-R43-R44’ Glu-R,4-Asn-Fln-Glu-R3g-R3g.R40-Arg-R42-R43-R44, Gly-Glu-R34-Asn-Gln-Glu-R38-R39-R40-Arg-R42-R43-R44,
Gln-Gly-Glu-R34-Asn-Gln-Glu-R38-R3g-R4Q-Arg-R42-R43-R44,
Gln-Gln-Gly-Glu-R34-Asn-Gln-Glu-R38-R39-R4Q-Arg-R47-R4-5
-R44·
-i
2. Peptidy
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19943013U CZ3004U1 (cs) | 1994-10-13 | 1994-10-13 | Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19943013U CZ3004U1 (cs) | 1994-10-13 | 1994-10-13 | Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ3004U1 true CZ3004U1 (cs) | 1995-03-03 |
Family
ID=38754093
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19943013U CZ3004U1 (cs) | 1994-10-13 | 1994-10-13 | Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ3004U1 (cs) |
-
1994
- 1994-10-13 CZ CZ19943013U patent/CZ3004U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
| US4528190A (en) | GRF Analogs IV | |
| US4563352A (en) | Human pancreatic GRF | |
| US4529595A (en) | GRF Analogs | |
| US4626523A (en) | GRF analogs II | |
| KR0138907B1 (ko) | 합성 펩티드 | |
| EP0117034B1 (en) | Grf analogs | |
| US4595676A (en) | Rat hypothalamic GRF | |
| US5262519A (en) | GRF analogs XI | |
| US4728726A (en) | GRF analogs IIIb | |
| US5002931A (en) | GRF analogs VII | |
| FI94356C (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen kasvuhormonia vapauttavan tekijän synteettisen peptidianalogin tai sen ei-myrkyllisen suolan valmistamiseksi | |
| US4703035A (en) | Human pancreatic GRF amidated fragments | |
| EP0107890B1 (en) | Mammalian pgrf | |
| CZ3004U1 (cs) | Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem | |
| CS276972B6 (en) | Peptides, process of their preparation and pharmaceutical containing thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20041013 |