JPH0730112B2

JPH0730112B2 - ブラジキニン拮抗作用をもつ新規の擬似ペプチド化合物

Info

Publication number: JPH0730112B2
Application number: JP5005261A
Authority: JP
Inventors: − リュクフォシュルジャン; ツリュクリストフ; カネエマニュエル
Original assignee: アディールエコンパニー
Priority date: 1992-01-17
Filing date: 1993-01-14
Publication date: 1995-04-05
Anticipated expiration: 2010-04-05
Also published as: ES2086195T3; ZA93275B; JPH06179697A; AU3184493A; US5409899A; EP0552106B1; GR3019372T3; DE69301468D1; ATE133960T1; FR2686343A1; DK0552106T3; AU653460B2; CA2087379A1; FR2686343B1; NZ245685A; EP0552106A1; DE69301468T2

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明はブラジキニン拮抗作用
をもつ新規の擬似ペプチド化合物、およびそれらを含む
薬剤組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ブラジキンは天然のノナペプチドで、低
血圧状態におけるばかりでなく炎症性で苦痛を伴う作用
の媒介者として知られる。それに加えてブラジキンは平
滑筋、とりわけ気管、子宮または平滑筋の収縮作用をも
つ。臨床医学においてブラジキンはショック状態の生理
病理学、炎症性の反応、喘息および気管支の作用亢進、
アレルギー性のまたはウイルス性の鼻炎、膵炎、関節
炎、胃切除後のダンピング症候群、乾癬、遺伝性の血管
神経症性浮腫および偏頭痛にかかわりをもった。

【０００３】出願ＥＰ０，３７０，４５３には、式

【化４】Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｅ−Ｆ−Ｋ−（Ｄ）Ｔｉｃ−Ｇ−
Ｍ−Ｆ−Ｉである擬似ペプチド構造をもつブラジキニン拮抗薬が記
載され、そしてこれらの中に式

【化５】H-(D)Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-O
ic-Arg-OH のデカペプチドが記載される。式中、Ａｒｇはアルギ
ニル残基を表し、Ｐｒｏはプロリル残基を表し、Ｈｙ
ｐは４−ヒドロキシプロリル残基を表し、Ｇｌｙは
グリシル残基を表し、Ｔｈｉａはβ−（２−チエニ
ル）アラニル残基を表し、Ｓｅｒはセリル残基を表
し、Ｔｉｃは式

【化６】のテトラヒドロイソキノリン−３−カルボニル残基を表
しＯｉｃは式

【化７】のオクタヒドロインドール−２−カルボニル残基を表
し、上記アミノ酸の一種に対する記号の前の省略形
（Ｄ）はこのアミノ酸が（Ｄ）配置をもつことを意味す
る。省略形（Ｄ）がない場合はそのアミノ酸は（Ｌ）配
置をもつと考えられる。

【０００４】より詳しくは、この発明は式

【化８】Ｇ−Ａｒｑ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ
ａ−Ｓｅｒ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｑ−ＯＨのノナペプチドに関する。式中Ｇは式

【化９】の４−グアニジンベンゾイル基を表し、Ａｒｇはアルギニル残基を表し、Ｐｒｏはプロリル残基を表し、Ｈｙｐは４−ヒドロキシプロリル残基を表し、Ｇｌｙはグリシル残基を表し、Ｔｈｉａはβ−（２−チエニル）アラニル残基を表
し、Ｓｅｒはセリル残基を表し、Ｔｉｃは１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン
−３−カルボニル残基を表し、Ｏｉｃはオクタヒドロインドール−２−カルボニル残
基を表し、ペプチド配列のそれぞれのアミノ酸はそのα炭素におい
てＤまたはＬ配置をもつ。本発明はまた、そのノナペプ
チドのエナンチオマー、ジアステレオマーおよびエピマ
ーならびに薬剤として許容される酸または塩基との付加
塩をもつ。

【０００５】この発明の好ましい化合物は式

【化１０】 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-Oic-Arg-OH の化合物である。式中（Ｄ）Ｔｉｃはそのα炭素におい
てＤ配置をもち、ペプチド配列のその他のアミノ酸はそ
のα炭素においてＬ配置をもち、Ｈｙｐは４Ｒ配置で、
そしてＯｉｃは（２Ｓ，３ａＳ，７ａＳ）配置であり、
さらに薬剤として許容される酸または塩基をもつ付加塩
をもつ。

【０００６】薬剤として許容し得る酸としては、塩酸、
臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフロオロ酢酸、
乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、
フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アルコルビ
ン酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、ショウノウ酸等を
挙げることができるが、これらに限定されるものではな
い。薬剤として許容し得る塩基としては、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム、トリエチルアミン、第三級ブチ
ルアミン等を挙げることができるが、これらに限定され
るものではない。

【０００７】この化合物は新規であることとは別に、出
願ＥＰ０，３７０，４５３の好ましい誘導体よりも有
利な性質を賦与されている。この発明の生成物の新規の
ノナペプチド構造、とりわけＮ−末端α−アミノ基の欠
如は、生体内でそれに、出願ＥＰ０，３７０，４５３
の好ましい化合物のデカペプチド構造と比べアミノペプ
チダーゼに対しより大きな抵抗性を与える。

【０００８】更に、そのノナペプチド構造はそれに９個
の非対称中心を賦与し、それは出願ＥＰ０，３７０，
４５３に記載のデカペプチドの場合より非対称中心がひ
とつ少いということができ、工業的合成に少なからざる
利益を与える。更に、固有の活性を調査するためにおこ
なわれる生体内試験において、この発明の化合物は出願
ＥＰ０，３７０，４５３の好ましい生成物よりも有意
に良い結果を与える。

【０００９】この発明はまた発明の化合物の調製方法に
も拡張でき、それは逐次固相合成、フラグメントの合成
と溶液中でのそれらの結合、酵素的合成および形質転換
バクテリア中の遺伝子のクローニングおよび発現による
遺伝子合成のような各種方法により得ることができる。
一般的な固相ペプチド合成法はＢ．Ｗ．ＥＲＩＣＫＳＯ
ＮおよびＲ．Ｂ．ＭＥＲＲＩＦＩＥＬＤにより記載され
た。（“蛋白質”、固相ペプチド合成、第３版、ｖｏｌ
II、２５７−５２７、１９７６）（“ＴｈｅＰｒｏ
ｔｅｉｎｓ”，Ｓｏｌｉｄ−ＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄ
ｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖ
ｏｌｕｍｅ II, ２５７−５２７，１９７６）

【００１０】固相合成は自動化装置でおこなうことがで
き、それはペプチド鎖にアミノ酸を逐次導入するために
必要な繰返しのプログラム化可能な方法の脱保護、結
合、および洗浄サイクルにおいて実行される。好ましく
はＣ−末端のアミノ酸はポリペプチドの調製に好都合に
使われる樹脂、好ましくは０．５〜３．０％のジビニル
ベンゼンを用いて架橋されそして第一のアミノ酸を樹脂
に共有結合させ得るクロロメチレンまたはヒドロキシメ
チレンのような活性化残基を備えたポリスチレンに結合
される。フラグメントの結合サイトの選択はしばしばラ
セミ化の危険を最少限になるように決定される。３個の
結合サイトは、たとえばプロリン（位置２）、ヒドロキ
シプロリン（位置３）およびグリシン（位置４）のＣ−
末端基である。

【００１１】アミノ酸はついで操作者により決められた
順序によりひとつずつ導入される。アミノ酸の導入に対
応するそれぞれの合成サイクルはペプチド鎖、好ましく
はＮ−末端の脱保護、反応物を除去するためにまたは樹
脂を膨張させるために設計された連続的洗浄、アミノ酸
の活性化を伴う結合および追加の洗浄を必然的に伴う。
これらの各操作についで、合成がおこなわれる反応器中
に備えられた焼結ガラスフィルタによりろ過される。

【００１２】使われるカップリング試薬はジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣ）およびヒドロキシベンゾ
トリアゾル（ＨＯＢＴ）またはベンゾトリアゾル−１−
イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキ
サフルオロホスファート（ＢＯＰ）またはその代りにジ
フェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）のようなペプチ
ド合成の標準試薬である。混合された無水物形成による
活性化もまた可能である。それぞれのアミノ酸は樹脂の
置換度に関し過剰に（例えば４倍に）、そして結合剤に
関しほぼ当量に反応器中に導入される。結合反応は合成
の各ステップにおいてＥ．ＫＡＩＳＥＲらにより記載の
ニンヒドリン反応試験（Ａｎａｌｙｔ，Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，３４，５９５，１９７０）によりチェックするこ
とができる。

【００１３】樹脂上のペプチド鎖の組み立て後、アニソ
ール、エタンジチオールまたは２−メチルインドールの
存在下でトリフルオロ酢酸またはフッ化水素酸のような
強酸による処理は、樹脂からペプチドを分離しそしてま
た適当であればその保護基からペプチドを遊離するのに
役立つ。その化合物はついで標準精製技術、特にクロマ
トグラフィー技術により精製される。

【００１４】この発明のペプチドはまた、固相において
もまたは溶液においても調製することができる選択的に
保護されたペプチドフラグメントを溶液中で結合するこ
とによっても得ることができる。溶液中での一般的なペ
プチドの合成方法はＦ．Ｍ．ＦＩＮＮおよびＫ．ＨＯ
ＦＭＡＮにより記載される。（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，３ｒ
ｄｅｄｉｔｉｏｎ，ｖｏｌｕｍｅ II，ｐ．１０５−
２５３，１９７６）保護基の使用およびそれらの差別安
定性（ｄｉｆｆｉｒｅｎｔｉａｌｓｔａｂｉｌｉｔ
ｙ）の利益をとる方法は、樹脂へのペプチド鎖の結合に
対する場合を除き固相法と同様である。Ｃ−末端カルボ
ニル基はたとえばメチルエステルまたはアミド基により
保護される。結合中の活性化法もまた固相法合成で用い
られるものと同様である。

【００１５】この発明の化合物を逐次固相合成法により
調製するための特定の方法において、連続するアミノ酸
はＦｍｏｃ−Ａｒｇ−ＯＨで置換された樹脂と反応して
組成物Ｈ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉａ−Ｓｅｒ
−（Ｄ）Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−樹脂をつくり、それ
は最終的にＧ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨと反応する。こ
の発明の化合物は極めて有利な薬学的性質、とりわけブ
ラジキニン拮抗性を、炎症および気管支収縮において有
する。

【００１６】これを基礎にして、それらは外傷、擦過
傷、火傷、皮膚発疹、湿疹、紅斑、浮腫、咽喉炎、関節
炎、喘息、アレルギー、鼻炎、過敏症のショック、炎
症、動脈低血圧症、陣痛、そうよう症、および精子移動
不全のような多くの治療症候群に便利に使うことができ
る。この発明の主題はまた、有効成分として少くともこ
の発明のひとつの化合物、または薬剤として許容される
酸または塩基とのその付加塩の少くともひとつを、単独
でもしくは一種またはそれより多い無毒性、不活性の賦
形剤または賦形薬と組み合わせて含有する薬剤組成物で
ある。

【００１７】この発明による薬剤組成物の中でも、より
特定的に、経口、非経口または鼻腔投与に適したもの、
単味または糖衣錠、舌下錠、薬包、硬質ゼラチンカプセ
ル、舌下におく製剤、トローチ、坐薬、クリーム、軟
膏、スキンゲル、エアーゾル、嚥下用または注射用製剤
を含むアンプル等を挙げることができる。

【００１８】投与量は患者の年齢および体重、苦痛の性
質および強さならびにまた投与経路によっても変わる。
後者は経口、鼻腔、直腸または非経口であってもよい。
一般的に言って投与量は２４時間当たり１または数回投
与する治療に対し５μｇ／kg乃至５mg／kgの範囲であ
る。

【００１９】例１

【化１１】 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-Oic-Arg-OH トリフルオロアセテートオクタヒドロインドール−２−カルボン酸残基（Ｏｉ
ｃ）は（２Ｓ，３ａＳ，７ａＳ）の配置である。例１の
化合物は０．３３ｍｍｏｌ／ｇのＦｍｏｃ−Ａｒｇ−Ｏ
Ｈで置換された２ｇの樹脂から次の繰返しプロトコルに
より合成される。

【表１】操作Ｎｏ作用溶剤／薬剤繰返し数／時間１洗浄ＤＭＦ２×２分２脱保護２０％ピペリジン／ＤＭＦ１×５分３脱保護２０％ピペリジン／ＤＭＦ１×１５分４洗浄ＤＭＦ３×２分５洗浄ジクロロメタン３×２分６結合活性化保護化アミノ酸１×９０分７洗浄ＤＭＦ３×２分８洗浄イソプロピルアルコール３×２分９洗浄ジクロロメタン３×２分

【００２０】これらの操作のそれぞれは、室温でかき混
ぜられる３０mlの溶剤中においてなされ、ついで合成が
進行するガラス容器（反応器）中に備えられた焼結ガラ
スろ過材を通してろ過される。フィルタには成長したペ
プチド鎖が結合した樹脂が残る。選ばれた保護化アミノ
酸は次の順序で導入される。Ｆｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ，Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨおよびＧ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｏ
Ｈ。

【００２１】結合を目的とする活性化（操作６）は各サ
イクルにおいて、４当量（２．６４ｍｍｏｌ）の保護化
アミノ酸を３０mlのＤＭＦ中の３６０mgのＨＯＢｔに溶
解し、ついで室温で３０分後に６１８mgのＤＣＣを加え
ることにより得られる。この溶液はそのあと直ちに１０
mlのジクロロメタンと共に反応容器に導かれる。

【００２２】８種のアミノ酸の逐次結合に相当する８サ
イクルの終りに、そしてＣ末端アルギニンと共に、その
側鎖が保護されそしてＣ−末端位置において樹脂に結合
しているノナペプチドがそれにより得られた。樹脂はつ
いでトリフルオロ酢酸（１８ml）ジクロロメタン（１m
l）およびアニソール（１ml）の混合物で室温において
９０分間処理される。ろ液と、樹脂の洗浄に用いられる
溶剤（３×２０mlのジクロロメタン）とは、いっしょに
し、乾燥するまで蒸発される。生成物はエーテルに懸濁
されろ過されて乾燥され、ついで用意されたＣ₁₈カラム
（内径４７mm、長さ３００mm）によるＨＰＬＣで精製さ
れ凍結乾燥される。

【００２３】得られた生成物の分析は最終物を６Ｎの塩
酸中で１８時間１１０℃の加水分解によりアミノ酸に分
解後、得られたアミノ酸のＨＰＬＣによる定量検定によ
りおこなわれる。この分析は通常要求される基準に従
う。

【００２４】例２この発明の化合物の薬理学的研
究、ウサギの頸静脈、Ｂ₂受容器ブラジキニンは例１の生成物により抑制される収縮をひ
き起す。ｐＡ₂（この発明の化合物のモル濃度の負の対
数で、これは同じ効果を得るためにブラジキニン濃度を
２倍にすることを必要とする）は９．７３±０．１（ｎ
＝５）である。同一条件下で出願ＥＰ０，３７０，４
５３の好ましい化合物のｐＡ₂は９．２３±０．４５
で、この発明の化合物が有意差をもって勝っているとい
える。

【００２５】例３この発明の化合物の抗炎症作用の
生体内測定この発明の化合物の抗炎症作用がカラゲニンの注射によ
り誘起されたラットの足の浮腫のモデルを用いて測定さ
れた。（ＷＩＮＴＥＲＧ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｓｏ
ｃ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，３，５４４−５４７，１９６
０）この研究は１８０−２１０ｇの体重のオスのラット
の８個のグループについておこなわれる。この発明の化
合物が、ラットの右後足の足裏にカラゲニン（IV型ラム
ダカラゲニン、シグマ、１％溶液、注射容積０．１ml）
を皮下注射した直後にＩ．Ｖ．（静脈内）投与される。
実験の異った時点における足の容積が肢体容積計を用い
て測定される。浮腫の抑制が３時間の時点で、賦形薬を
受けた対照グループとの比較において計算され、抑制パ
ーセンテージとして表された。これらの条件において例
１の化合物を０．１mg／kgＩ．Ｖ．投与することにより
３時間の時点で５９％の抑制をもたらした。

【００２６】例４薬物組成物例１のペプチドを５μｇ／ml含む軟膏 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-Oic-Arg-OH ---- ５０mg ポリエチレングリコールＱ．Ｓ． ----１００ml 注射用溶液 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-Oic-Arg-OH ----０．５mg 注射用蒸留水Ｑ．Ｓ． ---- ２５ml

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＤＡＣＶＡＤＤＡＥＰＡ６１Ｋ 37/02 ＡＣＤＡＣＶＡＤＤＡＥＰ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）の化合物：【化１】 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-Tic-Oic-Arg-OH （１）（ここにＧは次式の４−グアニジノベンゾイル基を表
し、【化２】そしてＡｒｇはアルギニル残基を表し、Ｐｒｏはプロリル残基を表し、Ｈｙｐは４−ヒドロキシプロリル残基を表し、Ｇｌｙはグリシル残基を表し、Ｔｈｉａはβ−（２−チエニル）アラニル残基を表
し、Ｓｅｒはセリル残基を表し、Ｔｉｃは１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン
−３−カルボニル残基を表し、Ｏｉｃはオクタヒドロインドール−２−カルボニル残
基を表し、ペプチド配列の各アミノ酸は、そのα炭素においてＤま
たはＬ配置をもつ）、そのエナンチオマーもしくはジア
ステレオマー又は薬剤として許容される酸もしくは塩基
とのその付加塩。
【請求項２】請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物であ
って、式【化３】 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-Oic-Arg-OH の化合物であることを特徴とする化合物：（ここに、
（Ｄ）Ｔｉｃはそのα炭素においてＤ配置の１，２，
３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボニル基
を表し、ペプチド配列のその他のアミノ酸はそれらのα
炭素においてＬ配置をもち、Ｈｙｐは４Ｒ配置でありそ
してＯｉｃは（２Ｓ，３ａＳ，７ａＳ）配置である）な
らびに薬剤として許容される酸または塩基との付加塩。
【請求項３】有効成分として請求項１および２のいず
れかに記載の式（Ｉ）の少なくとも１種の化合物を、単
独であるいは１種もしくはそれより多い薬剤として許容
される賦形剤または賦形薬と組み合わせて含む、各種原
因の外傷、炎症性疾患、苦痛、ショック状態、アレルギ
ー性疾患、気管支の作用亢進および精子移動不全の治療
におけるブラジキニン拮抗薬。