JPS5824428B2 - ポリペプチドの製造法 - Google Patents
ポリペプチドの製造法Info
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- JPS5824428B2 JPS5824428B2 JP56140117A JP14011781A JPS5824428B2 JP S5824428 B2 JPS5824428 B2 JP S5824428B2 JP 56140117 A JP56140117 A JP 56140117A JP 14011781 A JP14011781 A JP 14011781A JP S5824428 B2 JPS5824428 B2 JP S5824428B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は強力な排卵コントロール作用を有する新規ポリ
ペプチド類の製造法に関する。
ペプチド類の製造法に関する。
さらに詳しくは、
式（Ｉ）
〔式中、Ｒは水酸基を有しまたは有しない低級アルキル
基を示す。
基を示す。
又Ａｌａは９体、他は５体を示−漬で表わされるポリペ
プチドを製造するためにピログルタミン酸またはピログ
ルタミン酸をＮ−末端とし以下上記に相当するアミノ酸
配列を有する部分ペプチドと上記目的のポリペプチド残
余部分とを縮合させることを特徴とする上記ポリペプチ
ドの製造法である。
プチドを製造するためにピログルタミン酸またはピログ
ルタミン酸をＮ−末端とし以下上記に相当するアミノ酸
配列を有する部分ペプチドと上記目的のポリペプチド残
余部分とを縮合させることを特徴とする上記ポリペプチ
ドの製造法である。
本明細書においては国際的な規則にもとづいて次のよう
に略語を用いる。
に略語を用いる。
ＮＬｅ ：ノルロイシン、Ｚ：カルボベンゾキシ、Ｈ
ＯＮＢにＮ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２・３−
ジカルボキシイミド、ＤＣＣ ：Ｎ−Ｎ’−ジシクロ
へキシルカルボジイミド、ＯＭｅ ：メチルエステル
、ＯＢＺＬニペンジルエステル。
ＯＮＢにＮ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２・３−
ジカルボキシイミド、ＤＣＣ ：Ｎ−Ｎ’−ジシクロ
へキシルカルボジイミド、ＯＭｅ ：メチルエステル
、ＯＢＺＬニペンジルエステル。
本発明の目的化合物は全て文献未載の新規ペプチド体で
あり、優れた排卵コントロール作用を示し、動物の脳下
垂体に働いて黄体形成刺戟ホルモンおよびｆ胞細胞刺戟
ホルモンの分泌を促進する。
あり、優れた排卵コントロール作用を示し、動物の脳下
垂体に働いて黄体形成刺戟ホルモンおよびｆ胞細胞刺戟
ホルモンの分泌を促進する。
従って医薬品として脳下垂体機能の診断や同機能の低下
症の治療に有用であることは勿論、動物用薬品として排
卵促進剤としても有用なものである。
症の治療に有用であることは勿論、動物用薬品として排
卵促進剤としても有用なものである。
脳下垂体から分泌される黄体形成刺戟ホルモン（ＬＨ）
と沢胞細胞刺戟ホルモン（ＦＳＨ） は更に上位の視床
下部より分泌される分泌因子（ＲＨ）によって分泌の調
節を受けているが、このＲＨの化学構造が、（Ｐｙｒ
）Ｇｌｕ−Ｈｉｓ −Ｔｒｐ ＝Ｓｅｒ −’ｌ’ｙｒ
−Ｇｌｙ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ Ｎ
Ｈ２のデカペプチドアミドであることが明らかにされた
（ Ａ、 Ｖ、 Ｓ ｃｈａｌｌｙら、Ｂ ｉｏｃｈｅ
ｍ、 Ｂ １ｏｐｈｙｓ 、Ｒｅｓ 。
と沢胞細胞刺戟ホルモン（ＦＳＨ） は更に上位の視床
下部より分泌される分泌因子（ＲＨ）によって分泌の調
節を受けているが、このＲＨの化学構造が、（Ｐｙｒ
）Ｇｌｕ−Ｈｉｓ −Ｔｒｐ ＝Ｓｅｒ −’ｌ’ｙｒ
−Ｇｌｙ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ Ｎ
Ｈ２のデカペプチドアミドであることが明らかにされた
（ Ａ、 Ｖ、 Ｓ ｃｈａｌｌｙら、Ｂ ｉｏｃｈｅ
ｍ、 Ｂ １ｏｐｈｙｓ 、Ｒｅｓ 。
Ｃｏｍｍｕｎ １．４３．１３３４（１９７１） ；Ｒ
。
。
Ｇ ｕｉ ｌ ｌｅｍ ｉｎら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａ
ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、炙旦、２７８（１９７２））
。
ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、炙旦、２７８（１９７２））
。
それに続いて数多くの類似ペプチド合成が行われ、それ
ら類似ペプチドの生物学的試験も行われているが、一般
に構成アミノ酸残基をわずかに変えるだけでもその生理
活性は著しく減少し、この化学構造が最も強い生理活性
発現に必須なものであると考えられていた（ Ａ、 Ｖ
、 Ｓ ｃｈａｌｌｙら、Ｂ ｉｏｃｈｍ 、 Ｂ １
ｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、、４．３６６（１
９７２）、ＲｏＧｕｉ ｌｌｅｍｉｎら、Ｃｈｉｍｉａ
ｌ ２６．３００（１９７２））。
ら類似ペプチドの生物学的試験も行われているが、一般
に構成アミノ酸残基をわずかに変えるだけでもその生理
活性は著しく減少し、この化学構造が最も強い生理活性
発現に必須なものであると考えられていた（ Ａ、 Ｖ
、 Ｓ ｃｈａｌｌｙら、Ｂ ｉｏｃｈｍ 、 Ｂ １
ｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、、４．３６６（１
９７２）、ＲｏＧｕｉ ｌｌｅｍｉｎら、Ｃｈｉｍｉａ
ｌ ２６．３００（１９７２））。
ところが本発明者は、６位グリシンをＤ−Ａｌａに置換
し、さらに１０位グリシンを低級アルキルアミンに置換
した同属体が天然ペプチドよりも著しく強い生理活性を
示すことを見出した。
し、さらに１０位グリシンを低級アルキルアミンに置換
した同属体が天然ペプチドよりも著しく強い生理活性を
示すことを見出した。
これは医薬品あるいは動物薬品としてこの様に複雑なペ
プチドである放出因子を安価に供給できる道を開（もの
である。
プチドである放出因子を安価に供給できる道を開（もの
である。
前記式（Ｉ）において、Ｒで表わされる低級アルキル基
としては、たとえばメチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル基などがあげられる。
としては、たとえばメチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル基などがあげられる。
これらは水酸基で置換されていてもよい。
一般にペプチド合成においては、原料物質であるアミノ
酸またはペプチドの縮合反応に関与しないアミノ基また
はカルボキシル基を保護してから縮合反応を行ない、目
的とするアミノ酸配列を形成させる手段が数多（確立さ
れているが、上記の本発明の方法を実施するにあたって
はこれらのいずれを用いてもよい。
酸またはペプチドの縮合反応に関与しないアミノ基また
はカルボキシル基を保護してから縮合反応を行ない、目
的とするアミノ酸配列を形成させる手段が数多（確立さ
れているが、上記の本発明の方法を実施するにあたって
はこれらのいずれを用いてもよい。
本発明方法にあってその有利な具体例として次のような
手段が挙げられる。
手段が挙げられる。
（１） （ａ）Ｃ−末端のカルボキシル基が遊離であ
り、保護されもしくはされ、ていないピログルタミン酸
またはピログルタミン酸なＮ−末端とし以下上記式（Ｉ
）のアミノ酸配列を有する部分ペプチドと、（ｂ）Ｎ−
末端のアミン基が遊離であり、上記目的ポリペプチドの
アミノ酸配列の残余部分（例、残余部分を構成する部分
ペプチド置換アミド、プロリン置換アミドあるいは置換
アミン）とを縮合剤の存在下に縮合させる手段。
り、保護されもしくはされ、ていないピログルタミン酸
またはピログルタミン酸なＮ−末端とし以下上記式（Ｉ
）のアミノ酸配列を有する部分ペプチドと、（ｂ）Ｎ−
末端のアミン基が遊離であり、上記目的ポリペプチドの
アミノ酸配列の残余部分（例、残余部分を構成する部分
ペプチド置換アミド、プロリン置換アミドあるいは置換
アミン）とを縮合剤の存在下に縮合させる手段。
（２） （ａ）Ｃ−末端のカルボキシル基が活性化さ
れており保護されもしくはされていな℃・ピログルタミ
ン酸またはピログルタミン酸をＮ−末端とし以下上記式
（Ｉ）のアミノ酸配列を有する部分ペプチドと、（ｂ）
Ｎ−末端が遊離のアミノ基であり、上記目的のポリペプ
チドのアミノ酸配列の残余部分（例、残余部分を構成す
る部分ペプチド置換アミド、プロリン置換アミドあるい
は置換アミン）とを縮合させる手段。
れており保護されもしくはされていな℃・ピログルタミ
ン酸またはピログルタミン酸をＮ−末端とし以下上記式
（Ｉ）のアミノ酸配列を有する部分ペプチドと、（ｂ）
Ｎ−末端が遊離のアミノ基であり、上記目的のポリペプ
チドのアミノ酸配列の残余部分（例、残余部分を構成す
る部分ペプチド置換アミド、プロリン置換アミドあるい
は置換アミン）とを縮合させる手段。
（３） （ａ）Ｃ−末端のカルボキシル基が遊離であ
り、保護されもしくはされていないピログルタミン酸ま
たはピログルタミン酸をＮ−末端とし以下式（Ｉ）のア
ミノ酸配列を有する部分ペプチドと、（ｂ）Ｎ−末端の
アミン基が活性化されており、上記目的ポリペプチドの
アミノ酸配列の残余部分（例、残余部分を構成する部分
ペプチド−置換アミド、プロリン−置換アミドあるいは
置換アミン）とを縮合させる手段。
り、保護されもしくはされていないピログルタミン酸ま
たはピログルタミン酸をＮ−末端とし以下式（Ｉ）のア
ミノ酸配列を有する部分ペプチドと、（ｂ）Ｎ−末端の
アミン基が活性化されており、上記目的ポリペプチドの
アミノ酸配列の残余部分（例、残余部分を構成する部分
ペプチド−置換アミド、プロリン−置換アミドあるいは
置換アミン）とを縮合させる手段。
ピログルタミン酸のピログルタミル基もしくはピログル
タミン酸をＮ−末端とし上記式（Ｉ）のアミノ酸配列を
有する部分ペプチドにおけるピログルタミル基はγ−カ
ルボン酸がエステル化されたり、アミド化されているグ
ルタミル基のように容易にピログルタミル基に導きうる
ものである場合を含む。
タミン酸をＮ−末端とし上記式（Ｉ）のアミノ酸配列を
有する部分ペプチドにおけるピログルタミル基はγ−カ
ルボン酸がエステル化されたり、アミド化されているグ
ルタミル基のように容易にピログルタミル基に導きうる
ものである場合を含む。
一般式（Ｉ）で示されるポリペプチドアミドは、ピログ
ルタミン酸の分子内アシルアミノ基、アルギンの側鎖ア
ミノ基以外にヒスチジン、トリプトファン、セリン、チ
ロシンなどに側鎖の反応性基を有し、ペプチド合成の常
法に従えば、これらの縮合反応性基を反応過程中保護し
ておき、これを反応終了後、自体公知の手段に従って除
去せしめるのが有利であると考えられる。
ルタミン酸の分子内アシルアミノ基、アルギンの側鎖ア
ミノ基以外にヒスチジン、トリプトファン、セリン、チ
ロシンなどに側鎖の反応性基を有し、ペプチド合成の常
法に従えば、これらの縮合反応性基を反応過程中保護し
ておき、これを反応終了後、自体公知の手段に従って除
去せしめるのが有利であると考えられる。
なお、反応性基を保護してから縮合反応を行なうことも
本発明方法の一実施の態様であり、そのための二、三の
具体例を示すとピログルタミン酸の分子内アシルアミノ
基の保護基および中間ペプチドのα−アミノ基のアミノ
基の保護基としてはベンジルオキシカルボニル基、ｔ−
ブトキシカルボニル基、イソボルニルオキシカルボニル
基等が、ヒスチジンのイミノ基の保護基としては、たと
えばベンジル、トシル、２・４−ジニトロフェニル、ｔ
−ブチルオキシカルボニル、カルボベンゾキシ等力、セ
リンの水酸基の保護基としては、たとえばベンジル、ｔ
−７”チル等のエーテル等が、チロシンの水酸基の保護
基としては、たとえばベンジル、ｔ−ブチル等のエーテ
ル等が、アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、
たとえばニトロ基、トシル基、カルボベンゾキシ、イン
ボニルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニ
ル等が例示される。
本発明方法の一実施の態様であり、そのための二、三の
具体例を示すとピログルタミン酸の分子内アシルアミノ
基の保護基および中間ペプチドのα−アミノ基のアミノ
基の保護基としてはベンジルオキシカルボニル基、ｔ−
ブトキシカルボニル基、イソボルニルオキシカルボニル
基等が、ヒスチジンのイミノ基の保護基としては、たと
えばベンジル、トシル、２・４−ジニトロフェニル、ｔ
−ブチルオキシカルボニル、カルボベンゾキシ等力、セ
リンの水酸基の保護基としては、たとえばベンジル、ｔ
−７”チル等のエーテル等が、チロシンの水酸基の保護
基としては、たとえばベンジル、ｔ−ブチル等のエーテ
ル等が、アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、
たとえばニトロ基、トシル基、カルボベンゾキシ、イン
ボニルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニ
ル等が例示される。
しかし、ピログルタミン酸の分子内アシルアミノ基の保
護はピログルタミン酸自体を製造する意味と中間体の溶
解性に影響を及ぼす点で積極的な意義があるが、公知の
方法により製造することもでき、上記の縮合反応に際し
保護基を採用する場合は、得られるデカペプチドは一般
にそれぞれの反応性基が上記保護基で保護されているが
、これらの保護基は得られたポリペプチドのアミノ酸配
列を損なわないそれ自体公知の適当な手段でそれを除去
することができ、式（Ｉ）に示す遊離のポリペプチドを
与える。
護はピログルタミン酸自体を製造する意味と中間体の溶
解性に影響を及ぼす点で積極的な意義があるが、公知の
方法により製造することもでき、上記の縮合反応に際し
保護基を採用する場合は、得られるデカペプチドは一般
にそれぞれの反応性基が上記保護基で保護されているが
、これらの保護基は得られたポリペプチドのアミノ酸配
列を損なわないそれ自体公知の適当な手段でそれを除去
することができ、式（Ｉ）に示す遊離のポリペプチドを
与える。
このための手段としては、たとえばパラジウム黒、パラ
ジウム炭素、白金等の触媒を使用する接触還元、たとえ
ば弗化水素、トリフルオロ酢酸などを用いる酸分解、た
とえば液体アンモニア中金属ナトリウムなどを用いる還
元やギ酸中塩化第一スズによる還元等を挙げることがで
きる。
ジウム炭素、白金等の触媒を使用する接触還元、たとえ
ば弗化水素、トリフルオロ酢酸などを用いる酸分解、た
とえば液体アンモニア中金属ナトリウムなどを用いる還
元やギ酸中塩化第一スズによる還元等を挙げることがで
きる。
また上記のＣ−末端のカルボキシル基が活性化されてお
りＮ−末端のイミノ基が保護されもしくはされていない
ピログルタミン酸もしくはピログルタミン酸をＮ−末端
とし以下上記式（Ｉ）のアミノ酸配列を有する部分ペプ
チドは、公知の方法もしくは自体公知の方法により製造
することもできる。
りＮ−末端のイミノ基が保護されもしくはされていない
ピログルタミン酸もしくはピログルタミン酸をＮ−末端
とし以下上記式（Ｉ）のアミノ酸配列を有する部分ペプ
チドは、公知の方法もしくは自体公知の方法により製造
することもできる。
そのような化合物のＣ−末端カルボキシル基の活性化さ
れた形態としては、具体的にはたとえば、対応する酸無
水物、たとえば炭酸のモノ低級アルキルエステルとの混
酸無水物、アジド、活性エステル（ペンタクロルフェノ
ール、２・４・５−トリクロルフェノール、２・４−ジ
ニトロフェノール、シアンメチルアルコール、パラニト
ロフェノール、Ｎ−ハイドロオキシフタルイミド、Ｎ−
ハイドロオキシフタルイミド、Ｎ−ハイドロオキシベン
ズトリアゾールなどのアルコール類とのエステル）等が
挙げられる。
れた形態としては、具体的にはたとえば、対応する酸無
水物、たとえば炭酸のモノ低級アルキルエステルとの混
酸無水物、アジド、活性エステル（ペンタクロルフェノ
ール、２・４・５−トリクロルフェノール、２・４−ジ
ニトロフェノール、シアンメチルアルコール、パラニト
ロフェノール、Ｎ−ハイドロオキシフタルイミド、Ｎ−
ハイドロオキシフタルイミド、Ｎ−ハイドロオキシベン
ズトリアゾールなどのアルコール類とのエステル）等が
挙げられる。
なお、本発明者の知見によれば、活性エステルとして、
Ｎ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−２・３−ジカル
ボキシイミドエステルがことのほかこの目的に有利であ
る。
Ｎ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−２・３−ジカル
ボキシイミドエステルがことのほかこの目的に有利であ
る。
当該エステルを使用するとラセミ化現象やＮ−ハイドロ
キシサクシンイミドエステルの場合の副反応を起こすこ
となく、好都合に反応を行ないうる。
キシサクシンイミドエステルの場合の副反応を起こすこ
となく、好都合に反応を行ないうる。
またＮ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−２・３−ジ
カルボキシイミドエステルを利用する場合は（ａ） Ｃ
−末端のカルボキシル基が遊離であり、保護されもしく
はされていないピログルタミン酸またはピログルタミン
酸をＮ−末端とし以下上記式（１）のアミノ酸配列を有
する部分ペプチド、（ｂ）Ｎ−末端のアミン基が遊離で
あり、上記目的ポリペプチドのアミノ酸配列の残余部分
（例、残余部分を構成する部分ペプチド置換アミド、プ
ロリン、置換アミドあるいは置換アミン）、（Ｃ）脱水
剤およヒ（ｄ）Ｎ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−
２・３−ジカルボキシイミドを一相で反応させ、上記イ
ミドエステルを反応液中で生成させ縮合反応を一操作で
進行させることもでき、特に推奨される。
カルボキシイミドエステルを利用する場合は（ａ） Ｃ
−末端のカルボキシル基が遊離であり、保護されもしく
はされていないピログルタミン酸またはピログルタミン
酸をＮ−末端とし以下上記式（１）のアミノ酸配列を有
する部分ペプチド、（ｂ）Ｎ−末端のアミン基が遊離で
あり、上記目的ポリペプチドのアミノ酸配列の残余部分
（例、残余部分を構成する部分ペプチド置換アミド、プ
ロリン、置換アミドあるいは置換アミン）、（Ｃ）脱水
剤およヒ（ｄ）Ｎ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−
２・３−ジカルボキシイミドを一相で反応させ、上記イ
ミドエステルを反応液中で生成させ縮合反応を一操作で
進行させることもでき、特に推奨される。
活性化されたアミノ基を有するアミノ酸、ペプチドも、
公知の種類のものでよく、具体的には対応する亜リン酸
アミドなどが挙げられる。
公知の種類のものでよく、具体的には対応する亜リン酸
アミドなどが挙げられる。
このように、上記の目的とするペプチドを製造するため
には、種々の手段の組合わせが可能である。
には、種々の手段の組合わせが可能である。
また、脱水剤としてはペグチド合成に利用しうるものな
らどのようなものでも採用可能であるが、たとえばシン
クロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などのいわゆる
カルボジイミド試薬が特に好適である。
らどのようなものでも採用可能であるが、たとえばシン
クロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などのいわゆる
カルボジイミド試薬が特に好適である。
ペプチドの製造には多（の可能な工程が考えられるにも
カへわらず、最も好ましい工程は中間体の結晶性に依存
している場合が多い。
カへわらず、最も好ましい工程は中間体の結晶性に依存
している場合が多い。
これは中間体での精製が特に最終産物の純度に影響する
からである。
からである。
この点、その好ましい一例を次に図示すＰｒｏ −Ｒは
特に結晶性の良い化合物であり、中間体として極めて優
れている。
特に結晶性の良い化合物であり、中間体として極めて優
れている。
上式においてＲ１は、たとえばメチル、エチル、ｔ−ブ
チル、ベンジルなどの通常のＣ−末端力ルボキシル基の
保護基であり、Ｒは前記と同意義を有する。
チル、ベンジルなどの通常のＣ−末端力ルボキシル基の
保護基であり、Ｒは前記と同意義を有する。
この場合それ自体公知の手段にしたがってよい。
縮合反応は一般に適宜の溶媒の存在下に行なわれ、その
ような溶媒としては具体的には、たとえば無水または含
水のジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、
ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロルメタン
、テトラハイドロフラン等、またはこれらの混合物等が
挙げられる。
ような溶媒としては具体的には、たとえば無水または含
水のジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、
ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロルメタン
、テトラハイドロフラン等、またはこれらの混合物等が
挙げられる。
反応温度は通常は約−２０℃〜３０℃程度であるが適宜
に冷却あるいは加熱下に反応を行なってもよい。
に冷却あるいは加熱下に反応を行なってもよい。
アミド縮合を形成すべき二つの原料は通常は対応モルで
用いられるが、所望により変化させてもよい。
用いられるが、所望により変化させてもよい。
通常は一方の原料１モルに対して他方の原料は約１〜２
モル当量、より好ましくは約１〜１．４モル当量であり
、脱水剤の使用量は通常１〜２モル当量である。
モル当量、より好ましくは約１〜１．４モル当量であり
、脱水剤の使用量は通常１〜２モル当量である。
反応時間は約６〜１０時間柱度で十分なことが多い。
反応生成物は反応終了後たとえばエーテル、酢酸エチル
などの反応生成物を溶解しがたい溶媒を添加して、沈殿
せしめろ取することにより採取することができる。
などの反応生成物を溶解しがたい溶媒を添加して、沈殿
せしめろ取することにより採取することができる。
この反応生成物が保護基を有する場合には上記したよう
にそれ自体公知の手段によりこれを除去して目的の式（
Ｉ）のポリペプチドを製造することができる。
にそれ自体公知の手段によりこれを除去して目的の式（
Ｉ）のポリペプチドを製造することができる。
これを上記の沈殿法などそれ自体公知の手段により採取
できる。
できる。
このようにして得られた目的物は、たとえばカルボキシ
メチルセルロース、カルボキシメチルセファデックス、
アンバーライ）ＸＡＤ２（商品名）を用いるカラムクロ
マトなど適宜の手段で精製してもよい。
メチルセルロース、カルボキシメチルセファデックス、
アンバーライ）ＸＡＤ２（商品名）を用いるカラムクロ
マトなど適宜の手段で精製してもよい。
使用する反応条件によって、この新規化合物（Ｉ）は塩
基または塩の形で得られる。
基または塩の形で得られる。
この塩から常法に従って塩基を得ることができ、この塩
基は、治療に使うことのできる塩を形成するのに適当な
酸と反応させることによって塩にかえることができる。
基は、治療に使うことのできる塩を形成するのに適当な
酸と反応させることによって塩にかえることができる。
この酸としては、たとえば無機酸例えばハロゲン化水素
酸（例、塩酸または臭化水素酸）、過塩素酸、硝酸また
はチオシアン酸、硫酸、リン酸あるいは有機酸、たとえ
ばギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、無
性ブドウ酸、しゆう酸、マロン酸、こはく酸、マレイン
酸、フマル酸、アントラニル酸、けい皮酸、ナフタリン
スルホン酸、スルファニル酸などを挙げることができる
。
酸（例、塩酸または臭化水素酸）、過塩素酸、硝酸また
はチオシアン酸、硫酸、リン酸あるいは有機酸、たとえ
ばギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、無
性ブドウ酸、しゆう酸、マロン酸、こはく酸、マレイン
酸、フマル酸、アントラニル酸、けい皮酸、ナフタリン
スルホン酸、スルファニル酸などを挙げることができる
。
このようにして製造された目的物をそれ自体公知の手段
により金属錯体化合物に転換することができる。
により金属錯体化合物に転換することができる。
その具体例を示せば、上記の方法により得られたポリペ
プチドの水溶液を亜鉛、ニッケル、コバルト、銅あるい
は鉄の１種あるいは、それ以上の塩、水酸化物または酸
化物と反応させ、混合物のｐＨを約６乃至８に調整する
ことにより、担体としての金属化合物と当該ポリペプチ
ドとの微溶性吸着錯体化合物を形成させることができる
。
プチドの水溶液を亜鉛、ニッケル、コバルト、銅あるい
は鉄の１種あるいは、それ以上の塩、水酸化物または酸
化物と反応させ、混合物のｐＨを約６乃至８に調整する
ことにより、担体としての金属化合物と当該ポリペプチ
ドとの微溶性吸着錯体化合物を形成させることができる
。
種々の金属錯体化合物のうち、亜鉛錯体化合物は、持続
性において特に優れているようである。
性において特に優れているようである。
このようにして製造されるポリペプチドは極めて低毒性
であるために安全に投与することができる。
であるために安全に投与することができる。
たとえばラットに１〜１０ ｎ ｆｌ ／ １００ ｆ
ｆの微量を静脈、筋肉または皮下注入することによって
血中のＬＨおよびＦＳＨ濃度を強（上昇させる作用が認
められる。
ｆの微量を静脈、筋肉または皮下注入することによって
血中のＬＨおよびＦＳＨ濃度を強（上昇させる作用が認
められる。
たとえばＲがエチル基のポリペプチドは、最も排卵し難
い時期であるジエストラスのラットを使って体重１００
２当り６ｎＰの割合で皮下注入すると試験動物の１００
％に排卵作用を認めた。
い時期であるジエストラスのラットを使って体重１００
２当り６ｎＰの割合で皮下注入すると試験動物の１００
％に排卵作用を認めた。
これに対し天然ＬＨ−ＲＨでは同程度の作用を示すに必
要な量は６００〜４００ｎｙ′である。
要な量は６００〜４００ｎｙ′である。
従って排卵作用について本品は天然型ＬＨ−ＲＨの実に
約１００−８０倍以上の生理活性を示すことが判る。
約１００−８０倍以上の生理活性を示すことが判る。
又Ｒがイソプロピルあるいはプロピルであるポリペプチ
ドは上記エチル体に比して生理活性はやや劣るが、作用
の持続効果が皮下投与時に強く現われ、治療、目的には
有効である。
ドは上記エチル体に比して生理活性はやや劣るが、作用
の持続効果が皮下投与時に強く現われ、治療、目的には
有効である。
なお、Ｒがメチル基のものもエチル体に比し、排卵作用
は劣るが、それでも天然型ＬＨ−ＲＨの約８〜１０倍も
の効力を有する。
は劣るが、それでも天然型ＬＨ−ＲＨの約８〜１０倍も
の効力を有する。
したがって、本発明の目的物（Ｉ）は、たとえば人ある
いは動物（例、ヒツジ、ブタ、ウシ等）の脳下垂体機能
の診断、同機能の低下症の治療、排卵促進剤として使用
されうる。
いは動物（例、ヒツジ、ブタ、ウシ等）の脳下垂体機能
の診断、同機能の低下症の治療、排卵促進剤として使用
されうる。
その投与量は、対象動物、適用症状等によっても種々異
なるが、一般に化合物（Ｉ）’１０ｎＰ〜２γ／ｋｙの
範囲から適宜選択される。
なるが、一般に化合物（Ｉ）’１０ｎＰ〜２γ／ｋｙの
範囲から適宜選択される。
その投与は主として注射のように非経口的に行なわれる
。
。
場合によっては直腸投与も行なわれる。
注射液は化合物（Ｉ）をそれ自体公知の手段により生理
的食塩水に溶解することにより調製できる。
的食塩水に溶解することにより調製できる。
また、化合物（Ｉ）は、たとえばマニトールを増量剤と
した凍結アンプル品として使用することもできる。
した凍結アンプル品として使用することもできる。
実施例 １
（１） （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−３ｅｒ −Ｔｙｒ（Ｄ ） −Ａ ｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ −Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製
造 （ａ） （Ｐｙｒ ）−Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−３ｅｒ −Ｔｙｒ−ＯＨの製造 Ｚ −８ｅｒ −Ｔｙｒ −ＯＭｅ （８，０？、２０
ｒｒＬｍｏｌ）をメタノール１００ｒｒＬｌに溶解し、
パラジウム黒５００Ｔｖを加えて室温、常圧で接触還元
を行なう。
−３ｅｒ −Ｔｙｒ（Ｄ ） −Ａ ｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ −Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製
造 （ａ） （Ｐｙｒ ）−Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−３ｅｒ −Ｔｙｒ−ＯＨの製造 Ｚ −８ｅｒ −Ｔｙｒ −ＯＭｅ （８，０？、２０
ｒｒＬｍｏｌ）をメタノール１００ｒｒＬｌに溶解し、
パラジウム黒５００Ｔｖを加えて室温、常圧で接触還元
を行なう。
４時間水素を吹き込んだ後、触媒を沢去して減圧下低温
でメタノールを留去し、残留物をジメチルホルムアミド
３０ｍ１に溶解し、これに（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈ
ｌｓ −Ｔｒｐ−ＯＨの結晶６．７８１ （１５ｍｍｏ
ｌ ）を加えて氷冷する。
でメタノールを留去し、残留物をジメチルホルムアミド
３０ｍ１に溶解し、これに（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈ
ｌｓ −Ｔｒｐ−ＯＨの結晶６．７８１ （１５ｍｍｏ
ｌ ）を加えて氷冷する。
水冷後ＨＯＮＢ５．４ ′？（３０ｍｍｏｌ ）とＤＣ
Ｃ（５，１’、２５ ｍｍｏｌ ）を加えて水冷下に８
時間、室温で１０時間かき混ぜる。
Ｃ（５，１’、２５ ｍｍｏｌ ）を加えて水冷下に８
時間、室温で１０時間かき混ぜる。
生ずるジシクロへキシル−尿素を戸別し、涙液を減圧濃
縮してエーテル１００ｍ１を加える。
縮してエーテル１００ｍ１を加える。
沈殿を沢取し、エーテルで洗って乾燥する（収量１２．
２Ｐ）。
２Ｐ）。
本品を酢酸エチル−ピリジン刊酢酸−水（６０：２０：
６：１０）の混合液に溶解し、同じ混合溶媒で作ったシ
リカゲルのカラム（φ６．５ｘ１９ｃｒｒＬ）に流し込
み、同じ溶媒で展開する。
６：１０）の混合液に溶解し、同じ混合溶媒で作ったシ
リカゲルのカラム（φ６．５ｘ１９ｃｒｒＬ）に流し込
み、同じ溶媒で展開する。
目的とする（ Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒ
ｐ −３ｅｒ −Ｔｙｒ−ＯＭｅは１４８０−１８００
ｍｌノ区分に溶出するので、これを減圧乾固し、エーテ
ルで良く洗う。
ｐ −３ｅｒ −Ｔｙｒ−ＯＭｅは１４８０−１８００
ｍｌノ区分に溶出するので、これを減圧乾固し、エーテ
ルで良く洗う。
収量８．３り、本品はシリカゲルの薄層クロマトグラフ
ィーでＲｆｌ（酢酸エチル：ピリジン：酢酸：水、６０
：２０：６：１０）＝０．２９、Ｒｆ２（ｎ−ブタノー
ル：酢酸エチル：酢酸：水、１：１：１：１）−〇、６
８、Ｒｆ３（ｎ−ブタノール：酢酸：水、４ ： １
： １ ）−０，４３に単一のパラリー呈色像、エーリ
ツヒ呈色像を示す。
ィーでＲｆｌ（酢酸エチル：ピリジン：酢酸：水、６０
：２０：６：１０）＝０．２９、Ｒｆ２（ｎ−ブタノー
ル：酢酸エチル：酢酸：水、１：１：１：１）−〇、６
８、Ｒｆ３（ｎ−ブタノール：酢酸：水、４ ： １
： １ ）−０，４３に単一のパラリー呈色像、エーリ
ツヒ呈色像を示す。
本品７．２１（１０ｍｍｏｌ）をメタノール５０１ｒＬ
ｌに溶解し、氷冷してＮ−水酸化ナトリウム３０ｍ１を
ゆっくり滴下し、加水分解を行なう。
ｌに溶解し、氷冷してＮ−水酸化ナトリウム３０ｍ１を
ゆっくり滴下し、加水分解を行なう。
室温で３時間かきまぜたのち、Ｎ−塩酸水３０ｍ１を加
えて冷却すると沈殿が生ずる。
えて冷却すると沈殿が生ずる。
これを沢取して冷却した水で洗い乾燥する。
本品を５％含水エタノールに溶解し、アンバーライトＸ
ＡＤ−２０カラム（φ３ ｘ ２５ＣｒＩＬ）に流し込
んで吸着せしめ、５％エタノール（８ｏｏｍｌ）と９０
％エタノール（８００ＷＬｌ）でグラジェント溶出を行
なう。
ＡＤ−２０カラム（φ３ ｘ ２５ＣｒＩＬ）に流し込
んで吸着せしめ、５％エタノール（８ｏｏｍｌ）と９０
％エタノール（８００ＷＬｌ）でグラジェント溶出を行
なう。
目的の（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −
３ｅｒ −Ｔｙｒ−ＯＨの区分を含む溶出液を集めて減
圧濃縮してエタノールを留去し、凍結乾燥する。
３ｅｒ −Ｔｙｒ−ＯＨの区分を含む溶出液を集めて減
圧濃縮してエタノールを留去し、凍結乾燥する。
収量５，９グ（８２％）
Ｒｆ’＝０．０１、Ｒｆ２＝０．６２、Ｒｆ３−〇、３
４ 元素分析 Ｃ３４Ｈ３８Ｎ８ ｏ９・Ｈ２０として計算
値 Ｃ１５６，６５；Ｈ１５，５９；Ｎ、１５．５５ 実験値 Ｃ１５６，３９；Ｈ１５，７０；Ｎ、１５．５
２ アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の塩酸加水分解
）、Ｇｌｕ １．０５ ： Ｈｉｓ Ｏ，９８：Ｔｒｐ
Ｏ，９５： Ｓｅｒ Ｏ，９８： Ｔｙｒ １．０３
（ｂ） Ｚ −（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａ
ｒｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３の製
造 Ｈ−Ｌｅｕ −Ａ ｒｇ （ＮＯ２） −Ｐ ｒｏ −
ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３１，１４？ （２ｍ、ｍｏｌ ）
と２−（Ｄ ） −Ａｌａ −０Ｈ４４７１ｎ９（２ｍ
ｍｏｌ ）をジオキサン３０ｍ１とジメチルホルムアミ
ド１０ｒｒＬｌの混合液に溶解する。
４ 元素分析 Ｃ３４Ｈ３８Ｎ８ ｏ９・Ｈ２０として計算
値 Ｃ１５６，６５；Ｈ１５，５９；Ｎ、１５．５５ 実験値 Ｃ１５６，３９；Ｈ１５，７０；Ｎ、１５．５
２ アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の塩酸加水分解
）、Ｇｌｕ １．０５ ： Ｈｉｓ Ｏ，９８：Ｔｒｐ
Ｏ，９５： Ｓｅｒ Ｏ，９８： Ｔｙｒ １．０３
（ｂ） Ｚ −（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａ
ｒｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３の製
造 Ｈ−Ｌｅｕ −Ａ ｒｇ （ＮＯ２） −Ｐ ｒｏ −
ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３１，１４？ （２ｍ、ｍｏｌ ）
と２−（Ｄ ） −Ａｌａ −０Ｈ４４７１ｎ９（２ｍ
ｍｏｌ ）をジオキサン３０ｍ１とジメチルホルムアミ
ド１０ｒｒＬｌの混合液に溶解する。
この溶液にＨＯＮＢ４００ヤを加えて急冷し、ＤＣＣ４
６０ダを加えてかき混ぜる。
６０ダを加えてかき混ぜる。
２０時間かき混ぜたのち、生ずるジシクロヘキシル尿素
を沢去して涙液を減圧乾固し、残留物を酢酸エチルに加
温して溶解し、４％炭酸水素ナトリウム水、水で洗って
、無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧乾固する。
を沢去して涙液を減圧乾固し、残留物を酢酸エチルに加
温して溶解し、４％炭酸水素ナトリウム水、水で洗って
、無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧乾固する。
残留物を再び少量の酢酸エチルに加熱溶解して、涙過し
て少量の不溶物を除き、放置すると針状結晶が析出する
。
て少量の不溶物を除き、放置すると針状結晶が析出する
。
これを沢取して冷酢酸エチルで洗って乾燥する。
収量１．３０Ｐ（９８％）。融点１８３〜１８４℃。
〔α、）Ｄ−４９，２°（Ｃ−〇、５、メタノール）
元素分析 Ｃ３０Ｈ４７ｏ８Ｎ９として
計算値 Ｃ１５４，４５；Ｈ１７，１６；Ｎ。
１９．０５
実測値 Ｃ，５４，４２；Ｈ１７，２８；Ｎ１１８．８
６ Ｒｆ （クロロホルム：メタノール：酢酸、９ ： １
： ０．５ ）−０，６５、Ｒｆ ’＝ ０１７８、
Ｒｆ２＝０．９０ （ｃ） ＰＧｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ
−Ｔｙｒ −Ａ ｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐ ｒ
ｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 Ｚ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａ ｒｇ （Ｎ
Ｏ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２の結晶１５５η
を酢酸２０ｍ１に溶解し、これにパラジウム黒１００〜
を加えて室温、常圧で５時間接触還元する。
６ Ｒｆ （クロロホルム：メタノール：酢酸、９ ： １
： ０．５ ）−０，６５、Ｒｆ ’＝ ０１７８、
Ｒｆ２＝０．９０ （ｃ） ＰＧｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ
−Ｔｙｒ −Ａ ｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐ ｒ
ｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 Ｚ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａ ｒｇ （Ｎ
Ｏ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２の結晶１５５η
を酢酸２０ｍ１に溶解し、これにパラジウム黒１００〜
を加えて室温、常圧で５時間接触還元する。
触媒を沢去しｆ液にＮ−塩酸水０．４５ｍ１を加えて減
圧乾固し、残留物を水１０ｍ１に溶解して凍結乾燥する
。
圧乾固し、残留物を水１０ｍ１に溶解して凍結乾燥する
。
残留する白色綿状物と（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ
−Ｔｒｐ −５ｅｒ −Ｔｙｒ ＯＨ１４１ｍ９をジ
メチルホ／ｌｚムアミド１０ｍ１に溶解し、ＨＯＮＢ６
０’Ｖを加え、氷冷してＮ−エチルモルホリンの１０％
ジメチルホルムアミド溶液０．２５ｍ１を加え、更にＤ
ＣＣ５０７Ｑを加えて水冷下５時間、室温１０時間かき
混ぜる。
−Ｔｒｐ −５ｅｒ −Ｔｙｒ ＯＨ１４１ｍ９をジ
メチルホ／ｌｚムアミド１０ｍ１に溶解し、ＨＯＮＢ６
０’Ｖを加え、氷冷してＮ−エチルモルホリンの１０％
ジメチルホルムアミド溶液０．２５ｍ１を加え、更にＤ
ＣＣ５０７Ｑを加えて水冷下５時間、室温１０時間かき
混ぜる。
ジメチルホルムアミドを減圧留去して水２０ｍ１を加え
て不溶物を沢去し、ｆ液をアンバーライ）ＩＲＡ −４
ｌ０（酢酸型）のカラム（φｌＸ５ＣＩｒＬ）に流し、
５０ｍ１の水で洗う。
て不溶物を沢去し、ｆ液をアンバーライ）ＩＲＡ −４
ｌ０（酢酸型）のカラム（φｌＸ５ＣＩｒＬ）に流し、
５０ｍ１の水で洗う。
通過液と洗液を合わせて、カルボキシメチルセルロース
のカラム （φ１，５ｘ２５ｃＩｒＬ）に吸着せしめ、０．００５
Ｍ酢酸アンモニア（３００１１Ｌｌ）と０．１７５Ｍ酢
酸アンモニア（３００ｍｌ）でグラジェント溶出を行な
う。
のカラム （φ１，５ｘ２５ｃＩｒＬ）に吸着せしめ、０．００５
Ｍ酢酸アンモニア（３００１１Ｌｌ）と０．１７５Ｍ酢
酸アンモニア（３００ｍｌ）でグラジェント溶出を行な
う。
１７０ｍ１〜２４０ｍ１の区分を凍結乾燥し、白色羽状
物２０８〜を得る。
物２０８〜を得る。
水晶は薄層クロマトグラフィーでＲｆ値の大きい１つの
不純物が認められるので、更にアンバーライトＸＡＤ−
２０カラム（φ２×２０ｃＩｆＬ）で精製する。
不純物が認められるので、更にアンバーライトＸＡＤ−
２０カラム（φ２×２０ｃＩｆＬ）で精製する。
即ち、水で作ったＸＡＤ −２のカラムに上記白色羽状
物を水に溶解して流して吸着せしめ、水（２５０ｍｌ）
と７５％エタノール（２８０ｍｌ）でグラジェント溶出
を行ない、１７０ｒＩＬｌから２５０ｍ１の溶出区分を
集めて、減圧でエタノールを留去し、凍結乾燥する。
物を水に溶解して流して吸着せしめ、水（２５０ｍｌ）
と７５％エタノール（２８０ｍｌ）でグラジェント溶出
を行ない、１７０ｒＩＬｌから２５０ｍ１の溶出区分を
集めて、減圧でエタノールを留去し、凍結乾燥する。
収量１２９〜。Ｒｆ Ｏ，０６２、Ｒｆ−０，３５８
〔α〕賃−−４７．０°（Ｃ＝０．５．５％酢酸水）
アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の塩酸分解）、
Ｇｌｕ、０．９８ ： Ｈｉｓ １゜０５；Ｔｒｐ １
．０４ ：５ｅｒＯ，９７：ＴｙｒＯ，９７：Ａｌａｌ
、ＯＯ：Ｌｅｕｌ、０４ ：Ａｒｇｌ、０３ ：Ｐｒｏ
１．００ ：エチルアミン１−０２（回収率８６％） 同様にして（ｂ）のＺ −（Ｄ ） −Ａ ｌａ −Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ
３の代りにＺ （Ｄ） Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ３から出発して
（Ｉ）式のＲ−−ＣＨ３のポリペプチドが得られる。
Ｇｌｕ、０．９８ ： Ｈｉｓ １゜０５；Ｔｒｐ １
．０４ ：５ｅｒＯ，９７：ＴｙｒＯ，９７：Ａｌａｌ
、ＯＯ：Ｌｅｕｌ、０４ ：Ａｒｇｌ、０３ ：Ｐｒｏ
１．００ ：エチルアミン１−０２（回収率８６％） 同様にして（ｂ）のＺ −（Ｄ ） −Ａ ｌａ −Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ
３の代りにＺ （Ｄ） Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ３から出発して
（Ｉ）式のＲ−−ＣＨ３のポリペプチドが得られる。
このものの理化学的性状は次の通りである。
〔α〕２Ｔ３−４８．１°（Ｃ＝０．６．５％酢酸）Ｒ
ｆ Ｏ，０５５Ｒｆ −０，３３５アミノ酸分析（
チオグリコール酸存在下の塩酸分解）、Ｇｌｕ １．０
０ ； Ｈｉｓ １．０２ ；ＴｒｐＯ，８９；５ｅｒ
０．９０ ；ＴｙｒＯ，９８：Ａｌａｌ、００ ：Ｌｅ
ｕｌ、００ ；Ａｒｇｌ−０４：Ｐｒｏ １．０２ ：
メチルアミ１０．９７（回収率８４．９％）。
ｆ Ｏ，０５５Ｒｆ −０，３３５アミノ酸分析（
チオグリコール酸存在下の塩酸分解）、Ｇｌｕ １．０
０ ； Ｈｉｓ １．０２ ；ＴｒｐＯ，８９；５ｅｒ
０．９０ ；ＴｙｒＯ，９８：Ａｌａｌ、００ ：Ｌｅ
ｕｌ、００ ；Ａｒｇｌ−０４：Ｐｒｏ １．０２ ：
メチルアミ１０．９７（回収率８４．９％）。
実施例 ２
（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ
−Ｔｙｒ −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒｏ
−ＮＨ−ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （ａ） Ｚ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ，−ＣＨ２−
ＣＨ３の製造Ｚ −Ｌｅｕ −Ａ ｒｇ （Ｎ０２）
−Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ５７２０１
ｒＱ （１ｍｍｏｌ ）を２５％臭化水素−氷酢酸２ｍ
ｌに溶解し、４０分間ふり混ぜ、これに乾燥エーテル２
０ｍ１を加えて生ずる沈殿を沢取し、乾燥エーテルで洗
う。
−Ｔｙｒ −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒｏ
−ＮＨ−ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （ａ） Ｚ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ，−ＣＨ２−
ＣＨ３の製造Ｚ −Ｌｅｕ −Ａ ｒｇ （Ｎ０２）
−Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ５７２０１
ｒＱ （１ｍｍｏｌ ）を２５％臭化水素−氷酢酸２ｍ
ｌに溶解し、４０分間ふり混ぜ、これに乾燥エーテル２
０ｍ１を加えて生ずる沈殿を沢取し、乾燥エーテルで洗
う。
この粉末を水酸化ナトリウムのデシケータ−中で減圧乾
燥し、乾燥後ＤＭＦ ５ｍｌに溶解し、更にＺ −（Ｄ
） −Ａｌａ−ＯＨ２３０１ＶとＨＯＮＢ２００ｍ９を
加えて氷冷し、トリエチルアミンの１０％を含むＤＭＦ
溶液１．５ｍｌを加え、この溶液にＤＣＣ２３０〜を加
えて１０時間室温でかき混ぜる。
燥し、乾燥後ＤＭＦ ５ｍｌに溶解し、更にＺ −（Ｄ
） −Ａｌａ−ＯＨ２３０１ＶとＨＯＮＢ２００ｍ９を
加えて氷冷し、トリエチルアミンの１０％を含むＤＭＦ
溶液１．５ｍｌを加え、この溶液にＤＣＣ２３０〜を加
えて１０時間室温でかき混ぜる。
ＤＭＦの大部分を減圧留去し、酢酸エチル５０ＩｒＬｌ
を加えて残留物をとかし、不溶物をｐ去してｐ液を４％
炭酸水素ナトリウム水で３回、水で２回洗って無水硫酸
ナトリウムで乾燥した後、酢酸エチルを留去する。
を加えて残留物をとかし、不溶物をｐ去してｐ液を４％
炭酸水素ナトリウム水で３回、水で２回洗って無水硫酸
ナトリウムで乾燥した後、酢酸エチルを留去する。
残留物をエーテルに加えて粉末として沢取し、酢酸エチ
ルに加熱溶解してエーテルを加えて再沈殿して精製する
と粉末７２３ＷＩ９を得る。
ルに加熱溶解してエーテルを加えて再沈殿して精製する
と粉末７２３ＷＩ９を得る。
〔α〕甘せ４８．０°（Ｃ＝１．０、メタノール）
元素分析 Ｃ３１Ｈ４８０８Ｎ９として
計算値 Ｃ，５５，１８；Ｈ，７，１７；Ｎ１１８．６
８ 実測値 Ｃ，５４，８９；Ｈ１７，３２；Ｎ、１８．４
４ Ｒｆ （クロロホルム：メタノール：酢酸、９：１ ：
０．５ ） −０，６２ （ｂ） （Ｐｙｒ）Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−８
ｅｒ −Ｔｙｒ−Ａ ｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐ
ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （ａ）で得られたＺ −（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ
２−ＣＨ３１５０ηを酢酸１０ｍ１とメタノール１０ｍ
１中で４時間パラジウム黒を触媒として接触還元する。
８ 実測値 Ｃ，５４，８９；Ｈ１７，３２；Ｎ、１８．４
４ Ｒｆ （クロロホルム：メタノール：酢酸、９：１ ：
０．５ ） −０，６２ （ｂ） （Ｐｙｒ）Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−８
ｅｒ −Ｔｙｒ−Ａ ｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐ
ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （ａ）で得られたＺ −（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ
２−ＣＨ３１５０ηを酢酸１０ｍ１とメタノール１０ｍ
１中で４時間パラジウム黒を触媒として接触還元する。
触媒を沢取し、涙液から減圧で溶媒を留去し、残留物を
ＩＮ−塩酸０．４ ｍｌと水１０ｒＩｌｌに溶解して凍
結乾燥すると白色毛状物が得られる。
ＩＮ−塩酸０．４ ｍｌと水１０ｒＩｌｌに溶解して凍
結乾燥すると白色毛状物が得られる。
これと（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −
３ｅｒ −Ｔｙｒ −ＯＨ１４１ｍ９とをジメチルホル
ムアミド１０ｍ１に溶解し、ＨＯＮＢ６０７ＱとＮ−エ
チルモルホリン（１０％）−Ｄ■゛溶液０．２５７ｄを
加えて一２℃に冷却し、ＤＣＣ５５〜を加えて水冷下５
時間室温１２時間かき混ぜる。
３ｅｒ −Ｔｙｒ −ＯＨ１４１ｍ９とをジメチルホル
ムアミド１０ｍ１に溶解し、ＨＯＮＢ６０７ＱとＮ−エ
チルモルホリン（１０％）−Ｄ■゛溶液０．２５７ｄを
加えて一２℃に冷却し、ＤＣＣ５５〜を加えて水冷下５
時間室温１２時間かき混ぜる。
反応終了後、ジメチルホルムアミドを減圧留去して、残
留物を水２０ｍ１に溶解し、少量の不溶物（ジシクロヘ
キシル尿素）を沢去し、アンバーライトＩＲＡ −４ｌ
０（酢酸型）のカラム（ＩＸ４ＣｒｒＬ）に流し込み、
水で洗う。
留物を水２０ｍ１に溶解し、少量の不溶物（ジシクロヘ
キシル尿素）を沢去し、アンバーライトＩＲＡ −４ｌ
０（酢酸型）のカラム（ＩＸ４ＣｒｒＬ）に流し込み、
水で洗う。
流出液と洗液を合わせて、カルボキシメチルセルロース
のカラム（１，５ｘ２５ＣｒｆＬ）に吸着させ、０．０
０５Ｍ酢酸−アンモニアで洗ったのち、０．００５Ｍ−
酢酸−アンモニア（ｐＨ６，８）３００ｍｌと０．２Ｍ
−酢酸−アンモニア（ｐＨ６，９） ３００ｒａｌで連
続溶出を行なう。
のカラム（１，５ｘ２５ＣｒｆＬ）に吸着させ、０．０
０５Ｍ酢酸−アンモニアで洗ったのち、０．００５Ｍ−
酢酸−アンモニア（ｐＨ６，８）３００ｍｌと０．２Ｍ
−酢酸−アンモニア（ｐＨ６，９） ３００ｒａｌで連
続溶出を行なう。
１６０ｗＬｌ〜２３０ｍ１の区分を集め、凍結乾燥し、
更に同条件で再クロマトグラフィーを行ない、凍結乾燥
し、これをビオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ ） ｐ−２のカラ
ム（３ｘ５０ｃｆｒＬ）にかげる（５％酢酸を溶出液と
する）目的物の区分を凍結乾燥すると白色毛状物２０１
７ｒＩ？を得る。
更に同条件で再クロマトグラフィーを行ない、凍結乾燥
し、これをビオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ ） ｐ−２のカラ
ム（３ｘ５０ｃｆｒＬ）にかげる（５％酢酸を溶出液と
する）目的物の区分を凍結乾燥すると白色毛状物２０１
７ｒＩ？を得る。
〔α〕”、；−４６，８°（Ｃ＝０．５．５％酢酸）Ｔ
ＬＣ、Ｒｆ （ｎ−ブタノール、酢酸エチル、酢酸、
水；１：１：１：１）−０，３７ Ｒｆ （酢酸エチル：ピリジン：酢酸：水、６０ ：２
０ ：６： １０）−０，０８アミノ酸分析（チオグリ
コール酸存在下の５．７Ｎ＝塩酸加水分解物）、Ｈｉｓ
０．９７ ；ＡｒｇＯ，９７；Ｔｒｐｏ、９１ ；５
ｅｒ０．９１ ；Ｇｌｕｌ、ＯＯ：Ｐｒｏ １．００
：Ａｌａｏ、９８ ；Ｌｅｕ ０．９７ ： Ｔｙｒ
Ｏ，９４（ペプチド含量８６．４％）。
ＬＣ、Ｒｆ （ｎ−ブタノール、酢酸エチル、酢酸、
水；１：１：１：１）−０，３７ Ｒｆ （酢酸エチル：ピリジン：酢酸：水、６０ ：２
０ ：６： １０）−０，０８アミノ酸分析（チオグリ
コール酸存在下の５．７Ｎ＝塩酸加水分解物）、Ｈｉｓ
０．９７ ；ＡｒｇＯ，９７；Ｔｒｐｏ、９１ ；５
ｅｒ０．９１ ；Ｇｌｕｌ、ＯＯ：Ｐｒｏ １．００
：Ａｌａｏ、９８ ；Ｌｅｕ ０．９７ ： Ｔｙｒ
Ｏ，９４（ペプチド含量８６．４％）。
実施例 ３
（Ｐｙｒ ）Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−８ｅｒ −
Ｔｙｒ −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒｏ −
ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−０Ｈの製造 （ａ） Ｚ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ
の製造Ｚ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ
−ＮＨ〜ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ７２２１ｖを２０％臭
化水素ジオキサン３ｒｒＬｌに溶解し、６０分間ふり混
ぜる。
Ｔｙｒ −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒｏ −
ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−０Ｈの製造 （ａ） Ｚ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ
の製造Ｚ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ
−ＮＨ〜ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ７２２１ｖを２０％臭
化水素ジオキサン３ｒｒＬｌに溶解し、６０分間ふり混
ぜる。
これに乾燥エーテル３０ｍ１を加えて沈殿を、傾斜法で
集め、乾燥エーテルで洗う。
集め、乾燥エーテルで洗う。
水酸化ナトリウムのデシケータ−中減圧で良く乾燥して
、ジメチルホルムアミド５７７１１に溶解し、Ｚ−（Ｄ
）−Ａｌａ −ＯＨ２３０１１１９とＨＯＮＢ２１０Ｉ
ｎＩ？を加えて氷冷し、トリエチルアミン０．１６ｍ１
を加えて、ＤＣＣ２３０ｍ９を加え、水冷下１時間、室
温４時間かき混ぜる。
、ジメチルホルムアミド５７７１１に溶解し、Ｚ−（Ｄ
）−Ａｌａ −ＯＨ２３０１１１９とＨＯＮＢ２１０Ｉ
ｎＩ？を加えて氷冷し、トリエチルアミン０．１６ｍ１
を加えて、ＤＣＣ２３０ｍ９を加え、水冷下１時間、室
温４時間かき混ぜる。
この反応液を沢過後、クロロホルム１００ｍ１に加え、
４％炭酸水素ナトリウム水と水で洗って無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥して減圧乾固する。
４％炭酸水素ナトリウム水と水で洗って無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥して減圧乾固する。
これをクロロホルム−メタノール−酢酸（９：１：０．
５）の混合溶媒に溶解して、同溶媒で作ったシリカゲル
のカラム（３Ｘ４０ｃｒｒＬ）に流し込み、同溶媒で展
開する。
５）の混合溶媒に溶解して、同溶媒で作ったシリカゲル
のカラム（３Ｘ４０ｃｒｒＬ）に流し込み、同溶媒で展
開する。
Ｒｆ値で０．４７に相当する区分を集め、減圧乾固し、
更にエーテルで洗う。
更にエーテルで洗う。
粉末６４０ｍＩ？を得る。
〔α〕”、； −４７，２°（Ｃ＝０．５、メタノール
：元素分析 ｃ３ｏ Ｈ４７ｏ、Ｎ９ 計算値 Ｃ，５３，１６；Ｈ，６，９９；Ｎ１１８．６
０ 実測値 Ｃ，５２，８４；Ｈ，７，２６；Ｎ１１８．２
１ Ｒｆ（り０ロホルム：メタノール：酢酸、９：１ ：
０．５ ） ＝０．４７ （ｂ） （Ｐｙｒ ）Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−３ｅｒ −Ｔｙｒ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ −Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−０Ｈ
の製造 （ａ）で得られたＺ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２
−ＯＨ１５４ダを酢酸１０ｍ１中で５時間パラジウム黒
を触媒として接触還元する。
：元素分析 ｃ３ｏ Ｈ４７ｏ、Ｎ９ 計算値 Ｃ，５３，１６；Ｈ，６，９９；Ｎ１１８．６
０ 実測値 Ｃ，５２，８４；Ｈ，７，２６；Ｎ１１８．２
１ Ｒｆ（り０ロホルム：メタノール：酢酸、９：１ ：
０．５ ） ＝０．４７ （ｂ） （Ｐｙｒ ）Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−３ｅｒ −Ｔｙｒ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ −Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−０Ｈ
の製造 （ａ）で得られたＺ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ
−Ａｒｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２
−ＯＨ１５４ダを酢酸１０ｍ１中で５時間パラジウム黒
を触媒として接触還元する。
触媒を沢去して、涙液を減圧乾固し、水１０ｍ１とＩＮ
−塩酸９．４５ｍを加えて凍結乾燥する。
−塩酸９．４５ｍを加えて凍結乾燥する。
この乾燥粉末と（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔ
ｒｐ −３ｅｒ −Ｔｙｒ−〇Ｈ１４０■とをジメチル
ホルムアミド１０ｍ１に溶解し、Ｉ（ＯＮＢ６０即とＮ
−エチルモルホリン（１０％）−ＤＭＦ溶液０．２５ｒ
ｒＬｌを加えて一２℃に冷却し、ＤＣＣ６０〜を加えて
水冷下６時間、室温で１２時間かき混ぜる。
ｒｐ −３ｅｒ −Ｔｙｒ−〇Ｈ１４０■とをジメチル
ホルムアミド１０ｍ１に溶解し、Ｉ（ＯＮＢ６０即とＮ
−エチルモルホリン（１０％）−ＤＭＦ溶液０．２５ｒ
ｒＬｌを加えて一２℃に冷却し、ＤＣＣ６０〜を加えて
水冷下６時間、室温で１２時間かき混ぜる。
反応終了後、ジメチルホルムアミドを減圧留去し、残留
物を水１０ｍ１に溶解して、不溶物を沢去し、アンバー
ライトＩＲＡ −４１００カラム（１×４α、酢酸型）
に流して酢酸塩に変え、つづいて実施例１と同じく、カ
ルボキシメチルセルロースのカラムとアンバーライトＸ
ＡＤ−２のカラムで精製し、凍結乾燥して白色羽状物を
得る。
物を水１０ｍ１に溶解して、不溶物を沢去し、アンバー
ライトＩＲＡ −４１００カラム（１×４α、酢酸型）
に流して酢酸塩に変え、つづいて実施例１と同じく、カ
ルボキシメチルセルロースのカラムとアンバーライトＸ
ＡＤ−２のカラムで精製し、凍結乾燥して白色羽状物を
得る。
収量１４６ｍ９
〔α］’、７−４８．１°（Ｃ＝０．５．５％酢酸）Ｔ
ＬＣ、Ｒｆ （ｎ−ブタノール、酢酸エチル、酢酸、
水；１ ：１ ：１ ： １ ）−０，３１Ｒｆ （酢
酸エチル：ピリジン：酢酸：水、６０：２０ ：６：１
０）＝０．０２５ アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の５．７Ｎ−塩
酸加水分解物）、Ｈｉｓ １．００ ：Ａｒｇｏ、９８
： Ｔｒｐ Ｏ，９８： Ｓｅｒ Ｏ，９２：Ｇｌｕ
ｌ、００ ；Ｐｒｏ １．００ ＋ Ａｌａ ０．９９
： Ｌｅｕｌ、００：Ｔｙｒｏ、９８（ペプチド含量
８７％） 実施例 ４ （Ｐｙｒ ） Ｇ ｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −５ｅ
ｒ −Ｔｙｒ −（Ｄ ）−Ａｌａ −Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）２の製造 （ａ） Ｚ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）２の製
造 Ｚ −Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−
ＣＨ（ＣＨ３）２７２０〜を実施例２−ａと同様に処理
して、Ｚ−（Ｄ）−Ａｌａ−ＯＨとジメチルホルムアミ
ド（５ｍｌ）−ジクロルメタン（１０ｍｌ）の混合溶液
中でＤＣＣとＨＯＮＢで縮合し、酢酸エチルで抽出して
粉末６９０１ｎ９を得た。
ＬＣ、Ｒｆ （ｎ−ブタノール、酢酸エチル、酢酸、
水；１ ：１ ：１ ： １ ）−０，３１Ｒｆ （酢
酸エチル：ピリジン：酢酸：水、６０：２０ ：６：１
０）＝０．０２５ アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の５．７Ｎ−塩
酸加水分解物）、Ｈｉｓ １．００ ：Ａｒｇｏ、９８
： Ｔｒｐ Ｏ，９８： Ｓｅｒ Ｏ，９２：Ｇｌｕ
ｌ、００ ；Ｐｒｏ １．００ ＋ Ａｌａ ０．９９
： Ｌｅｕｌ、００：Ｔｙｒｏ、９８（ペプチド含量
８７％） 実施例 ４ （Ｐｙｒ ） Ｇ ｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −５ｅ
ｒ −Ｔｙｒ −（Ｄ ）−Ａｌａ −Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）２の製造 （ａ） Ｚ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒ
ｇ （ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）２の製
造 Ｚ −Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−
ＣＨ（ＣＨ３）２７２０〜を実施例２−ａと同様に処理
して、Ｚ−（Ｄ）−Ａｌａ−ＯＨとジメチルホルムアミ
ド（５ｍｌ）−ジクロルメタン（１０ｍｌ）の混合溶液
中でＤＣＣとＨＯＮＢで縮合し、酢酸エチルで抽出して
粉末６９０１ｎ９を得た。
〔α〕甘せ４８３°（Ｃ＝ｌＯ、メタノール）元素分析
ｃ３ｔＨ１Ｏ８Ｎ９として 計算値 Ｃ１５５，１８；Ｈ，７，１７；Ｎ。
ｃ３ｔＨ１Ｏ８Ｎ９として 計算値 Ｃ１５５，１８；Ｈ，７，１７；Ｎ。
１８．６８
実測値 Ｃ１５４，７８；Ｈ，７，０９；Ｎ、１８．２
２ Ｒｆ （ＴＬＣ、クロロホルム−メタノール酢酸、９
： １ ： ０．５ ）−０，６１（ｂ） （Ｐｙｒ
） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ −Ｔｙ
ｒ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒ
ｏ −ＮＨ〜ＣＨ（ＣＨ３）２ の製造 実施例２のｂと全く同操作によって Ｚ （Ｄ ） Ａｌａ−Ｌｅｕ −Ａｒｇ （ＮＯ２
）−Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３） ２と（Ｐｙｒ
）−Ｇ ｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ −Ｔｙ
ｒ −ＯＨとから製造した。
２ Ｒｆ （ＴＬＣ、クロロホルム−メタノール酢酸、９
： １ ： ０．５ ）−０，６１（ｂ） （Ｐｙｒ
） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ −Ｔｙ
ｒ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒ
ｏ −ＮＨ〜ＣＨ（ＣＨ３）２ の製造 実施例２のｂと全く同操作によって Ｚ （Ｄ ） Ａｌａ−Ｌｅｕ −Ａｒｇ （ＮＯ２
）−Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３） ２と（Ｐｙｒ
）−Ｇ ｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ −Ｔｙ
ｒ −ＯＨとから製造した。
収量１２８Ｔｎ９〔α〕甘せ４７．５°（Ｃ＝０．５．
５％酢酸）ＴＬＣ、Ｒｆ （ｎ−ブタノール、酢酸エ
チル、酢酸、水：に１ ： １ ： １ ）−０，３７
５Ｒｆ （酢酸エチル：ピリジン： 酢酸： 水、６
０：２０：６：１．０）−０，０８ アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の５．７Ｎ−塩
酸加水分解）、Ｈｉｓ ０．９９ ： ＡｒｇＯ，９８
： Ｔｒｐｏ、８９ ： ５ｅｒＯ，９４：Ｇｌｕｌ、
００：Ｐｒｏｌ、ＯＯ：Ａｌａｌ、ＯＯ；Ｌｅｕｌ、０
２ ：ＴｙｒＯ，９８（ペプチド含量８６．５％）。
５％酢酸）ＴＬＣ、Ｒｆ （ｎ−ブタノール、酢酸エ
チル、酢酸、水：に１ ： １ ： １ ）−０，３７
５Ｒｆ （酢酸エチル：ピリジン： 酢酸： 水、６
０：２０：６：１．０）−０，０８ アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の５．７Ｎ−塩
酸加水分解）、Ｈｉｓ ０．９９ ： ＡｒｇＯ，９８
： Ｔｒｐｏ、８９ ： ５ｅｒＯ，９４：Ｇｌｕｌ、
００：Ｐｒｏｌ、ＯＯ：Ａｌａｌ、ＯＯ；Ｌｅｕｌ、０
２ ：ＴｙｒＯ，９８（ペプチド含量８６．５％）。
実施例 ５
（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −３ｅｒ
−Ｐｈｅ■）−Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒ
ｏ −ＮＵ−ＣＨ２−ＯＨ５の製造 （ａ） （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−３ｅｒ −Ｐｈｅ−ＯＨの製造 Ｚ −Ｓｅｒ −Ｐｈｅ −ＯＭｅ ４．０ ’ｆｔを
メタノール１００ｍ１にとかし、パラジウム黒５００■
を触媒として常圧で１５時間接触還元する。
−Ｐｈｅ■）−Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｐｒ
ｏ −ＮＵ−ＣＨ２−ＯＨ５の製造 （ａ） （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−３ｅｒ −Ｐｈｅ−ＯＨの製造 Ｚ −Ｓｅｒ −Ｐｈｅ −ＯＭｅ ４．０ ’ｆｔを
メタノール１００ｍ１にとかし、パラジウム黒５００■
を触媒として常圧で１５時間接触還元する。
触媒をろ去し、手早くメタノールを減圧留去して、残留
物をＤＭＦ ２５ｍ１に溶解する。
物をＤＭＦ ２５ｍ１に溶解する。
これに（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−Ｏ
Ｈの結晶４．１１を加えて一５℃に冷却し、ＨＯＮＢ３
．８ＰとＤＣＣ，ｌを加えて一５℃で２時間、０℃で２
時間、あと室温で８時間かき混ぜる。
Ｈの結晶４．１１を加えて一５℃に冷却し、ＨＯＮＢ３
．８ＰとＤＣＣ，ｌを加えて一５℃で２時間、０℃で２
時間、あと室温で８時間かき混ぜる。
生ずるジシクロヘキシル尿素をろ去し、ろ液を減圧乾固
して酢酸エチルで粉末としろ取する（６．７ｆ）。
して酢酸エチルで粉末としろ取する（６．７ｆ）。
こノ粉末を１５％メタノール−クロロホルム３０ｍ１に
溶解し、同じく１５％メタノール−クロロホルムで作っ
たシリカゲルのカラム（φ６×１２ＣｒｒＬ）に流し込
み、１５％メタノール−クロロホルム６００ｍ１，２５
％メタノール−クロロホルム１．ｇ、３０％メタノール
−クロロホルム１１でそれぞれ溶出する。
溶解し、同じく１５％メタノール−クロロホルムで作っ
たシリカゲルのカラム（φ６×１２ＣｒｒＬ）に流し込
み、１５％メタノール−クロロホルム６００ｍ１，２５
％メタノール−クロロホルム１．ｇ、３０％メタノール
−クロロホルム１１でそれぞれ溶出する。
２５％メタノール−クロロホルムの４００１１１１目よ
り３０％メタノール−クロロホルム７００１ｒＬｌ目ま
でを集め、減圧で乾固し、これに酢酸エチルを加えて粉
末としてろ取すると目的物４．２１が得られる。
り３０％メタノール−クロロホルム７００１ｒＬｌ目ま
でを集め、減圧で乾固し、これに酢酸エチルを加えて粉
末としてろ取すると目的物４．２１が得られる。
Ｒｆ１＝０．２９
コノメチルエステル体３．５ｆをメタノール２０ｍ１に
懸濁し、０℃に冷却してＮ−苛性ソーダ水８ｍｌを加え
て１時間かき混ぜ、Ｎ−塩酸水８１ｒＬｌを加えて中和
する。
懸濁し、０℃に冷却してＮ−苛性ソーダ水８ｍｌを加え
て１時間かき混ぜ、Ｎ−塩酸水８１ｒＬｌを加えて中和
する。
メタノールを減圧留去して、冷水２０ｍ１を追加して冷
却し析出する沈殿をろ取し、冷却水で洗い、ついでエタ
ノール−エーテル（４： ６）で洗って、乾燥すると目
的物２．３２１（６６％）が得られる。
却し析出する沈殿をろ取し、冷却水で洗い、ついでエタ
ノール−エーテル（４： ６）で洗って、乾燥すると目
的物２．３２１（６６％）が得られる。
Ｒｆ２−０．６１（α〕２６°”−３，３°（Ｃ＝０．
５５、木酢り 酸中） （ｂ） （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−Ｓｅｒ −Ｐｈｅ −（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅ
ｕ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２
−ＣＨ３の製造 Ｚ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ （Ｎ
Ｏ２） −Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨａの結晶１，６
りを２５％臭化水素−氷酢酸１５ｍ１に溶かし、室温で
５０分間振り混ぜる。
５５、木酢り 酸中） （ｂ） （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−Ｓｅｒ −Ｐｈｅ −（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅ
ｕ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２
−ＣＨ３の製造 Ｚ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ （Ｎ
Ｏ２） −Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨａの結晶１，６
りを２５％臭化水素−氷酢酸１５ｍ１に溶かし、室温で
５０分間振り混ぜる。
これに乾燥エーテル１５０Ｔｕｌを加えて生ずる沈殿を
ろ取し、乾燥後水３０ｍ１に溶解してアンバーライト （Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ） ＣＧ −４１０（遊離塩基
）のカラム（２，５ｃｒＩＬＸ １５ｃｒｒＬ）に流し
込み３０％メタノール水で良く洗う。
ろ取し、乾燥後水３０ｍ１に溶解してアンバーライト （Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ） ＣＧ −４１０（遊離塩基
）のカラム（２，５ｃｒＩＬＸ １５ｃｒｒＬ）に流し
込み３０％メタノール水で良く洗う。
留出液と洗液を合わせて減圧濃縮してメタノールを除い
てから凍結乾乾するとＨ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅ
ｕ −Ａｒｇ（Ｎ（）り−Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−
ＣＨ３の遊離塩基１．２２が得られる。
てから凍結乾乾するとＨ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅ
ｕ −Ａｒｇ（Ｎ（）り−Ｐ ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−
ＣＨ３の遊離塩基１．２２が得られる。
Ｒ，ｆ’＝０．２１ Ｒｆ２＝０．６４本品２２５〜
と前述の（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ−Ｔｒｐ −
３ｅｒ −Ｐｈｅ −ＯＨ２８Ｑ■とをジメチルホルム
アミド５７７１１に溶解し、ＨＯＮＢ１１５０〜を加え
て一１０℃に冷却する。
と前述の（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ−Ｔｒｐ −
３ｅｒ −Ｐｈｅ −ＯＨ２８Ｑ■とをジメチルホルム
アミド５７７１１に溶解し、ＨＯＮＢ１１５０〜を加え
て一１０℃に冷却する。
これにＤＣＣ９０〜を加えて一１０℃で２時間、０℃で
４時間、さらに室温で１２時間かきませる。
４時間、さらに室温で１２時間かきませる。
反応液をろ過してジシクロヘキシル尿素を除去し、酢酸
エチルを加えて生ずる沈殿をろ取して乾燥する。
エチルを加えて生ずる沈殿をろ取して乾燥する。
これを２０％エタノール水に加熱溶解して放置すると微
細結晶が得られる。
細結晶が得られる。
ろ取して乾燥すると３８９〜。
〔α〕賃”−−４３，６°（Ｃ＝０．１１、メタノール
）Ｒｆ１＝０．２２ Ｒｆ２＝０．７４本品も天然型
ＬＨ−ＲＨに比して同程度以上の排卵活性を持っている
。
）Ｒｆ１＝０．２２ Ｒｆ２＝０．７４本品も天然型
ＬＨ−ＲＨに比して同程度以上の排卵活性を持っている
。
（ｃ） （Ｐｙｒ）Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ −
３ｅｒ −Ｐｈｅ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −
Ａｒｇ −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （Ｉ） （ｂ）で得られたＮＯ２一体１５０ｒ／′Ｉ
ｇを１０７７１１の６０％ギ酸水に溶解し、ＳｎＣｌ２
−Ｎ２０３００ｍ９を加えて８０−８５℃で２時間３０
分加温する。
３ｅｒ −Ｐｈｅ−（Ｄ ） −Ａｌａ −Ｌｅｕ −
Ａｒｇ −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （Ｉ） （ｂ）で得られたＮＯ２一体１５０ｒ／′Ｉ
ｇを１０７７１１の６０％ギ酸水に溶解し、ＳｎＣｌ２
−Ｎ２０３００ｍ９を加えて８０−８５℃で２時間３０
分加温する。
減圧で乾固して、８０℃の温水３０Ｒ１で残渣を抽出し
、ろ過した後、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ
） ＸＡＤ −２（２００メツシユ前后）のカラム（φ
３Ｘ１５（１１７１１）に流し込み水洗後、水と１００
％エタノール（３００ｍｌづつ）でグラジェント溶出を
行う。
、ろ過した後、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ
） ＸＡＤ −２（２００メツシユ前后）のカラム（φ
３Ｘ１５（１１７１１）に流し込み水洗後、水と１００
％エタノール（３００ｍｌづつ）でグラジェント溶出を
行う。
目的物は１３０７７１１〜２２０ｍ１に溶出するノテ、
この区分を集めて減圧濃縮してエタノールを除き、つい
でカルボキシメチルセルロースのカラム（φ２×３０Ｃ
１ｒＬ）に流し込み０．００５Ｍより０．２ Ｍの酢酸
アンモニア（ｐＨ６，８）でグラジェント溶出を行う。
この区分を集めて減圧濃縮してエタノールを除き、つい
でカルボキシメチルセルロースのカラム（φ２×３０Ｃ
１ｒＬ）に流し込み０．００５Ｍより０．２ Ｍの酢酸
アンモニア（ｐＨ６，８）でグラジェント溶出を行う。
目的のペプチドが３５０Ｔｌｌ〜５００ｍ１に溶出する
ので、この区分を集めて凍結乾燥すると白色の羽毛状物
１１２■が得られる。
ので、この区分を集めて凍結乾燥すると白色の羽毛状物
１１２■が得られる。
〔α）２４−−４４．３°（Ｃ＝０．５３．５％酢酸中
、ペプチド含量で補正〕 Ｒｆ’＝０．０８８、Ｒｆ２＝０．７３ アミノ酸分析： Ｈｉｓ Ｏ，９６： Ａｒｇ １．０
４ ：Ｔｒｐｏ、９２ ；５ｅｒＯ，９６：Ｇｌｕｏ、
９９ ；Ｐｒｏ １．０８ ： Ａｌａ １．００ ：
Ｌｅｕ １．００ ：Ｐｈｅ １．００ ：Ｌチルア
ミン１．０４（ペプチド含量８５％）。
、ペプチド含量で補正〕 Ｒｆ’＝０．０８８、Ｒｆ２＝０．７３ アミノ酸分析： Ｈｉｓ Ｏ，９６： Ａｒｇ １．０
４ ：Ｔｒｐｏ、９２ ；５ｅｒＯ，９６：Ｇｌｕｏ、
９９ ；Ｐｒｏ １．０８ ： Ａｌａ １．００ ：
Ｌｅｕ １．００ ：Ｐｈｅ １．００ ：Ｌチルア
ミン１．０４（ペプチド含量８５％）。
（ＩＩ） （ｂ）で得られたＮＯ□一体１００７ｎ９
ヲ氷酢酸１ｍｌとメタノール２０ＴＬｌに溶解しパラジ
ウム黒１１００１ｎを加えて常圧で２日間接触還元する
。
ヲ氷酢酸１ｍｌとメタノール２０ＴＬｌに溶解しパラジ
ウム黒１１００１ｎを加えて常圧で２日間接触還元する
。
反応液をろ過して触媒を除去し、減圧乾固する。
これを０．００５Ｍ酢酸アンモニア水３ｍｌに溶解し、
カルボキシメチルセルロースのカラム（φ２Ｘ３０ｃＩ
ｒＬ）に流し込み、（Ｉ）と同条件でグラジェント溶出
を行う。
カルボキシメチルセルロースのカラム（φ２Ｘ３０ｃＩ
ｒＬ）に流し込み、（Ｉ）と同条件でグラジェント溶出
を行う。
３５０ｍ１〜４６０ｍ１の区分を集め凍結乾燥すると目
的物６８〜が得られる。
的物６８〜が得られる。
Ｒｆ値、比旋光度は（Ｉ）で得たものと一致する。
（［１１（ｂ）で得られたＮＯ２一体１００〜をアニソ
ール０．２ ｍｌとメルカプトエタノール０．１ ｍｌ
を含む無水弗化水素５ｍｌに溶解し、０℃で４０分かき
まぜる。
ール０．２ ｍｌとメルカプトエタノール０．１ ｍｌ
を含む無水弗化水素５ｍｌに溶解し、０℃で４０分かき
まぜる。
これを減圧乾固して弗化水素を除去し、水１０ｍ１に溶
解して不溶物をセライトを使ってろ去する。
解して不溶物をセライトを使ってろ去する。
これをアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ） ＣＧ
−４１０（酢酸型）のカラム（φｌＸ１０ｃｒＩｌ）に
流し、更に流出液と洗液ヲ集めてカルボキシメチルセル
ロースのカラム（φ２Ｘ３０ｃＴｌ）に流し込み、（Ｉ
）と同条件でグラジェント溶出を行う。
−４１０（酢酸型）のカラム（φｌＸ１０ｃｒＩｌ）に
流し、更に流出液と洗液ヲ集めてカルボキシメチルセル
ロースのカラム（φ２Ｘ３０ｃＴｌ）に流し込み、（Ｉ
）と同条件でグラジェント溶出を行う。
３４０ｍ１〜４６０ｍ１の区分を集め凍結乾燥すると目
的物４２■が得られる。
的物４２■が得られる。
本市のＲｆ値、比旋光度は（Ｉ）で得たものと一致し生
理活性（排卵誘発作用）のＥＤ、。
理活性（排卵誘発作用）のＥＤ、。
も等しい。
実施例 ６
（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−８ｅｒ
−Ｔｙｒ 〜Ｄ−Ａｌａ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ −Ｐｒ
ｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （ａ） Ｚ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ （Ｎ０２） −Ｐ
ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 Ｚ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２
−ＣＨ５４７７，５■を２５％臭化水素−氷酢酸４ｄに
とかし、室温で３０分かきまぜる。
−Ｔｙｒ 〜Ｄ−Ａｌａ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ −Ｐｒ
ｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 （ａ） Ｚ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ （Ｎ０２） −Ｐ
ｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５の製造 Ｚ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２
−ＣＨ５４７７，５■を２５％臭化水素−氷酢酸４ｄに
とかし、室温で３０分かきまぜる。
反応液に乾燥エーテル５０ｍ１を加えて、析出する沈殿
を沢取し、エーテルでよく洗い、水酸化ナトリウム上減
圧で乾燥する。
を沢取し、エーテルでよく洗い、水酸化ナトリウム上減
圧で乾燥する。
他方、Ｚ Ｎｌｅ −０Ｈ２６５，３〜を酢酸エチル
とジオキサンの混合液（２ｍｌ／２ｍ１）に溶かし、０
°Ｃに冷却してＨＯＮＢ １８７〜とＤＣＣ２２６ηを
加え、３時間かきまぜる。
とジオキサンの混合液（２ｍｌ／２ｍ１）に溶かし、０
°Ｃに冷却してＨＯＮＢ １８７〜とＤＣＣ２２６ηを
加え、３時間かきまぜる。
析出した尿素体を沢去し、涙液を先に調製した沈殿物を
１７′／ｌｌのＤＭＦ に溶解した溶液に加え、さらに
トリエチルアミン０．２８ｍ１を滴下して１２時間かき
まぜる。
１７′／ｌｌのＤＭＦ に溶解した溶液に加え、さらに
トリエチルアミン０．２８ｍ１を滴下して１２時間かき
まぜる。
溶媒を留去した後、残渣をクロロホルム１００ｍ１にて
抽出し、抽出液を５％炭酸水素ナトリウム水、水、０．
５Ｎ−塩酸水、水で順次洗い、無水硫酸マグネシウムで
乾燥する。
抽出し、抽出液を５％炭酸水素ナトリウム水、水、０．
５Ｎ−塩酸水、水で順次洗い、無水硫酸マグネシウムで
乾燥する。
クロロホルムを留去し、残渣をエーテルで固め、さらに
エタノールとエーテルで再沈殿して精製する。
エタノールとエーテルで再沈殿して精製する。
収量４１０〜、融点１０９−１１１℃（分解）、〔α〕
Ｍ−−５０．４°（Ｃ＝０．５、エタノール）元素分析
：Ｃ２７Ｈ４□０□Ｎ８・−）Ｎ２０として計算値 Ｃ
，５４，０７；Ｈ，７，２２；Ｎ、１８．６８％ 実測値 Ｃ１５３７９；Ｈ１７，０９； Ｎ、１８．２４％ （ｂ） Ｚ （Ｄ） Ａｌａ Ｎｌｅ Ａｒ
ｇ（ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３の製造 Ｚ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −Ｎ
Ｈ−ＣＨ２−ＣＨ３２００ｍ９を２５％臭化水素−氷酢
酸５ｍｌに溶解し室温で４０分ふり混ぜる。
Ｍ−−５０．４°（Ｃ＝０．５、エタノール）元素分析
：Ｃ２７Ｈ４□０□Ｎ８・−）Ｎ２０として計算値 Ｃ
，５４，０７；Ｈ，７，２２；Ｎ、１８．６８％ 実測値 Ｃ１５３７９；Ｈ１７，０９； Ｎ、１８．２４％ （ｂ） Ｚ （Ｄ） Ａｌａ Ｎｌｅ Ａｒ
ｇ（ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３の製造 Ｚ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −Ｐｒｏ −Ｎ
Ｈ−ＣＨ２−ＣＨ３２００ｍ９を２５％臭化水素−氷酢
酸５ｍｌに溶解し室温で４０分ふり混ぜる。
これに乾燥エーテル５０ｍ１を加えて生ずる沈殿を戸数
し、エーテルで洗って乾燥する。
し、エーテルで洗って乾燥する。
本品をアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ） ＩＲ
Ａ −４１０（遊離型）のカラム（φ１ｘ５ｃｒｆＬ）
に４０％メタノール水で洗して脱臭化水素酸を行い、メ
タノール留去してから凍結乾燥すると白色の粉末１２０
ηを得る。
Ａ −４１０（遊離型）のカラム（φ１ｘ５ｃｒｆＬ）
に４０％メタノール水で洗して脱臭化水素酸を行い、メ
タノール留去してから凍結乾燥すると白色の粉末１２０
ηを得る。
本品とＺ −（Ｄ ） −Ａｌａ −０Ｈ４４，７〜を
ジクロールメタ”／２０ｒｕｌ！とＤＭＦ５７７１１の
混液に溶解して０℃に冷却し、ＨＯＮＢ４０〜とＤＣＣ
４６〜を加えて１２時間室温でかき混ぜる。
ジクロールメタ”／２０ｒｕｌ！とＤＭＦ５７７１１の
混液に溶解して０℃に冷却し、ＨＯＮＢ４０〜とＤＣＣ
４６〜を加えて１２時間室温でかき混ぜる。
ジシクロヘキシル尿素をろ別して減圧乾固し、残留物を
酢酸エチル１２０１ｎｌにとかして４％炭酸水素ナトリ
ウム、水で洗って無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧乾
固する。
酢酸エチル１２０１ｎｌにとかして４％炭酸水素ナトリ
ウム、水で洗って無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧乾
固する。
残留物をエタノール少量にとかしてエーテルで再沈殿を
２回くりかえす。
２回くりかえす。
収量１３２〜、融点、粉末のため正確な融点を示さず、
〔α）２６−−４８．５°（Ｃ＝０．５、メタノール〕
元素分析 Ｃ３０Ｈ４７ｏ８Ｎ９として 計算値 Ｃ１５４，４５；Ｈ，７，１６；Ｎ１９．０５
％ 実測値 Ｃ，５４，４８；Ｈ１７，２３；Ｎ、１８．７
２％ Ｒｆ （クロロホルム：メタノール：酢酸、９：１ ：
０．５ ） −０，６６、Ｒｆ’＝０．７９、Ｒｆ２
−０．９２ （ｃ） （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−８ｅｒ −Ｔｙｒ−（Ｄ）−Ａｌｅ−Ｎｌｅ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ−ＣＨ５ Ｚ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ （ＮＯ
２）−Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３１００’ｎ’；
ｉｌを２５％臭化水素−氷酢酸５ｍｌに溶解し５０分間
室温でぶり混ぜる。
元素分析 Ｃ３０Ｈ４７ｏ８Ｎ９として 計算値 Ｃ１５４，４５；Ｈ，７，１６；Ｎ１９．０５
％ 実測値 Ｃ，５４，４８；Ｈ１７，２３；Ｎ、１８．７
２％ Ｒｆ （クロロホルム：メタノール：酢酸、９：１ ：
０．５ ） −０，６６、Ｒｆ’＝０．７９、Ｒｆ２
−０．９２ （ｃ） （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ
−８ｅｒ −Ｔｙｒ−（Ｄ）−Ａｌｅ−Ｎｌｅ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ−ＣＨ５ Ｚ （Ｄ ） −Ａｌａ −Ｎｌｅ −Ａｒｇ （ＮＯ
２）−Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３１００’ｎ’；
ｉｌを２５％臭化水素−氷酢酸５ｍｌに溶解し５０分間
室温でぶり混ぜる。
これに乾燥エーテル４０１ｒＬｌを加えて生ずる沈殿を
戸数してエーテルで洗い水酸化ナトリウムのデシケータ
−中で減圧乾燥する。
戸数してエーテルで洗い水酸化ナトリウムのデシケータ
−中で減圧乾燥する。
本品をアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ） ＣＧ
−４５の遊離型樹脂のカラムに４０％メタノール水で洗
して脱臭化水素酸化し、減圧でメタノールを留去してか
ら凍結乾燥する。
−４５の遊離型樹脂のカラムに４０％メタノール水で洗
して脱臭化水素酸化し、減圧でメタノールを留去してか
ら凍結乾燥する。
残留物と（Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−
８ｅｒ −Ｔｙｒ −〇Ｈ１００〜をジメチルホルムア
ミド４ｍＡ’に溶解し、ＨＯＮＢ ４５ ｒｒＩ９を加
えて−５〜−７℃に冷却した後ＤＣＣ４０ｍ９を加えて
水冷下で５時間、室温で１０時間かき混ぜる。
８ｅｒ −Ｔｙｒ −〇Ｈ１００〜をジメチルホルムア
ミド４ｍＡ’に溶解し、ＨＯＮＢ ４５ ｒｒＩ９を加
えて−５〜−７℃に冷却した後ＤＣＣ４０ｍ９を加えて
水冷下で５時間、室温で１０時間かき混ぜる。
ジメチルホルムアミドを留去した後酢酸エチル３０ｍ１
を加えて不溶物を戸数して乾燥する。
を加えて不溶物を戸数して乾燥する。
本品をアニソール０．０５ｍ１とメルカプトエタノ−＃
０．０５ｍ１を含む無水弗化水素２ｍｌに溶解して、０
℃で４０分かき混ぜ、弗化水素を減圧で留去した後、水
１０ｍ１に溶解し、不溶物をセライトを使って戸別する
。
０．０５ｍ１を含む無水弗化水素２ｍｌに溶解して、０
℃で４０分かき混ぜ、弗化水素を減圧で留去した後、水
１０ｍ１に溶解し、不溶物をセライトを使って戸別する
。
ろ液をアンバーライ） （Ａｍｂｅｒｌ ｉ ｔｅ ）
ＩＲＡ−４１０（酢酸型）のカラム（ＩＸ５ｃｒｆＬ）
に洗して酢酸型に変え、これをさらにカルボキシメチル
セルロースのカラム（φ１．５ Ｘ ３０ｃｒｒＬ）に
吸着せしめ０．００５Ｍ酢酸アンモニア（４００ｍｌ）
と０．２ Ｍ酢酸アンモニア（４００７７１１）を溶媒
としてグラジェント溶出を行う。
ＩＲＡ−４１０（酢酸型）のカラム（ＩＸ５ｃｒｆＬ）
に洗して酢酸型に変え、これをさらにカルボキシメチル
セルロースのカラム（φ１．５ Ｘ ３０ｃｒｒＬ）に
吸着せしめ０．００５Ｍ酢酸アンモニア（４００ｍｌ）
と０．２ Ｍ酢酸アンモニア（４００７７１１）を溶媒
としてグラジェント溶出を行う。
２９０ｍ１〜３２０ｍ１の区分に紫外部吸収のピークが
認められるのでこの区分を集めて凍結乾燥を行うと白色
毛状物１０５〜が得られる。
認められるのでこの区分を集めて凍結乾燥を行うと白色
毛状物１０５〜が得られる。
Ｒｆ’＝０．０６３、Ｒｆ２＝０．３６０〔α）２６−
−４６．０°（Ｃ＝０．３．５％酢酸水、ペプチド含量
で補正） アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の塩酸加水分解
） Ｇｌｕ Ｏ，１０： Ｈｉｓ １．０２ ： Ｔｒ
ｐＯ，９１：５ｅｒ０．９８ ：Ｔｙｒ １．００ ：
Ａｌａｌ、００ ：Ｎｌｅ １．０２ ：ＡｒｇＯ，９
８：Ｐｒ。
−４６．０°（Ｃ＝０．３．５％酢酸水、ペプチド含量
で補正） アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の塩酸加水分解
） Ｇｌｕ Ｏ，１０： Ｈｉｓ １．０２ ： Ｔｒ
ｐＯ，９１：５ｅｒ０．９８ ：Ｔｙｒ １．００ ：
Ａｌａｌ、００ ：Ｎｌｅ １．０２ ：ＡｒｇＯ，９
８：Ｐｒ。
０９７：エチルアミン１．０４（回収率８４％）実施例
７ （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−８ｅｒ
−Ｐｈｅ −（Ｄ ） −Ａｌａ−Ｉ ｌｅ −Ａｒｇ
−Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５ ＢＯＣ−Ｐｒｏ−樹脂３２（プロリン含量０゜３１４
ｍｍｏｌ ／ ？ ）を自動ペプチド合成機（島津製作
所製ＡＰＳ−８００）の反応器に入れ、ジクロルメタン
で１２時間膨潤せしめ、次のサイクルで各アミノ酸を導
入した。
７ （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ −Ｔｒｐ−８ｅｒ
−Ｐｈｅ −（Ｄ ） −Ａｌａ−Ｉ ｌｅ −Ａｒｇ
−Ｐｒｏ −ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５ ＢＯＣ−Ｐｒｏ−樹脂３２（プロリン含量０゜３１４
ｍｍｏｌ ／ ？ ）を自動ペプチド合成機（島津製作
所製ＡＰＳ−８００）の反応器に入れ、ジクロルメタン
で１２時間膨潤せしめ、次のサイクルで各アミノ酸を導
入した。
ジクロルメタン（３分間×３回）→５ｏ％トリフルオロ
酢酸／ジクロルメタン（１０分間および３０分間の２回
）→ジクロルメタン（３分間×３回）→エタノール（３
分間×３回）→ジクロルメタン（３分間×３回）→１ｏ
％トリエチルアミイ／クロロホルム（１０分間）→クロ
ロボルム（３分間×３回）→ジクロルメタン（３分間×
２回）→ＢＯＣ−アミノ酸−無水分（常法でＢＯＣ−ア
ミノ酸とＤＣＣより合成）（３０分および６ｏ分間の２
回）→アセチル化（ジクロルメタン、トリエチルアミン
、および無水酢酸使用）（１時間）→ジクロルメタン（
３分×３回） （（Ｐｙｒ ）Ｇｌｕ−ＯＨのみがＢＯ
Ｃ−基を使用せずそのま又使用し、ジメチルホルムアミ
ド中で直接ＤＣＣで縮合反応を行った〕 最後に樹脂をエタノール、クロロボルム、ジメチルホル
ムアミド、エーテルで洗って乾燥する。
酢酸／ジクロルメタン（１０分間および３０分間の２回
）→ジクロルメタン（３分間×３回）→エタノール（３
分間×３回）→ジクロルメタン（３分間×３回）→１ｏ
％トリエチルアミイ／クロロホルム（１０分間）→クロ
ロボルム（３分間×３回）→ジクロルメタン（３分間×
２回）→ＢＯＣ−アミノ酸−無水分（常法でＢＯＣ−ア
ミノ酸とＤＣＣより合成）（３０分および６ｏ分間の２
回）→アセチル化（ジクロルメタン、トリエチルアミン
、および無水酢酸使用）（１時間）→ジクロルメタン（
３分×３回） （（Ｐｙｒ ）Ｇｌｕ−ＯＨのみがＢＯ
Ｃ−基を使用せずそのま又使用し、ジメチルホルムアミ
ド中で直接ＤＣＣで縮合反応を行った〕 最後に樹脂をエタノール、クロロボルム、ジメチルホル
ムアミド、エーテルで洗って乾燥する。
収量４．１２ ｆ？。
使用したＢＯＣ−アミノ酸は次の通りである。
ＢＯＣ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ ）、Ｂｏｃ−Ｉ ｌｅ 、
ＢＯＣ−（Ｄ ） −Ａｌａ、 ＢＯＣ−Ｐｈｅ、Ｂ
ＯＣＳｅｒ （ＢＺＬ）、ＢＯＣ−Ｔｒｐ、ＢＯＣ−Ｈ
ｌｓ （Ｔｏｓ ） この様にして得られた樹脂３２をジメチルホルムアミド
２０ｍ１に懸濁して２０℃でエチルアミンを吸き込み充
分飽和したのち室温で４０時間がき混ぜる。
ＢＯＣ−（Ｄ ） −Ａｌａ、 ＢＯＣ−Ｐｈｅ、Ｂ
ＯＣＳｅｒ （ＢＺＬ）、ＢＯＣ−Ｔｒｐ、ＢＯＣ−Ｈ
ｌｓ （Ｔｏｓ ） この様にして得られた樹脂３２をジメチルホルムアミド
２０ｍ１に懸濁して２０℃でエチルアミンを吸き込み充
分飽和したのち室温で４０時間がき混ぜる。
樹脂をろ別してろ液を減圧乾固してエーテルで粉末とす
ると７２０〜の粗製の （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ （Ｔｏｓ ） 〜Ｔ
ｒｐ −３ｅｒ （ＢＺＬ ） −Ｐｈｅ−（Ｄ） −
Ａｌａ−１１ｅ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｐｒｏ
−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５が得られる。
ると７２０〜の粗製の （Ｐｙｒ ） Ｇｌｕ −Ｈｌｓ （Ｔｏｓ ） 〜Ｔ
ｒｐ −３ｅｒ （ＢＺＬ ） −Ｐｈｅ−（Ｄ） −
Ａｌａ−１１ｅ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｐｒｏ
−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ５が得られる。
この粗製物には多量の不純物が存在しているのでこれを
Ｒｆ’ の溶媒にとかし、同溶媒でつめたシリカゲル
のカラム（φ３Ｘ２０ｃｒｒＬ）に流し込み、同溶媒で
溶出する。
Ｒｆ’ の溶媒にとかし、同溶媒でつめたシリカゲル
のカラム（φ３Ｘ２０ｃｒｒＬ）に流し込み、同溶媒で
溶出する。
１５％メタノール−クロロホルムのＴＬＣでＲｆ ＝
０．４の区分を示す溶出部を集めて減圧乾固する。
０．４の区分を示す溶出部を集めて減圧乾固する。
これを酢酸エチルで粉末としてろ取し乾燥すると２４０
〜が得られる。
〜が得られる。
水晶をチオグリコール酸０．０５Ｔ／ｌｌとアニソール
０．２ｍｌを含む無水弗化水素５ｒＩＬｌに溶解して０
℃で１時間かき混ぜ、弗化水素を留去して水１０ＴｒＬ
ｌに溶解し、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ）
ＩＲＡ −４１００カラム（酢酸型、φ１ｘｌＯｃＩ
ｒＬ）に流過して後、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉ
ｔｅ ） ＸＡＤ −２０カラム（φ２×１０Ｃｒｆ
Ｌ）で２回、カルボキシメチルセルロースのカラム（φ
１．９Ｘ２５ＣｒｒＬ）で２回、更にセファデックスＬ
Ｈ−２００カラム（φｌＸ６０ＣｒｒＬ）で１回精製を
行い、最終精製物を凍結乾燥すると白色羽状物４２ηを
得る。
０．２ｍｌを含む無水弗化水素５ｒＩＬｌに溶解して０
℃で１時間かき混ぜ、弗化水素を留去して水１０ＴｒＬ
ｌに溶解し、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ）
ＩＲＡ −４１００カラム（酢酸型、φ１ｘｌＯｃＩ
ｒＬ）に流過して後、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉ
ｔｅ ） ＸＡＤ −２０カラム（φ２×１０Ｃｒｆ
Ｌ）で２回、カルボキシメチルセルロースのカラム（φ
１．９Ｘ２５ＣｒｒＬ）で２回、更にセファデックスＬ
Ｈ−２００カラム（φｌＸ６０ＣｒｒＬ）で１回精製を
行い、最終精製物を凍結乾燥すると白色羽状物４２ηを
得る。
Ｒｆ１＝０．０７１、Ｒｆ２−０．３７
アミノ酸分析（チオグリコール酸存在下の塩酸加水分解
） Ｇｌｕ １．０１ ； Ｈｉｓ Ｏ，９３： Ｔｒ
ｐＯ，９２：Ｓｅｒ Ｏ，９９：Ｐｈｅ １．００ ；
Ａｌａ １．０３ ； ｌ１ｅＱ、（） ８ ＋ Ａｒ
ｇ ｉ、ｏ Ｏ：Ｐｒｏ １．０８ ； エチルアミ
ン１．０４（回収率８８％）。
） Ｇｌｕ １．０１ ； Ｈｉｓ Ｏ，９３： Ｔｒ
ｐＯ，９２：Ｓｅｒ Ｏ，９９：Ｐｈｅ １．００ ；
Ａｌａ １．０３ ； ｌ１ｅＱ、（） ８ ＋ Ａｒ
ｇ ｉ、ｏ Ｏ：Ｐｒｏ １．０８ ； エチルアミ
ン１．０４（回収率８８％）。
本発明の目的物■）の排卵促進作用を天然ＬＨ−ＲＨの
排卵促進作用を１００として比較すると次のとおりであ
る。
排卵促進作用を１００として比較すると次のとおりであ
る。
〔試験方法： Ｊ 、 Ｍｅｄ 、Ｃｈｅｍ。１６．１
１４４（１９７３））
１４４（１９７３））
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １式 〔式中、Ｒは水酸基を有しまたは有しない低級アルキル
基を示す。 又、Ａｌａは９体を他は５体を示す。 〕で表わされるポリペプチドの製造に当り、ピログルタ
ミン酸またはピログルタミン酸をＮ−末端として以下上
記に相当するアミノ酸配列を有する部分ペプチドと上記
目的のポリペプチドの残余部分とを縮合させることを特
徴とするポリペプチドの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56140117A JPS5824428B2 (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | ポリペプチドの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56140117A JPS5824428B2 (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | ポリペプチドの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5791965A JPS5791965A (en) | 1982-06-08 |
| JPS5824428B2 true JPS5824428B2 (ja) | 1983-05-20 |
Family
ID=15261304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56140117A Expired JPS5824428B2 (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | ポリペプチドの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5824428B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0447390Y2 (ja) * | 1985-01-14 | 1992-11-09 |
-
1981
- 1981-09-04 JP JP56140117A patent/JPS5824428B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0447390Y2 (ja) * | 1985-01-14 | 1992-11-09 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5791965A (en) | 1982-06-08 |
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